2014_Manual Prático de Biologia Celular

8/17/2019 2014_Manual Prático de Biologia Celular

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Manual Prático de Citologia Apostila de aulas práticas

PROFª. DRª. ROSEMEIRE BUENO

CEUNSP - Itu20/01/2014


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Profª. Drª. Rosemeire Bueno

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REGRAS PARA O BOM APROVEITAMENTO NAS AULAS PRÁTICAS

Prof.a Drª. Rosemeire Bueno

Os laboratórios apresentam certos perigos inerentes, os quais os estudantes devem

reconhecer e tomar os devidos cuidados. Entretanto, eles podem ser também um lugar

excelente para aprender, dependendo das práticas e atitudes do estudante. Algumas

regras são importantes:

1. Chegar no horário das aulas, pois há necessidade que o trabalho seja executado

com calma e paciência.

2. No início de cada aula, observar cuidadosamente as instruções a respeito dos

experimentos a serem executados. Em caso de dúvida, perguntar ao professor

antes de começar o experimento. A aula prática será de pouco valor, a não ser que

o aluno entenda claramente o objetivo e o método do experimento.

3. O aluno é responsável pelo material que usar durante as aulas práticas, devendo

zelar pela boa manutenção dos materiais e equipamentos. O aluno que danificar o

material permanente ou de consumo, mesmo casualmente, deverá indenizar a

Instituição, a critério do professor.

4. Não esquecer que o avental ou guarda-pó é indispensável. A falta deste

impossibilitará o aluno de participar da aula, e consequentemente não terá

frequência na aula.

5. Notificar qualquer acidente, mal estar ou ferimento o mais breve possível, não

importa o quão trivial possa parecer.

6. Nunca comer ou beber (refrigerantes, cafés, etc.) ou fumar no laboratório.

7. Manter o laboratório limpo.

8. Não jogue lixo nas pias.

9. Não sentar nas bancadas do laboratório. Os ácidos não têm cor distinta.

10. Durante as aulas, o diálogo deve ser em voz baixa.

11. Não riscar ou escrever nas bancadas.

12. Ande, não corra no laboratório.

13. Escolher bem seus colegas de equipe para evitar discussões e incompreensões

que levem a intervenção do professor.


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3REGRAS PARA O BOM APROVEITAMENTO NAS AULAS PRÁTICAS

14. Os relatórios deverão ser entregues rigorosamente na data combinada pelo

professor. Não haverá prorrogação para o prazo de entrega, independente de

imprevistos que possam acontecer (problemas em disquetes, falta de tinta ou

papel para impressora, etc.).15. Antes e após a aula prática, o aluno deve limpar o seu microscópio, de acordo

com as instruções do professor. Ao deixar a sala de aula deve apagar a luz do

microscópio e cobri-lo com a respectiva capa.

16. Somente sair da aula após ter limpado o local de trabalho e executado com

perfeição a prática proposta.

17. É estritamente proibido retirar qualquer material do laboratório.


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4PRÁTICA 1 - APRESENTAÇÃO DO MICROSCÓPIO ÓPTICO

PRÁTICA 1 - APRESENTAÇÃO DO MICROSCÓPIO ÓPTICO

1. MICROSCÓPIO ÓPTICO.

OBJETIVOS: Conhecer o microscópio e as funções de cada componente, assim como os

cuidados a serem tomados para a boa manutenção do mesmo.

Recomendações

O M.O.C. deve ser transportado cuidadosamente com as duas mãos, pelo braço e pela base.

Após o uso, o microscópio deve ser guardado livre de poeira e/ou óleo. Sempre com a menorobjetiva e a platina totalmente levantada.

Micrométrico

Partes principais do microscópio óptico binocular.

O microscópio (palavra de origem grega; micros = pequeno; scopein =observar, olhar com

atenção) é um aparelho destinado a ampliar a imagem das microestruturas observadas,

utilizando para isso, a luz e um sistema de lentes. Ele é composto pelas seguintes partes:

2. PARTES DO MICROSCÓPIO.

Todo microscópio é composto de partes mecânicas e partes ópticas, que juntas nos permitem

a observação detalhada de materiais em estudo.

Mecânicas

a) Base ou pé (suporte do microscópio): é feito de ligas de metais pesados para dar mais

estabilidade e impedir que o aparelho tombe. É usado para o repouso do aparelho na mesa de

trabalho.

b) Braço ou coluna: Sustenta a parte óptica (lentes) e serve para o transporte do

aparelho. Peça que liga o pé à parte superior do microscópio.


