PCR NA DETECÇÃO DE Salmonella spp. EM AMOSTRAS DE PEITO DE FRANGO ARTIFICIALMENTE CONTAMINADAS

RAQUEL GOUVÊA1*, LEANDRO DOS SANTOS MACHADO2, SAMIRA PIROLA SANTOS MANTILLA2, VIRGINIA LÉO DE ALMEIDA PEREIRA3, ROBSON

MAIA FRANCO4, ELMIRO ROSENDO DO NASCIMENTO3

1 Mestre em Medicina Veterinária - Higiene Veterinária e Processamento Tecnológico de Produtos de Origem Animal - UFF, Niterói, RJ2 Programa de Pós-graduação em Medicina Veterinária - Higiene Veterinária e Processamento Tecnológico de Produtos de Origem Animal - UFF3 Departamento de Saúde Coletiva Veterinária e Saúde Pública – MSV – UFF4 Departamento de Tecnologia de Alimentos. Faculdade de Veterinária – MTA – UFF.

RESUMO

A PCR consiste na síntese de ciclos repetidos de oligo-nucleotídeos de DNA para conduzir à replicação de sequências definidas, formando a base para a amplificação e detecção de sequências específicas de ácido nucléico. Por detectar uma região única do genoma bacteriano, a PCR é mais específica do que os métodos convencionais de diagnóstico. A aplicação da PCR é uma estratégia atualmente utilizada, eficiente e rápida, na detecção de bactérias em alimentos contaminados, tais como Listeria monocytogenes, Campylobacter spp., Escherichia coli e Salmonella spp. O objetivo deste trabalho foi avaliar a frequência de detecção de Salmonella spp. em 34 sub-amostras de 25g de peito de frango artificialmente contaminados com S. Enteritidis e determinar o tempo demandado para análise pela PCR. Para o preparo do inóculo, uma suspensão bacteriana foi preparada pela adição de solução salina peptonada 0,1% em cultivo de S. Enteritidis ATCC 13057 em ágar nutriente inclinado até obtenção de turvação igual à do padrão nº1 na escala de McFarland. Alíquotas de 1mL da suspensão bacteriana foram adicionadas às diluições das sub-amostras de 25g de peito de frango em 225mL de água peptonada 1%. Após a incubação das amostras pré-enriquecidas a 37ºC por 24 horas, alíquotas de 1mL foram colocadas em microtubos de polipropileno para a realização da extração do DNA bacteriano. A extração do DNA foi realizada pelo método do fenol-clorofórmio, segundo Sambrook et al. (1989). Para a PCR, foi utilizado um par de “primers” que amplificam 284 pares de bases, com a sequência de oligonucleotídeos derivada do gene invA, segundo Rahn et al. (1992). O ciclo de amplificação utilizado foi desnaturação inicial a 94ºC por 5 minutos, 35 ciclos de desnaturação a 94ºC por 30 segundos, pareamento a 54ºC por 30 segundos e amplificação a 72ºC por 30 segundos, com extensão final a 72ºC por sete minutos. Como resultado, todas as amostras foram positivas na PCR e o tempo total da análise foi de 48 horas. A PCR é um método rápido e eficaz na detecção de Salmonella spp. em peito de frango.