Apresentaçao M.I.a - Copia
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1
Validação de método para determinação de cotinina
em urina por cromatografia líquida de alta eficiência
Alunos: Carolina LadeiraFernanda Barreto Gabryela NardyKamila LacerdaMariana Tito Teixeira
FACULDADE DE CIENCIAS BIOLOGICAS E DA SAUDE Engenharia Química
EQU107- Métodos e Analises Instrumentais
Professora: Ligia Vieira
2
1. Introdução
CROMATOGRAFIA:
1. Introdução 3
SEPARAÇAO IDENTIFICAÇAO
QUANTIFICAÇAO
Slide do esquema de Carol
4
HPLC (Cromatografia liquida de alta eficiência)
1. Introdução 5
6
Danos a saúde
Demanda por analises
laboratoriaisCâncer pulmonar
Umas das maiores causa de morte no mundo
1. Introdução
7
O consumo de tabaco representa a segunda maior causa de mortes no mundo.
Estrutura da nicotina, um alcalóide do tabaco extremamente venenoso
1. Introdução
Grande parte da nicotina absorvida é biotransformada em cotinina, seu principal metabólito.
8 1. Introdução
• Validar um método por CLAE precendida por extração líquido-líquido para mensurar os níveis de cotinina na urina, com a finalidade de monitorar a exposição ao tabaco, incluindo a exposição ambiental.
2. Objetivo
2. Objetivo 9
3. Materiais e Métodos:
3. Materiais e Métodos10
Cotinina ,
Nicotina, Sigma-Aldfrich
2-fenilimidazol
11
Hidroxido de sodio , NaOH Diclorometano , H2CCl2 Metanol H3C-OH AcetonitrilaCH3CN Merck Acido CitricoC6H8O7
TrietilaminaN(CH2CH3)3
Acetato de sodio ( CH3COONa )
3. Materiais e Métodos
Parâmetros cromatográficos
•Fase móvel: Agua Milli-Q
•pH: 4,4 com acido acético
123. Materiais e Métodos
Procedimentos de extração• Foram pipetados amostra de urina centrifugada. Posteriormente
adicionado de hidróxido de sódio , padrão interno e diclorometano. Posteriormente esta solução sofreu agitação em um homogeneizador e centrifugada . Após a fase orgânica foi transferida para um frasco evaporador e colocados em termobloco, sob corrente de nitrogênio e temperatura ambiente, até secura. A seguir o resíduo foi reconstituído com com a fase móvel e injetado na CLAE.
133. Materiais e Métodos
Validação analitica,
143. Materiais e Métodos
LinearidadeLimite de detecção
Precisão inter-ensaio
Exatidão Estabilidade
4. Resultados:
4. resultados e discursões 15
Os 3 GRAFICOs:
Tabela
•
16 4. resultados e discursões
Devido meia-vida, a estabilidade e o fato de ser o metabolito mais abundante, tornam a cotinina o biomarcador mais adequado para determinar a exposição do tabaco.
4.1- Discussões 4. resultados e discursões 17
•A CLAE exige um pré-tratamento das amostras por extração liquido-liquido ou extração em fase solida. Devido ao menor e a boa qualidade dos resultados obtidos com extração liquido-liquido, foi empregado diclorometano como solvente de extração.
18 4. resultados e discursões
•Conclui-se que este trabalho apresentou um metodo sensicel e especifico para a determinação de cotinina em urina por CLAE precedida da extração liquido-liquido.
5. Conclusão
5. Conclusão
19
OBRIGADO !
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