Resistência de Fitopatógenos a

FungicidasProfs. Eiko Mori Andrade Spinelli e Milton Luiz da Paz Lima

1

Instituto Federal Goiano câmpus Urutaí

VI Semana de Ciências Agrárias

Programa do curso:

Teoria:

1 - Conceitos.

2 - Tipos de fungicidas.

3 - Resistência dos patógenos.

4 - Manejo da resistência ou Estratégia anti-resistência.

5 - Resultados:

Prática:

A) repicagem

B) medição do diâmetro da colônia:

cálculo da AACPCM;

calculo da % de inibição e porcentagem de crescimento;

calculo da taxa de crescimento;

Classes de sensibilidade;

cálculo do EC50 2

1. Diâmetro da colônia

Fonte: milksci.unizar.es

Soma / 2 = diâmetro médio

Placas de Petri

3

CulturasPenicillium sp.Aspergillus flavus

Cladosporium sp.

Colletotrichum falcatum Bipolaris sp. Sclerotinea sp.

4

Paz Lima, 2010Paz Lima, 2010Paz Lima, 2014

Cálculo da AACPCM

Área abaixo da curva de progresso do crescimento micelial

Usa-se a variável dependente: diâmetro da colônia

Valor adimensional

Medidas coletadas no tempo;

5

Visconti et al. (2010)

AACPCM

Calculo AACPCM

6

1 12

2 14

3 15

4 26

5 32

6 42

7 50

Isolado 1 Isolado 2

1. Cálculo a mão

2. Cálculo no excell

1 43

2 50

3 58

4 70

5 75

6 84

7 95

AACPCM isolado 1 =

((2-1)*(14+12)/2)) +

((3-2)*(15+14)/2)) +

((4-3)*(26+15)/2)) +

((5-4)*(32+26)/2)) +

((6-5)*(42+32)/2)) +

((7-6)*(50+42)/2)) =

AACPCM isolado 2 =

((2-1)*(50+43)/2)) +

((3-2)*(58+50)/2)) +

((4-3)*(70+58)/2)) +

((5-4)*(75+70)/2)) +

((6-5)*(84+75)/2)) +

((7-6)*(95+84)/2)) =

x y

Y=diâmetro da colônia

AACPCM

7

Visconti et al., 2010

AACPCM

8

Visconti et al., 2010

Cálculo da % de inibição;

Quanto do crescimento em escala de porcentagem teve seu crescimento inibido.

É realizado através da regra de três utilizando o valor da testemunha como padrão.

Cada isolado fúngico pode reagir diferentemente as dosagens de fungicidas aplicados.

Calculo:

Valor do diâmetro de

colônia da testemunha100 %

Quanto em %

corresponde?

