01 - Laboratório de Microbiologia - Prática Microbiologia 2014 - Farmácia 4º p. Noturno
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Farmácia – 4º Período/2014
MICROBIOLOGIA BÁSICA Profª Esp.Luciana S. de Mello Cordeiro
Médica Veterinária
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Aula Prática 01 Data: ........../........../.............
Disciplina: MICROBIOLOGIA BASICA Professora: LUCIANA CORDEIRO
Tema da Aula: “LABORATÓRIO DE MICROBIOLOGIA”
Assunto: Equipamentos e Materiais Utilizados, Definições Aplicadas ao Controle
de Microrganismos nas Práticas Laboratoriais de Microbiologia.
Objetivo(s):
Apresentação do Laboratório de Microbiologia
Promover o conhecimento e identificação dos materiais de uso
microbiológico
Reconhecimento e identificação dos equipamentos laboratoriais de
microbiologia
Conhecimento da função do emprego dos equipamentos de microbiologia
Manuseio, e cuidados gerais com as vidrarias requeridas para pratica
microbiológica
Conhecimento das práticas laboratoriais de microbiologia desenvolvidas com
utilização dos principais equipamentos microbiológicos
Definir os conceitos de esterilização, desinfecção, antissepsia e assepsia.
LABORATÓRIO DE MICROBIOLOGIA
INTRODUÇÃO
Um laboratório é uma sala ou espaço físico com parâmetros ambientais
controlados; e equipado com diversos elementos, que permitem a correta medida
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ou análise ao objeto de estudo de carater microbiano. Engloba uma série de
componentes constituidores como um todo.
Dentre os componentes constituidores do laboratório de microbiologia as
vidrarias e alguns equipamentos específicos se fazem indispensáveis na prática
microbiológica. Assim é de extrema importância o conhecimento de cada uma das
diversas vidrarias empregadas, e de todos equipamentos requeridos, bem como o
devido manuseio e adoção do adequado procedimento operacional aliado as ações
de cuidados gerais. Não deixando de lado o conhecimento e entendimento das
funções pertinentes a utilização de cada item no emprego das inúmeras técnicas e
procedimento de microbiologia laboratorial.
EQUIPAMENTOS
Estufa incubadora (Microbiológica):
É um tipo específico de estufa que
apresenta além da porta metálica, uma porta de
vidro. Apresenta um sistema de aquecimento
controlado por resistência elétrica. O
aquecimento é controlado através de um
termostato e a temperatura acompanhada com
termômetro analógico ou digital. A temperatura
não deve ter uma variação superior à ±0,5ºC.
Para determinar a temperatura, coloca-se um
termômetro com o bulbo submerso em líquido
(glicerina, água, etc.) para maior homogeneidade
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da medida. Esse equipamento é utilizado como auxiliar no crescimento e
reprodução dos microrganismos, uma vez que fornece a temperatura adequada a
cada espécie microbiana.
Incubadora de banho de água (banho-maria):
É um equipamento indispensável para
realizações dos ensaios de coliformes
termotolerantes (44,5ºC ± 0,2ºC). O mesmo é
dotado de um termômetro, termostato e tampa
para o controle de temperatura do banho.
Estufa de Esterilização:
É um tipo específico de estufa que apresenta um
sistema de aquecimento controlado por resistência
elétrica, é munida de termostato e termômetro para o
controle de temperatura. Em geral este equipamento é
utilizado para esterilizar vidrarias.
Potenciômetro;
É um equipamento muito utilizado no
laboratório de Microbiologia para se determinar o
pH dos diferentes tipos de meios de culturas e
soluções tampão. É constituído por eletrodos,
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botões de ajuste e é dotado de um sistema eletrônico capaz de fornecer leituras
diretas com exatidão de ±0,1 unidades de pH.
Verifica-se a exatidão do aparelho pelo menos duas vezes ao dia, usandose
soluções-padrão tamponadas.
Há medidores portáteis de fácil uso.
