シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（大腸菌用）

Cica Geneus® E. coli POT KIT

キットの構成（30回分） 操作手順

● 解析結果を数値化（POT値）することで、E.coli の菌株識別が可能です。● 最適化したマルチプレックスPCRなので、約4時間以内で分子疫学解析が可能です。● パルスフィールドゲル電気泳動（PFGE）のように、特別な装置は不要です。● 特にESBL産生大腸菌において、PFGEに近い識別能を有しています。

特長

*1 AptaTaq DNA Master（5×Conc.）は、Roche Diagnostics K.K.の商品です。*2 DNA抽出は、シカジーニアス® DNA抽出試薬をご利用ください（別売）。

個別名称

試薬A

試薬 B

試薬C

試薬D

試薬 E

試薬 F

容　量

240 μL×1本

240 μL×1本

120 μL×1本

120 μL×1本

240 μL×1本

240 μL×1本

AptaTaq DNA Master（5×Conc.）*1

PCRサプリメント

プライマーミックスα

プライマーミックスβ

ポジティブコントロール

6×ローディングバッファー

2種類のマルチプレックスPCR

DNA抽出*2を行い、テンプレートDNAを調製

分離した菌株を純培養

アガロースゲル電気泳動（別途準備）

バンドパターンの読み取り

POT値の算出

各検体でのPOT値の比較解析

大腸菌（E. coli）は、自然環境中に広く存在する日和見感染菌です。医療環境においては、食中毒や院内感染といった集団感染の原因になることが多く、感染管理が重要となります。本キットは、大腸菌の菌種同定、クローン同定および菌株識別を行うための遺伝子型別キットです。愛知県衛生研究所(現　藤田保健衛生大学)の鈴木先生らが開発したPCR-based ORF Typing（POT）法の原理に基づき、マルチプレックスPCRを用いて大腸菌の保有する複数の特定遺伝子領域を増幅し、アガロースゲル電気泳動法によって分離されたバンドパターンを数値化することで、クローン同定および菌株識別を遺伝学的に決定します。

BGa-14(201707)

POT No. 増幅サイズﾞ(bp) POT係数 ターゲット領域

Reactionmixture 1

Reactionmixture 2

表1 検出ORFの種類（ターゲット領域）とそのPCR増幅産物サイズ

①2つのマルチプレックス PCRの電気泳動結果（図１）からバンドパターン（表１）を読み取ります。②この電気泳動のバンドの有無の結果を用いて、POT値解析用の計算シートに二進法で入力し、３つのカテゴリーの POT値を算出します。Ⅰ PCR PC が陽性の場合、その検体は大腸菌であることが確認できます。Ⅱ ESBL 産生大腸菌で多く分離されるST131株は、POT1の値が49になります。Ⅲ POT２の値が奇数であればCTX-M-1 group、128 以上であればCTX-M-2 group、POT３の値が奇数であればCTX-M-9 group の各 ESBL 遺伝子を保有しています。Ⅳ 検体間の POT値を比較することで、E. coli の菌体間の相同性を客観的に推測出来ます。Ⅴ 集団感染から得られた菌体は POT 1 ～ 3 の POT値が全て同一になります。

★上記の他に必要な機材などがございますので、弊社営業所もしくは販売店へお問合せください。●本キットは愛知県と中部大学から特許許諾を得て、製造販売しております。他メーカーの商品に関するライセンスについては、各メーカーにご確認ください。●製品の仕様は、製品の改良のため変更する場合がございます。あらかじめご了承ください。

＊希望価格は税抜きです。

解析結果

■ 製品情報

カテゴリーPOT1POT2POT3

1800

217166

32002

41004

図1におけるサンプル番号

製品番号08362-9708178-96

包装30回分120回分

希望価格（円）42,00022,000

保存冷凍（-20 ℃～-25 ℃）冷蔵（2 ℃～8℃）

製品名シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（大腸菌用）シカジーニアス® DNA抽出試薬

■ PCRキットシリーズ、関連試薬製品番号08180-9608180-9708187-9608062-9608112-9608114-96

包装120回分 30回分 50回分 30回分 30回分 30回分

希望価格（円） 83,000 38,000 64,000 42,000 38,000 38,000

　　　　　　　 製品名

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（黄色ブドウ球菌用）

シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（緑膿菌用）シカジーニアス® 分子疫学解析POTキット（アシネトバクター属菌用）シカジーニアス® ESBL遺伝子型検出キットシカジーニアス® カルバペネマーゼ遺伝子型検出キット

製品番号08087-9672101 46510-7914575-4349914-4001089-23

包装100回分10枚1 L10 mL

125 gel Lanes100 g

希望価格（円）85,0003,1005,0005,00013,00027,000

製品名シカジーニアス® 病原遺伝子検出PCRキット（下痢原性大腸菌用）クロモアガーESBL生培地10×TBE緩衝液臭化エチジウム溶液（2 mg/mL、点眼瓶入）Quick-Load Purple 50 bp DNA LadderアガロースKANTO HC（短フラグメント用）

PCR PCPOT 1-1POT 1-2POT 1-3POT 1-4POT 1-5POT 1-6POT 2-1POT 2-2POT 2-3POT 2-4POT 2-5

6525114153633072532221781461239880

-321684211286432168

E. coli Positive controlGenomic Islet-1Genomic Islet-2Genomic Islet-3Genomic Islet-4Genomic Islet-5Genomic Islet-6

Genomic Island-1Genomic Island-2Genomic Island-3Genomic Island-4

PCR PCPOT 2-6POT 2-7POT 2-8POT 3-1POT 3-2POT 3-3POT 3-4POT 3-5POT 3-6POT 3-7POT 3-8

65252743636131125021917915412210279

-4211286432168421

E. coli Positive controlGenomic Islet-7Genomic Island-5

Genomic Island-6Genomic Island-7Genomic Islet-8Genomic Island-8Genomic Island-9Genomic Islet-9Genomic Island-10

NEW !

図１　電気泳動パターンの実例　　M： 50 bp ラダーマーカー　　P ： ポジティブコントロール 1 ： ATCC 8739 2 ：ATCC 11775 3 ： ATCC 25922 4 ：ATCC 27166 5 ： ATCC 35218 6 ：ATCC BAA-2340 (KPC) 7 ： ATCC BAA-2469 (NDM-1) 8 ： ATCC 35150 (O-157)

　　

弊社製品 HPからPOT値解析用計算シートをダウンロード後、バンドの有無を二進法で入力し（バンドあり：1、バンドなし：0）、３つのカテゴリーの POT値を算出。

CTX-M-2bla

CTX-M-1bla

CTX-M-9bla

5219624

649634

749434

8263232

Reaction mixture 2

Reaction mixture 1

652

bp

511415363307253222178146123 98 80

652527436361311250219179154122 102 79

M P 1 2 3 4 5 6 7 8 P

M P 1 2 3 4 5 6 7 8 P