UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO

INSTITUTO DE VETERINRIA

Depto de Medicina e Cirurgia Veterinria

PROPEDUTICA CLNICA

COLETA E EXAME DO FLUIDO RUMINAL

Avelino Jos Bittencourt Professor Adjunto IV

1 - CONTENO Fsica Formiga

2 - EQUIPAMENTOS

2.1 Alternativos (Figura 1) a) Abre-bocas

b) Sonda 2,30m X 0,008m(diam.) plstica c) Bomba de vcuo

d) Kitasato

Figura 1. Material alternativo para coleta de suco ruminal. A bomba de vcuo, B tubo de polipropileno (mangueira de gs), C Kitasato, D Rolha com tubo, E ponteira para suco e filtragem, F Abrebocas de madeira ou guia de sonda.

A B

C

D E

F

2.2 - Comerciais

a) Sonda de Sorensen & Schambye (Figura 2)

A Figura 2 Aparelho de Sorensen& Schambie: A Sonda metlica em espiral; B Ponteira de suco/filtrao; C Bomba de vcuo; D Tubo conector metlico; E Rolha perfurada para coneco com frasco de coleta; F Tubo de borracha para suco de ar.

b) Bomba de vcuo eltrica (Figura 3)

Figura 3 Bomba de vcuo eltrica, bivolt, dotada de manmetro, com capacidade para quatro litros.

A

B

C

D E

E

F

3 - TEMPO PARA EXAME

3.1 - 20 - 22C mximo. 9hs

3.2 - 04 - 05C mximo. 24hs

4 - EXAME PROPRIAMENTE DITO

4.1 - COR

Varia de acordo a alimentao, do cinza e oliva ao castanho esverdeado.

4.1.1 - Normal

Verde escura pasto (Figura 4)

Figura 4 Colorao verde escura devido alimentao predominante em pastagem.

Castanho-amarelado - silagem de milho ou gros

Cinza - Tubrculos picados

Verde-oliva a verde acastanhado - Feno

4.1.2 - Anormal

Cinza leitoso ou verde leitoso - acidose

Preto-esverdeado - estase prolongada e/ou putrefao nos pr-estmagos.

Cinza e com leite coalhado no suco - bezerros com leite seqestrado no rmen como resultado de refluxo abomasal ou insuficincia na goteira esofgica.

4.2 - VISCOSIDADE E CONSISTNCIA

4.2.1 - Normal

Levemente viscoso

Amostras muito viscosas podem conter grande quantidade de saliva, devendo portanto ser desprezadas (Figura 5).

Figura 5 Amostra de suco ruminal com viscosidade elevada (formao de filamento longo), devido ao excesso de saliva.

4.2.2 - Anormal

Aguado - inatividade da flora e fauna

Muitas bolhas pequenas - timpanismo espumoso

4.3 - ODOR

4.3.1 - Normal

Tpico do tipo de alimento fornecido - aromtico e no repugnante.

4.3.2 - Anormal

Repulsivo, mofado e ftido - decomposio de protenas ou de leite estragado.

Penetrante de Ac. Lctico - ingesto excessiva de carboidratos de fcil digesto.

Estragado e indiferente - suco ruminal inativo

Amnia - intoxicao pela uria

4.4 - pH

4.4.1 - Fisiolgico - de 5,5 - 7,4

Alimentao base de forrageiras - 6 a 7 (Figura 6)

Figura 6 Avaliao de pH de suco ruminal, proveniente de bovino com alimentao base de forrageiras.

Alimentao a base de concentrados - 5,5 a 6,5

Varia de acordo com diversos fatores: a) Composio da rao - relao concentrado-volumoso.

b) Tempo decorrido entre a coleta e a ltima alimentao. No caso da alimentao ser

fornecida a intervalos irregulares, deve-se coletar e medir aps 3hs da ingesto de

alimentos.

c) Quando a amostra coletada, for extremamente viscosa, pode ter ocorrido suco de

amostras com excesso de saliva, cujo pH deve se encontrar na faixa de 8,5 (pH da

saliva), neste caso despreza-se os 200ml iniciais e utiliza-se o restante (Figura 7).

Figura 7 Suco ruminal com excesso de saliva (espumosa), o pH acima de oito.

4.4.2 - Anormal

Elevado at a faixa de alcalinidade - jejum por mais de 24hs, flora desativada por intoxicao pela uria ou processo putrefativo, como alcalose e putrefao do

contedo ruminal.