Balanças:
São destinadas a pesagens das diferentes substâncias
usadas no preparo dos vários tipos de meios de cultura,
soluções e corantes. Podem ser analógicas ou digitais. As
balanças devem ser mantidas sobre uma base sólida
protegidas de vibrações, e também de umidade e mudanças
bruscas de temperatura.
Autoclave:
É um equipamento destinado à esterilização pelo
calor úmido (vapor d´água sob pressão). Normalmente, são
utilizados para esterilizar águas de diluições, meios de
cultura que suportem temperaturas elevadas (115-120ºC),
materiais contaminados que vão ser descartados e outros.
A autoclave de laboratório pode ser do tipo horizontal ou
vertical, contendo os seguintes acessórios: caldeira
cilíndrica hermeticamente fechada por uma tampa de
bronze ou cobre, dotada de manômetro, válvula de escape
de ar e de segurança. Em seu interior existe uma cesta
metálica (móvel) onde são colocados todos os materiais a
serem esterilizados.
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É empregado o uso de bioindicadores ou fitas de controle para se testar a
eficiência deste equipamento.
Geladeiras e Congeladores (Freezers):
As geladeiras são utilizadas para a conservação
de meios de cultura estéreis, soluções e amostras de
contra-prova. As culturas microbianas e soluções não
devem ser colocados no mesmo equipamentos que as
amostras. Jamais poderá guardar refeições, lanches,
bebidas ou qualquer outro alimento que irá ser consumido. Se contiver material
com risco biológico deverá ser identificada com o pictograma adequado. Culturas
vivas não devem ser congeladas.
A verificação diária da temperatura é regra geral de controle destes
equipamentos.
Agitador Magnético:
É munido de uma plataforma metálica onde o
recipiente contendo o meio líquido e uma barra magnética
revestida de material inerte é colocado. O mesmo gira a
barra magnética de modo circular, agitando o meio
continuamente durante a incubação e também expondo
maior superfície do meio à fase gasosa,
Microscópio Ótico:
Equipamento utilizado para o estudo dos microrganismos. Os equipamentos
mais usados permitem o aumento de até 1.250 vezes e podem ser monocular ou
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binocular. Deve-se ter cuidado para não utilizar preparações a fresco com a
objetiva de imersão.
Cabines de Fluxo Laminar Horizontal (A) e Vertical (B):
As cabines de fluxo horizontal se prestam para a
manipulação de materiais estéreis como meios de cultura
esterilizados e amostras de materiais estéreis (soluções
injetáveis, nutrição parenteral, etc). Não devem ser usadas
para materiais muito contaminados ou culturas puras de
microrganismos, pois o fluxo de é direcionado no sentido do
operador.
VIDRARIAS
Vidraria refere-se a uma grande variedade de equipamentos de laboratório
que tradicionalmente são feitos de vidro, mas também podem ser plásticos. Em
geral são utilizados em análises e experimentos. Contudo o vidro ainda é muito
utilizado devido a sua transparência, resistência ao calor e por ser praticamente um
material inerte.
Tipos de Vidrarias e suas Funções
Geralmente a vidraria de laboratório apresenta graduações e marcas
volumétricas em suas paredes. Essa marcação pode ser de maior ou de menor
precisão conforme o tipo de vidraria e sua função.
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Além das marcações, da precisão e do tipo de material, a função da
vidraria também é determinada pelo seu formato. Em alguns casos, a vidraria não
apresenta marcação. Algumas tem formato específico para algumas vidrarias (ex.
algumas mantas aquecedoras), e da mesma forma algumas vidrarias tem formatos
específicos para o equipamento (ex. tubos falcon).
As vidrarias também podem apresentar cores e materiais diferenciados:
Vidro cristal: vidro de alta qualidade e transparência, geralmente
denominado vidro boro que possui maios resistência a choques térmicos,
mecânicos e químicos.
Vidro âmbar: é o vidro escurecido, utilizado na maioria das vezes para
diminuir o efeito da luz no armazenamento de compostos fotossensíveis.
Plástico: Atualmente alguns equipamentos estão sendo fabricados com
plástico, em sua maioria por razões econômicas, porém sem apresentar muitas das
qualidades do vidro.
