Apostila+de+Parasitologia+Clínica+Protozoários+e+Helmintos+Profa+Rose (2)

7/22/2019 Apostila+de+Parasitologia+Clnica+Protozorios+e+Helmintos+Profa+Rose (2)

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Apostila de ParasitologiaProtozorios - Helmintos

Professora Especialista: Rose Felipe

2009


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Parasitologia - Introduo


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I) EXAME DIRETO

EXAME MACROSCPICO DE PREPARAES A FRESCO

O diagnstico realizado pela observao microscpica dos oocistos entre lminas e lamnulas. O

exame direto a fresco realizado diretamente das fezes diarreicas, ou aps a diluio das fezes

pastosas, em soluo salina a 0,85% (1:5). Examinar com objetiva de imerso. A microscopia de

contraste de fase facilita a observao dos parasitas.

Observaes: O oocisto no exame direto aparece maior que aqueles observados nos esfregaos

fixados e corados. Os oocistos apresentam-se como elemento esfricos de 5 a 6 m de dimetro,

com membrana externa fina, com um citoplasma finalmente granulado, e com mancha negra

proeminente, central ou lateral, quer representa os corpos residuais. Os quatro esporozotos livres

aparecem como pequenas manchas dispostas na periferia em forma de "C". O ncleo visto no

centro do organismo (GARCIA et al.,1983; LEMETEIL, 1987; MEHLHORN, 1988).

2) Mtodo de Faust e cols: centrfugo - flutuao

1) Princpio do teste

A pesquisa de cistos nas fezes pode ser realizada por diferentes mtodos. O mtodo de Faust

est baseado na centrifugao e na flutuao em uma soluo de Sulfato de zinco. Uma alquota

de fezes filtrada e posteriormente centrifugada. O sobrenadante colocado numa soluo de

Sulfato de zinco e centrifugado. O material a examinar retirado da parte superficial, tratado com

soluo de lugol e observado ao microscpio.

2) Aplicao clnica

A principal aplicao do mtodo de Faust a pesquisa de cistos de protozorios, destacando-se a

pesquisa de cistos de Iodameba btschlii, Entamoeba histolytica, Entamoeba coli, Endolimax

nana. Outros cistos de protozorios, ovos e larvas de helmintos podem ser pesquisados.

3) Reagentes

3.1 Lugol

1 g de Iodo macerada com 2 g de Iodeto de potssio. Medir 200 mL de gua Tipo I. Adicionar

lentamente pequena quantidade desta gua com homogeneizao constante. Quando houver

solubilizao total, adicionar o volume restante desta gua. Armazenar em um frasco de vidro

mbar e rotular. Transferir 20 mL para um frasco conta-gotas mbar, o qual ser usado no dia-

a-dia.

3.2 Sulfato de zinco a 33 %


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Preparar uma soluo em gua Tipo I de modo produzir uma soluo de Sulfato de zinco a 33 %

com densidade 1.180 g/L. Habitualmente a soluo de Sulfato de zinco a 33 % apresenta

densidade 1.180 g/L, mas a densidade deve ser medida e corrigida conforme necessrio.

4) Outros insumos

4.1 Borrel ou frasco de vidro.

4.2 Funil de plstico pequeno.

4.3 Palito de sorvete

4.4 Tubo cnico de plstico.

4.5 Caneta para marcar tubo.

4.6 Gaze tipo queijo ou tamiz metlico de 80 a 100 malhas/cm2.

4.7 Estante.

4.8 Lmina de vidro.

4.9 Lamnula de vidro.

4.10 Ala de inoculao ou pipeta Pasteur.

5) Equipamentos

5.1 Centrfuga.

5.2 Microscpio.

6) Procedimento detalhado

OBS: Para executar este procedimento indispensvel o uso de luvas, mscara e avental.

1 Preparar uma suspenso 1:10 de fezes em gua Tipo II num frasco do tipo Borrel,

identificado com o nmero de registro do paciente.

