Aulas+práticas+Imunologia+Clinica

8/12/2019 Aulas+prticas+Imunologia+Clinica

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Instituto de Cincias da Sade

Curso: FARMCIA

Disci!ina: I"uno!o#ia C!$nica

Titu!o da Au!a: %isua!i&a'(o de C)!u!asSan#u$neas

AU*A

+

O,-ETI%O:Proporcionar a identificao os elementos figurados do sangue e diferenciaodas principais clulas de defesa do sistema imune presentes na circulao sangunea! "a#ercorrelao da morfologia com a funo destas clulas!

.ROCEDIMENTO:$ Os microsc%pios de&em estar em superfcies isentas de &i'ra(es!$ No trocar os microsc%pios de lugar!$ Colocar a o')eti&a de menor aumento na direo da lu# atra&s de mo&imento do re&%l&er!$ Colocar a l*mina +com lamnula para cima, na platina- encai.ando$a no /c0arriot1!

$ 2ncostar o condensador na l*mina e ligar a lu#!$ Atra&s do mo&imento do parafuso macromtrico at focali#ar o esfregao sanguneo emimagem ntida!$ Aperfeioar o foco com o parafuso micromtrico e o'ser&ar a imagem e elementos figurados3ue podem ser detectados neste aumento!$ 4epetir o processo utili#ando as outras o')eti&as at a o')eti&a de 567- porm nesta noutili#ar mais o parafuso macromtrico para foco e sim o parafuso micromtrico!$ A)ustar a iluminao!$ Nesta o')eti&a )8 poss&el diferenciar gl%'ulos &ermel0os- pla3uetas e gl%'ulos 'rancos etam'm o'ser&ar os diferentes tipos de leuc%citos pela l*mina!$ Na o')eti&a de 9667- adicionar pre&iamente uma gota do %leo de imerso na l*mina +a)ustariluminao e o foco com parafuso micromtrico,!$ Neste aumento- identificar as diferenas morfol%gicas entre neutr%filos- linf%citos- mon%citos-

eosin%filos e- se encontrado- 'as%filos! No poss&el &erificar diferenas morfol%gicas entre olinf%cito :- linf%cito ; e clulas N< apesar de possurem fun(es 'astante distintas na respostaimune!*i"e&a do Microsc/io:

Ao finali#ar a an8lise- limpar as lentes do microsc%pio- iniciando da lente de menoraumento para finali#ar com a de maior aumento- e&itando assim 3ue as o')eti&as demenor aumento fi3uem su)as com o %leo de imerso utili#ado na o')eti&a de 9667!

MATERIAIS 0UANTIDADEL*minas para leitura=leo de imerso

E0UI.AMENTOS 0UANTIDADEMicrosc/io


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Descarte do "ateria! uti!i&ado con1or"e Nor"as Internacionais de Se#uran'a


Curso: FARMCIA


Titu!o da Au!a: A#!utina'(o

AU*A

2

O,-ETI%O: mostrar ao aluno- rea(es de formao do comple.o antgeno$anticorpo /in &itro1

A#!utina'(o .assi3a: Deter"ina'(o de .rote$na C4Reati3a

Fina!idade> :este de aglutinao passi&a para deteco da Protena C$4eati&a no soro0umano! A Protena C$4eati&a +PC4, em altas concentra(es est8 associada ? infec(esagudas- situa(es necr%ticas e a uma &ariedade de estados inflamat%rios! A monitori#ao dosn&eis de PC4 nos permite a&aliar a efic8cia do tratamento e a recuperao do paciente!

.rinc$io> As partculas de l8te. so sensi'ili#adas com anticorpos 0umanos anti$PC4!@uando se mistura a suspenso de l8te. contendo ele&ados n&eis de PC4- ir8 produ#ir$seuma aglutinao ntida em um perodo m8.imo de minutos!

.rocedi"ento: Teste 0ua!itati3o9, 2m cada crculo da placa colocar>

CrculonBmero 9

CrculonBmero

CrculonBmero

CrculonBmero 5

Controle Negati&o D6l $ $ $

Controle Positi&o $ D6l $ $

Amostra nBmero 9 $ $ D6l $

55*6te7 FR 9 gota 9 gota 9 gota 9 gota

, Misturar com au.lio de esp8tula utili#ando toda a e.tenso de cada crculo da l*mina!, Agitar a l*mina com mo&imentos circulares por dois minutos!5, O'ser&ar os resultados!

