Artigo Histologia 4

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Braz. J. vet. Res. anim. Sci., São Paulo, v. 45, n. 6, p. 413-420, 2008

Descrição histológica da via genital masculina e

hermafrodita de escargots das espécies Achatinafulica e Achatina monochromatica

1 – Departamento de Cirurgia da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecniada Universidade de São Paulo, São Paulo-SP2 – Departamento de Nutrição e Produção Animal da Faculdade de MedicinaVeterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, Pirassununga-SP3 – Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecniada Universidade de São Paulo, São Paulo-SP

Dulcinéa GonçalvesTEIXEIRA1

Maria Fátima MARTINS2

José Luiz GUERRA3

Francisco Javier HernandezBLAZQUEZ1

Idércio Luiz SINHORINI3

Correspondência para:Av. São Remo 491 apto 41ª, Butantã,05360-150, São Paulo – SP,[email protected]

Recebido para publicação: 09/02/2005Aprovado para publicação: 07/03/2008

Resumo

O objetivo deste trabalho foi descrever a histologia da via genitalmasculina e hermafrodita dos escargots das espécies Achatina fulica eAchatina monochromatica. Foram usados 10 exemplares adultos decada espécie para análise histológica. Após o processo seletivo, pesageme tomada das medidas da concha, os espécimes foram sacrificados porcongelamento em freezer, a -2ºC por aproximadamente 10min. Paraa exposição dos órgãos reprodutores foi efetuada uma incisãolongitudinal iniciada na extremidade cranial e, acompanhando a torçãodo corpo, até a extremidade caudal. Cada animal foi dissecado, sobreuma placa de Petri, sob imersão em formol a 10% para melhorpreservação dos tecidos. Foram coletados fragmentos representativosde cada segmento do sistema reprodutor e observou-se que a estruturahistológica dos mesmos não apresentou diferenças notórias, comexceção do ovotestis do Achatina fulica, no qual se constatou umnúmero maior de células pigmentadas no epitélio germinativo doque, nesse mesmo epitélio, no Achatina monochromatica.

Palavras-chave:Histologia.Escargot.Achatina fulica.Achatina monochromatica.Sistema Reprodutor.

Introdução

Os moluscos, conhecidos comoescargots, tornaram-se mundialmenteconhecidos e em alguns países apreciadoscomo fonte de proteína. Os processos demelhoramento genético e aperfeiçoamentodas linhagens só podem ser feitos por meiodo conhecimento biológico das espécies.1 Asinformações sobre a estrutura macroscópicae microscópica de certas espécies de escargots,no entanto, são escassamente veiculadas naliteratura especializada.

O escargot é um molusco terrestrepertencente ao Phyllum Mollusca, ordemStylommatophora, família Achatinidae, dogênero Achatina.2 São gastrópodespulmonados, apresentando uma conchaespiralada, cabeça distinta com tentáculos eolhos, pé desenvolvido e massa visceral com

giro de 180o. 3 Este é um animal invertebrado,herbívoro e ovíparo, apesar de possuir umacaracterística hermafrodita. Para que possahaver fecundação e, conseqüentemente, areprodução é necessário que dois espécimescopulem.

A espécie Achatina fulica é origináriada África e difere de outras espécies dogênero que habitam as florestas tropicaisúmidas no leste da África ou em florestastemperadas de altas altitudes.4

Kumprataung et al.5 descrevem osistema reprodutor da espécie Achatina fulica,como um conjunto de órgãos masculinosrepresentados pela glândula prostática, ductodeferente, pênis e o saco dardo. O ovotestis,presente em todo escargot, é o órgão queproduz tanto espermatozóides quantoóvulos.

O aperfeiçoamento das linhagens é

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citado por Barnes, Calow e Olive3 quemencionam que na espécie Achatinamonochromatica uma característica de maiorimportância é a postura de poucos ovos(40-80) quando comparada a da Achatinafulica que é de 200-500, em média. O autortambém evidencia a importância do tamanhodos ovos (11,3 e 8,5mm, respectivamente)que permite obter dados quanto a suaclassificação. Barnes6 lembra que sãonecessários estudos anatômicos macro- emicroscópicos do sistema reprodutor dasespécies sob condições ambientais.