Outros materiais: porcelana, borrachas, metais, entre outros também podem
ser encontrados entre os materiais que compõem as vidrarias de laboratórios.
Descrição das Vidrarias Empregadas em Microbiologia
1. Anel para funil: usado como suporte de funis.
2. Alça de platina: usada basicamente em microbiologia. Pode ser usada para
outros fins.
3. Lâmina: usada por vários setores técnicos e para diversos fins.
4. Lamínula: usada por vários setores e para diversos fins.
5. Câmara de Neubauer: usada para contagem global de células bactérias, e
sanguíneas.
6. Balão de destilação: usado em destilações. Possui saída lateral para
condensação de vapores.
7. Balão de fundo chato: usado para aquecimento e armazenamento de líquidos.
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8. Balão de fundo redondo: usado para aquecimento de líquidos e reações de
desprendimento de gases.
9. Balão volumétrico: usado para preparar e diluir soluções.
10. Becker: usado para aquecimento de líquidos, reações de precipitação etc.
11. Bico de Bunsen: usado para aquecimento.
12. Bureta: usada para medidas precisas de líquidos. Usada em análises
volumétricas.
13. Capilares: tubos de diâmetro reduzido usados em micropesquisas. São
usados também em hematologia (hematócrito) e bacteriologia.
14. Condensador: usados para condensar os gases ou vapores na destilação.
15. Dessecador: usado para resfriar substâncias em ausência de umidade.
16. Erlenmeyer: usado para titulações e aquecimento de líquidos.
17. Escovas: usadas para limpeza de tubos de ensaio e outros materiais.
18. Estante para tubos de ensaio: suporte de tubos de ensaio.
19. Frasco de reagentes: usado para o armazenamento de soluções.
20. Funil de Buchner: usado em conjunto com o Kitassato para filtração a
vácuo.
21. Funil de haste longa: usado em transferências de líquidos e em filtrações
de laboratório.
22. Funil de separação / decantação: usado para separação de líquidos
imiscíveis.
23. Garra metálica: usadas em filtrações, sustentação de peças tais
como condensador, funil de decantação e outros fins.
24. Kitassato: usado para filtração a vácuo.
25. Pinça de madeira: usada para segurar tubos de ensaio durante
aquecimentos diretos no bico de Bunsen.
26. Pinça de Mohr e Pinça de Hoffman: usadas para impedir ou diminuir fluxos
gasosos.
27. Pinça metálica: usada para transporte de cadinhos e outros fins.
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28. Pipeta de Pasteur: usada para a transferência de líquidos.
29. Pipeta de Sahli: usada na dosagem de hemoglobina sangüínea.
30. Pipeta de Thoma: usada para medir a quantidade de células sangüíneas.
31. Pipeta de Westergreen: usada na determinação da velocidade de
hemossedimentação.
32. Pipeta graduada: usada para medir volumes variáveis de líquidos.
33. Pipeta volumétrica: para medir volumes fixos de líquidos.
34. Pisseta: usada para lavagens, desinfeção, remoção de precipitados e outros
fins.
35. Placa de Petri: usada para fins diversos, especialmente cultivo de
microrganismos.
36. Proveta graduada: usada para medidas aproximadas de volumes de
líquidos.
37. Termômetro: usado para a medida de temperaturas.
38. Tubo cônico: usados em pesquisas bacteriológicas,
sedimentoscopia urinária, pesquisas parasitológicas e bioquímica.
39. Tubo de Ensaio: usado em reações químicas, principalmente testes de
reação.
40. Tubo de Wintrobe: usada na determinação do volume celular sanguíneo –
hematócrito.
41. Vidro de relógio: usado para cobrir beckers em evaporações, pesagens e
fins diversos.
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CONCEITOS E DEFINIÇÕES EMPREGADOS AO CONTORLE DE
MICRORGANISMOS ENQUANTO MEDIDAS DE BIOSSEGURANÇA QUE VISAM
MINIMIZAR RISCOS DE CONTAMINAÇÃO
1. Antissepsia: é a eliminação das formas vegetativas de bactérias patogênicas e
grande parte da flora residente da pele ou mucosa, através da ação de substâncias
químicas (antissépticos).
