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Técnicas para o Diagnóstico Automatizado de Enteroparasitoses
Aula n. 2 - Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Profs. Alexandre Falcão e Jancarlo Gomes
Universidade Estadual de Campinas - UNICAMP
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Etapas de Coleta e Preservação de Amostras Fecais
• Parte geral
• Coleta de material fecal
– Fezes eliminadas espontaneamente: quantidade, livre de impurezas, local de evacuação, etc.
– Fezes eliminadas com a utilização de medicamentos, produtos químicos e laxantes
– Recipiente indicado para coleta de amostra fecal
– Estabilidade da amostra coletada
– Estruturas parasitárias, estágios de diagnóstico
• Número de amostra coletada
• Preservação temporária e permanente de material coletado
– Formaldeído, Schaudinn, APV, MIF, SAF e PAF
(Garcia, 2007; De Carli, 2007)
(Neves, 2009; Rey, 2008; Garcia, 2007; De Carli, 2007; Gomes et al., 2004; Hoshino-Shimizu et al., 2003; Van Gool, 2003)
Eliminação na semana de estruturas parasitárias
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Eliminação Irregular de Estruturas Parasitárias
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF)
• Exame macroscópico
Adulto de Taenia saginata
Adultos de Ascaris lumbricoides
(Cortesia das imagens - Departamento de Biologia Animal do Instituto de Biologia da UNICAMP e CDC / USA)
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF)
• Exame microscópico
Ovos de Ascaris lumbricoides
Ovo de Schistosoma mansoni
(Cortesia das imagens - Instituto de Computação da UNICAMP e FAPESP)
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF)
• Uso de coloração temporária
– Soluções de Iodo, Quensel, Azul de Metileno, etc.
– Vantagens e desvantagens
• Uso de coloração permanente
– Derivadas da hematoxilina, Tricrômico, Tionina, etc.
– Vantagens e desvantagens
• Uso de coloração para coccídios intestinais
– Kinyoun, Ziehl-Neelsen, Heine, Safranina, Giemsa, etc.
– Vantagens e desvantagens
(Garcia, 2007; De Carli, 2007)
• Exame direto
– Vantagens e desvantagens
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF)
(Garcia, 2007; De Carli, 2007)
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF)
• Técnicas convencionais
– Técnicas de flutuação (espontânea e centrifugada)
• Sulfato de zinco, cloreto de sódio e sulfato de magnésio
– Técnicas de sedimentação (espontânea e centrifugada)
• Sedimentação-espontânea, formalina-éter, formalina acetato de etila, etc.
– Técnicas de concentração para coccídeos
• Centrífugo-sedimentação com formaldeído-éter modificado, centrífugo-sedimentação com hidróxido de
potássio e centrífugo-flutuação em solução de sacarose
• Immunodiagnóstico e métodos moleculares
(Rey, 2008; Neves, 2008; Garcia, 2007; De Carli, 2007)
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Evolução Cronológica das Técnicas Parasitológicas Convencionais
(Gomes , 2011)
(Baermann, 1917; Rugai, 1954; Harada & Mori, 1955; Ash, 1997 - Figura segundo Rey, Parasitologia 3ª Edição, Guanabara Koogan, 2008)
Técnicas Convencionais
A - Rugai, Mattos e Brisola
B - Baermann-Moraes
C - Harada e Mori
Funil e tubo
Fezes
Gaze dobrada
Recipiente com fezes
Água aquecida
Água aquecida
Fezes
Água
Papel filtro
Recipiente com fezes
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Isolamento de Larvas
Técnica de Lutz (Hoffman, Pons & Janer)
(Lutz, 1919; Hoffman, Pons & Janer, 1934 - Figura segundo Dias, 2000 )
Fezes
Gaze umedecida
Copo ou
beaker
Água corrente
Copo cônico
Água corrente
Pipeta
Sedimento
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF) – Sedimentação-Espontânea
• Técnica de Willis
(Bass, 1910; Willis, 1921 - Figura segundo De Carli, Parasitologia Clínica, Ed. Atheneu, 2001)
Lamínula
Solução de
cloreto de sódio
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF) – Técnica de Flutuação
• Método de Stoll
(Stoll, 1926 - Figura segundo Araujo, Dissertação de Mestrado, USP, 2000)
Solução de hidróxido
de sódio
Fezes
Esferas de vidro
Rolha de borracha
Pipeta de Stoll
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Quantificação de Ovos
• Técnica de Faust & Cols.
(Bass, 1910; Faust, 1939 - Figura segundo De Carli, Parasitologia Clínica, Ed. Atheneu, 2007)
A - Técnica da lamínula
B - Técnica da alça de arame
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Técnica de Flutuação
• Técnica de Ritchie
(Telemann, 1908; Ritchie, 1948 - Figura segundo De Carli, Parasitologia Clínica, Ed., Ed.Atheneu, 2007)
A - Tubo de centrifugação
1 - Sedimento
2 - Formalina
3 - Impurezas
4 - Camada de Éter
B - Tubo de centrifugação
Limpeza da parede do tubo
com swab de algodão
C - Tubo de centrifugação
Sedimento
D - Preparação da lâmina
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Técnica de Sedimentação
• Técnica de Kato-Katz
(Kato, 1954; Komiya, 1966; Katz, 1970; Katz, 1972 - Figura segundo Araujo, Dissertação de Mestrado, USP, 2000)
Fezes não preservadas
Tela metálica ou
de náilon
Cartão retangular com
orifício central
Papel absorvente
Papel celofane
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Quantificação de Ovos
7 ml***3 ml**
* Amostra fecal;** acetato de etila; *** água destilada
1500rpm
2min.
7 ml *
*
1500rpm
2min.
1,4 g
fezes
Formalina 10%
tamponada: 12ml
(NL Comércio Exterior, 2006 - Figura segundo Araujo, Dissertação de Mestrado, USP, 2000)
Frasco
coletor
Solução de
formalina
Filtro
Tubo de
centrifugação
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Kit Comercial
• Kit Coprotest®
1 g
fezes
(Diagnostek Ind. Com. Prod. Cient., 2006)
Filtro
Solução de
Formalina 10%
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Kit Comercial
• Kit Paratest®
• Kit Parasep®
• Kit StillQuick®
• Coproseco®
• CoproKit®
(Medical Campinas, 2006; DiaSys Europe, 2006; Labo-Moderne, 2006)
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Kits Comerciais
(Falcão et. al , 2011)
Motivação - Projeto Maior FAPESP/UNICAMP
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
(Cortesia: Universidade Estadual de Campinas, Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo, 2011)
Kit paciente
Conjunto de filtros
mais tubo de centrifugação
Conjunto processador
Técnicas parasitológicas convencionais e kits comerciais
Exame Parasitológico das Fezes (EPF) - Inovadora Técnica Parasitológica