FOLHETO INFORMATIVO PI.158

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Microorganismos EZ-PEC™

Os preparados de microorganismos EZ-PEC™ fornecem desafios quantitativos para os testes de eficácia antimicrobiana e de eficácia do conservante.

USO PREVISTO

Os microorganismos EZ-PEC™ (desafio da eficácia do conservante) são preparados de microorganismos enumerados liofilizados para serem utilizados em laboratórios industriais.

As aplicações para estes preparados de microorganismos incluem desafios quantitativos para testes da eficácia antimicrobiana e da eficácia do conservante.

Estes preparados de microorganismos são rastreáveis até a American Type Culture Collection (ATCC®) ou outra coleta de culturas de referência autêntica. RESUMO E HISTÓRIA

Muitos dos procedimentos de teste de CQ dos laboratórios exigem que se utilize uma concentração específica da cepa de prova e que a cepa de prova só possa ser passada ou subcultivada a partir de uma cultura de referência, e um número limitado de vezes, para evitar a mutação e alterações subtis do desempenho.

Os métodos tradicionais para preparação de cepas de prova com concentrações específicas exigem muito tempo e um trabalho intensivo. Os laboratórios adquirem uma cepa designada, desenvolvem a cepa, preparam as diluições, realizam as contagens das colônias em cada diluição para determinar a concentração a ser empregue no procedimento de prova e, subseqüentemente, preparar as diluições da cepa de prova para ser utilizada. Além disso, a cada passo da subcultura são realizados testes fenotípicos (atividade bioquímica e exames morfológicos) para que haja total certeza de que não tiveram lugar mutações ou alterações.

Os microorganismos EZ-PEC™ são uma alternativa eficaz em termos de custos aos trabalhosos procedimentos de diluição/contagem de colônias. Eles não necessitam do equipamento necessário para processar e preservar no local concentrações de cepas de prova, sendo executado o controle rotineiro de qualidade, o que apóia a ausência de mutações e alterações.

PRINCÍPIO

Os microorganismos EZ-PEC™ incorporam um método de liofilização referido por Obara et.al., que utiliza um meio de suspensão constituído por gelatina, leite desnatado, ácido ascórbico, dextrose e carvão vegetal. A gelatina funciona como meio de transporte do microorganismo. O leite desnatado, o ácido ascórbico e a dextrose protegem o microorganismo, preservando a integridade da parede celular durante o processo de liofilização e conservação. O carvão vegetal é incluído para neutralizar quaisquer substâncias tóxicas formadas durante o processo de liofilização.

Uma tecnologia proprietária origina uma população de microorganismos liofilizados com uma concentração predeterminada. COMPONENTES DA FÓRMULA

O preparado liofilizado consiste de: • Uma população de microorganismos quantificada • Gelatina • Leite desnatado • Ácido ascórbico • Dextrose • Carvão vegetal O fluido hidratante é uma solução de trabalho de tampão de fosfato com pH 7,2. O fluido contém: • Fosfato monobásico de potássio • Hidróxido de sódio • Água deionizada • Cloreto de magnésio, conforme a necessidade

ESPECIFICAÇÕES E DESEMPENHO

Cada microorganismo EZ-PEC™ é fornecido embalado em uma configuração de kit. Cada kit consiste de: • Dois (2) frascos, cada um dos quais contendo dez (10) esferas liofilizadas de uma cepa de microorganismos individual • Dez (10) frascos, cada um dos quais contendo 2 mL de fluido hidratante • Instruções detalhadas • Certificado de prova

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Processada conforme as instruções, uma adição de 0,5 ou 1,0 por cento (%) desta suspensão de microorganismos ao produto a testar resultará em uma concentração de desafio final de 1,0E+05 a 1,0E+06 CFU por mL do produto. A documentação de controle de qualidade inclui, mas não se limita, a um certificado de análise que inclui: • A identidade do microorganismo • A rastreabilidade do microorganismo até uma cultura de referência • Que o preparado de microorganismo foi afastado quatro (4) passagens da cultura de referência • O valor médio de prova para o preparado de microorganismos