REA89O .OSITI%A> Ntida aglutinao!REA89O NEATI%A> AusEncia de aglutinao +suspenso 0omogEnea,!

2; A#!utina'(o .assi3a: Deter"ina'(o de Fator Reu"at/ideFina!idade> :este de aglutinao passi&a para o diagn%stico de fator reumat%ide +"4,!.rinc$io> Partculas de l8te. sensi'ili#adas com IgG! A aglutinao &is&el em amostra comconcentrao de "4 igual ou superior a F UIml- de acordo com as referEncias esta'elecidas!

2.erccios propostos +no o'rigat%rio,9, Nos testes de 0amaglutinao para :o.oplasmose e doena de C0agas- pede$se>

a, @ual suporte foi empregadoH', 4eali#ou$se a pes3uisa de anticorpos! @ue tipo de antgeno foi empregadoH


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c, @uais cuidados de&em ser o'ser&ados na reali#ao do testeHd, @ual tipo de resposta imunol%gica foi ati&adaH 2.pli3ue!e, upon0amos 3ue ten0a se detectado na pes3uisa da paciente a presena de IgM +IgMJ $ oureagente,- o 3ue significaH @ual a rele&*ncia da positi&idade de uma IgM em uma gestanteHf, @ual o &alor da pes3uisa de IgG para a Koena de C0agasH 2.pli3ue!

MATERIAIS 0UANTIDADEKescarte com 0ipocloritoPlaca de fundo escuro +acompan0a o it,Palito para 0omogenei#ar os reagentes +acompan0a o it,Pipeta autom8tica de Dl $6lPonteiras amarelas +menor &olume,

E0UI.AMENTOS 0UANTIDADE



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Curso: FARMCIA


Titu!o da Au!a: A#!utina'(o 4 a#as

Fina!idade> :este de 0emaglutinao passi&a para o diagn%stico sorol%gico da doena deC0agas!

.rinc$io> em8cias de a&es esta'ili#adas e sensi'ili#adas com antgenos totais deTrypanosoma cruzi+antgenos solB&eis,- so aglutinadas 3uando colocadas em contato comdilui(es de soros de pacientes c0ag8sicos!

.rocedi"ento: Teste 0uantitati3o

a, 2m tu'o de ensaio- diluir a amostra a 956 a ensaiar e os soros controle positi&o +4, enegati&o +45,- adicionando> 96l de amostra J 6-5ml de diluente +4A,!

', Adicionar na microplaca a partir da ca&idade D6l de diluente +4A,!c, :ransferir D6l da amostra diluda para a 9ca&idade!d, :ransferir D6l da amostra diluda a ca&idade e 0omogenei#ar e transferir D6l para

a ca&idade- 0omogenei#ar e transferir D6l pa ra a 5 ca&idade e assimsucessi&amente at a F ca&idade- em 3ue ap%s a 0omogenei#ao D6l serodespre#ados +o?ser3ar es@ue"a,!

e, Controle positi&o> seguir o mesmo es3uema de diluio +ite" d,- at a ca&idade- em3ue ap%s a 0omogenei#ao D6l sero despre#ados +o?ser3ar es@ue"a,!

f, Controle negati&o> adicionar D6l do controle diludo nas e Fca&idades!g, omogenei#ar 'em a suspenso de 0em8cias +49,- por agitao delicada do frasco e

adicionar D l a cada ca&idade!0, ;ater le&emente nas laterais da placa para 0omogenei#ao dos reagentes!i, Kei.ar a placa em repouso por 9 0ora- a temperatura am'iente- em local isento de

&i'ra(es!), 2fetuar leitura ao final da incu'ao!

Resu!tado:

O ttulo ser8 a maior diluio 3ue ainda fornecer um resultado positi&o! Para &alidar o testede&e$se encontrar nas mesmas condi(es de leitura- o ttulo do soro positi&o +4, indicado na

eti3ueta 9 diluio!

REA89O .OSITI%A> u uniforme de 0em8cias reco'rindo toda a ca&idade- podendo estar ?s&e#es parcialmente retrado nas 'ordas!

REA89O FRACAMENTE .OSITI%A> u pouco ntido- apresentando pe3ueno dep%sito de0em8cias no fundo da ca&idade!

REA89O NEATI%A> ;oto compacto de 0em8cias no fundo da ca&idade!


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Es@ue"aera!