2 Adaptar a gaze ao funil de vidro.

3 Identificar um tubo cnico com o nmero de registro do paciente.4 - Filtrar a suspenso para este tubo cnico.

5 Centrifugar a 2500 rpm por 1 minuto.

6 Desprezar o sobrenadante.

7 Adicionar 3 mL de gua Tipo II e misturar.

8 Repetir os itens 5, 6 e 7 mais duas vezes.

9 No ltimo sedimento, adicionar 3 mL de soluo de Sulfato de zinco.

10 Agitar e completar o volume do tubo com o Sulfato de zinco.

11 Centrifugar a 2500 rpm por 1 minuto.12 Aspirar a pelcula superior.


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13 Identificar a lmina de vidro com o nmero de registro do paciente.

13 Colocar 1 gota na lmina de vidro.

14 Colocar 1 gota de lugol na lmina de vidro.

15 Homogeneizar.

16 Colocar a lminula de vidro.

17 Observar no microscpio, inicialmente com pequeno aumento.

18 Registrar o resultado na Planilha de exame

7) Leitura

1 A riqueza de cistos pode ser verificada com pequeno aumento do microscpio.

2 As caractersticas de cada espcie so observadas com grande aumento ou imerso.

3 Observar: o nmero de nuclolos dos cistos, a sua estrutura, a distribuio, a colorao e o aspecto

do glicognio neles contido.

8) Limitaes do mtodo

1 Amostra do paciente contendo poucos cistos pode fornecer resultado falso negativos.

2 A incapacidade do observador em identificar as caractersticas morfolgicas das

diferentes espcies poder causar resultados enganosos.


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III) Tcnica de Colorao por Hematoxilina Frrica

A hematoxilina frrica utilizando fezes preservadas sem dvida, o mtodo que maior segurana

oferece na identificao e no diagnstico da E. histolytica.

Os trofozotas apresentam uma cor cinza-azulada, diferenciando-se de estruturas de tonalidades

escuras. Seu tamanho varia entre 15 a 60 micra.O citoplasma distinto e observa-se uma ntida diferenciao entre o ectoplasma e o

endoplasma, principalmente se a forma observada estava emitindo pseudpodes quando da sua

fixao. O ectoplasma apresenta-se hialino com uma colorao cinza-clara, diferenciando-se do

endoplasma, que se apresenta granuloso e mais intensamente corado. No seu interior pode-se

observar uma ou mais hemcias coradas de negro, evidenciadas nitidamente por um halo claro em

toda sua parte externa. O ncleo geralmente no central, permanecendo em local afastado da

emisso dos pseudpodes, corando suas estruturas em negro. O cariossoma geralmente central,

mais corado, os grnulos de cromatina so escuros e distribudos uniformemente no interior damembrana nuclear.


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A forma pr-cistica geralmente esfrica, podendo apresentar-se oval, corando em azul-

acinzentado e no apresentando diferenciao entre o ectoplasma e o endoplasma. O vacolo

ocupa 2/3 do parasito, que o vacolo de glicognio, pouco corado. Os corpos cromatides, corados

em negro, se apresentam como um ou dois bastonetes de tamanhos diferentes. O ncleo se

apresenta um pouco maior na forma pr-cistica. O cariosoma grande, de aspecto geralmente

uniforme.

J nos cistos pode-se observar uma ntida membrana cstica corada em negro e o citoplasma se

apresenta em uma cor cinza-azulada contendo um vacolo de glicognio grande e no corado. Os

corpos cromatides, mais freqentes nos cistos imaturos, coram em negro e apresentam-se em

quantidades variveis, porm dificilmente so observados nos cistos tetranucleados. Outros

protozorios de interesse nos exames de fezes so: E. coli, E. hartmani, Endolimax nana,

Iodamoeba butschlii, Isospora belli, Balantidium coli. Pode usar para pesquisa de Trichomonas

vaginalis(secreo vaginal e uretral)

Procedimento Prtico

I) Material para anlise: fezes diarricas obtidas por purgantes (30 gramas de

sulfato de sdio dissolvidos em gua). Evacuao deve ser feita no laboratrio

II) Fezes muito pastosas ou endurecidas devem ser colocadas em fixador de

preferncia o de Schaudinn (veneno).

III) Utilizar lamnulas limpas e desengorduradas presas a um suporte de borracha

para facilitar a manipulao (figura 1).

IV) Com uma pzinha de sorvete espalhar as fezes fazendo um esfregao e aps

emergir ema placa de Petri contendo o fixador de Schaudinn.