PRECAUÇÕES E LIMITAÇÕES Estes produtos destinam-se exclusivamente à utilização in vitro. Estes dispositivos e o subseqüente crescimento destes microorganismos em meios de cultura são considerados material

biológico perigoso. Estes dispositivos contêm microorganismos viáveis que podem, em certas circunstâncias, produzir doenças. Deve-se

utilizar técnicas adequadas para evitar a exposição e o contato com qualquer crescimento de microorganismos. • O laboratório de microbiologia deve estar equipado e possuir as instalações necessárias para receber, processar,

manter, conservar e descartar material biológico perigoso • O pessoal do laboratório de microbiologia que utiliza estes dispositivos deve ter formação e experiência e demonstrar

competência no processamento, manutenção, conservação e descarte de material biológico perigoso • A eliminação de todos os materiais biológicos perigosos é regulada por estatutos e agências oficiais. Cada

laboratório deverá conhecer e cumprir as exigências de eliminação correta de materiais biológicos perigosos CONSERVAÇÃO E PRAZO DE VALIDADE

Conserve os microorganismos EZ-PEC™ e o fluido hidratante a uma temperatura entre 2 °C e 8 °C no seu frasco original, selado.

Se for armazenado de acordo com estas instruções, o preparado de microorganismo liofilizado preservará, até a data de validade indicada no rótulo do dispositivo, todas as suas especificações e desempenho dentro dos limites declarados.

Os microorganismos EZ-PEC™ não devem ser utilizados se: • Tiverem sido conservados incorretamente • Houver indícios de exposição excessiva a calor ou umidade • O prazo de validade tiver vencido

MATERIAIS NECESSÁRIOS, MAS NÃO FORNECIDOS

São necessárias pipetas estéreis para inocular o material a ser desafiado.

GARANTIA DO PRODUTO • Estes produtos possuem garantia de conformidade com as especificações e desempenho impressos e ilustrados nos

respectivos folhetos informativos, instruções e literatura de apoio • A garantia, expressa ou implícita, é limitada sempre que:

- Os procedimentos utilizados no laboratório contrariem as instruções ou orientações impressas e ilustradas - Os produtos forem utilizados para aplicações diferentes das indicações citadas nos respectivos folhetos

informativos, instruções e literatura de apoio

INSTRUÇÕES DE USO A. Preparação do material

1. O fluido hidratante e todos os materiais necessários ao procedimento de desafio e os materiais a serem desafiados devem estar prontos para uso imediatamente em seguida ao passo de hidratação.

2. Após a hidratação da cepa liofilizada, as inoculações de prova TÊM de estar concluídas ao fim de trinta (30) minutos, para evitar uma alteração na concentração da suspensão de prova.

3. O fluido hidratante TEM de estar aquecido a uma temperatura entre 34 °C e 38 °C antes de ser usado.

B. Hidratação 1. Retire o frasco de esferas liofilizadas do local de conservação refrigerado (2 °C a 8 °C) e deixe o frasco ainda

fechado atingir temperatura ambiente. 2. ANTES de utilizar, aqueça os fluidos de hidratação e diluição a uma temperatura entre 34 °C e 38 °C. 3. Com um fórceps estéril, retire DUAS (2) esferas e coloque-as dentro do frasco que contém 2 mL de fluido

hidratante. DEVEM SER UTILIZADAS DUAS ESFERAS

4. Volte a colocar imediatamente a tampa de borracha, volte a tapar o frasco e volte a colocar o restante material liofilizado no local de conservação refrigerado (2 °C a 8 °C).

5. Volte a tapar, imediatamente, o frasco com o material hidratado e coloque-o em uma incubadora com uma temperatura entre os 34 °C e 38 °C durante trinta (30) minutos, para assegurar a hidratação completa.

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6. Imediatamente após a incubação, misture bem o material hidratado, para obter uma suspensão homogênea e uma distribuição idêntica da cepa de desafio em toda a suspensão hidratada. Nota: O carvão vegetal é um componente essencial do preparado da esfera liofilizada. Após a hidratação, partículas de carvão vegetal podem estar visíveis na suspensão.

