08/03/2012

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PROF MARIANA DONATO

MARIDONATO@GMAIL .COM

Interao antgeno-anticorpo e anticorpos monoclonais Faltou ontem:

BOAS PRTICAS LABORATORIAIS

Responda:

Qual a importancia do estudo da sorologia para o diagnstico?

Como as reaes cruzadas podem interferir no resultado?

Porque feita dosagem semi-quantitativa, para saber a titulao de anticorpos de algum material?

Antgeno Anticorpo

ANTGENO: Qualquer substncia que pode ser especificamente conectada por um anticorpo ou por um receptor de antgenos da clula T

Apenas alguns tem a capacidade de ativar linfcitos, apesar de TODOS serem reconhecidos

Os que ativam: IMUNGENOS

IMUNGENOS: Grandes!

Pequenos: reconhecidos, mas no estimulam LT

Haptenos

1,3-Bis(4-nitrofenil)triazeno

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POLIVALNCIA

Configurao espacial faz diferena:

Determinante conformacional: se perde por desnaturao

Determinante linear: pode ou no ser perdido na desnaturao

Determinante neoantigenico: conseguido aps protelise

Ligao Ag-Ac ligao no-co-valente reversvel

Sua fora depender do eptopo de ligao; chamada de AFINIDADE

Afinidade representada por uma constante de dissociao Indica a facilidade que se separa a ligao Ag-Ac

constante de dissociao: fora de ligao Soro de individuo imunizado ter uma mistura de diferentes Acs, com diferentes afinidades

VALNCIA: IgG: 2 stios de ligao

IgM: 10 stios!

O nome dessa fora de ligao geral AVIDEZ; muito maior do que a ligao de um antgeno apenas um stio

VALNCIA AVIDEZ

Monovalente Baixa

Bivalente Alta

Polivalente Muito Alta

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Especifidade: Poucas diferenas so suficientes para evitar a ligao

Ptn: uma nica diferena de AA suficiente

Evita a reao cruzada

Diversidade:

Um nmero muito grande de Ac gerados

Mecanismos genticos: recombinao gentica

Afinidade: Anticorpos monoclonais: Habilidade de produzir Ac em larga escala

Georges Kohler e Cesar Milstein em 1975

LB: Ac especficos

Imortalizao da linha celular: HIBRIDOMAS

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ETAPAS:

Clulas de mieloma que crescem em meio normal

Fuso das clulas de mieloma com as clulas somticas do indivduo produtor de anticorpos

Com a troca de informao dos genes apenas as clulas completamente hibridizadas vo sobreviver

Clulas do mieloma possuem defeitos na sntese de DNA NORMAL: produzir purina e timidilato (por via de novo) utilizando tetraidrofolato

Drogas antiflicas inibem essa via

Clulas tratadas com essas drogas podem ser recuperadas usando vias alternativas; porm, em cultura, esse meio precisa ser suplementado para que a clula se divida

Meio HAT

Clulas somticas: aps imunizao do animal

Para a fuso: polietilenoglicol

Os hbridos so cultivados de forma a isolar cada clula progenitora

Aps 2 semanas, o crescimento avaliado e so feitos testes RIA ou ELISA, se solveis; se no, outros testes podem ser feitos

Compartimentos positivos so re-isolados

Aps esses procedimentos, clones so selecionados com certa especificidade, e colocados em cultura (dependendo do caso, tumores asctios)

APLICAES DOS MONOCLONAIS: Identificao de marcadores fenotpicos celulares

Imunodiagnstico

Diagnstico de tumores

Terapia

Anlise funcional de molculas de superfcie

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Prximas pesquisas: hibridomas humanos

Uso da gentica (cDNA) para copiar a cadeia polipeptdica Esse tipo de pesquisa permite costurar informaes, formando um gene hbrido, formando anticorpos humanizados

Tambm existe pesquisa utilizando biblioteca de genes em fagos, e esses serem testados aleatoriamente. Aps isso, esse cDNA ser purificado e inserido em uma clula, para a produo em massa

E os policlonais?

Derivados de vrias linhagens de LB, com Ac diversos

Responda: Defina: afinidade, avidez, especificidade, diversidade e valncia

Esquematize a produo de anticorpos monoclonais

Explique quais funes dos anticorpos monoclonais