Aplicação e comparação de diferentes metodologias de extração na determinação das atividades

antimicrobianas e antioxidantes de extratos vegetais da Campomanesia sessiliflora O. Berg.

Mestrando:Felipe Francisco Bittencourt Junior

• Graduado em Biomedicina pelo Centro Universitário da Grande Dourados (2010).

• Mestrando em Recursos naturais pela Universidade Estadual do Mato Grosso do Sul (Mar/2012-Mar/2014).

• Linha de pesquisa: Bioprospecção.

• Orientador: Prof. Dr. Euclésio Simionatto (UEMS).

• Co-orientador: Prof. Dr. Marcus Vinícius Pimenta Rodrigues (UNOESTE).

Bioprospecção:

“Método de localizar, avaliar e explorar sistemática e legalmente a diversidade de vida existente em

determinado local. Tem como objetivo principal a busca de recursos genéticos e bioquímicos para fins

comerciais”. (FARNSWORTH, N. 1997)

Genética: Manipulação gênica. Bioprodutos: hormônios vegetais. Química: biodiesel. Cosmetologia: Descoberta e manipulação de novas

substâncias em prol da estética. Bioquímica: princípios ativos. Farmacologia/microbiologia: síntese de novos

fármacos/tratamentos. “Cerca de 25% dos medicamentos existentes foram elaborados

com ingredientes ativos extraídos de plantas”. REID et al (1993)

Aplicações

Principais métodos de extração de substâncias:InfusãoMaceraçãoDestilaçãoUso de solventes

Antimicrobianos Antioxidantes Antinflamatórios Hipoglicemiantes Herbicidas: Curatella americana L. (Lixeira)“O extrato diclorometanólico da folha da lixeira apresentou um

elevado potencial fitotóxico, em concentrações semelhantes às utilizadas pelos herbicidas comerciais. (BARBOSA, Cecília.Soares et al.)

Propriedades comumente exploradas:

Popularmente conhecida como Guavira,Guabiroba.

Nativa do Brasil. Pouco exigente em relação

ao solo/clima. Consumida popularmente

“in natura”, em sorvetes ou na cachaça.

Campomanesia sessiliflora

AdstringenteAntidiarréica FrutosHipoglicemianteRelaxante muscularAntinflamatório FolhasAnalgésico

Propriedades conhecidas

Comparar a eficiência de extração dos solventes empregados.

Avaliar a atividade antioxidante e antimicrobiana dos extratos das folhas de Campomanesia sessiliflora O. Berg.

Fornecer base para futuras pesquisas.

Objetivos

Avaliação da atividade antimicrobiana (UNIGRAN)

Avaliação da atividade antioxidante (Unidade de Naviraí)

Bioautografia

Metodologia

Solventes empregados:

Hexano: (apolar)Acetato de etila: (apolar)Clorofórmio: (apolar)Metanol: (polar)

Metodologia

Preparação dos extratos

Evaporador rotativo

Método de difusão em ágarTeste Qualitativo

Reativação das bactérias. Semeadura e padronização (escala 0,5

mac Farland). Cobertura da superfície do ágar com

solução bacteriana padrão. Perfuração do ágar e inoculação do extrato

(concentrações de 200ug/mL e 100ug/mL).

Incubação em estufa (24h). Leitura dos resultados e comparação com

antibióticos padrão (gentamicina e ampicilina) e tabela.

Concentração Inibitória Mínima

Bactérias utilizadas:Concentrações de extrato

Escherichia coli Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pyogenes Proteus mirabilis Enterococcus faecalis

• 100 ug/mL• 50ug/mL• 25ug/mL• 12,5ug/mL• 6,25ug/mL• 3,12ug/mL• 1,56ug/mL• 0,75ug/mL• ...

Teste Quantitativo

Determinação da MIC

Baseados na espectrofotometria

•Diferença de absorbância

•Solução teste – solução padrão (controle)

Testes antioxidantes

Indica o grupo de substâncias com atividade antimicrobiana presentes no extrato.

Borifar substância com cultura bacteriana em placa cromatografada.

Incubar por 24h. Corar com eosina. Leitura do cromatograma. A inibição é indicada por

clareamento

Bioautografia

Resultados já obtidosExtrato hexânico:

Não ocorreu atividade inibitória

Extrato de acetato de etila:

Atividade inibitória perante:S. aureus: 35 mmP. aeruginosa: 37 mmE. faecalis: 32 mmP. mirabilis: 40 mm

OBS* Relativos à concentração de 200ug/mL

Resultados

Inibição do crescimento de Staphylococcus aureus após o mesmo ser confrontado com o extrato de acetato de etila da Campomanesia sessiliflora

O. Berg.

LIMA MRF, XIMENES CPA, LUNA JS, SANT’ANA AEG 2006a. The antibiotic activity of some Brazilian medicinal plants. Rev Bras Farmacogn 16: 300-306.

MOKBEL, M.S.; HASHINAGA, F. Evaluation of the antioxidant activity of extracts from buntan (Citrus grandis Osbeck) fruit tissues. Food Chemistry, v. 94, n. 4, p. 529-534, 2006. BARRY AL, THORNSBERRY C 1991. Susceptibility tests: Diffusion Test Procedures. In: BALOWS A, HAUSER WJ, HERMANN KL, ISENBERG HD, SHAMODY HJ 1991. Manual of clinical microbiology. 5.ed. Washington, DC:American Society for Microbiology, p. 1117-1125.

BAUER, A.W.; KIRBY, W.M.; SHERRIS, J.C; TURCK, M. Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. American Journal Clinical Pathology, v. 45, p. 493-496, 1966.

CAVIN, A.; HOSTETTMANN, K.; DYATMYKO, W.; POTTERAT, O. Antioxidant and Lipophilic Constituints of Tinospora crispa . v. 64, p. 393-396, 1998.

WATERMAN, P.G., MOLE, S. Analysis of phenolic plant metabolites. Oxford: Blackwell Scientific, p. 238, 1994.

MOKBEL, M.S.; HASHINAGA, F. Evaluation of the antioxidant activity of extracts from buntan (Citrus grandis Osbeck) fruit tissues. Food Chemistry, v. 94, n. 4, p. 529-534, 2006

Referências

Agradecimentos