ATIVIDADES LABORATORIAIS REALIZADAS NO INSTITUTO … · Chiroptera: identificação morfométrica...
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Juliana Galera Castilho Kawai Pesquisadora Científica – Instituto Pasteur Outubro-2013 ATIVIDADES LABORATORIAIS REALIZADAS NO INSTITUTO PASTEUR: DIAGNÓSTICO E PESQUISA
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Juliana Galera Castilho Kawai
Pesquisadora Científica – Instituto Pasteur
Outubro-2013
ATIVIDADES LABORATORIAIS REALIZADAS
NO INSTITUTO PASTEUR: DIAGNÓSTICO E
PESQUISA
PAPEL DO LABORATÓRIO
1 - DIAGNÓSTICO
Confirmação
de
caso suspeito
Diagnóstico
diferencial
Determinação
da profilaxia
Análise da
situação
epidemiológica
Monitoramento
do tratamento
humano
Dosagem de
anticorpos
2 - PRODUÇÃO
DE INSUMOS 3 - CAPACITAÇÃO 4- PESQUISA
ORGANIZAÇÃO LABORATORIAL
RECEPÇÃO DE AMOSTRAS
EXPEDIENTE
SEÇÃO DE DIAGNÓSTICO DA RAIVA
VIROLOGIA
IMUNOLOGIA
BIOLOGIA MOLECULAR
BIOTÉRIO/ INFECTÓRIO
CULTIVO CELULAR
IMUNO-HISTOQUÍMICA
- SNC
- ANIMAIS SILVESTRES
- FOLÍCULO PILOSO/SALIVA/LÍQUOR
- SORO HUMANO
- SORO ANIMAL (LPV)
- LÍQUOR
VIROLOGIA
IMUNOLOGIA
BIOTÉRIO / INFECTÓRIO
EXPEDIENTE
SEÇÃO DE DIAGNÓSTICO DA RAIVA
• Diagnóstico virológico para raiva: postmortem e
antemortem
• Diagnóstico diferencial raiva/cinomose
• Diagnóstico diferencial raiva/encefalite equina
• Identificação morfométrica de espécies de morcegos
• Identificação genética de espécies de animais silvestres
• Tipificação antigênica para raiva
• Tipificação genética para raiva e encefalites equinas
• Capacitação laboratorial para profissionais/estagiários/
alunos pós-graduação
• Diagnóstico sorológico para raiva humana (Brasil)
• Diagnóstico sorológico antemortem
• Diagnóstico sorológico para raiva animal (laboratórios
produtores de vacina)
• Produção de conjugado: interno e externo
• Capacitação laboratorial para profissionais/estagiários/
alunos pós graduação
SERVIÇO OFERECIDOS PELO LABORATÓRIO
VIROLOGIA
IMUNOLOGIA
BIOTÉRIO / INFECTÓRIO
SEÇÃO DE DIAGNÓSTICO DA RAIVA
- IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD) - ISOLAMENTO VIRAL - IDENTIFICAÇÃO MORFOMÉTRICA E GÉNETICA DE ESPÉCIES - IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (AcMs) - RT-PCR/NESTED RT-PCR - SEQUENCIAMENTO GENÉTICO - SELLERS
- SFIMT - RFFIT - PRODUÇÃO DE CONJUGADO ANTIVÍRUS DA RAIVA
TÉCNICAS REALIZADAS PELO LABORATÓRIO
EXPEDIENTE
SEÇÃO DE DIAGNÓSTICO DA RAIVA
DEMANDA GERADA
BIOTÉRIO / INFECTÓRIO Serviços Municipais e
Estaduais (SP e outros Estados ligados a Saúde)
Serviços Municipais e Estaduais (SP e outros
Estados ligados a Agricultura)
Serviços Municipais e Estaduais (SP e outros
Estados ligados ao Meio Ambiente)
OPAS MS Emilio Ribas
População (Proprietários) Empresas (Produtoras de Vacinas)
WHO
1- DIAGNÓSTICO
FLUXO DO DIAGNÓSTICO NA
VIROLOGIA
NÚMERO DE AMOSTRAS RECEBIDAS POR ANO PARA O DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO
(2002-2012)
11074
12754
12039
12651
11541
11386
11683
9663
9250
8060
7521
0
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012
Nú
me
ro d
e A
mo
str
as
re
ce
bid
as
Ano
Técnicas convencionais para o
diagnóstico da raiva
Imunofluorescência
direta Isolamento
viral
FLUXO DO DIAGNÓSTICO NA VIROLOGIA
Amostras = 3.200
Amostras = 4.040
BIOTÉRIO/
INFECTÓRIO
BIOTÉRIO/
INFECTÓRIO BIOTÉRIO/
INFECTÓRIO
CULTIVO
CELULAR
Técnicas convencionais para o
diagnóstico da raiva
FLUXO DO DIAGNÓSTICO NA VIROLOGIA
Positiva
IFI (anticorpos
monoclonais)
Chiroptera: identificação
morfométrica de sp
Outros silvestres:
identificação genética de sp
Tipificação
antigênica
Amostras = 74
CARACTERÍSTICAS GERAIS DOS VÍRUS CARACTERIZAÇÃO: IFI (monoclonais)
VARIANTE 3
(Desmodus rotundus)
VARIANTES
VARIANTE 2
(Cão)
VARIANTE 4
(Tadarida brasiliensis)
VARIANTE 6
(Lasiurus cinereus) NÃO
COMPATÍVEL??