C. Desafio 1. Prossiga com o teste de acordo com o protocolo do laboratório.

Por exemplo, para cada 20,0 mL de produto a ser testado, retire o volume desejado (isto é, 0,1 ml a 0,2 mL) da suspensão hidratada, bem misturada, com uma pipeta estéril, e transfira o material a ser testado quanto ao teste da eficácia antimicrobiana.

NOTAS TÉCNICAS

O preparado de microorganismo liofilizado, o fluido hidratante, o procedimento e o processo suportam e estão de acordo com as seguintes aplicações:

A. Desafio de teste.

Tal como indicado no USP, a concentração do desafio final da suspensão do microorganismo diluído irá resultar numa concentração entre 1,0E+05 e 1,0E+06 CFU por mL do produto a ser testado.

B. Volume de controle analisado.

Tal como indicado no USP, o volume do microorganismo de desafio tem de ter entre 0,5% e 1,0% do volume total do preparado a ser testado. Por exemplo, se o volume total do preparado a ser testado for de 20,0 mL, o volume do desafio será de 0,1 mL a 0,2 mL.

C. Exemplo de concentração de desafio.

• O valor médio da análise do microorganismo EZ-PEC™ é de 3,5E+07 CFU/mL • Após a hidratação, a concentração da suspensão do microorganismo é de 3,5E+06 CFU por 0,1 mL • 0,2 mL da suspensão hidratada (7,0E+06 CFU) adicionada a 20,0 mL do material a ser testado terá como resultado

uma concentração final de 3,5E+05 por mL

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GUIA DE SOLUÇÃO DE PROBLEMAS As preparações de microorganismos EZ-PEC™ são submetidas a um procedimento de teste validado antes da liberação do controle de qualidade, o qual assegura que todo lote atende às especificações do produto. Quando usado de acordo com as instruções do folheto informativo, a concentração depois da hidratação será entre 2,0E+07 e 9,9E+07 CFU/mL. Uma adição de 0,5 ou 1,0 por cento desta suspensão ao produto a ser testado resultará em uma concentração de desafio de 1,0E+05 a 1,0E+06 por mL do produto. Se forem observados resultados fora desse intervalo, as situações a seguir devem ser levadas em conta como possíveis causas. Toda a literatura referenciada nesta seção está disponível em nosso site da web, em www.microbiologics.com, bem como em nosso manual técnico. Para solicitar uma cópia de nosso manual técnico, por favor ligue para 1-800-599-BUGS(2847) ou envie um e-mail para info@mbl2000.com.

PROBLEMA POSSÍVEL CAUSA RECOMENDAÇÕES BAIXA

RECUPERAÇÃO/ SEM

RECUPERAÇÃO

1) Uso de meio seletivo ou inadequado.

Nem todos os meios sustentam o crescimento de microorganismos. Verifique junto ao fabricante do meio se existe incerteza se o meio sustenta ou não o crescimento do microorganismo. O uso de um meio seletivo pode inibir a recuperação do microorganismo. Consulte o TIB.134 para obter informações adicionais sobre o uso de meios seletivos.

2) Tempo de incubação, temperatura ou atmosfera incorreta.

O período de incubação, temperatura e condições atmosféricas exigidos diferem de acordo com o organismo. Consulte o TIB.081 para os requisitos de crescimento recomendados para cada organismo. Também verifique se os termômetros da incubadora estão funcionando corretamente.

3) Armazenamento incorreto

do frasco.

Os microorganismos EZ-PEC™ devem ser guardados entre 2 °C e 8°C, em seus frascos originais. O pacote dessecante não deve ser removido. O frasco deve ter tempo de igualar sua temperatura à temperatura ambiente antes de ser aberto. Se um frasco frio for aberto, pode haver acúmulo de condensação no frasco. A combinação de umidade e oxigênio pode produzir radicais livres tóxicos, os quais podem reduzir a recuperação de microorganismos liofilizados.

4) Usar depois de trinta (30) minutos após a etapa de hidratação.

Conforme informado neste folheto informativo (Instruções de Uso, seção A), a suspensão de microorganismo hidratada tem de ser usada dentro de trinta (30) minutos. Para obter informações adicionais, consulte o TIB.160.

