EVENTOS CO e PÓS TRADUCIONAIS

EVENTOS CO e PÓS TRADUCIONAIS

• Enovelamento natural e assistido (Chaperonas e HSPs)

•Ubiquitinação e degradação via proteassomo de proteínas não enoveladas

•Endereçamento (peptídeo sinal e glicosilação)

•Digestão de pró-proteínas

•Hidroxilação

•Fosforilação

O Paradoxo de Levinthal (1968)

• Uma proteína não pode experimentar todas as possíveis conformações

entre o estado desenovelado e o estado nativo.

• Imagine uma proteína com 150 aa que experimentam apenas as 3

conformações previstas no plote de Ramachandran. Cada conformação se

interconverteria na outra em picoseg (10-12s). Essa proteína, então, possuiria

3150 possíveis conformações (= 1068). Para experimentar todas essas

conformações seriam necessários

1068 x 10-12 seg = 1056 seg = 1048 anos !!!

• O enovelamento demora de 0.1 a 1000 seg in vivo e in vitro.

• O enovelamento é, portanto, dirigido passando por rotas cinéticas e

intermediários bem definidos escapando de conformações irrelevantes.

Gráfico de Ramachandran

Os três mecanismos clássicos de enovelamento

A. Fersht and V. Daggett, 2002, Cell

Enovelamento co-Traducional

Opções de Enovelamento

Chaperoninas (HSP60): Caixa de Enovelamento

HSP70ligação à áreas hidrofóbicas

Caminhos de Enovelamento

Degradação de Proteínas não EnoveladasUbiquitinação

Created by Roger B. Dodd

Degradação de Proteínas não EnolveladasProteassomo

Endereçamento e Peptídeo Sinal (eucariotos)

Via secretora

•CIT → RE H2N-Met-Met-Ser-Phe-Val-Ser-Leu-Leu-Leu-Val-Gly-Ile-Leu-Phe-Trp-

Ala-Thr-Glu-Ala-Glu-Gln-Leu-Thr-Lys-Cys-Glu-Val-Phe-Gln-Protein

•Golgi → RE Protein -Lys-Asp-Glu-Leu-COOH

Via Celular

•CIT → Nucleo H2N-(...)-Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val-Protein

•CIT → MIT H2N-Met-Leu-Ser-Leu-Arg-Gln-Ser-Ile-Arg-Phe-Phe-Lys-Pro-Ala-Thr-

Arg-Thr-Leu-Cys-Ser-Ser-Arg-Tyr-Leu-Leu-Protein

•CIT → Perox Protein -Ser-Lys-Leu-COOH

•CIT → Perox H2N-(...)-Arg-Leu-X5-His-Leu-Protein

Endereçamento de Proteínas (eucariotos)Via secretória – Retículo endoplasmático

As proteínas da via secretória

possuem uma sequência

sinal (peptídeo sinal) que

direciona os ribossomos que

as estão sintetizando para a

membrana do retículo

endoplasmático

Endereçamento de proteínas

sintetizadas em ribossomos

aderidos ao retículo

endoplasmático

Endereçamento de ProteínasVia secretória –> Retículo endoplasmático

Endereçamento de ProteínasVia secretória : Proteínas de Membrana

Proteína unipasso

Endereçamento de ProteínasVia secretória : Proteínas de Membrana

Proteína multipasso

Endereçamento de Proteínas (eucariotos)Via secretória : 1ª destino : Proteínas do RE

Toda as proteínas residentes no

reticulo endoplasmático

possuem na região C-terminal uma

sequência sinal extra denominada KDEL(LYS-ASP-GLU-LEU).

Endereçamento de Proteínas (eucariotos)Via secretória : outros destinos

- reencaminhadas para o retículo endoplasmático (sinal extra KDEL)- retidas no Complexo de Golgi (sinal extra desconhecido)- enviadas para os lisossomos (Sinal extra = manose-6-fosfato)- encaminhadas para vesículas de secreção (sinal extra desconhecido)- encaminhadas para membrana plasmática ou meio extracelular (SEM SINAL extra)

No Complexo de Golgi, as proteínas podem ser:

Endereçamento de Proteínas (eucariotos)Via secretória : Glicosilação no RE

- Após Golgi => Enviadas para os lisossomos (Sinal extra = manose-6-fosfato)

Endereçamento de Proteínas (eucariotos)Via celular – Citosol e organelas

Núcleo Peroxissomo

Cloroplasto

Mitocôndria

Ribossomos livresno citoplasma

Proteínacitosólicamadura

Proteínas citosólicas não possuem nenhum tipo de sinal de endereçamento

Endereçamento de Proteínas em Eucariotos

Complexo de Golgi

Retículo endoplasmático

Membrana citoplasmáticoSuperfície celular

(secretada) LisossomosNúcleo Peroxissomo

Cloroplasto

Mitocôndria

Proteínacitosólicamadura

VIA SECRETORA

1) Ribossomos aderidos ao RE

2) Ribossomoslivres

Endereçamento de Proteínas em Procariotos

Poteínas da membrana e espaço intermembranar são sintetizadas em ribossomos aderidos à membrana

- Citoplasma: sem sinal

- Membrana plasmática ou espaço intermembranar: com sinal

Ativação Proteolítica de ProteínasDigestão da Insulina

Hidroxilação de ProteínasExemplo do Colágeno

Fosforilação de Proteínas

Enzimas responsáveis pela adição de um grupamento fosfato em radicais Ser, Thr e

Tyr de proteínas.

Proteína Proteína

PO4

-3

PO4

-3

Kinases

Fosfatases

ATP

Fosforilação de ProteínasExemplo das Lipases