Neste trabalho, descreve-se aorganização histológica de cada segmentodo sistema reprodutor masculino dasespécies Achatina fulica e Achatinamonochromatica, para contribuir com osprocessos de seleção e aperfeiçoamento delinhagens sob o ponto de vista domelhoramento genético helicícola.

Material e Método

Foram utilizados, vinte exemplares deescargots matrizes, dez Achatina fulica e dezAchatina monochromatica, selecionados por umprograma de melhoramento genético doHeliciário Experimental, Profa Dra. Lor Cury,da Faculdade de Medicina Veterinária eZootecnia – Campus de Pirassununga – USP.Cada um dos vinte exemplares adultos tinhacerca de um ano de idade.

O processo seletivo foi efetuadoseparando-se as matrizes mais prolíficas,com alto índice de eclodibilidade, que seriamos progenitores das gerações subseqüentes.As matrizes foram separadas, pesadas,mensuradas e acompanhadas suas posturas.

Após o nascimento, cada progênie foipesada e medida. Do total de progênies, os50% maiores e mais pesados foramseparados em uma caixa. O procedimentopara seleção foi repetido semanalmente atéa fase adulta (doze meses) de modo osanimais maiores e mais vistosos foramseparados que passaram a ser consideradosmatrizes.

O preparo dos animais envolveuprimeiramente a sedação por resfriamento

em geladeira a 4ºC, e logo após, imersãoem solução aquosa de formol a 10%, poraproximadamente quinze minutos. Aconcha foi quebrada e o animal retirado.

As dissecações foram feitas a olhodesarmado, iniciando-se com incisão noplano mediano, começando pela boca,seguindo no sentido crânio lateral noantímero esquerdo acompanhando, assim, atorção geral do corpo. Seccionou-se omúsculo retrator do pênis, que está inseridona parede interna da cavidade corpórea, eliberou-se todo o conjunto de órgãosreprodutores. O animal foi dissecado, sobreuma placa de Petri, sob imersão emformaldeído a 10% para melhorpreservação dos tecidos.

Fragmentos representativos de cadasegmento da via genital masculina ehermafrodita foram coletados para osprocedimentos histológicos, utilizando atécnica usual de desidratação, diafanizaçãoem xilol e inclusão em parafina. Foramobtidos cortes seriados com espessura de5µm, com auxílio do micrótomo marcaAmerican Optical® (modelo 820). Acoloração dos fragmentos histológicos comhematoxilina-eosina foi efetuada após aretirada da parafina.

A foto-documentação e as lâminaspreparadas foram analisadas sobmicroscópio binocular marca Carl Zeiss.

O sistema reprodutor, como umtodo, foi esquematizado para cada espécie.

Resultados

Localização de cada segmento dosistema reprodutor dos moluscosestudados

Nos moluscos, em geral, independenteda espécie, o sistema reprodutor 3 écaracterístico e se distribui desde a porçãosuperior da cabeça até a porção inferior doanimal como mostra a figura 1. Nas espéciesAchatina fulica e Achatina monochromatica osistema reprodutor apresenta umaorganização morfológica um tanto diferenteao se comparar as duas espécies como podeser visto na figura 2.

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Aspectos histológicos do sistemareprodutor masculino e hermafrodita deAchatina fulica e Achatina monochromatica

Via genital masculina - Próstata: ascélulas dos ácinos são células colunares, com

núcleo em posição basal envolvidas porcélulas de sustentação, exibindo umcitoplasma repleto de grânulos eosinofílicos.Os ductos excretores são revestidos porepitélio colunar ciliado e comunicam-se com

Figura 1 – Anatomia interna do molusco (BARNES; KALOW; OLIVE, 1995)

Figura 2 – Esquema do sistema reprodutor das espécies (A) Achatina fulica e (B) Achatina monochromatica

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o lúmen uterino, enquanto que o estroma éescasso, pobremente vascularizado e comcélulas alongadas e afiladas, semelhantes afibroblastos (Figura 3).

Via genital masculina - Ductodeferente: o epitélio do ducto deferente édo tipo simples cúbico e encontra-seapoiado em lâmina própria de tecidoconjuntivo frouxo com numerosas células,com grânulos acidofílicos, glândulastubulares ramificadas, uma camadamuscular circular externa e umalongitudinal interna revestidas pormembrana serosa (Figura 4).

Via genital masculina - Pênis:apresenta epitélio colunar secretor, umalâmina própria constituída de tecidoconjuntivo frouxo com numerosas célulasricas em granulações basofílicas. Exibequatro camadas: muscular circular interna,muscular longitudinal, muscular circular

externa e, novamente, uma muscularlongitudinal externa (Figura 5).

Via genital masculina - Músculoretrator do pênis: é constituído pormúsculo estriado esquelético (Figura 6).

Via hermafrodita - Ovotestis: aregião masculina do ovotestis é compostapor um sistema tubular onde os túbulosencontram-se unidos por tecidoconjuntivo denso, rico em fibrascolágenas, e a parede interna é revestidapor epitélio germinativo no qual foipossível observar, de entremeio, célulasgerminativas e células sugestivas de célulasde Sertoli. Este conjunto celular exibe umadisposição que abrange desde asespermatogônias até os espermatozóides.É importante salientar que no epitéliogerminativo são vistos oócitos emdiferentes graus de diferenciação. Emcontinuidade aos túbulos, os canais

Figura 3 - Fotomicrografia de corte histológico de tecido do sistema reprodutor masculino da Achatinamonochromatica: (A) glândula prostática mostrando arranjo túbulo-alveolar, com ácinos revestidos porcélulas colunares altas e espaço luminal evidentes. Aumento: 40x; (B) Detalhe em maior aumento dosácinos prostáticos, evidenciando células de sustentação com núcleos afilados e alongados, de entremeioà células com citoplasma acidófilo e homogêneo e células ricas em granulações citoplasmáticas acidofílicas.Ambos os tipos celulares exibem núcleos em posição basal. Aumento: 400x; (C) Conjunto útero-próstata, mostrando na parte superior da foto, a parede uterina com seu lúmen, mucosa e paredeconjuntivo-muscular e, na parte inferior, a glândula prostática (GP) ligada à parede uterina (PU) pormeio do tecido conjuntivo frouxo. Aumento: 40x. Coloração: Hematoxilina-eosina

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coletores são formados de epitélio colunarsimples ciliado, com células caliciformes(Figura 7).

Via hermafrodita - Ducto hermafrodita:exibe uma mucosa revestida por epitéliocolunar simples ciliado, emitindo projeçõespapilares de tamanhos e formas variáveis,em direção luminal. Encontram-se, ainda,numerosos hemolinfáticos presentes nalâmina própria. Abaixo da submucosa, nota-se uma camada de fibra muscular lisa,uma camada espessa de tecido conjuntivofrouxo rico em fibras colágenas e,externamente, uma monocamada de célulasplanas, formando a serosa. Na Achatinamonochromatica, a parede conjuntivo-muscularé mais espessa que na Achatina fulica(Figura 8).

As lâminas histológicas de todos ossegmentos apresentados nas figuras 3 a 8para a Achatina monochromatica são iguais aosda Achatina fulica, exceto no ovotestis da

Achatina fulica em que o tecido apresenta umnumero maior de células pigmentadas.

Discussão

As evidências histológicas do sistemareprodutor masculino da Achatina fulica eAchatina monochromatica, entre seus segmentossão iguais. Contudo, no ovotestis da viahermafrodita do Achatina fulica existe umaquantidade maior de células com pigmentono epitélio germinativo que no Achatinamonochromatica.

A literatura é escassa em relatos sobrea histologia das espécies Achatina fulica eAchatina monochromatica. O trabalho maisevidente, e que pode ser usado paraintercomparação com as observações feitasneste estudo para estas duas espécies, foiescrito por Kumprataung et al.5.

Os achados no presente estudodiferem daqueles observados por

Figura 4 – Fotomicrografia de corte histológico de tecido do sistema reprodutor masculino da Achatinamonochromatica: (A) Ducto deferente com lúmen centralmente localizado, glândulas tubularesramificadas e parede conjuntivo-muscular. Aumento: 40x. Nos detalhes (Aumento: 400x): A - célulaslocalizadas na lâmina própria, ricas em granulações basofílicas; B – mucosa revestida por epitéliocúbico simples e lâmina própria com tecido conjuntivo frouxo; (B) Mucosa revestida por epitéliocúbico simples e lâmina própria com tecido conjuntivo frouxo. Aumento: 100x; (C) Células comgranulações citoplasmáticas na lâmina própria. Aumento: 400x; (D) Células localizadas na lâminaprópria, ricas em granulações basofílicas (O). Aumento: 400x. Coloração: Hematoxilina-eosina

