Post on 07-Aug-2015
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Prova de Coombs Directa
O que é a prova de Coombs
O seu conceito baseia-se na reacção dos eritrócitos com um
soro de antiglobulina humana, servindo para identificar a
presença ou não de imunoglobulina no sangue do paciente.
É utilizado
• Como prova ao doente, antes de qualquer transfusão
• Na detecção da doença hemolítica do recém-nascido
• Em reacções transfusionais
• No diagnóstico de anemias hemolíticas auto-imunes
Prova de Coombs Directa
(Ou seja deteta anticorpos ligados à superfície dos eritrócitos)
Como se realiza
1 – identificar o card
2– Colocar nos microtubos identificados
como I e II 50 μl de solução preparada
com 10 μl de concentrado de eritrócitos
e 1000 μl de diluente 2.
3 – Incubar 15 minutos a 37
4 – Centrifugar 10 minutos
5 – Ler os resultados
Prova de Coombs Directa
Resultados
Teste positivo
Teste negativo
Prova de Coombs Directa
Em caso de resultado positivo
Falsos positivos Verdadeiro positivo
Preparar eluição ácida Suspensões celulares exageradas
Remoção da IgG – alteração de Ag eritrocitários
Aglutinação precoce dos eritrócitos
Partículas ou contaminantes nos tubos Agregação eritrocitária
Prova de Coombs Directa
O que fazer quando a prova é realmente positiva
1 – Deitar num tubo o concentrado de eritrócitos.
2 – Lavar três vezes com soro fisiológico
3 – Entre cada lavagem levar a centrifugar
2 minutos a 3500 rpm
4 – Em seguida preparar o teste da
antiglobulina directo com soros
monoespecíficos
Prova de Coombs Directa
Este card é meramente informativo
Prova de Coombs Directa
Teste das Igs é meramente especulativo. Devemos repetir a coombs directa depois das lavagens para verificar se é realmente um verdadeiro positivo Este card diz kal é o tipo de Ig ou factor do complemento que está a causar uma prova de coombs positiva
Prova de Coombs Directa
Técnica da eluição ácida
1- Preparar a solução de lavagem de 1:10 em água destilada
2 – Lavar o concentrado de eritrócitos do paciente 4 vezes
3 - Em cada uma delas levar a centrifugar e rejeitar o sobrenadante
4 - Na ultima centrifugação guardar o sobrenadante num tubo limpo (que depois vai servir de
controlo)
5 – Passar os eritrócitos que ficaram no fundo do tubo da última lavagem para um tubo limpo
(cerca de 20 gotas)
6 – Aí juntar a solução de eluição (que tem cor amarela)
7 - Inverter o tubo 4 vezes e centrifugar durante 45 a 60 segundos a 3500 rpm
8 – Depois da centrifugação dos eritrócitos + solução de eluição retirar o sobrenadante para outro
tubo limpo e juntar a este sobrenadante 20 gotas de solução tampão (até este ficar azul) - este vai
ser o eluado
9 – Depois repetir novamente a prova de liss/coombs e a placa de enzimas
Células
+
eluado
Células
+
controlo
Vai para a estufa
Vai a centrifugar
Prova de Coombs Directa
Em primeiro pomos sempre as células e só depois o eluado e o controlo Caso o resultado que se obtenha não seja conclusivo passamos à prova das 11 células
Prova de Coombs Directa
Caso o resultado que se obtenha para o painel de três células não seja
conclusivo passamos para o painel de onze células