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c) Platina ou mesa: forma redonda ou retangular, é fixa, móvel ou giratória no plano

horizontal. Funciona como uma mesa que serve de apoio para a lâmina que contém o

preparado a ser observado. Possui presilhas para melhor fixar a lâmina e é dotada de um

orifício que permite a passagem da luz.

d) Presilhas ou porta-lâmina: local onde a lâmina com o material a ser observado se

encaixa. A lâmina pode ser deslocada em todas as direções, sempre no mesmo plano.

e) Tubo ou canhão: no microscópio monocular, o tubo representa um cilindro metálico,

tendo na parte superior um encaixe para a ocular e na parte inferior um sistema mecânico que

o adapta ao revólver.

f) Botões macrométrico e micrométrico: possuem comandos próprios localizados

lateralmente, permitindo uma focalização precisa, afastando ou aproximando o preparado das

objetivas. Com o botão macrométrico obtém-se a focalização ótica grosseira do materialexaminado, enquanto o micrométrico permite o ajuste fino (2 milésimos de milímetro), dando

dessa forma nitidez à imagem.

g) Revólver: é uma peça giratória na qual estão inseridas 3 ou 4 objetivas, sempre na

ordem de seu aumento progressivo. Para obter aumentos sucessivos (ampliação da imagem)

ou vice-versa, já focalizados macrometricamente, basta girar o câmbio de objetivas ou revólver

em um só sentido, durante as observações microscópicas.

h) "Charriot": peça ligada à platina, com a função de movimentar a lâmina no plano

horizontal da esquerda para a direita e vice-versa, e de trás para frente e vice-versa.

Óticas

a) Oculares: são encaixadas na extremidade superior do tubo. São compostas de duas

lentes que ampliam a imagem formada pela objetiva e corrigem possíveis aberrações ópticas.

Não tornam mais nítidas as estruturas do objeto a ser estudado. Não é aconselhável o uso

simultâneo de objetivas e oculares de forte aumento. O campo visual seria pouco nítido nas

estruturas celulares, quase não haveria luminosidade e o campo ótico seria mínimo. As

oculares trazem inscrições que indicam a sua capacidade de aumento: 15X significa ocular compoder de aumento de 15 vezes.

b) Objetivas: são sistemas óticos, construídos com 4, 5, 6 ou mais lentes superpostas.

Ampliam a imagem do material examinado, corrigindo também os defeitos cromáticos dos

raios luminosos. As objetivas trazem inscrições que especificam sua capacidade de aumento:

10X significa objetiva com poder de aumento de 10 vezes (menor aumento); 40X corresponde

a objetiva com poder de aumento de 40 vezes (aumento superior) e 100X é a objetiva com

poder de aumento de 100 vezes (óleo de imersão). Denomina-se imersão a técnica pela qual

se coloca um fluido (óleo transparente: óleo de cedro ou sucedâneo sintético) entre a objetiva

e a lamínula, o que resulta na melhoria do poder de resolução do microscópio e da qualidade


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da imagem; tornando mais claro o campo do microscópio. As objetivas de imersão geralmente

são marcadas, para identificação, com anéis coloridos: as de imersão em óleo, por exemplo,

possuem anel preto.

Obs.: Aumento: O aumento de um microscópio (valor da ampliação total fornecida por cadaobjetiva) é calculado pela multiplicação do valor da ocular pelo valor da objetiva. Ex.: valor da

ocular (10) x valor da objetiva (40) = 400 x (aumento total)

c) Condensador: conjunto de lentes localizado abaixo da platina. Sua função é fornecer

muita luz. Para tal, é provido de um sistema de lentes convergentes, que concentram e jogam

o maior número de feixes luminosos pela lente frontal da objetiva. O botão do condensador é

que permite a movimentação do mesmo. É indispensável quando se empregam grandes

aumentos. São dotados de um diafragma.

d) Diafragma: controla a quantidade de luz que entra no condensador e atinge apreparação. Ao usar objetivas de pouco aumento, o diafragma deve ser fechado, para eliminar

os raios laterais. O diafragma é aberto na medida em que as ampliações aumentam. A

intensidade da luz poderá ser diminuída por meio de filtros ou reduzindo a tensão elétrica da

fonte de iluminação.

e) Iluminador: fonte luminosa. A própria luz diurna poderá servir para observações

menos acuradas. Microscópios modernos trazem uma fonte de iluminação própria. A luz ao

incidir no objeto deverá ser difusa. A difusão da mesma é obtida logo na saída da fonte, por

meio de um vidro fosco, ou mesmo ao nível do condensador.


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PARTES DO MICROSCÓPIO

1. Identifique, com base nesta figura, cada uma das partes apontadas:

1-__________________________________

2-__________________________________

3-__________________________________

4-__________________________________

5-__________________________________

6-__________________________________7-__________________________________

8-__________________________________

9-__________________________________

10-_________________________________

11-_________________________________

12-_________________________________

13-_________________________________

14- ________________________________

1

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5

4

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3. CUIDADOS BÁSICOS NO USO DO MICROSCÓPIO

1) O microscópio é um instrumento sensível, que exige cuidados especiais por parte

do microscopista, pois caso contrário pode-se avariá-lo para sempre.2) Ao transportar o microscópio use as duas mãos, uma segurando o braço do

aparelho e a outra o sustentando pela base. Nunca carregue o aparelho, usando

apenas uma das mãos. Coloque-o cuidadosamente sobre a mesa e longe da

borda.