A acidez ruminal pode chegar em casos extremos at abaixo de 4,0 (quatro), como conseqncia da fermentao do cido lctico, super-alimentao com carboidratos

de fcil digesto (farelo de cereais e tubrculos), por forte refluxo de suco

abomasal, o qual no pode ser equilibrado pelo bicarbonato da saliva (obstruo

abomasal junto aos intestinos).

4.5 - TESTE DO AZUL DE METILENO

A reduo do azul de metileno reflete o metabolismo fermentativo anaerbio da flora ruminal (bactrias). Com este teste tm-se uma idia do estado das bactrias ruminais.

4.5.1 - Tcnica:

a) tubo de ensaio contendo 20ml de suco ruminal

b) Adicionar 1ml de azul de metileno a 0,03%

c) homogeneizar por inverso

Figura 8 Incio do teste do azul de metileno. A tubo sem reagente; B tubo com azul de metileno, j ocorrendo a reduo do mesmo.

d) Verificar o tempo gasto para que a colorao volte ao normal. Bem como a formao

de um anel azul na parte superior do tubo, comparando-se com outro contendo

somente fluido ruminal (Figura 8). A presena do halo azulado na poro superior do

tubo (Figura 9), deve-se maior concentrao de oxignio nesta poro, que dificulta

a reduo do azul de metileno neste local, visto que as bactrias so anaerbicas.

A B

Figura 9 Teste da reduo do azul de metileno - Final da prova, onde se nota o halo azulado na poro superior da proveta.

4.5.2 - Interpretao dos resultados

a) Reduo em 1 min - rao basicamente constituda de gros.

b) Reduo dentro de 3 min - microflora altamente ativa de um animal submetido a

alimentao a base de feno e concentrados.

c) Reduo entre 3-6 min - dieta a base de feno.

d) Reduo em mais de 15 min - flora inativada por alimentao pobre em estrutura,

volumoso indigervel, anorexia por vrios dias e quando o pH menor que 5 na

acidose ruminal.

4.6 - SEDIMENTAO E FLUTUAO

Deve-se verificar, logo aps a coleta do lquido ruminal, o tempo necessrio para ocorrer a sedimentao e flutuao, sendo que as partculas mais finas e os

infusrios (protozorios) sedimentam rapidamente (Figura 10), enquanto que as

partculas maiores e mais fibrosas so carreadas para a superfcie por bolhas de gs

resultantes da fermentao, formando uma camada espumosa de espessura varivel

(Figura 11).

Figura 10 Sedimentao no frasco de coleta, onde se v as partculas mais finas no fundo do frasco.

Figura 11 Flutuao no frasco de coleta, podem ser verificadas partculas mais espessas e espuma.

4.6.1 - Normal

O tempo para que ocorra a sedimentao e flutuao, depende da composio da rao e de quando ocorreu a ltima alimentao - varia de 4-8min (Figura 12).

Figura 12. Prova da sedimentao e flutuao do suco ruminal. A Teste da sedimentao e flutuao; B Teste do Azul de Metileno; C Frasco de coleta

4.6.2 - Anormal

Sedimentao rpida e flutuao retardada ou ausente este quadro pode ocorrer em animais inapetentes, com inanio ou rao de baixo valor nutritivo (quadro de

inatividade da flora e apresentando suco ruminal aguado e em acidose ruminal).

Rpida flutuao com bastante espuma, podendo tambm as pores slidas e liquidas ficarem misturadas por um tempo prolongado pode ser verificado nos animais em que ocorra putrefao e decomposio do contedo ruminal, na

fermentao espumosa.

4.7 - FLORA E FAUNA

4.7.1 - FLORA

Fazem parte deste grupo as bactrias, que compreende um grande numero de

espcies, as quais so divididas de acordo com a funo em vrios grupos:

Celulolticas

Amidolticas

Poteolticas

Formadoras de cido butrico, lctico e propinico.

Em cada um desses grupos encontra-se uma grande variedade de formas , em funo da composio do alimento (nutrientes), se estabelecer a distribuio

das espcies de bactrias.

Quando a alimentao a base de celulose, esto presentes menos bactrias,

A

A

A

B

A

A

C

A

A

quando se compara com uma base de amido.

4.7.2 Normal

Alimentao base de feno e de gros - predominncia de bactrias Gram-negativas, que so as bactrias que se coram em vermelho ( Figura 13).

Figura 13. Esfregao de suco ruminal, proveniente de animal alimentado quase que

exclusivamente base de capim. Onde pode ser observada predominncia de

cocos e bastonetes gram negativos.

