Primeiro slide

1

INTERAO

FRMACO-RECEPTOR

E

MTODOS EM

FARMACOLOGIA

Primeiro slide

2

INTERAO FRMACO-RECEPTOR

AR*

Primeiro slide

3

Ligao total - Inespecfica = Ligao especfica

Membrana

semi-purificada

do tecido Ligao total

[3H]QNB tampo

M

M M M M

M M M M

[3H]QNB atropina tampo

Ligao inespecfica

Membrana

semi-purificada

do tecido

M M M

M M M M

M

AFINIDADE E DENSIDADE DE RECEPTOR

Estudos com ligantes radioativos

Primeiro slide

4

AFINIDADE E DENSIDADE DE RECEPTOR

KD e Bmax

0 20 40 60 80 0

50

100

B (fmol/mg protena)

B/F

(f

mo

l/m

g/n

M)

B (fmol/mg protena)

B/F

(f

mo

l/m

g/n

M)

0 20 40 60 80 0

50

100 Ensaio de saturao

Primeiro slide

5

a b c

e

Estudos funcionais Emax, EC50

EFICCIA

d FNF

ACh

f

Primeiro slide

6

Curva Concentrao-efeito do Agonista

Resposta fisiolgica no diretamente proprorcional ocupao

Estudos funcionais Emax, EC50

EFICCIA

Potncia:

afinidade +

eficcia -10 -9 -8 -7 -6 -5 -4

0

50

100Controle Basal

Controle Casena

Hiperproteica S/R

Fenilefrina log [M]

% c

on

trao

Primeiro slide

7

AGONISTA TOTAL e PARCIAL

Agonista parcial: resposta submxima eficcia (a < 1) (com 100% de ocupao)

Agonista total: resposta mxima eficcia (a =1)

Primeiro slide

8

AGONISTA INVERSO

Afinidade pelo receptor em repouso

Primeiro slide

9

ANTAGONISMO ENTRE FRMACOS

Antagonismo qumico: interao em soluo

Antagonismo farmacocintico: alt. absoro, metab...

Antagonismo fisiolgico: efeitos opostos

Antagonismo competitivo: mesmo receptor

reversvel

irreverssvel

Antagonismo no competitivo: stios diferentes

Primeiro slide

10

ANTAGONISMO COMPETITIVO REVERSVEL

No muda o efeito mximo na presena do antagonista

Primeiro slide

11

ANTAGONISMO COMPETITIVO IRREVERSVEL

o efeito mximo na presena do antagonista

Primeiro slide

12

log [M] antagonistas

Lig

ao

esp

ecfic

a [

3H

]QN

B(%

do

co

ntr

ole

)

-13 -11 -9 -7 -5 -3

0

50

100

A

Atropina

Pirenzepina

4-DAMP

Metoctramina

HHSiD

log [M] antagonistas

Lig

ao

esp

ecfic

a [

3H

]QN

B(%

do

co

ntr

ole

)

-13 -11 -9 -7 -5 -30

25

50

75

100

Atropina

Metoctramina

HHSiD

B

Estudos com ligantes radioativos

CARACTERIZAO DE SUBTIPOS DE RECEPTOR

Ensaio

de

competio

pKi = -log IC50

Primeiro slide

13

Estudos funcionais

Primeiro slide

14

M1

Imunohistoqumica Imunofluorescncia

Imunomarcao

M3

Protena

Primeiro slide

15

Western Blotting

Protena M3

Primeiro slide

16

Reao da transcriptase reversa - reao em cadeia da polimerase (RT-PCR)

PM

m1

m2

m3

m4

GA

PD

H

Crebro

600

Extrao do RNA total com CsCl

random primers

RT

cDNA

Termociclador

35 ciclos

dNTPs

primers especficos

taq DNA polimerase tampo

RNAm

Primeiro slide

17

m2

b-actin

Ribonuclease Protection Assay (RPA)

Extrao

RNA total +

sonda

[32P]-RNA

Hibridizao

RNAse

[32P]-RNAm