Ca&idade da placa 9 5 D F

Kiluente +4A, l $ D6 D6 D6 D6 D6 D6 D6

Amostra diluda a

956 +l,

D6 D6

:ransferir D6l Q Q Q Q Q Q Q

despre#ar

em8cias +49, l D D D D D D D D

:tulo do oro 56 F6 96 6 56 9F6 D6 D96

Interreta'(o dos Resu!tados:

T$tu!o do soro "enor @ue +B> soro no reagente R indi&duo no parasitado!

T$tu!o do soro "aior ou i#ua!a +B> soro reagente R indi&duo com suspeita da parasitose!


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:este de 0emaglutinao passi&a para o diagn%stico sorol%gico da to.oplasmose!

.rinc$io> em8cias de a&es esta'ili#adas e sensi'ili#adas com antgenos totais de

Toxoplasma gondii+antgenos solB&eis,- so aglutinadas 3uando colocadas em contato comdilui(es de soros com anticorpos especficos!

.rocedi"ento: Teste 0uantitati3o

a, 2m tu'o de ensaio- diluir a amostra a 99 a ensaiar e os soros controle positi&o enegati&o- adicionando> Dl de amostra J 6-5ml de diluente!

', Adicionar na microplaca a partir da ca&idade D6l de diluente!c, :ransferir D6l da amostra diluda para a 9ca&idade!d, :ransferir D6l da amostra diluda a ca&idade e 0omogenei#ar e transferir D6l para

a ca&idade- 0omogenei#ar e transferir D6l pa ra a 5 ca&idade e assimsucessi&amente at a F ca&idade- em 3ue ap%s a 0omogenei#ao D6l serodespre#ados +o?ser3ar es@ue"a,!

e, Controle positi&o> seguir o mesmo es3uema de diluio +ite" d,- at a ca&idade- em3ue ap%s a 0omogenei#ao D6l sero despre#ados +o?ser3ar es@ue"a,!

f, Controle negati&o> adicionar D6l do controle diludo nas e Fca&idades!g, omogenei#ar 'em a suspenso de 0em8cias- por agitao delicada do frasco e

adicionar D l a cada ca&idade!0, ;ater le&emente nas laterais da placa para 0omogenei#ao dos reagentes!i, Kei.ar a placa em repouso por 9 0ora- a temperatura am'iente- em local isento de

&i'ra(es!), 2fetuar leitura ao final da incu'ao!

Resu!tado:

O ttulo ser8 a maior diluio 3ue ainda fornecer um resultado positi&o! Para &alidar o testede&e$se encontrar nas mesmas condi(es de leitura- o ttulo do soro positi&o indicado na

eti3ueta 9 diluio!

REA89O .OSITI%A> u uniforme de 0em8cias reco'rindo toda a ca&idade- podendo estar ?s&e#es parcialmente retrado nas 'ordas!

REA89O FRACAMENTE .OSITI%A> u pouco ntido- apresentando pe3ueno dep%sito de0em8cias no fundo da ca&idade!

REA89O NEATI%A> ;oto compacto de 0em8cias no fundo da ca&idade!


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Es@ue"aera!

Ca&idade da placa 9 5 D F

Kiluente +4, l $ D6 D6 D6 D6 D6 D6 D6

Amostra diluda a

99 +l,

D6 D6

:ransferir D6l Q Q Q Q Q Q Q

despre#ar

em8cias +49, l D D D D D D D D

:tulo do oro 9 5 9F D D9 965 65F

Interreta'(o dos Resu!tados:

%eri1icar a "67i"a a#!utina'(o

2.erccios propostos +no o'rigat%rio,I, Nos testes de 0amaglutinao para :o.oplasmose e doena de C0agas e de aglutinao-pede$se>a, @ual suporte foi empregado nos testesH 2.pli3ue o princpio do mtodo!', 4eali#ou$se a pes3uisa de anticorpos! @ue tipo de antgeno foi empregadoH

c, @uais cuidados de&em ser o'ser&ados na reali#ao dos testesHd, @ual tipo de resposta imunol%gica foi ati&adaH 2.pli3ue!e, 2.pli3ue o significado clnico para uma gestante com resultado reagente para IgM na:o.oplasmose!f, @ual o &alor da pes3uisa de IgG para a Koena de C0agasH 2.pli3ue!

II, Indi3ue o ttulo das amostras +em A e ;,!Ap%s an8lise do controle positi&o e controle negati&o- )ustifi3ue a &alidao e a li'erao dosresultados das amostras em cada teste!