ALTA RECUPERAÇÃO

1) Usar depois de trinta (30) minutos após a etapa de hidratação.

Conforme informado neste folheto informativo (Instruções de Uso, seção A), a suspensão de microorganismo hidratada tem de ser usada dentro de trinta (30) minutos. Para obter informações adicionais, consulte o TIB.160.

Se nenhuma das situações acima for aplicável ou a recuperação continuar ficando fora do intervalo exigido para o produto, entre em contato com nosso Departamento de Assistência Técnica, no número 1-800-599-BUGS(2847), ou mande um e-mail para indprdts@mbl2000.com, para obter assistência adicional.

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LIMPEZA DE MATERIAL BIOLÓGICO PERIGOSO Se ocorrer vazamento ou derramamento acidental do dispositivo ou subseqüente crescimento do microorganismo

no meio de ágar, as informações a seguir descrevem os materiais e procedimentos que facilitarão a limpeza em segurança do material biológico perigoso.

1. MSDS (Material Safety Data Sheet, folha de dados de segurança do material) • Deverá ser mantido um arquivo de todos os documentos de MSDS para material biológico perigoso. • O arquivo de MSDS deverá estar disponível para todos os funcionários. • Todos os funcionários deverão ser informados sobre a localização dos arquivos de MSDS.

2. Kit para derramamento de material biológico perigoso

Encontram-se disponíveis no mercado kits para derramamento de material biológico perigoso, e eles também podem ser fabricados utilizando os seguintes materiais: • Uma garrafa de um litro de uma solução germicida aquosa. • Um par de luvas descartáveis de látex ou sem látex. • Uma pinça. • Um saco para material biológico perigoso com fecho. • Um pacote ou rolo de toalhas de papel.

3. Procedimento

• Notifique TODAS as pessoas que estiverem trabalhando nas imediações da área do incidente. • NÃO deixe a área sem vigilância (a menos que você seja a única pessoa na área). Designe outro funcionário

para vigiar a área do incidente e desviar o tráfego, afastando-o dessa área. • Depois de notificar todos os funcionários que se encontrem nas imediações, apanhe o kit para derramamento

de material biológico perigoso e regresse IMEDIATAMENTE à área do incidente. • Coloque as luvas descartáveis. • Com o auxílio da pinça, apanhe o máximo possível de material e coloque cuidadosamente o material no saco

para material biológico perigoso. • Sature a área do derramamento com solução germicida. • Mantenha a área do derramamento umedecida com a solução germicida pelo período de tempo devido,

conforme indicado na solução germicida utilizada. • Limpe a área com as toalhas de papel. • Coloque todas as toalhas de papel utilizadas no saco para material biológico perigoso. • Depois da limpeza, retire as luvas cuidadosamente e coloque-as no saco para material biológico perigoso. • Feche, vedando, o saco para material biológico perigoso. • Descarte o saco para material biológico perigoso de acordo com as normas reguladoras.

CHAVE DOS SÍMBOLOS

Código do lote (Lote)

Perigos biológicos Riscos biológicos

Número de catálogo

Consulte os documentos que acompanham

Atenção: consulte as instruções de uso

Fabricante

Limites de temperatura

Usar até

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CONTROLE DE QUALIDADE

Este produto é desenvolvido, fabricado e distribuído: • Em conformidade com as normas da FDA: Quality System Regulation (QSR), 21CFR Parte 820. • Em conformidade com os elementos da norma ISO 9001:2000.

As funções de controle de qualidade incluem, mas não se limitam a: • Características de pureza e crescimento. • Características morfológicas. • Atividade bioquímica. • Valor da análise. • A identidade dos microorganismos e a rastreabilidade a partir de uma cultura de referência. • O número de passagens em que o preparado de microorganismos foi afastado da cultura de referência. A decisão de realizar controles de qualidade adicionais é da responsabilidade de cada laboratório específico.

BIBLIOGRAFIA

A obra de referência a seguir cita a base para o método de liofilização utilizado nestes preparados de microorganismos.

1. Y. Obara, S. Yamai, T. Nikkawa, Y. Shimoda, and Y. Miyamoto. 1981. J. Clin. Microbiol. 14:61-66. SITE NA WEB

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