3) Se houver alguma lâmpada ligada ao aparelho, cuidado com os fios. É sempre

aconselhável manter a mesa do laboratório livre de tudo o que não seja

absolutamente necessário.

4) Não deixe a lâmpada do microscópio acesa quando você não estiver observando:

habitue-se a desligá-la pois ela tem um tempo de vida curto.

5) Não passe os dedos nas lentes para limpá-las. O vidro das lentes é facilmente

arranhável (mais que o vidro comum), por isso só devemos usar um papel bem

macio (lenço de papel), para limpá-las. Você pode proceder da mesma forma com

as lâminas permanentes, retirando impressões digitais e o pó que fica sobre elas.

6) As objetivas de imersão devem ser limpas utilizando-se cotonetes ou papel

absorvente, se possível embebidos em xilol.

7) Evite molhar o microscópio quando estiver trabalhando; se isso ocorrer seque-o

imediatamente com um pano macio.

8) Não gire o parafuso micrométrico indefinidamente, pois poderá estragar o seu

delicado mecanismo. Use-o somente para ajustar o foco e para as observações de

profundidade. Não force o parafuso macrométrico.

9) Não tente desmontar qualquer parte do microscópio. É um instrumento caro e todo

cuidado é pouco.

10) Quando terminar o trabalho com o aparelho, retire a lâmina da platina, coloque a

objetiva de menor aumento e abaixe o canhão. Desligar o sistema de iluminação,

recobrir o aparelho com a respectiva capa de proteção, evitando-se o acúmulo de

poeira.


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4. PROCEDIMENTOS PARA O USO ADEQUADO DO MICROSCÓPIO

1) Usando o parafuso macrométrico abaixe a platina do microscópio de maneira que

as objetivas não a toquem quando girar o revólver.

2) Gire o revólver de modo que a objetiva do menor aumento fique em linha com a

abertura da platina.

3) Ligue o interruptor localizado na base do microscópio sem fornecer luz

demasiadamente.

4) Coloque a lâmina preparada na platina fixando-a com as presilhas.

5) Movimentar o "charriot" de maneira que o material a ser observado fique no centro

da platina, ou seja, sobre o orifício da platina. Se o microscópio não possuir

"charriot", movimentar a lâmina cuidadosamente com os dedos.6) Iniciar sempre a focalização pela objetiva de menor aumento. Para isso, utilize o

botão macrométrico.

7) Acertar a iluminação do microscópio de acordo com a objetiva a ser usada.

Lembre-se que quanto maior for a incidência de luz sobre o material analisado,

melhor será a sua visualização.

8) Olhando a lâmina diretamente (por fora da ocular) e movendo o parafuso

macrométrico, eleve vagarosamente a platina, até que a objetiva fique a 1 mm de

distância da lamínula. Esta não deve ser tocada pela objetiva.9) Olhando agora pela ocular e movendo o parafuso macrométrico, abaixe a platina

vagarosamente, até que o material da lâmina se torne visível e nítido (focalizado).

Ajuste a intensidade de luz, girando o botão da base do microscópio para a direita

ou para a esquerda.

ATENÇÃO: não eleve a platina ou abaixe o canhão enquanto estiver olhando pela

ocular, porque poderá quebrar a lâmina e inutilizar a preparação.

10) Após focalizar, gire lentamente o parafuso micrométrico localizado sob a platina,

para a direita e para a esquerda, a fim de obter a melhor focalização possível.11)Olhando pela ocular, desloque toda a lâmina vagarosamente para poder explorar

todo o campo da preparação.

12) Passe para a objetiva de 40X. Nessa situação somente o botão micrométrico é

utilizado para ajustar a focalização. Caso você não consiga focalizar volte para a

objetiva menor e repita toda a operação. Nunca force a objetiva sobre a lâmina,

você poderá quebrar a lâmina.

13) Se você não dispõe de óleo de imersão não utilize a objetiva de 100X.


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14) Evite acidentes e preserve o material didático. Em caso de dúvida, chame o

professor.

5. ATIVIDADE

Responder as seguintes questões:

1. Onde se coloca a lâmina com o objeto a ser focalizado no microscópio?

Resposta:_____________________________________________________________

2. Como se reconhece a objetiva de imersão?

Resposta:_____________________________________________________________

_____________________________________________________________________

3. Como se focaliza em imersão?

Resposta:_____________________________________________________________

_____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________ _____________________________________________________________________

4. Qual a finalidade do uso do óleo de imersão na focalização em imersão?

Resposta:_____________________________________________________________

5. Como se calcula o aumento final do objeto após a focalização?

Resposta:_____________________________________________________________

6. Qual é o aumento final obtido quando se usa uma objetiva de 100x e ocular de

10x?

Resposta:_____________________________________________________________7. Qual é a finalidade do condensador?

Resposta:_____________________________________________________________

8. Qual é a finalidade do diafragma?

Resposta:_____________________________________________________________

9. Cite 5 cuidados básicos que você deve ter com o microscópio após o uso.

Resposta:_____________________________________________________________

_____________________________________________________________________

____________________________________________________________________


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11PRÁTICA 2 - USO DO MICROSCÓPIO: Observação das letras A, F e L

PRÁTICA 2 - USO DO MICROSCÓPIO: Observação das letras A, F e L

1. INTRODUÇÃO.

2. OBJETIVOS.

Introduzir o aluno nas atividades de laboratório. Conhecer o funcionamento do

microscópio óptico, aprender a manipulá-lo, conhecer as unidades de medida

utilizadas em microscopia e relacionar as imagens formadas e os aumentos obtidos

com o seu funcionamento.

3. MATERIAIS:

- Microscópio.- Lâminas e lamínulas.- Papel absorvente ou papel filtro.- Letras recortadas.- Recipiente dom água de torneira.- Tesoura.- Conta-gotas ou pipeta Pasteur.- Régua de plástico.

4. PROCEDIMENTO.

Obs.: Os materiais a serem observados são colocados sobre uma lâmina de vidro e

cobertos por outra, muito delgada, que é a lamínula.

Lâminas e lamínulas devem estar bem limpas para serem usadas. Evite tocá-las nas

superfícies com os dedos: segure-as pelos bordos usando o polegar e o indicador.

Para limpá-las use lenço de papel. As lamínulas são muito frágeis e quebram-se

facilmente.

a) Recortar as letras A, F ou L do jornal e/ou revistas (as menores letras possíveis) ou

utilizar letras recortadas.

b) Com o auxílio de uma pinça e um pincel, colocar a letra no centro de uma lâmina

limpa, com a letra voltada para cima, e acrescentar uma gota de água sobre a

mesma.

c) Colocar uma lamínula sobre a gota da seguinte maneira: encostar uma das bordas

da lamínula sobre a lâmina, de maneira que forme um ângulo de 45°. Baixar a

lamínula vagarosamente até que a mesma cubra a amostra.


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d) Remover o excesso de água, encostando um papel absorvente nas bordas da

lamínula. não elimine toda a água, o preparado deve ficar sempre submerso. Se

necessário, bater ligeiramente sobre a lamínula, com o cabo do pincel, para a

remoção de possíveis bolhas de ar.e) Coloque esta lâmina sobre a platina do microscópio, de modo a manter a letra na

posição em que é lida por você.

f) Proceder de acordo com as instruções "Procedimentos para o uso adequado do

microscópio", observar as letras ao microscópio em todos os aumentos (exceto o

de imersão) esquematizar e anotar a posição das letras focalizadas.

g) Colocar uma régua sobre a platina, focalizar suas divisões utilizando todas as

objetivas do microscópio (proceder de modo idêntico ao das lâminas) e medir o

diâmetro do campo em milímetros e em micrometros.

h) Terminado o trabalho, retire a lâmina da platina, coloque a objetiva de menor

aumento, desligue o fio da tomada. Verifique se o microscópio não tem respingos

de água. Enxugue-o se for o caso. Coloque a capa de proteção.


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PREPARANDO LETRAS PARA SEREM

OBSERVADAS AO MICROSCÓPIO

Centro de Estudos do Genoma Humano. Diagramação: Regina de Siqueira Bueno


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5. RESULTADOS E DISCUSSÃO (incluir as respostas das questões, quando

solicitado).

a) Compare a posição e o tamanho da imagem da letra quando visualizada pela

ocular e quando vista diretamente por fora (a olho nu). O que você observa?

b) Desenhar as letras visualizadas, nos círculos correspondentes as objetivas,

obedecendo a proporção existente entre a objetiva utilizada e o tamanho da letra

observado. O desenho deve se aproximar o máximo do real. Não desenhe o que

você não vê.

c) Nas objetivas de diferentes aumentos, o que você notou quanto ao tamanho da

imagem e quanto à área do campo de observação (campo visual)? tornou-se

maior ou menor? Justifique. Houve alteração na posição da imagem?

d) Olhando pela ocular mova lentamente a lâmina para a esquerda, para a direita,

para frente e para trás. Descreva o que você nota.

e) Esquematize as objetivas, especificando as inscrições das lentes do seu

microscópio. Explique o significado destas inscrições.

f) Como se distingue a objetiva utilizada para a imersão em óleo das demais

objetivas? Por que se deve utilizar óleo de imersão na objetiva de 100X?

g) Questão: Em um microscópio óptico dotado de lente ocular 10X e de lente

objetiva 15X, um citologista obteve uma imagem de 0,3 mm de diâmetro de uma

estrutura circular. Qual o tamanho real, em nm, da estrutura observada?