Legenda>CJ S controle positi&o

C$ S controle negati&o

4eao positi&a> &u uniforme de 0am8cias reco'rindo toda a ca&idade!

4eao negati&a> 'oto compacto de 0em8cias no fundo da ca&idade!


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:este A> Koena de C0agas :este ;> :o.oplasmose

Kiluio> Amostra Kiluio> Amostra

9>56 CJ 9>9 CJ

9>F6 CJ 9> CJ

9>96 CJ 9>5 CJ

9>6 CJ 9>9F CJ

9>56 CJ 9>D CJ

9>9F6 CJ 9>D9 CJ

9>D6 C$ 9>965 C$

9>D96 C$ 9>65F C$

MATERIAIS 0UANTIDADEKescarte com 0ipocloritoPipeta autom8tica de Dl- D6l

E0UI.AMENTOS 0UANTIDADE



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Curso: FARMCIA


Titu!o da Au!a: En&i"6tico 4 E*ISA

AU*A

B

O,-ETI%O:Mostrar ao aluno- rea(es de formao do comple.o antgeno$anticorpo /in &itro1com o emprego de um teste en#im8tico aplicado na pr8tica de diagn%stico e de triagem!

.rinc$io

A amostra diluda no suporte no 3ual se encontra o antgeno imo'ili#ado! e a mesmaconti&er os anticorpos especficos- estes formaro um comple.o com os antgenos epermanecero unidos! A frao no unida eliminada por la&agem! Adicionar os anticorposanti$imunoglo'ulina 0umana marcados pela en#ima +con)ugado,! e ocorrer a reao naprimeira etapa do processo- o con)ugado se unir8 ao anticorpo da amostra! Ap%s uma no&a

la&agem- se adiciona o su'strato cromogEnico! Nos casos onde o con)ugado ti&er se unido-0a&er8 surgimento de colorao celeste! A reao se detm com 8cido sulfBrico- com o 3ue acolorao a#ul celeste torna$se amarela!

.rocedi"ento

9! 2sta'elecer o plano de distri'uio e identificao das amostras e dos controles!! Pipetar 66Tl do diluente J 96Tl dos controles positi&o- negati&o e amostra! "a#er um

controle 'ranco no 3ual ser8 adicionado somente 66Tl do diluente!! ;ater le&emente nas laterais da placa!4. Incu'ar por 6 minutos a C !D! Kespre#ar o l3uido de cada poo e la&ar D &e#es com tampo de la&agem!

! Kistri'uir D6Tl do con)ugado anti$Ig 0umano pero.idase!7. Incu'ar por 6 minutos a C!F! La&ar como no item D!! Kistri'uir D6Tl do 4e&elador A J D6Tl do 4e&elador ;! +uma gota de cada e cada um dos

poos,!10. Incu'ar por 6 minutos a C!99! Kistri'uir D6Tl do /stoper1 em cada poo!L2I:U4A> Proceder ? leitura da reao em espectrofotVmetro para microplacas utili#ando filtro

5D6m!

2.erccio proposto +no o'rigat%rio,Para as tcnicas imunoen#im8ticas- responda>

a, 2.pli3ue o princpio do teste imunoen#im8tico!', 2s3uemati#e um teste 2LIA para a pes3uisa de anticorpos!c, 2.pli3ue como em um teste 2LIA pode$se determinar a fase da doena-

contra 3ual doena o anticorpo encontrado na amostra!d, O 3ue o con)ugado empregado no teste 2LIA para a pes3uisa de

anticorposH 2.pli3ue!e, @ual o princpio do teste de Western blotting WBH 2.pli3ue!f, Por3ue de&emos reali#ar as etapas de la&agemH @ual o o')eti&oHg, Kiferencie o su'strato cromogEnico do teste 2LIA e W;!


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MATERIAIS 0UANTIDADEKescarte com 0ipocloritoPipeta autom8tica de Dl - Dl- D6l- 966l- D66lPro&eta D6mL +para diluir tampo de la&agem,;alo &olumtrico 66mL +para diluir tampo de la&agem,Ponteiras amarelas +&olume at 66l,

Ponteiras a#uis +&olume at 9666l,;3uer de 66mL +para soluo de la&agem,Pipeta Pasteur de pl8stico ou &idro +para la&agem,

E0UI.AMENTOS 0UANTIDADELeitora de placas +2LIA,

Descarte do "ateria! uti!i&ado con1or"e Nor"as Internacionais de Se#uran'a:

Antes de descartar as placas usadas autocla&ar!

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