2. Antisséptico: substância ou produto capaz de deter ou inibir a proliferação de
microrganismos patogênicos, à temperatura ambiente, em tecidos vivos.
3. Assepsia: Método empregado para impedir que um determinado meio seja
contaminado. Quando este meio for isento de bactérias chamamos de meio
asséptico.
4. Degermação: é a remoção de detritos, impurezas, sujeira e microrganismos da
flora transitória e alguns da flora residente depositados sobre a pele do paciente ou
das mãos da equipe laboratorial através da ação mecânica de detergente, sabão
ou pela utilização de substâncias químicas (antissépticos).
5. Descontaminação: tem por objetivo a diminuição dos microrganismos sem
eliminação completa devido à presença de matéria orgânica, realizado em
instrumentais e superfícies.
6. Desinfecção: é a eliminação de microrganismos patogênicos na forma
vegetativa de laboratórios e demais ambientes de saúde, geralmente é feita por
meio químicos (desinfetantes).
7. Desinfetantes: substância ou produto capaz de deter ou inibir a proliferação de
microrganismos patogênicos em ambientes e superfícies do laboratório, à
temperatura ambiente.
8. Detergente: substância ou preparação química que produz limpeza; possui uma
ou mais propriedades: tensoatividade, solubilização, dispersão, emulsificação e
umectação.
9. Equipamento de proteção individual (EPI'S): são equipamentos de proteção
utilizados pelo profissional, pessoal auxiliar, paciente e equipamentos, a fim de
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evitar contaminação e acidentes (gorro, máscara, avental, luvas, óculos de
proteção...)
10. Esporos: os esporos nada mais são que a forma mais resistente dos
microrganismos, sendo mais difícil de serem eliminados.
11. Esterilização: é a destruição dos microrganismos nas formas vegetativas e
esporuladas. A esterilização pode ser por meio físico (calor) ou químico (soluções
esterilizantes).
12. Esterilizante: agente físico (estufa, autoclave) ou químico (glutaraldeído 2%,
formaldeído 38%) capaz de destruir todas as formas de microrganismos, inclusive
as esporuladas.
13. Infecção cruzada: é a infecção ocasionada pela transmissão de um
microrganismo de um indivíduo para outro, geralmente pelo pessoal, ambiente ou
um instrumento laboratorial contaminado.
BIBLIOGRAFIA
BRASIL. Biossegurança em laboratórios biomédicos e de microbiologia. Ministério da Saúde. Secretaria
de Vigilância em Saúde. Departamento de Vigilância Epidemiológica. 3.ed. Brasília: Ministério da Saúde,
2006. 290p.
LACAZ, R.. Manual Prático de Microbiologia Básica. 1ª ed. São Paulo: EDUSP - Editora da Universidade
de São Paulo, 2000.
VERMELHO, A. B.. Práticas de Microbiologia. 1ª ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2006.
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RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA DE MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA
Data: ........../............./..............
Curso: FARMÁCIA Turno: NOTURNO Série: 4º PERÍODO Série: ................
Disciplina: MICROBIOLOGIA BÁSICA Professora: LUCIANA CORDEIRO
Tema da Aula: “LABORATÓRIO DE MICROBIOLOGIA”
Aluno: ....................................................................................................................................
EXERCÍCIOS DE FIXAÇÃO
1. Quanto a contextualização descrita nesta apostila, cite três dos
equipamentos requeridos nas práticas de microbiologia, os quais considera
de maior importância para garantir segurança técnica, processual, e de
resultados, e justifique sua resposta.
2. Estabeleça a função de cada uma das vidrarias citadas abaixo.
A) Câmara de Neubauer:
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B) Alça de Platina:
C) Tubo de Ensaio:
D) Placa de Petri:
E) Erlermayer:
F) Pisseta:
G) Becker:
3. Diferencie os termos abaixo:
A) Antissepsia de Assepsia:
B) Detergente de Desinfetante:
C) Esterilização de Descontaminação: