ARTIGO ORIGInAl ISSn 2238-1589 ESTUDO … · kept in conventional animal facilities and SPF, showed...

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64 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 64-70, jan./fev./mar. 2012 ARTIGO ORIGINAL ISSN 2238-1589 RESUMO 1 Diretoria Técnica de Apoio ao Ensino e à Pesquisa da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo Autor para correspondência: Marilda Osti Spinelli E-mail: [email protected] Recebido para publicação: 10/08/2011 Aceito para publicação: 24/11/2011 ESTUDO COMPARATIVO DOS VALORES HEMATOLÓGICOS ENTRE SEXO E CATEGORIAS SANITÁRIAS DE CAMUNDONGOS C57BL/6 E BALB/C Marilda Osti Spinelli 1 , Robison José da Cruz 1 , Cyntia Marques Santos Corrêa de Godoy 1 , Mara de Souza Junqueira 1 , Milena Coutinho da Motta 1 , Juliana Bortolatto 1 - ( ) - - - º Palavras-chave: 1 INTRODUÇÃO Trabalhos desenvolvidos por pesquisadores brasileiros ganham maior aceitação internacional quando utilizam animais de qualidade. Para terem essa garantia de qualidade, esses animais devem ser produzidos em ambientes onde são em - pregadas técnicas apuradas de controle de conta- minação 1 . Camundongos e ratos, como os demais ma- míferos em estado de higidez, devem manter seu meio interno constante e um controle rigoroso dos limites de sua variação (fatores ambientais). Por essa razão, o conhecimento dos valores de - gicos e resultados obtidos nos procedimentos experimentais 2 .

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64 RESBCAL, São Paulo, v.1 n.1, p. 64-70, jan./fev./mar. 2012

ARTIGO ORIGInAl ISSn 2238-1589

RESUMO

1 Diretoria Técnica de Apoio ao Ensino e à Pesquisa da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo

Autor para correspondência:Marilda Osti SpinelliE-mail: [email protected]

Recebido para publicação: 10/08/2011Aceito para publicação: 24/11/2011

ESTUDO COMPARATIVO DOS VALORES HEMATOLÓGICOS ENTRE SEXO E CATEGORIAS SANITÁRIAS DE CAMUNDONGOS C57BL/6 E BALB/C

Marilda Osti Spinelli1, Robison José da Cruz1, Cyntia Marques Santos Corrêa de Godoy1, Mara de Souza Junqueira1, Milena Coutinho da Motta1, Juliana Bortolatto1

-

( )

-

-

-

º

Palavras-chave:

1 INTRODUçãO

Trabalhos desenvolvidos por pesquisadores brasileiros ganham maior aceitação internacional quando utilizam animais de qualidade. Para terem essa garantia de qualidade, esses animais devem ser produzidos em ambientes onde são em - pregadas técnicas apuradas de controle de conta- minação1.

Camundongos e ratos, como os demais ma-míferos em estado de higidez, devem manter seu meio interno constante e um controle rigoroso dos limites de sua variação (fatores ambientais). Por essa razão, o conhecimento dos valores de

-gicos e resultados obtidos nos procedimentos experimentais2.

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Marilda Osti Spinelli, Robison José da Cruz, Cyntia Marques Santos Corrêa de Godoy, Mara de Souza Junqueira, Milena Coutinho da Motta, Juliana Bortolatto

-nhecimento que camundongos podem exibir va-

dieta, manuseio, ambiente, entre outros fatores3. Devido a esses fatores, os animais experi-

mentais não se comportam do mesmo modo nas

países, onde são mantidos em cativeiro, sendo -

do planeta4.A importância de conhecer os valores dos pa-

desvios torna-se evidente quando se observa que camundongos isogênicos e heterogênicos têm,

comparada aos valores em humanos. Além disso,

-das em consideração nos projetos experimentais relacionados3,5.

-soluta e relativa das células do sangue ou de seus formadores; a reatividade desses sistemas varia de acordo com a espécie, explicando as discrepân-cias de resultados em protocolos experimentais formalmente idênticos3.

no manejo e ambiente, a resultante dos valores normais devem ser analisadas e estudadas antes e depois das mudanças realizadas, mesmo que

a realização de um estudo comparativo, devemos seguir as mesmas normas utilizadas desde a região anatômica da coleta de sangue até: idade, sexo,

4,6,7.-

quisadores dados que possam ser relevantes na escolha do modelo experimental a ser utilizado,

-mundongos isogênicos, mantidos em biotérios Convencional e SPF do Centro de Bioterismo – FMUSP.