V) Passar esta preparao pelos seguintes lquidos:

1- lcool iodado - 1 minuto

2- lcool a 95% - 1 minuto3- gua corrente para lavagem 1 minuto dentro da cuba

4- Mordente (alumnio de ferro) 3 minutos

5- gua corrente - 1 minuto dentro da cuba

6- Soluo de Hematoxilina frrica 5 minutos

7- gua corrente - 1 minuto dentro da cuba

8- Diferenciador (alumnio de ferro) at que o esfregao adquira uma

transparncia adequada. (muita experincia): momento crucial

9- gua corrente - 2 minutos dentro da cuba.10- lcool absoluto 2 minutos.


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11- lcool a 95% - 2 minutos

12- lcool creosoto - 2 minutos

13- Creosoto de Faia - 2 minutos

14- Montar com blsamo do Canad: sobre uma lmina limpa e desengordurada colocar

uma gota de blsamo, e sem deixar bolhas de ar, colocar a preparao com o

esfregao voltado para baixo, sobre o mesmo.

A preparao poder ser colocada em estufa a 37 C para a secagem do blsamo do

Canad, limpando-se o excesso com auxlio de xilol e papel de filtro. Examinar com

objetiva de imerso e ocular 5x ou 10x.

Entamoeba histolytica

Giardia lamblia

cisto

Trofozoto

cisto

Trofozoto

Entamoeba coli(trofozoto e cisto)


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Desenhos das Lminas


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Protozorios sanguneos

Preparao do esfregao sanguneo e colorao Mtodo de GIEMSA:

(diagnstico do tripanosomas, dos plasmdios, das leishmanias e Toxoplasma).

I) Preparo de esfregao sanguneo

A) Sangue com EDTA

B) Preparam-se esfregaos finos tocando uma lmina limpa, desengordurada,

em uma pequena gota de sangue, de modo que fique prximo de uma

extrimidade da lmina. Uma segunda lmina espalhadora (lmina deextenso) segurada pelas bordas, em ngulo de 30 graus sobre a lmina

que tem o material e recuada sobre a gota fazendo que se espalhe ao longo

da borda da lmina espalhadora. Com suavidez e rapidez, empurre a lmina

espalhadora para frente, de modo que o sangue se espalhe e corra em

camada plana.

C) Deixe secar ao ar e core conforme a descrio.

II) Procedimento de colorao

A) Identificao do Trypanosoma cruzi hemoflagelado


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Objetivos da aula: reconhecer as seguintes formas evolutivas: tripomastigotas,

amatigostas e epimastigotas de T. cruzi.

1) Tripomastigotas

Examinar lmina de esfregao sanguneo corado pelo mtodo Giemsa

(visualizar o parasito entre as hemceas).

Descrever a posio do cinestoplasto, posio do ncleo, membrana

ondulante e flagelo.

B) Identificao de Leishmania spp.

Objetivos da aula: reconhecer as seguintes formas evolutivas: promastigotas e

amastigotas de Leishamnia ssp.

1) Promastigotas

As promastigotas de Leishmania ssp so encontradas no trato intestinal do

mosquisto Flebotomneo (mosquito palha), mas tambm podem ser encontrados em

culturas in vitro

Descrever a posio do cinestoplasto, posio do ncleo e flagelo.

2) Amastigotas

Epimastigota de T.cruzi

Amastigota de T. cruzi


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As amastigotas sero encontradas em clulas do sistema fagocitrio, presentes

no sangue circulante ou nos rgos de indivduos infectados.

Examinar lminas obtidas de amstigotas obtidas em linfonodo.

Descrever a posio do cinestoplasto, posio do ncleo e flagelo.

D) Identificao de Plasmdios (Plasmodiumsp)

Objetivos da aula: reconhecimento das formas sanguneas dos palsmdios


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D) Identificao de Toxoplasma gondii.

Objetivos da aula: reconhecimento dos principais estgios parasitrios de gondii, diferenciando

estgios encontrados na fase aguda (taquizotos) da fase crnica (bradizotos em cistos

teciduais).


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Desenhos das Lminas

Bradizoto

Taquizotos


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Schistosoma mansoni


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Desenhos das Lminas


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Mtodo de Lutz ou de Hoffmann (sedimentao espontnea)

Princpio do mtodo:

Mtodo baseado na sedimentao espontnea, especfico para a pesquisa de ovos de Schistosoma

mansoni, porm altamente eficiente e amplamente utilizado para a pesquisa de todos os parasitos .