6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS.


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DESENHO ESQUEMÁTICO DAS LETRAS OBSERVADAS AOMICROSCÓPIO

Objetiva

10X

Objetiva

40X

Objetiva

4XOlho nu


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16PRÁTICA 3 - APRESENTAÇÃO DA CÉLULA ANIMAL

PRÁTICA 3 - APRESENTAÇÃO DA CÉLULA ANIMALExame de material vivo: Análise das células da mucosa bucal (células epiteliais).

1. INTRODUÇÃO.

2. OBJETIVOS.Conhecer alguns métodos de observação das células, identificando os efeitos

produzidos por corantes em um mesmo material. Observar um tipo de célula deorigem animal, as células epiteliais que revestem a cavidade bucal, diferenciando-a dacélula vegetal e bacteriana.

3. MATERIAIS:

- Microscópio.

- Azul de metileno a 1% ou 0,5% ou lugol.

- Lâmina e lamínula.

- Conta-gotas ou pipeta Pasteur.

- Palito de sorvete ou espátula.

- Células descamadas da mucosa bucal

- Papel filtro.

- Água destilada ou solução salina.

- Recipiente para o descarte das lâminas e lamínulas utilizadas.

4. PROCEDIMENTO.

a) Com o auxílio de um palito de sorvete ou espátula, raspar suavemente a mucosa

bucal da face interna da bochecha para a obtenção de células da mucosa bucal.

b) Preparação a fresco sem coloração: Colocar o material no centro de uma lâmina

limpa com uma gota de água destilada ou solução salina.c) Descarte o objeto que serviu para coletar o material da boca.

d) Cobrir com lamínula (ângulo de 45° para não formar bolhas de ar).

e) Enxugue o excesso de solução encostando um pedaço de papel filtro na borda

externa da lamínula, na linha de contato entre esta e a lâmina.

f) Observar ao microscópio nas lentes objetivas de menor, médio e maior aumento.

Na objetiva de 4X feche um pouco o diafragma e abaixe o condensador para obter

melhor contraste.

g) Examine, desenhe e anote o que observou.

O azul de metileno é umcomposto aromático

heterocíclico solúvel emágua, com a fórmula

molecular C16H18CIN3S.Usado como corante e

indicador, é um remédio decor azul, em farmácias

comuns.


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h) Preparação a fresco corada com azul de metileno: Retirar a lâmina do

microscópio e substituir a água ou a solução salina do mesmo material pelo

corante azul de metileno, utilizando papel filtro.

i) Sem tirar a lamínula apoie a lâmina e coloque uma gota de azul de metileno nalinha de contato entre a lamínula e a lâmina.

j) No lado oposto da lamínula (sem retirá-la), encoste um pedaço de papel filtro. Este

papel absorverá a solução salina ou água, permitindo que o corante penetre, por

capilaridade, por baixo da lamínula, pelo outro lado.

k) Observar a lâmina novamente ao microscópio.

5. RESULTADOS E DISCUSSÃO. (incluir as respostas das questões, quandosolicitado).

A. Faça um esquema representando o que você observou, antes e após a coloração.

B. Questões:

1. As células epiteliais apresentam forma e contorno definidos? Qual a disposição

das mesmas?

2. Ao raspar a parte interna da bochecha, que tipo de tecido foi coletado?

3. O azul de metileno, sendo um corante básico, cora principalmente o núcleo ou o

citoplasma? Por quê?

4. Quais as estruturas básicas de uma célula animal?

5. O que você observa no interior das células? Com e sem corante.

6. Você notou parede celular, vacúolos e plastos no citoplasma desta célula? Por

quê?



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OBSERVAÇÃO DE CÉLULAS HUMANAS EM ESFREGAÇO DEMUCOSA BUCAL (Método alternativo)


http://genoma.ib.usp.br/wordpress/wp-content/uploads/2011/04/Observacao_Celulas_Humanas_web1.pdf


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DESENHO ESQUEMÁTICO DAS CÉLULAS HUMANAS DAMUCOSA BUCAL

Aumento: 4X

Sem corante Com corante

Aumento: 10X


Aumento: 40X



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20PRÁTICA 4 - APRESENTAÇÃO DA CÉLULA VEGETAL

PRÁTICA 4 - APRESENTAÇÃO DA CÉLULA VEGETALExame de material vivo: Análise das células da epiderme da cebola e do tomate.

1. INTRODUÇÃO.

2. OBJETIVOS.

Conhecer alguns métodos de observação das células e observar a estrutura da

célula vegetal, diferenciando-a da célula animal.

3. MATERIAIS:

- Microscópio.- Azul de metileno 0,1% ou lugol.- Lâmina e lamínula.- Conta-gotas ou pipeta Pasteur.- Lâmina de barbear e pinça.- Papel filtro.- Água destilada.- Cebola e tomate.