2 MATERIAL E MéTODO

2.1. Animais Experimentais

Foram selecionados randomicamente 20 ani-mais das linhagens de camundongos: C57Bl/6 e BALB/c provenientes do biotério convencional e 20 animais, das mesmas linhagens de camundon-gos, do biotério SPF. Os animais foram criados e fornecidos pelo Centro de Bioterismo da Facul-dade de Medicina da USP; todos os animais apre-sentavam idade entre 10 e 11 semanas, separados em grupos por sexo.

2.2. Ambiente

Campinas/SP). Todo o material introduzido nos isoladores foi esterilizado em autoclave, no inte-rior de cilindro de transferência, sendo que a face

-

a 2%, permanecendo em contato por 30 minutos, quando então todo o material era utilizado para

-vel (Nuvital-Curitiba/PR) foram fornecidos ad libitum. Todos os procedimentos de esterilização foram validados8

regras de higienização e paramentação na entrada;

mantendo a temperatura a 22ºC ± 2ºC.Animais convencionais, mantidos sob barrei-

salas exclusivas para cada linhagem, recebendo ad libitum.

As gaiolas sofreram desinfecção com hipoclori-

-

paramentação na entrada. A temperatura nas salas

absoluta do ar.

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ESTUDO COMPARATIVO DOS VALORES HEMATOLÓGICOS ENTRE SEXO E CATEGORIAS SANITÁRIAS DE CAMUNDONGOS C57BL/6 E BALB/C

Todos os procedimentos foram realizados de acordo com princípios internacionais de ética e bem-estar animal e aprovados pelo Comitê de Ética

º 251/11.

2.3. Parâmetros Sanguíneos

coleta de sangue total, por punção da veia sub-mandibular, sem prévio jejum9. Aproximadamente 100ul de sangue total foi coletado e acondicionado

-

10. As amostras de sangue foram analisadas no mesmo dia da coleta, através do Contador de Células (Celm CC510). Os parâmetros testados foram: estudo da série vermelha (eritrograma) e branca (leucograma).

No eritrograma foi realizada a contagem de

por microcentrifugação (Fanen 211); hemoglobina (Hb), através da fotocolorimetria no comprimento

-puscular médio (VCM); hemoglobina corpuscular média (HCM); e a concentração da hemoglobina corpuscular média (CHCM). Foram calculados

-

bem como a diferenciação celular em esfregaços -

determinados por contagem relativa resultante em percentual celular10.

3 ANÁLISE ESTATíSTICA

Para comparação dos grupos de categorias

da mesma linhagem, foi utilizado o programa estatístico Prisma 5 GraphPad Software, teste t-Student (paramétrico) e teste Mann-Whitney - Teste U (não paramétrico), para comparação

das médias e desvio padrão. Os resultados foram

o valor de P<0,05.

4 RESULTADOS

As tabelas 1 e 2 demonstram os valores hema-

criados no Centro de Bioterismo da FMUSP.

de camundongos machos e fêmeas para as catego-

percentual de polimorfonucleares ( ),

machos e fêmeas de camundongos C57Bl/6 e --

5 DISCUSSãO

-

4,7. A criação de

da colônia para a qual os testes serão aplicados. Quando comparamos animais Convencionais com os SPF criados em nossa instituição, deparamos

Dos parâmetros analisados, encontramos

em ambas as linhagens, entre os sexos e entre -

esterilização química do porto acoplado ao cilin-

adentrar no interior do isolador durante o processo de passagem do material.

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Marilda Osti Spinelli, Robison José da Cruz, Cyntia Marques Santos Corrêa de Godoy, Mara de Souza Junqueira, Milena Coutinho da Motta, Juliana Bortolatto

Tabela 1 -

Parâmetroslinhagem C57Bl/6 - SPF C57Bl/6 - Convencional

SexoUnidade Resultados

3

%

3

3 3

%%%%%

Tabela 2 -

Parâmetroslinhagem C57Bl/6 - SPF C57Bl/6 - Convencional

SexoUnidade Resultados

3

%

3

3 3

%%%%%

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ESTUDO COMPARATIVO DOS VALORES HEMATOLÓGICOS ENTRE SEXO E CATEGORIAS SANITÁRIAS DE CAMUNDONGOS C57BL/6 E BALB/C