Material necessrio:

1. Clice de decantao

2. Peneira

3. Gaze dobrada em 4

4. gua corrente ou destilada

5. Esptula de madeira (tipo abaixador de lngua)

6. Lmina e lamnula

Tomar cerca de 2 g de fezes recm emitidas, dissolv-las no prprio recipiente de coleta (frasco padro

para coleta de amostra) utilizando um pouco de gua. Transferir o material dissolvido para um clice de

decantao fazendo filtrar em peneira contendo gaze em 4. Completar at do volume de gua e

deixar repousar em superfcie firme e livre de vibraes por no mnimo 2 horas.

Retirar o sedimento com um canudo ou pipeta Pasteur e transferir para lmina de vidro adicionando 2

gotas de soluo de Lugol e cobrindo com lamnula. Observar ao microscpio em objetiva de 10x.

Taenia sp


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Desenhos das Lminas


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Hymenolepis nana


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Ascaris sp

Ovo Ovo


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Desenhos das Lminas


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FLUTUAO SIMPLES - WILLIS (flutuao em salina saturada)

Essa tcnica se baseia na propriedade que alguns ovos de helmintos apresentam de flutuarem na

superfcie de uma soluo de densidade elevada e de aderirem ao vidro. Este procedimento especfico

para a pesquisa de ovos de Ancilostomdeos.

1. A soluo saturada de cloreto de sdio feita adicionando aproximadamente 40g de NaCl a 100mL

de gua sob aquecimento at o ponto em que o sal no se dissolva mais na gua. A densidade desta

soluo deve ser de aproximadamente 1,20g/mL.

2. Colocar uma quantidade de fezes (aproximadamente 2 g) coletadas de vrias partes do bolo fecal em

uma pequena cuba contendo uma parte de soluo saturada de cloreto de sdio, dissolver as fezes

nesta soluo e acrescentar gua at a borda.

3. Colocar sob a borda da cuba uma lmina de vidro quase tocando a soluo saturada e deixar de 30 a

45 minutos . Aps este tempo, inverter a lmina rapidamente e observar ao microscpio.

Ancylostoma sp


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Desenhos das Lminas


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Rugai e cols

Barmann Moraes


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Strongyloides stercoralis

Desenhos das Lminas


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COLETA PARA PESQUISA DE ENTEROBIUS VERMICULARIS

(TCNICA DA FITA ADESIVA OU SWAB PERIANAL NOTURNO)

Material necessrio

1. Fita de celofane adesiva e transparente (tipo Durex)

2. Toluol (tolueno), Xilol (xileno) ou Iodo-xilol

3. Lmina para microscopia.

Tcnica

1. Colocar um pedao de fita adesiva transparente em uma esptula de madeira tipo abaixador de lngua

com a parte adesiva voltada para fora

2. Pressionar firmemente a esptula contendo a fita adesiva contra as pregas anais e perianais

3. Colar a fita adesiva em lmina devidamente identificada

4. No momento da execuo do exame, levantar cuidadosamente a fita da lmina e pingar uma gota de

toluol ou xileno e pressionar novamente a fita contra a lmina. A preparao ficar clara ou levemente

corada, tornando os ovos bem visveis.

Caso o material no seja examinado imediatamente, no acrescentar o toluol.

Ovos da coleta do analswab

Fita gomada ou anal swab


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Enterobius vermiculares


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Trichuris trichiura

Wuchereria bancrofti


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Desenhos das lminas


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Ectoparasitos


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DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIAINSTITUTO DE BIOLOGIA / UNICAMP

PROTOZORIOS INTESTINAIS E CAVITRIOSAMEBAS PARASITAS E COMENSAIS

Entamoebahistolyticacisto

Entamoebahistolyticacisto (corado pelo lugol)

Entamoebahistolyticacisto

Entamoebahistolyticatrofozota



Entamoebacolicisto (corado pelo lugol)

Entamoebacolicisto (corado pelo lugol)

Entamoebacolitrofozota

Entamoebacolitrofozota

Iodamoeba btchliicisto

Endolimaxnanacisto

Endolimaxnanatrofozota

FLAGELADOS INTESTINAIS E CAVITRIOS

Giardialambliatrofozota

Giardialambliatrofozota

Giardialambliacisto

Giardialambliacisto

Trichomonasvaginalis

CILIADOS INTESTINAIS

BalantidiumcolicistoBalantidiumcolitrofozota

Balantidiumcoliem corte deintestinoBalantidiumcoliem corte dointestino grosso


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DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIAINSTITUTO DE BIOLOGIA / UNICAMP

