o DOCENTE : Blga: Carmen Aquije Blgo: Manuel Fasabi

o TEMA : Tecnología del ADN Recombinante

o INTEGRANTES :

Mora Torero, Bruno

Zavaleta Gonzales, Alfredo Soplin Villacorta, Gabriela

Mayorca Apaza, Melissa

Romero Arango, Juan

Los 70s

ADN

Adelantos Tecnológic

os

Serie de Técnicas

INTRODUCCIÓN

HISTORIA / DESCUBRIMIENTO

Daniel Nathans Hamilton Smith

ENZIMA DE RESTRICCIÓN

DEFINICIÓN

Es la unión artificial de dos fragmentos de ADN.

Conjuntos de técnicas que permiten aislar un gen de un organismo para su posterior inoculación en otro organismo. La tecnología del ADN recombinante

comprende una serie de técnicas que permiten cortar, aislar, pegar,

reproducir y secuenciar fragmentos específicos del ADN de cualquier

organismo.

Existen varias líneas de investigación, las cuales son: El conocimiento de las enzimas de restricción. La replicación y reparación de ADN. La replicación de virus y plásmidos. La síntesis química de secuencias de nucleótidos

FINES Ayudan a la

investigación de enfermedades como el cáncer.

Producción de vacunas, tratamientos para la diabetes y la producción de alimentos enriquecidos.

IMPORTANCIAS Se puede usar para la obtención de hormonas como la

insulina o de crecimiento.

Se pueden usar para la creación de técnicas génicas para el tratamiento de enfermedades genéticas, como

la enfermedad de Huntington.

LAS HERRAMIENTAS DE LA TECNOLOGÌA DEL

ADN RECOMBINANTE

A finales de 1960 surge el

conjunto de técnicas en

laboratorios muy

revolucionarias que

permitían modificar el ADN ;

a este conjunto se le conoce

como ingenierías genéticas.

Esta Ingeniería permite cortar y empalmar fragmentos de ADN, para crea combinaciones no existentes en la naturaleza; y todo esto es posible gracias a herramientas:

Enzimas de restricción

(fragmentación del ADN). Ligasa

( unión de fragmentos de ADN). Los vectores o técnicas

de transformación genética

(transformación de células).

Y MEDIANTE PROCESOS COMO:

1. Electroforesis en geles de agarosa: Técnica de separación molecular basada en la diferente movilidad de las moléculas cuando son sometidas a un campo eléctrico continuo

2. Amplificación del ADN por técnica de PCR: Permite amplificar ADN obteniendo millones de copias de segmentos específicos.

3. Secuenciación del ADN: Determina la secuencia de nucleótidos de un fragmento de ADN.

LAS HERRAMIENTAS DE LA TECNOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE

Enzimas de Restricción o Retrictasas.- Son encimas bacterias con capacidad de reconocer lugares específicos

de la cadena de ADN y cortar la secuencia; obteniendo fragmentos de restricción que se separan mediante electroforesis sobre geles.

Estas son tres enzimas de restricción de las más usadas (En la actualidad se comercializan más de 100) y los organismos de procedencia, junto con la secuencia de reconocimiento y el

lugar por donde realizan el corte de ADN.

LOS VECTORES DE CLONADO.-

Son pequeñas moléculas de ADN, que tienen capacidad para autor replicarse dentro de las células hospedadoras.

Se utilizan con frecuencia dos tipos de vectores: Plásmidos y virus.

PLÁSMIDOS: Son moléculas de ADN circular; se replican con independencia del cromosoma bacteriano al tener su propio origen de replicación.

BACTERIÓFAGOS: Se trata de insertar el gen deseado en un fragmento de ADN vírico .

En el siguiente paso se insertará este ADN por el proceso de la transducción.

CÓSMIDOS: Se empaqueta en el interior de un fago.

Además del origen de replicación, los vectores de clonación deben llevar otros genes

denominados marcadores que sirven para identificar las células que contienen el vector de clonación:

Genes de resistencia a antibióticos. Sirven para identificar bacterias que contienen el vector de clonación.

Genes de luminiscencia. En este caso, la célula que contenga el gen que se quiere clonar, tendrá la propiedad de emitir luz ( se da cuando la célula es eucariota).

MÉTODOS DE INTRODUCCIÓN DEL VECTOR: Este método dependerá del tipo de célula. En bacterias (células procariotas)

TRANSFORMACIÓN.- Consigue artificialmente sometiendo a la célula bacteriana a tratamientos físicos y químicos. 

TRANSDUCCIÓN.- Utilizando como vector de clonación el genoma del virus. 

Enzima Endonucleasa

Fragmentos del ADN

“Fragmentos de

Restricción”

PROCEDIMIENTO- OBTENCIÓN

ADN del Plásmido

ADN a multiplica

r

“ADN Ligasa”

PROCEDIMIENTO - INSERCIÓN

PROCEDIMIENTO

PCR (Polymerase

Chain Reaction ) Revoluciono

el Diagnostico Molecular

Obtención millones de copias de

ADN Se lleva a cabo en

pequeños tubos de ensayo.

DIAGNOSTICO MOLECULAR

1er ciclo - Separar la doble cadena de ADN

(94-96 ºC)

2do ciclo (Anillamiento de los Cebadores con las

secuencias complementarias del

ADN)

Ciclo de Extensión (ADN Polimeraza sintetiza nuevas

hebras de ADN que serán

complementarias a la cadena original.)

MECANISMO PCR

Se necesita oligonucleótidos que actúan como cebadores.

MECANISMO DEL PCR

AVANCES DE LA PCR EN LA MEDICINA ACTUAL

PCR Cuantitativo

Detección de Mutaciones

AVANCES DE LA PCR EN LA MEDICINA ACTUAL

Estudios Evolutivos

Obtención de huellas

APLICACIONES DEL ADN

RECOMBINANTE

En el esquema se indica en el lugar en el que corta la enzima de restricción en ambas hebras.

Ha quedado rota la molécula de ADN, quedando unos bordes pegajosos por donde puede unirse este ADN, con otro aunque sea de

una especie diferente.

CORTE ESPECIFICO DEL ADN

Insulina artificial

Vacunas recombinantes Proteínas

recombinantes

Alimentos transgénicos

Clonación de animales

APLICADO EN LA MEDICINA,CIENCIA, AGRICULTURA

Insulina artificial Vacuna contra VPH

PROCESOS DE LA APLICACIÓN DE ADN

Proteínas Recombinantes (fabricación hormona de crecimiento)

Plantas transgénicas

Clonaciones

DESVENTAJAS