Técnicas convencionais para o
diagnóstico da raiva
FLUXO DO DIAGNÓSTICO NA VIROLOGIA
Positiva
Tipificação
genética
Tipificação
antigênica???
RT-PCR e
sequenciamento Amostras = 30
DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL DE RAIVA
FLUXO DO DIAGNÓSTICO NA VIROLOGIA
SELLERS
CÃO
Amostras = 3.058
EQUINOS
NESTED
RT-PCR
BIOTÉRIO/
INFECTÓRIO
Amostras = 104
BIOLOGIA
MOLECULAR
FLUXO DO DIAGNÓSTICO NA VIROLOGIA
IFD E IV
- SALIVA
- FOLÍCULO PILOSO
Amostras = 45
NESTED
RT-PCR E SEQ/O
DIAGNÓSTICO ANTEMORTEM
(AMOSTRA DE HUMAMO)
- LÍQUOR - FOLÍCULO PILOSO
- SALIVA
- LÍQUOR
IV
Amostras autolisadas
ou em decomposição
Diagnóstico
antemortem
Epidemiologia
molecular (maior poder descriminatório)
Vantagens
Perfil antigênico
não compatível
FLUXO DO DIAGNÓSTICO NA VIROLOGIA
Análise da
situação
epidemiológica
LABORATÓRIO DE BIOLOGIA MOLECULAR
Identificação
genética
de espécies
Amostras = 278
Amostras
teciduais fixadas
em formol
Diagnóstico
diferencial entre
as encefalites
Tipificação
antigênica
LABORATÓRIO DE IMUNO-HISTOQUÍMICA
Criar arquivo
de blocos de
amostras
FLUXO DO DIAGNÓSTICO NA VIROLOGIA
Amostras = 18 (período de maio/2012 a fevereiro/2013)
Estudos
retrospectivos
Diagnóstico
- Raiva
- Outras
encefalites
FLUXO DO DIAGNÓSTICO NA
IMUNOLOGIA
NÚMERO DE AMOSTRAS RECEBIDAS POR ANO PARA O DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO
(2002-2012)
14485
16342
17426
20045
23638
21921
20913
20026
22211 22158
17885
0
5000
10000
15000
20000
25000
2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012
Núm
ero
de a
mostr
as re
cebid
as
Ano
Técnicas convencionais para o
diagnóstico sorológico
FLUXO DO DIAGNÓSTICO NA IMUNOLOGIA
Soro humano
SFIMT
Soro animal
(Lab. produtores vacinas)
SFIMT
Amostras = 100
FLUXO DO DIAGNÓSTICO NA SOROLOGIA
RFFIT
Amostras = 45
DIAGNÓSTICO ANTEMORTEM
(AMOSTRA DE HUMAMO)
LÍQUOR SORO
2 – PRODUÇÃO DE INSUMOS
SEÇÃO DE DIAGNÓSTICO DA RAIVA
Produção e fornecimento de CVS e PV (vírus
padrão)
Fornecimento de soro hiperimune padrão
Fornecimento de células N2A e BHK-21
Produção e fornecimento de conjugado
Células BHK-21 infectadas com vírus fixo PV
Células N2A infectadas com vírus
fixo CVS
SEÇÃO DE DIAGNÓSTICO DA RAIVA
Controle de células
Fonte: Caporale (2010) - IP
3 – CAPACITAÇÃO
1 - CAPACITAÇÃO LABORATORIAL (PROFISSIONAIS)
NACIONAIS = 10/ANO INTERNACIONAIS = 5/ANO
3 – ALUNOS DE PÓS-GRADUAÇÃO
15
2 - CAPACITAÇÃO LABORATORIAL (PAP)
4/ANO
TOTAL =
SEÇÃO DE DIAGNÓSTICO DA RAIVA
CONSULTORIAS EXTERNAS
