Cálculos para ADNS e outros métodosespectrofotométricos

__K

K= inclinação da reta

Abs= Absorbância

= média dos Ks

[ ]calculada= concentração de açúcares nosdiferentes tubos

[ ] real= Concentração

__

real[ ] = K xAbscalculada[ ]K =Abs

1 – Utilizar o cálculo matemático

Construir uma curva padrão

Tubo V (mL) Abs [ ] cal K Kmedio [ ] real

Para o cálculo da amostra

açúcares

K x Abs x100=

Te[]

Te= concentração da amostra proveniente dasdiluições

Construção da tabela da amostra

Tubo V(mL)

Abspadrão

Absamostra

Kmedio Teamostra

Te= tomada de ensaio

%redutores %sacarose %totais

% sacarose= (% c/hidrólise – % s/hidrólise)x0,95% redutores= % s/hidrólise% totais= sacarose + s/hidrólise

2-Método Papel MilimetradoPara cálculo da reta:

2.1- Para fazer o gráfico, verificamos quantoscentímetros teríamos que fazer, de 10 cm, ou de 20cm

Cada quadro é um centímetro

Cada quadro éum milímetro

2.2- Verificar os valores mínimos e máximos daconcentração calculada e Absorbância da curva padrão

ExemploTubos (mg)

Eixo XAbs

Eixo Y0,25 0,1260,47 0,2410,91 0,4701,2 0,567

Eixo X Concentração Eixo Y AbsorbânciaValor mínimo em mg = 0,0 Valor mínimo abs. = 0,0

Valor máximo é =1,2 ou 1,3para dar uma margem

Valor Máximo= 0,6

Cálculo do eixo x (concentração)=Construiremos uma reta de 10cm

2.3- CONSTRUINDO O GRÁFICO

10x = = 7,691,3

Concentração em cm0,25 x 7,69 = 1,190,47 x 7,69 = 3,610,91 x 7,69 = 6,991,20 x 7,69 = 9,23

Cada valor achado serátransportado em cm ao papelmilimetrado no eixo X querepresentará os valores em mg decada tubo.

Cálculo de eixo Y (Absorbância)

10Y = = 16,660,6

Abs. em cm0,126 x 16,66 = 2,090,241 x 16,66 = 4,010,470 x 16,66 = 7,830,567 x 16,66 = 9,44

Cada valor achado serátransportado em cm ao papelmilimetrado no eixo Y querepresentará os valores deabsorbância de cada tubo.

6,88

Concentração em cm eixo x

0,25 x 7,69 = 1,19

0,47 x 7,69 = 3,61

0,91 x 7,69 = 6,99

1,20 x 7,69 = 9,23

Abs. em cm eixo Y

0,126 x 16,66 = 2,09

0,241 x 16,66 = 4,01

0,470 x 16,66 = 7,83

0,567 x 16,66 = 9,44

2.4- COMO USAR A RETA NO CÁLCULO DACONCENTRAÇÃO DA AMOSTRA

Tubo V (mL) Abspadrão

Absamostra

[ ] amostra

1 0,126 0,1852 0,241 0,3223 0,470 0,4364 0,567 0,630

Dos valores no quadro se escolhe o melhor ponto, neste caso éo tubo 3 tendo como Abs. 0,436, este valor se resolve:

Y = 16,66 x 0,436 = 7,26 cm.Os 7,26 cm são transportados na reta no papel milimetrado noeixo Y e traça-se uma linha horizontal imaginária até tocar nareta, a partir daí, projeta-se linha na vertical até encontrar o eixox. Contam-se os centímetros e o valor encontrado é de 6,88cm.

Eixo Y:

Para converter este valor em concentração(Eixo X):

6,887,69[ ] = = 0,89 mg

Então:

O tubo 3 da amostra tem 0,89 mg. A partir desteresultado, utilizam-se as diluições da amostra paraencontrar a concentração em %.

x 100 ml

2ml 50ml

0,3 ml0,5 ml0,8 ml1 ml

y

TRZ

F

Concentração _______

Centímetros ________

Valor encontrado da amostraem cm ______

Eixo X

0,89 mg9

Método do Origem

2 Enter

1 Enter

1 Enter

2 Enter

[24/03/2008 17:31 "/Graph1" (2454549)]Linear Regression for Data1_B:Y = A + B * X

Parameter Value Error------------------------------------------------------------A 178,5 42,99012B 77,7 7,84889------------------------------------------------------------

*Y a b X Y aX

b

Absorbância

Concentração

amostra

Como utilizar a fórmula:

x 100 ml

2ml 50ml

0,3 ml0,5 ml0,8 ml1 ml

y

TRZ

F

Calculando a tomada de ensaio segundo ográfico o ponto escolhido é o tubo 3 (0,8 ml)e supondo que Z= 0,54mg de amostra (te)

Com o ponto escolhido (ex: tubo 3, y= abs= 0,240)substituímos na fórmula, pois já temos os valores de ae b.

Y aXb

X = 0,32 mg de açúcares redutores após o cálculo como tubo escolhido ( tubo 3) (fictício)

0,54mg amostra ------- 0,32 mg redutores

100 mg amostra ------- x0,32 1000,54

xX

X = 59,26%