-

-

de determinadas células diferenciadas que se

11, 12. Quando comparamos os nossos resultados

que alguns desses parâmetros são semelhantes, enquanto outros são discordantes. As seme-

para C57Bl/6 e BALB/c, em ambos os sexos e

Figura 1 -

Figura 2 -

Figura 3 -

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Marilda Osti Spinelli, Robison José da Cruz, Cyntia Marques Santos Corrêa de Godoy, Mara de Souza Junqueira, Milena Coutinho da Motta, Juliana Bortolatto

categoria SPF; os demais parâmetros analisados apresentaram diferenciação nos resultados13-17.

-

biotério para outro.

6 CONCLUSãO

camundongos das linhagens isogênicas BALB/c

e C57BL/6, mantidos em biotérios Convencional e SPF, não apresentou diferenças entre os parâme-

-globina, volume corpuscular médio, hemoglobina corpuscular média, concentração de hemoglobina

--

taram valores diferentes entre os sexos e entre as

superiores em convencionais quando comparadas

HEMATOLOGICAL COMPARATIVE STUDY BETWEEN SEX AND SANITARY CATEGORIES OF C57BL/6 AND BALB/C MOUSE

The purpose of this study was to provide researchers with data that may be relevant in the choice of experimental model to be used, comparing the haematological values of isogenic strains of mice kept in conven-

were used for selected health category and sex, without clinical signs

leukocytes occurs by cell volume and is used to identify the cell sus-

haematological values of isogenic strains of mice BALB/c and C57BL/6, kept in conventional animal facilities and SPF, showed no differences between the parameters: erythrocyte count, hematocrit, hemoglobin, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin, hemoglobin concentration mean corpuscular; WBC, monocytes, lymphocytes, and

C57BL/6 were greater in number in females when compared to con-

Keywords:

ABST

RACT

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ESTUDO COMPARATIVO DOS VALORES HEMATOLÓGICOS ENTRE SEXO E CATEGORIAS SANITÁRIAS DE CAMUNDONGOS C57BL/6 E BALB/C

ed. New York: Mc Graw-Hill; 1966.

2. Foster HL, Small D, Fox JG. The mouse in biomedical research-diseases. 2nd ed. New York: Academic Press; 1984.

HM. Clinical biochemical and hematological reference values in normal experimental animals. New York: Masson; 1977.

4. Pinheiro DCSN, Favali CBF, Souza Filho AA, Silva ACM, Filgueiras TM, Lima MGS. Parâmetros

e ratos do biotério central da

(Scientia Plena. 2010; 6(10)).

5. Menendez RC. Animales de

Médicas; 1985.

Febiger; 1993.

7. Dantas JA, Ambiel CR, Cuman RKN, Baron IS, Bersani Amdo CA. Valores de referência de alguns

biotério central da Universidade

Sci. 2006 jul.-dez.;28(2):165-70.

8. Motta MC. Monitoramento

Paulo: Faculdade Osvaldo Cruz; 2004.

the saphenous vein compared with the tail vein during multiple blood sampling of mice. Lab Anim. 2010

10. Yoshida HS, Spinelli MO, Guedes

e bioquímicos em linhagens de camundongos isogênicas A.Snell, BALB/c, C57Bl/6J e heterogênica suíça. Rev Bras Med Vet. 2000 maio-jun.;22(3): 122-4.

enviromental impact on the variance of blood values in inbred and F1

12. Barrios M, Rodríguez-Acosta A, Gil A, Salazar AM, ,

, et al. Comparative hemostatic

parameters in BALB/c, C57Bl/6 and C3H/He mice. Thromb Res.

Dec 21.

13. Hrapkiewicz K, Medina L,

animal medicine an introduction.

1998.

14. Charles River Laboratories International. BALB/c mouse

http://www.criver.com/SiteCollectionDocuments/rm_rm_r_BALBc_mouse_

.

15. Charles River Laboratories International. C57BL/c mouse

http://www.criver.com/SiteCollectionDocuments/rm_rm_r_C57BL6_mouse_

.

16. Frich HC, Suber RL, Umholtz R.

C57BL/6 mice. Lab Anim Sci. 1980 Oct;30(5):835-40.

17. Lakowiscz W, Czeerski P.

Acta Haematol. 1996;36(1):13-25.

REFERêNCIAS