4 – INICIAÇÃO CIENTÍFICA
1/ANO
5 – BOLSA DE INVESTIGAÇÃO CIENTÍFICA
TOTAL: 5
SEÇÃO DE DIAGNÓSTICO DA RAIVA
4 – PESQUISA
PESQUISA
PESQUISADORES = 20
PUBLICAÇÕES = 60
30%
50%
20%
Mestrado
Doutorado
Pós-doutorado
FORMAÇÃO ACADÊMICA
LINHAS DE PESQUISAS
VIROLOGIA
1 - Identificação de espécies reservatórias para o vírus da
raiva
LINHAS DE PESQUISAS (VIROLOGIA)
Morcego insetívoro Morcego frugívoro
Morcego Hematófago
Cerdocyon thous
crab-eating fox
Lycalopex vetulus
hoary fox
?
1 - Identificação de espécies reservatórias para o vírus da
raiva
LINHAS DE PESQUISAS (VIROLOGIA)
LINHAS DE PESQUISAS (VIROLOGIA)
2 - Detecção do vírus da raiva em órgãos de morcegos
3-Padronização de técnicas para o diagnóstico
antemortem
4 - Patogenia do vírus da raiva
5 – Estudos de mecanismos antivirais para o vírus da
raiva
6 - Vigilância epidemiológica das encefalites equinas
LINHAS DE PESQUISAS (VIROLOGIA)
7 – Epidemiologia molecular da raiva no Brasil:
humanos
Cão
Cachorro do
mato
Humano
Saguis
D.rotundus
D.rotundus
Artibeus spp
1° Brasil
Gato Cão
D.rotundus
Artibeus spp
Humano
Humano
LINHAS DE PESQUISAS (VIROLOGIA)
D. rotundus
D. rotundus
Humano
Bovino
Caprino
LINHAS DE PESQUISAS (VIROLOGIA)
LINHAS DE PESQUISAS (VIROLOGIA)
7 – Epidemiologia molecular da raiva no Brasil: canídeos
domésticos e silvestres no nordeste
Cão
Cerdocyon thous
BA BA
MA
MA
PI
PI CE
CE
AL AL SE
PB
PB
SE
PE PE
Saguis
LINHAS DE PESQUISAS (VIROLOGIA)
7 – Epidemiologia molecular da raiva no Brasil:
saguis no nordeste
LINHAS DE PESQUISAS (VIROLOGIA)
7 – Epidemiologia molecular da raiva no Brasil: diferentes
linhagens de vírus da raiva isolados de morcegos
insetívoros
LINHAS DE PESQUISAS (VIROLOGIA)
8 - Filogeografia do vírus da raiva no Brasil
9 – Resposta imune in situ frente a infecção ao vírus da
raiva em diferentes hospedeiros
LINHAS DE PESQUISAS
SOROLOGIA
LINHAS DE PESQUISAS (SOROLOGIA)
1 - Estudo da imunidade humoral humana e animal
após vacinação para o vírus da raiva
2 - Avaliação da resposta imune conferida por proteínas
purificadas do vírus da raiva expostas à irradiação por
raios gama
3 - Purificação de proteínas para produção de insumo
biológico
LINHAS DE PESQUISAS (SOROLOGIA)
4 - Produção de anticorpos monoclonais
5 - Aperfeiçoamento e aplicação de métodos de produção
de vírus da raiva em cultivo celular
6 – Produção de conjugado fluorescente antivírus da raiva
a partir de soro hiperimune de equino
7 - Estudo da ação de fármacos e moléculas naturais como
agentes antivirais