Valor do diâmetro da

colônia nas dosagens

de fungicida

O calculo é feito numa escala de dias de cálculo

% de Crescimento

% de Crescimento-100

= % de inibição

9

Classes de Sensibilidade – determinação de amplitudes

Isolado

Tipo de

ingrediente

ativo 10 ppm % Cresc Classificação Isolado 100 ppm % Cresc Classificação

Coll soja Cercobin 56 intermediario Coll soja Cercobin 44 intermediario

Coll soja Cercobin 57 intermediario Coll soja Cercobin 47 intermediario

Coll anturio Cercobin 61 intermediario Coll anturio Cercobin 24 intermediario

Coll anturio Cercobin 71 intermediario Coll anturio Cercobin 20 intermediario

Coll caqui Cercobin 16 sensível Coll caqui Cercobin 16 sensível

Coll caqui Cercobin 16 sensível Coll caqui Cercobin 16 sensível

Coll dracena Cercobin 83 insensivel Coll dracena Cercobin 45 intermediario

Coll dracena Cercobin 83 insensivel Coll dracena Cercobin 32 intermediario

Coll uva Cercobin 61 intermediario Coll uva Cercobin 42 intermediario

Coll uva Cercobin 66 intermediario Coll uva Cercobin 29 intermediario

Coll tomate Cercobin 16 sensível Coll tomate Cercobin 16 sensível

Coll tomate Cercobin 16 sensível Coll tomate Cercobin 16 sensível

Coll iuca Cercobin 44 intermediario Coll iuca Cercobin 16 sensível

Coll iuca Cercobin 47 intermediario Coll iuca Cercobin 19 sensível

Coll mandioca Cercobin 92 insensivel Coll mandioca Cercobin 22 intermediario

Coll mandioca Cercobin 89 insensivel Coll mandioca Cercobin 22 intermediario

Coll soja Nativo 40 intermediario Coll soja Nativo 25 intermediario

Coll soja Nativo 38 intermediario Coll soja Nativo 24 intermediario

Coll anturio Nativo 25 intermediario Coll anturio Nativo 22 intermediario

Coll anturio Nativo 24 intermediario Coll anturio Nativo 21 intermediario

Coll caqui Nativo 60 intermediario Coll caqui Nativo 45 intermediario

Coll caqui Nativo 55 intermediario Coll caqui Nativo 36 intermediario

Coll dracena Nativo 39 intermediario Coll dracena Nativo 21 intermediario

Coll dracena Nativo 38 intermediario Coll dracena Nativo 22 intermediario

10

Classes de Sensibilidade – determinação de amplitudes

10 ppm 100 ppm 10 pmm 100 ppm

Soja 57 46 20,6964 I I 39 25 18,4853 I I

Antúrio 66 22 20,2712 I I 25 22 26,0251 I I

Caqui 16 16 30,3024 S S 58 41 6,9490 I I

Dracena 83 39 14,4274 IS I 39 22 18,9914 I I

Uva 63 36 20,8849 I I 27 23 25,1047 I I

Tomate 16 16 20,2222 S S 47 27 23,4861 I I

Iuca 46 18 22,6304 I S 24 24 27,1560 I I

Mandioca 91 22 21,5873 IS I 34 22 25,3889 I I

10 ppm 100 ppm 10 ppm 100 ppm

Soja 64 34 20,7516 I I 33 33 17,7778 I I

Antúrio 23 16 27,1111 I S 22 18 25,3095 I S

Caqui 21 21 21,8516 I I 20 20 24,2515 S S

Dracena 54 44 9,9458 I I 51 31 19,1845 I I

Uva 57 35 19,5030 I I 42 16 23,8485 I S

Tomate 50 18 22,0528 I S 73 16 23,2096 I S

Iuca 30 18 26,6250 I S 22 16 18,2778 I S

Mandioca 57 31 18,4744 I I 27 20 22,4221 I I

Azoxistrobina + ciproconazol

Trifloxistrobina +

Piraclostrobina +

epoxiconazol

% de

Crescimento

100 ppm

EC50 (mg

ia/mL)

EC50 (mg

ia/mL)

Isolados

Isolados

% de

Crescimento

100 ppm

% de

Crescimento

100 ppm

EC50 (mg

ia/mL)

% de

Crescimento

10 ppm

% de

Crescimento

10 ppm

% de

Crescimento

10 ppm

% de

Crescimento

100 ppm

EC50 (mg

ia/mL)

% de

Crescimento

10 ppm

Tiofanato metílico

11

Efeito de herbicidas

sobre agentes

fitopatogênicos

Rosa et al., 2010 [Acta Sci., Agron. (Online) vol.32

no.3 Maringá July/Sept. 2010]12

Cálculo da taxa de crescimento;

Regressão linear temos: intercepto e coeficiente angula=taxa de crescimento

Validação pelo teste de hipótese da regressão

Excel não faz, programas mais robustos possuem essa função

Excel =proj.lin(conjunto de dias;conjunto do diâmetro

y = -0,4691x + 61,598R² = 0,4922

0

20

40

60

80

100

0 20 40 60 80 100Diâ

metr

o d

a c

olô

nia

(m

m)

Dosagem Azoxistrobina + Ciproconazol

intercepto Taxa de

crescimento 13

Calculo da taxa de crescimento

14

1 43

2 50

3 58

4 70

5 75

6 84

7 95

Resultado dado é mm/dia

mmdia

Cálculo do EC50

Tirar logaritmo das dosagens – 0,1, 1, 10 e 100 ppm

15

log10-1

-1

0

0

1

1

2

2

0,1

0,1

1

1

10

10

100

100

1) Calculo do log das dosagens 2) Cálculo do coeficiente

angular - bx

0,1

0,1

1

1

10

10

100

100

100

100

100

100

56,25

57,14286

43,75

47,14286

Dosagens F

% de

Crescimento

3) Cálculo do INTERCEPTO

0,1

0,1

1

1

10

10

100

100

100

100

100

100

56,25

57,14286

43,75

47,14286

Dosagens F

% de

Crescimento

Cálculo do EC50 - Continuação

16

EC50 = 50 - INTERCEPTO

COEFICIENTE ANGULAR

VALOR EM MODULO

Critérios de Sensibilidade

dos isolados a fungicidas

17

Estatística na análise de Resistência a fungicidas

Fatores de variação Diametro da colônia % de inibição

Isolados F 7, 160 = 58,18** F 7,128 = 36,82**

Dosagem F 4, 160 = 3580,22** F 3,128 = 2550,82**

Fungicida F 3 , 160 = 164,15** F 3,128 = 76,57**

Dosagem x Fungicida F 12, 160= 33,91** F 9,128 = 10,72**

Isolados x Dosagem F 28, 160= 14,89** F 21,128 = 12,25**

Isolados x Fungicida F 21, 160 = 33,59** F 21, 128 = 30,41**

Isolado x Fungicida x Dosagem F 84,160 = 12,74** F 63, 128 = 12,34**

CV 6,3 10,418

Estatística na análise de Resistência a fungicidas

a

b bcbc bc c

dd

0

10

20

30

40

50

60

Soja Mandioca Uva Anturio Dracena Tomate Iuca Caqui

Méd

ias

do

Diâ

met

ro d

a c

olô

nia

(m

m)

Hospedeiros de origem dos isolados

a

b

c

d

e

0

10

20

30

40

50

60

70

80

0 0,1 1 10 100

Méd

ias

do

Diâ

metr

o d

a c

olô

nia

(m

m)

Dosagens de fungicidas utilizadas

19

Estatística na análise de Resistência a fungicidas

a

bc

d

0

10

20

30

40

50

60

Tiofanato metílico piraclostrobina +

epoxiconazol

azoxistrobina +

ciproconazol

trifloxistrobina +

tebuconazol

Méd

ias

do

Diã

met

ro d

a c

olô

nia

(m

m)

Fungicidas utilizados 20

Tabela 3. Amplitudes das EC50 para os isolados de

Colletotrichum spp. para os diferentes tipos de

fungicidas.

21

Fungicidas 0-5 6-10 11-15 16-20 21-25 26-30

Tiofanato metílico

Trifloxistrobina+Tebuconazol

Piraclostrobina+Epoxiconazol

Azoxistrobina+Ciproconazol