4. PROCEDIMENTO.

4.1. Cebola

a. Cortar uma cebola em quatro e, da parte

interna de uma escama (catáfilo) retirar

uma película correspondente a epiderme

da célula vegetal, com o auxílio de uma

pinça.

b. Colocar a película sobre uma lâmina limpa

com uma gota de água destilada,distendendo-a muito bem.

c. Cobrir com lamínula (ângulo de 45° para não formar bolhas de ar).

d. Remover o excesso de água com papel filtro e observar ao microscópio.

e. Preparar outra lâmina, corar o material com azul de metileno 0,1% (de forma

idêntica a preparação para célula animal) e observar ao microscópio.


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OBSERVAÇÃO DE CÉLULAS DA EPIDERME DA CEBOLA


http://genoma.ib.usp.br/wordpress/wp-

content/uploads/2011/04/Observacao_Celulas_Vegetais_web1.pdf

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DESENHO ESQUEMÁTICO DAS CÉLULAS DA EPIDERME DECEBOLA

Aumento: 4X


Aumento: 10X


Aumento: 40X



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4.2. Tomate

a. Com o auxílio de uma lâmina de barbear, recortar um triângulo com cerca de 1

cm de lado na superfície de um tomate maduro.

b. Com uma pinça, retirar a epiderme do pedaço recortado (primeira camadaexterna).

c. Colocar a película sobre uma lâmina limpa com uma gota de água destilada,

distendendo-a muito bem.

d. Cobrir com lamínula (ângulo de 45° para não formar bolhas de ar).

e. Remover o excesso de água com papel filtro e observar ao microscópio.

f. Preparar outra lâmina, corar o material com azul de metileno 0,1% e observar

ao microscópio.

5. RESULTADOS E DISCUSSÃO. (incluir as respostas das questões, quando

solicitado).

A. Faça um esquema representando o que você observou, delineando-as

corretamente, antes e após a coloração.

B. Questões:


1. Em qual das preparações foi possível observar as células com seus núcleos? Comente.

2. Qual a disposição das células da epiderme da cebola?

3. Quais estruturas observadas nestas células que não ocorrem nas células animais?

4. Faça uma comparação (semelhanças e diferenças) entre a célula da mucosa bucal

(animal) e a da cebola ou tomate (vegetal).


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OBSERVAÇÃO DE CÉLULAS DA EPIDERME DO TOMATE

Centro de Estudos do Genoma Humano. Diagramação: Regina de Siqueira Buenohttp://genoma.ib.usp.br/wordpress/wp-

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DESENHO ESQUEMÁTICO DAS CÉLULAS DA EPIDERME DOTOMATE

Aumento: 4X


Aumento: 10X


Aumento: 40X



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26PRÁTICA 5 - APRESENTAÇÃO DA CÉLULA BACTERIANA

PRÁTICA 5 - APRESENTAÇÃO DA CÉLULA BACTERIANA Análise microscópica de bactérias.

1. INTRODUÇÃO.

2. OBJETIVOS.

Identificar as bactérias e suas diferenças em relação às células eucarióticas.

Aprender o procedimento para utilização de óleo de imersão.

3. MATERIAIS:

- Microscópio.- Azul de metileno 0,1% ou lugol.- Fucsina básica.- Lâmina e lamínula.- Espátula.- Conta-gotas ou pipeta Pasteur.- Papel filtro.- Óleo de imersão.

4. PROCEDIMENTO.

a) Retire um pouco da placa bacteriana dos seus dentes com o auxílio da espátula e

espalhe esse material em uma lâmina.

b) Adicione uma gota de fucsina básica e cubra com a lamínula.

c) Observe ao microscópio na objetiva de 1.00X, utilizando o óleo de imersão.

d) Examine, desenhe e anote o que observou.

e) Repita o procedimento adicionando agora uma gota de azul de metileno. 0,1% (deforma idêntica a preparação para célula animal) e observar ao microscópio.


solicitado).

Faça um esquema representando o que você observou, delineando-as corretamente,

antes e após a coloração.


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27PRÁTICA 5 - APRESENTAÇÃO DA CÉLULA BACTERIANA

DESENHO ESQUEMÁTICO DAS CÉLULAS BACTERIANAS

Aumento: 100X

Corante: Fucsina básica Corante: Azul de metileno 0,1%.

Questões:

1. O que são bactérias?

2. Por que adicionou azul de metileno?

3. Quais as diferenças entre uma bactéria (célula procariótica) e uma célula

animal (eucariótica)?

6.REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS.


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28PRÁTICA 6 – MEMBRANA PLASMÁTICA E SUA PERMEABILIDADE

PRÁTICA 6 – MEMBRANA PLASMÁTICA E SUA PERMEABILIDADE1. Permeabilidade da membrana plasmática – efeito da acetona.