Alimentao rica em aucares (dissacardeos e/ou monossacardeos) - proliferam primeiramente os cocos, subseqentemente os bastonetes curtos e finalmente os

bastonetes longos Gram-positivos (coradas em azul ou roxo) .

4.7.3 - Anormal

Animais doentes, mas com pH normal - predominncia de Gram-negativas.

Na acidose ruminal (lctica) - sufocamento das Gram-negativas, podendo at mesmo desaparecer.

Sobrecarga por alimento rico em amido, predominam bastonetes Gram-positivos.

Distrbios na digesto proventricular, (inatividade ou putrefao) - ausncia de bactrias dominantes normais para a respectiva alimentao e/ou uma grande

uniformidade na flora, bem como o aparecimento de formas que geralmente no so

verificadas.

4.7.4 - Tcnica

Esfregao do fluido ruminal

Secar ao ar

Corar pelo Mtodo Gram:

Cristal violeta por 1

Desprezar o excesso de corante

Cobrir com lugol por 1

lavar em gua corrente

Diferenciar em lcool 95% por 15

Lavar em gua corrente

Fuccina Fenilada 10% por 30

Lavar

Desidratar (secar ao ar)

4.8 - FAUNA

Neste grupo incluem-se os protozorios, tambm conhecidos como infusrios.

Dentre as funes deste grupo de organismos, pode ser destacada a reduo de aucares, amido, hemicelulose, xilanos e pectinas. Os infusrios evitam a

diminuio excessiva do pH ruminal, pois utilizam parte do amido da reduo

bacteriana no rmem. Realizam tambm a converso da protena do alimento e das

bactrias digeridas em protena infusria, que tem valor biolgico mais elevado

A quantidade de protozorios ir variar de acordo com a composio da rao, com o tempo decorrido aps a ultima ingesto de alimentos e de qual poro ruminal foi

colhida a amostra.

No fluido ruminal recm colhido a densidade e a motilidade dos protozorios pode ser visvel a olho nu. Quando a sedimentao se completou os protozorios

(infusrios) formam uma faixa cinza acima da camada de partculas de alimento que

se depositou no fundo do tubo de sedimentao.

4.8.1 - Tcnica

Para realizar a microscopia - colocar uma gota do suco ruminal em uma lmina,

aquecer 30C e cobrir com lamnula e examinar ao microscpio (aumentos de 40 e 100 vezes).

4.8.2 - Exame

Os infusrios so classificados como pequenos, mdios e grandes (Figura 14). So brilhantes e movem-se rapidamente (no confundir com bolhas de ar).

Figura 14. Infusrios do suco ruminal. A- Pequenos; B Mdios; C Grandes.

No exame deve-se observar a densidade, que classificada em: +++ abundante ++ moderada + pouca - nenhuma

Proporo entre grandes, mdios e pequenos e a proporo entre vivos(mveis) e

mortos.

Nas alteraes da digesto dos pr estmagos, os infusrios grandes desaparecem primeiramente, seguido dos mdios e dos pequenos.

Todos morrero no pH abaixo de 5,0 (cinco) , como na acidose.

Indigesto moderada aguda - ao lado dos protozorios vivos, muitos mortos.

4.9 - OUTROS TESTES.

Os testes citados abaixo, demandam material mais especializado, e, na maioria

deles somente podero ser realizados em laboratrio.

4.9.1 - FERMENTAO DA GLICOSE

a) Capacidade das bactrias destruir a glicose

4.9.2 - REDUO DE NITRITOS

a) Avaliao da atividade das bactrias que reduzem ou sintetizam nitrognio

4.9.3 - CIDOS GRAXOS VOLTEIS (actico, propinico, butrico, frmico, valrico

e caprico) e CIDO LTICO

a) Formados pela fermentao microbiana dos carboidratos, so os principais

fornecedores de energia aos ruminantes.

A

B

C

4.9.4. - TEOR DE CLORETOS

a) Detectar refluxo de contedo abomasal nas obstrues

4.9.5. - ACIDEZ TOTAL (ACIDEZ TITULVEL)

a) Avaliao precisa do pH.

4.9.6. - CAPACIDADE DE TAMPONAMENTO

a) Manuteno de pH favorvel aos processos digestivos

4.9.7. - CONCENTRAO DE AMONACO

a) Avaliar a capacidade de enzimas bacterianas em reduzir as protenas do alimento e o

nitrognio no protico (uria), at amonaco por enzimas bacterianas, que a principal

fonte de nitrognio para bactrias e protozorios para formao de protenas.