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Figura 5 – Fotomicrografia do corte histológico tecido do sistema reprodutor masculino da Achatinamonochromatica - pênis: (A) canal peniano revestido por epitélio colunar, submucosa ampla, constituídade tecido conjuntivo denso e camadas musculares interna e externa. Aumento: 40x; (B) Canal peniano,em maior aumento, tortuoso com projeções luminares, células com polimorfismo e sugestivas deatividade secretora. Submucosa rica em tecido conjuntivo frouxo. Aumento: 40x. Nos detalhes (Aumento:400x): A - fibras musculares seccionadas transversalmente; B - epitélio colunar, células grandes comcitoplasma basofílico presentes na lâmina própria; (C) epitélio colunar, células grandes com citoplasmabasofílico (’!) presentes na lâmina própria. Aumento: 40x; (D) Fibras musculares seccionadastransversalmente. Aumento: 400x. Coloração: Hematoxilina-eosina

Figura 6 – Fotomicrografia tecido do sistemareprodutor masculino da Achatinamonochromatica que mostra o músculoretrator do pênis, em corte longitudinal, naqual são observadas as fibras muscularesentremeadas por tecido conjuntivo frouxo.Aumento: 100x. Coloração: hematoxilina-eosina

Figura 7 – Fotomicrografia do corte histológico doovotestis da Achatina monochromatica,mostrando conjunto de túbulos cortadostransversalmente (TO), unidos por septos dotecido fibro-adiposo (STF). Aumento: 40x.Nos detalhes (aumento: 400x): A - célulasgerminativas (ovócitos e de linhagemespermatogênica) em desenvolvimento eespermatozóides imbricados em célulassugestivas de célula de Sertolli; B - numerosasespermátides imbricadas em células deSertolli. Coloração: hematoxilina-eosina

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Kumprataung et al.5, que descrevem, porexemplo, que o ovotestis tem uma grandequantidade de lóbulos, constituídos pornumerosos ácinos arredondados, podendo-se observar que os espermatozóidesencontram-se em volta das células de Sertoli,enquanto os óvulos são maiores e selocalizam na extremidade do ácino.Constatou-se, no entanto, que no ovotestis,especificamente no epitélio germinativo, sãovistos ovócitos em diferentes graus dediferenciação e, em continuidade aos túbulos,os canais coletores são formados de epitéliocolunar simples ciliado, com célulascaliciformes.

Com relação ao ducto hermafroditaas lâminas histológicas mostram as mesmasobservações feitas por Kumprataung et al.5.Observa-se uma mucosa revestida porepitélio colunar simples ciliado, dividindo-se em três porções: as duas primeiras, visíveisexternamente e a terceira, incluída na glândulade albúmen abrindo-se no “carrefour”. Oducto hermafrodita na Achatinamonochromatica possui parede conjuntivo-muscular mais espessa que na Achatina fulica.

Na via masculina, Kumprataung etal.5 refere-se à próstata como uma estruturatubular e delgada, e o lúmen separado portecidos sobrepostos, revestidos por umepitélio ciliado contínuo, ao contrário do quese observou na presente pesquisa em que ascélulas dos ácinos são células colunares, comnúcleos em posição basal, envolvidas porcélulas de sustentação, exibindo um

citoplasma repleto de grânulos eosinofílicos.Aqueles autores não citam os ductosexcretores que são revestidos por epitéliocolunar ciliado e que se comunicam com olúmen uterino.

Quanto ao ducto deferente adescrição das lâminas histológicas nestetrabalho são as mesmas vistas porKumprataung et al.5.

Em relação ao pênis, no entanto,verificou-se que a descrição do tecido nãopermite concordar com aquela feita porKumprataung et al.5, pois segundo os autoreso pênis apresenta uma camada internarevestida por células cubóides ciliadas, e emsua membrana basal exibem duas camadasde células musculares, uma circular interna,outra longitudinal externa e uma camadadelgada de tecido conjuntivo que reveste asuperfície externa. Neste trabalho ficouevidente que o pênis exibe um total de quatrocamadas musculares enquanto Kumprataunget al.5 descrevem apenas duas. Acredita-seque essa diferença corresponda ao prepúcio,que está estreitamente relacionado ao pênis,dificultando, assim, a sua observação deforma isolada.