1. INTRODUÇÃO.

2. OBJETIVOS.

Demonstrar a presença da membrana em células vegetais e animais. Verificar a

permeabilidade da membrana celular. Observar o comportamento da membrana

quanto a sua permeabilidade seletiva a diferentes substâncias e tratamentos.

3. MATERIAIS:

- Beterraba (Beta vulgaris).- Soluções de acetona: (25%, 50%, 75% e 100%).- Tubos de ensaio e estante para tubos.- Água destilada e provetas.

4. PROCEDIMENTO.

a) Numere os tubos de ensaio e coloque em cada um deles 5 ml da solução deacetona, nas seguintes concentrações:

Tubo A: água destilada (concentração zero de acetona)

Tubo B: acetona 25%

Tubo C: acetona 50%

Tubo D: acetona 75%

Tubo E: acetona 100%

b) Cortar cubos de beterraba (1 cm3

) e adicionar a cada um dos 5 tubos de ensaiodistintos.

c) Esperar uma hora e anotar os resultados.


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29PRÁTICA 6 – MEMBRANA PLASMÁTICA E SUA PERMEABILIDADE


solicitado).

Descreva o resultado obtido em cada tubo, comparando-os.

Se possível, registre o resultado com fotografias ou desenhos.

Questões:

1. Explique as diferentes colorações observadas nos 5 tubos analisados.

2. Como a membrana plasmática sendo uma membrana semi-permeável tornou-se

permeável?

3. Por que no tubo 5 ocorreu nova alteração de coloração?

4. Que nome se dá ao movimento de água através da membrana plasmática?

5. Qual a diferença entre os fenômenos de difusão e osmose?



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30PRÁTICA 7 – MEMBRANA PLASMÁTICA

PRÁTICA 7 – MEMBRANA PLASMÁTICA2. Osmose em células vegetais - Efeito da diferença de concentração.

1. INTRODUÇÃO.

2. OBJETIVOS.

Demonstrar a presença da membrana plasmática em células vegetais. Visualizar o

processo de osmose em células vegetais e determinar quais os meios isotônicos

hipertônicos e hipotônicos à célula vegetal, baseando-se na sua alteração estrutural.

Observar os fenômenos de plasmólise e deplasmólise.

3. MATERIAIS:

- Lâminas e lamínulas.- Lâmina de babear e pinça.- Soluções de NaCl (0,9% e 1,5%).- Água destilada e papel filtro.- Epiderme de cebola ( Allium cepa) ou folhas de Tradescantia.

- Microscópio.

4. PROCEDIMENTO.

a) Retirar cuidadosamente uma película fina correspondente a epiderme inferior da

folha de Tradescantia ou da cebola, com o auxílio de uma lâmina de barbear.

b) Colocar o película sobre uma lâmina limpa com uma gota da solução de NaCl

0,9%, distendendo-a muito bem.

c) Cobrir com lamínula (ângulo de 45° para não formar bolhas de ar) e observar aomicroscópio.

d) Retirar a solução de NaCl 0,9% utilizando papel filtro e adicionar uma gota de NaCl

1,5%.

e) Observar ao microscópio o fenômeno da plasmólise e o contorno da membrana

plasmática.

f) No lado oposto da lamínula, encoste um pedaço de papel filtro delicadamente para

tirar a solução de NaCl 1,5% e adicionar uma gota de água destilada. Observar ao

microscópio o que acontece com esta célula.


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solicitado).

Esquematizar e discutir o que acontece com a célula vegetal nas três condições

distintas, classificando as células quanto a sua tonicidade.

Questões

1. Explique por que as saladas temperadas murcham após determinado tempo.

2. Diferenciar os processos de plasmólise e deplasmólise em células vegetais.

3. Certas conservas são feitas com salmoura. Você é capaz de explicar por que

não ocorre ataque dos micro-organismos nesses alimentos?



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DESENHO ESQUEMÁTICO DAS CÉLULAS VEGETAIS SOBDIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE SAL (OSMOSE)

Solução: NaCl 0,9%

Cebola Tradescantia


Cebola Tradescantia

Solução: Água destilada

Cebola Tradescantia


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PRÁTICA 8 – MEMBRANA PLASMÁTICA3. Osmose em células animais (hemácias)

1. INTRODUÇÃO.

2. OBJETIVOS.

Visualizar o processo de osmose em células animais. determinar quais os meios

isotônicos hipertônicos e hipotônicos à hemácea, baseando-se na sua alteração

estrutural. Observar o fenômeno da hemólise.

3. MATERIAIS:

- Lanceta descartável.- Lâminas e lamínulas.- Soluções de NaCl (0,9% e 1,5%).- Água destilada e papel filtro.- Microscópio.- Luvas cirúrgicas.