PROTOZORIOS DO SANGUE E OUTROS TECIDOS

Plasmodiumfalciparumtrofozota

Plasmodiumfalciparumgametcitos

Plasmodiumfalciparummicrogametcito

Plasmodiumfalciparummacrogametcito

Plasmodiumvivax

trofozota

Plasmodiumvivax

esquizonte

Plasmodiumvivax

merozoto

Plasmodiumvivax

microgametcito

Plasmodiumvivax

macrogametcito

Trypanosomacruziepimastigota

Trypanosomacruzitripomastigota

Trypanosomacruzitripomastigota

Trypanosomacruziamastigota

Leishmaniasp.amastigota

Leishmaniasp.amastigota

Leishmaniasp. promastigota

Toxoplasmagondiitrofozota

Toxoplasmagondiicisto

VETORESBarbeiros

Triatoma Panstrongylus Rhodnius

Anophelini

Ovos Larva Pupa Macho FmeaAdultos

Posio de pouso do adulto

Culicini

Ovos Larvas Pupa Macho FmeaAdultos Posio de pouso do adulto

DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA


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INSTITUTO DE BIOLOGIA / UNICAMP

HELMINTOS INTESTINAIS

Ovo deAncilostomatdeo

Ovo larvado deAncilostomatdeo

Ovo de Ancilostomatdeo Ovo deEnterobiusvermicularis

Ovos deEnterobiusvermicularis

Ovo deAscaris(fertilizado)

Ovo deAscaris(fertilizado) Ovo deAscaris(larvado edecorticado)

Ovo deAscaris(infrtil)

Ovo deAscaris(infrtil)

Ovo de Schistosomamansoni

Ovo de Fasciolahepatica Ovos de Taenia Ovo de Taenia Proglote grvidoTaenia solium

Ovo deHymenolepis

diminuta

Ovo deHymenolepis

nana

Ovo de Trichuristrichiura Ovo larvado de

Trichuristrichiura

Proglote grvido

Taenia saginata

Cpsula bucalAncilostomaduodenale

Cpsula bucalAncilostomaduodenale

Cpsula bucalNecatoramericanus

Cpsula bucalNecatoramericanus

Bolsa copuladora deA.duodenale


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Bibliografia Consultada

- DE CARLI, G.A. Parasitologia Clnica Seleo de Mtodos e Tcnicas de Laboratrio para

o Diagnstico das Parasitoses Humanas Editora Atheneu, So Paulo, 2001.

- CIMERMAN, B. & FRANCO, M.A. - Atlas de parasitologia: artrpodes, protozorios e helmintos.So Paulo, Ed. Atheneu, 1999.

- LEVENTHAL, R. & CHEADLE, R.- Parasitologia Mdica. Texto e Atlas.4ed. Editora Premiere,

2000.

- NEVES, D.P. - Parasitologia humana. 10 ed. Editora Atheneu (SP), 2003

- REY, L. - Bases da parasitologia mdica. 2 ed. Guanabara Koogan (RJ), 2002.

- VALLADA, E.P.; -Manual de Exames de Fezes - coprologa e parasitologia. Editora Atheneu

So Paulo, 1993

- NEVES, D.P. - Parasitologia dinmica. 1 ed. Editora Atheneu (SP), 2003.

- FERREIRA, M.U. e SCHHUMAKER, T.T.S. Fundamentos Biolgicos da Parasitologia

Humana. Editora Manole, So Paulo, 2003.

- VERONESI, R. & FOCACCIA, R. - Tratado de Infectologia. So Paulo, Editora Atheneu, 1999

Pginas de internet:WWW.dpd.cdc.gov/dpdx/Default.htm : pgina do Center for Disease Control and Prevention comimagens e textos sobre parasitos de importncia em sade pblica.

www.cdfound.to.it/html/atlas.htmwww.fcfrp.usp.br/dactb/Parasitologia/ATLAS_DE_PARASITOLOGIA.htmwww.farmacia.ufmg.br/ACT/atlas/

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