Conclusão

O estudo histológico do sistemareprodutor da Achatina fulica e Achatinamonochromatica não mostrou diferençasmarcantes em seus segmentos quando aslâminas são comparadas entre estas duas

Figura 8 – Fotomicrografia do corte histológico do ducto hermafrodita da Achatina monochromatica: (A) Detalheem maior aumento da região de transição do epitélio germinativo (’!), mostrando o epitélio colunarsimples ciliado (’!). Aumento: 400x; (B) Espaço luminal preenchido com espermatozóides, mucosapregueada e parede espessada. Aumento: 40x. Coloração com Hematoxilina-eosina

(A) (B)

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espécies. As observações permitiram chegaràs conclusões seguintes: no ovotestis daAchatina fulica existe maior quantidade decélulas com pigmento no epitéliogerminativo que na espécie Achatinamonochromatica; o pênis possui um total dequatro camadas musculares justapostas; porcausa desta diferença se infere que istocorresponda ao conjunto pênis-prepúcio, eque o mesmo é recoberto por tecidoconjuntivo em toda a sua extensão, nas duasespécies; o prepúcio possui uma paredeespessa, recobre toda a extensão do pênis, e

é maior na Achatina monochromatica.

Agradecimentos

Os autores agradecem aosprofessores da Faculdade de MedicinaVeterinária e Zootecnia da Universidade deSão Paulo, SP, Drs. Eduardo Farias e PaulinoJosé Sousa pelas sugestões quanto a fixaçãodos animais utilizados neste estudo e ao Sr.Fábio de M. Francisco, graduando daFMVZ-USP, pela formatação das figuras demicroscopia.

Histology description of the male and hermafrodite genital vias of the

escargots Achatina fulica and Achatina monochromatica

Abstract

The aim of this work was to make histological description of themale and hermaphrodite genital system of escargots of the speciesAchatina fulica and Achatina monochromatica. Ten adult copies of eachspecies were used for such analysis. After a selective process, weightingand measuring the shell, the specimens were sacrificed by freezing infreezer to -2ºC for approximately 10min. Reproductive organs wereexposed by longitudinal incision made in the cranial extremity and byaccompanying the sprain of the body, until the tail extremity. Eachanimal was dissected over a Petri plate, under immersion in 10%phormol for better preservation of the tissues. Representativefragments of each segment of the reproductive system were collectedand it was observed that their histological structure did not presentevident differences, except for the Achatina fulica ovotestis in which alarger number of pigmented cells was observed in the germinativeepithelium than in the same epithelium in the Achatina monochromatica.

Key words:Histology.Escargot.Achatina fulica.Achatina monochromatica.Reproductive System.

Referências

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2 RUPPERT, E. E.; BARNES, R. D. Zoologia dosinvertebrados. 6. ed. São Paulo: Roca, 1996. p. 332-352.

3 BARNES, R. S. K.; CALOW, P.; OLIVE, P. J. W. Osinvertebrados: uma nova síntese. São Paulo: Atheneu,1995. p. 136-155.

4 KUMPRATAUNG, W.; KRUATRACHUE, M.;SUCHART, E. U.; CHITRAMVONG, Y.; SETARUGSA,P.; CHAVADEJ, J.; SOBHON, T. M.; PRASERT, S.Comparative studies on reproductive systems of

Achatina fulica, Hemiplecta distincta and Cyclophorusaurantiacus. Journal of Science Society of Thailand,v. 15, n. 2, p. 71-107, 1989.

5 PACHECO, P.; MARTINS, M. F. Criação eprocessamento do escargot. São Paulo: FMVZ, 1997.p. 31. Apostila de curso.

6 TEIXEIRA, D. G.; MARTINS, M. F.; GUERRA, J. L.;MIGLINO, M. A.. Considerações estatísticas sobre osvalores métricos dos segmentos corpóreos do sistemareprodutor dos escargots das espécies Achatina fulica eAchatina monochromatica. Brazilian Journal ofVeterinary Research and Animal Science, v. 43, n. 4,p. 481-488, 2006.

7 BARNES, R. D. Zoologia dos invertebrados. SãoPaulo: Roca, 1984. p. 339-496.

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