4. PROCEDIMENTO.

a) Retirar cuidadosamente uma gota de sangue do dedo (punção digital) e colocar

sobre uma lâmina limpa com uma gota da solução de NaCl 0,9%.

b) Cobrir com lamínula (ângulo de 45° para não formar bolhas de ar) e observar ao

microscópio.

c) Repetir o experimento utilizando uma gota da solução de NaCl 1,5% e observar ao

microscópio.

d) Repetir o experimento utilizando uma gota de água destilada e observar aomicroscópio o fenômeno da hemólise.


solicitado).

Esquematizar e discutir o que acontece com a célula animal nas três condições

distintas, classificando as células quanto a sua tonicidade.


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DESENHO ESQUEMÁTICO DAS CÉLULAS ANIMAIS SOBDIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE SAL (OSMOSE)



Solução: Água destilada


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Questões:

1. O que é hemólise? Onde e como ela ocorreu?

2. Determine as soluções hipotônicas, hipertônicas e isotônicas.

3. Diferenciar os processos de osmose vegetal e animal.



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36PRÁTICA 9 – REPRODUÇÃO ASSEXUADA - BROTAMENTO EM Saccharomyces cerevisae.

PRÁTICA 9 – REPRODUÇÃO ASSEXUADA - BROTAMENTO EM Saccharomyces cerevisae.

1. INTRODUÇÃO.

2. OBJETIVOS.

Observar as células de levedura devido a facilidade de reprodução deste micro-

organismo em pequeno espaço de tempo.

3. MATERIAIS:

- Microscópio.- Fermento.- conta-gotas.- lâmina e lamínula.- Pincel.- placa de Petri.- Béquer.- açúcar e água.

- guardanapo de papel.

4. PROCEDIMENTO.

a) Dissolver uma pequena porção de fermento em 2 mL de água. Adicionar 1/4 colher

(café) de açúcar. Misturar.

b) Fazer um esfregaço do material sobre uma lâmina de vidro, cobrir com lamínula e

observar ao microscópio.

c) Desenhe a sua observação.


solicitado).

Esquematizar e relacionar a reprodução assexuada com os processos de divisão

celular.


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37PRÁTICA 9 – REPRODUÇÃO ASSEXUADA - BROTAMENTO EM Saccharomyces cerevisae.

DESENHO ESQUEMÁTICO DA LEVEDURA EM BROTAMENTO

Aumento: 4X Aumento: 10X

Aumento: 40X Aumento: 100X



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38PRÁTICA 10 - MITOSE.

PRÁTICA 10 - MITOSE.Observação de mitose em células vegetais (técnica do esmagamento).

1. INTRODUÇÃO.

2. OBJETIVOS.

Aprender a técnica de preparação de lâmina para o estudo microscópico da divisão

celular e observar as diferentes fases da mitose em raízes de cebola comum ( Alium

cepa).

3. MATERIAIS:

- Microscópio.- Béquer.- Lâminas e lamínulas.- Estilete, pinça e pincel.- Lamparina ou bico de Bunsen ou vela.- Papel filtro.

- Tubo de ensaio.- Cebola (raiz em crescimento).- Papel mata-borrão.- Placa de Petri ou vidro de relógio.- Tesoura.- Água.- Orceína acética 70% (corante preparado em ácido acético) ou solução a 1,5%

4. PROCEDIMENTO.

a) Raspar levemente com uma faca as raízes secas das cebolas novas, eliminando-as sem ferir o bulbo. Colocar somente a parte inferior da cebola em um béquer

contendo água, mantendo-o em local sombreado. Aproximadamente em uma

semana aparecerão diversas raízes.

b) Cortar com a tesoura ou estilete as extremidade das raízes (3 ou 4 mm) e

imediatamente colocar no tubo de ensaio contendo 0,5 mL a 1,0 mL de orceína

acética 70% ou 2,0 mL de orceína 1,5%.

c) Ferver com cuidado durante 3 ou 4 vezes e transferir o material para uma placa de

Petri ou vidro de relógio.


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d) Com uma pinça ou pincel, transfira uma ou duas pontas de raiz para uma lâmina

limpa. Adicionar 1 a 2 gotas de orceína acética fria sobre as raízes e picá-las com

o estilete.

e) Aguardar 5 minutos, colocar a lamínula sobre o material, evitando a formação debolhas de ar. Envolver a lamínula com um papel mata-borrão e com o polegar,

esmagar levemente o tecido da raiz.

f) Examinar a preparação ao microscópio e identificar as diferentes fases da mitose

das células em divisão: prófase, metáfase, anáfase e telófase..


solicitado).a. Esquematizar as fases observadas na objetiva de melhor resolução e descrever

as principais características de cada fase.



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DESENHO ESQUEMÁTICO DA MITOSE EM RAIZ DE CEBOLA

Prófase Metáfase

Anáfase Telófase

Intérfase

2014_Manual Prático de Biologia Celular

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