Colheita e Preservação e Exame macroscópico

da Amostra Fecal

Rosemary Araújo

2014

Colheita e Preservação da Amostra Fecal

• A maioria dos parasitos intestinais é diagnosticado pelo exame de fezes.

• Estágios:

– Ovos e larvas de helmintos

– Trofozoítos, cistos, oocistos e esporos de protozoários.

Colheita e Preservação da Amostra Fecal

• O espécime deve ser colhido sem contaminação e quando necessário, deve ser preservado.

• Material fecal inadequadamente colhido, velho ou mal preservado é de pequeno valor para diagnóstico.

Colheita e Preservação da Amostra Fecal

• Alguns vermes adultos de Ascaris lumbricoides,

Enterobius vermiculares, proglotes de Taenia spp. e

de Dipylidium caninum podem ser encontrados no

bolo fecal, por isso o exame macroscópico deve

preceder o microscópico.

Colheita:

• Fatores que devem ser considerados:

– Tipo do recipiente;

– Volume;

– Idade da amostra;

– Medicamentos e compostos químicos.

Colheita:

• Informações indispensáveis na amostra:

– Nome do paciente;

– Número de identificação;

– Nome do médico;

– Data e horário da coleta.

Colheita:

• Recipiente:

– Limpo e seco, boca larga, capacidade aproximada de 100 ml e vedação hermética.

– Devem ser colhidas

diretamente no frasco ou

em urinol, ou em papel

limpo e transferidas para

o frasco.

Colheita:

• Quantidade mínima: 20 a 30 g.

• Fezes pastosas ou mucosas: esfregaços corados.

• Porções formadas: técnicas de concentração.

• A amostra não deve ser incubada (37°C) ou congelada antes do exame.

Colheita:

• Medicamentos e produtos químicos tornam a amostra insatisfatória:

• Antidiarréicos

• Antibióticos – Tetraciclina

• Antiácidos

• Derivados de bismuto e bário – Exames radiológicos

• Vaselina

• Óleos minerais

Colheita: Em uma única passagem são revelados 1/3 à ½ das espécies presentes na amostra fecal.

A coleta de amostras múltiplas aumenta a possibilidade de encontrar organismos, em razão:

Da intermitência da passagem de certos parasitos a partir do

hospedeiro

Da distribuição não uniforme dos ovos de helmintos

Dos estágios dos protozoários

Das limitações das técnicas de diagnóstico.

Taenia Trichuris trichiura G. lamblia E. histolytica S. mansoni

Colheita e Preservação da Amostra Fecal

• Fezes colhidas em caixas de papel, o recipiente deve ser queimado;

• Quando colhidas em metal ou vidro, deixar submerso em solução de formaldeído a 10% antes do descarte;

• Materiais como: lâminas, vidrarias, espátulas, gaze, devem ser submersos em desinfetante por 1 hora antes de serem lavados ou descartados.

Preservação da Amostra Fecal

• A preservação permanente de trofozoítos, cistos, ovos e larvas é realizada por meio de vários preservadores: – Formalina – Mertiolato-iodo-formaldeído (MIF) – Acetato de sódio-ácido acético-formaldeído (SAF) – Álcool polivilínico (fixador APV) – Líquido de Schaudinn e fenol-álcool-etílico-formaldeído

(PAF)

Solução de Formaldeído:

• É usada para a preservação dos estágios de diagnóstico de protozoários e helmintos.

• Concentrações:

– 5%: preservação de cistos de protozoários

– 10%: oocistos de coccídeos, esporos de microsporídeos, ovos e larvas de helmintos.

Solução de Formaldeído:

• Vantagens • Excelente preservador (cistos e oocistos de protozoários e ovos e

larvas de helmintos);

• Mantém a morfologia dos organismos por longo período;

• De fácil preservação e longo período de validade.

• Desvantagens • Esfregaços permanentes corados não podem ser preparados com

espécimes preservados pelo formaldeído;

• Preservação inadequada da morfologia dos trofozoítos dos protozoários;

• Pode interferir com a técnica de PCR.

Fixador de Schaudinn

• Usado na preservação de fezes frescas ou amostras da superfície da mucosa intestinal.

• Preparação de esfregaços permanentes corados para a demonstração de protozoários intestinais.

• Problema: presença do cloreto de mercúrio-II, substância tóxica, os frascos devem ser etiquetados como VENENO.

Fixador Álcool Polivinílico (APV)

• É uma resina solúvel em água, que é incorporada ao fixador de Schaudinn.

• Vantagens • Excelente preservador de trofozoítos e cistos de protozoários para a

coloração de esfregaços permanentes

• Muito boa adesão das amostras fecais à lâmina

• Longo período de validade (meses a anos)

• Os organismos são fixados em uma a duas horas.

• Desvantagens • Contêm cloreto de mercúrio-II

• Difícil preparação no laboratório

• A morfologia de alguns ovos e larvas pode ser distorcida.

Fixador Mertiolato-Iodo-Formaldeído (MIF)

• Vantagens • No exame direto a fresco os reagentes preservam e coram

simultaneamente os organismos

• De fácil preparação

• Longo período de validade

• Cistos de protozoários e ovos e larvas de helmintos podem ser diagnosticadas a partir de esfregaços temporários a fresco.

• Desvantagens • A morfologia dos organismos é alterada nos esfregaços

permanentes corados

• Técnicas de concentração podem apresentar resultados insatisfatórios.

Fixador Acetato de Sódio-Ácido Acético-Formaldeído (SAF)

• É uma combinação de formaldeído com o acetato de sódio. • É estável e não é tóxica • Vantagens

• Pode ser usado em técnicas de concentração e na preparação de esfregaços permanentes corados

• De fácil preparação • Longo período de validade • Os organismos são fixados em 1 a 2 horas.

• Desvantagens • Possui fracas propriedades adesivas • Requer o uso de albumina fixadora de Mayer • A morfologia dos protozoários não apresentam resultados regulares de

coloração quando corados pelo tricômico.

Fixador Fenol-Álcool-Formaldeído (PAF)

• É usado para a preservação de trofozoítos e cistos de protozoários e ovos e larvas de helmintos.

• Os espécimes podem ser examinados diretamente, usando corantes especiais.

• Apresentam bons resultados quando corados pela tionina ou pelo azur A

Albumina fixadora de Mayer

• Quando o material fecal é fixado pelo SAF, a albumina fixadora de Mayer é indicada como adesivo do material à lâmina de microscopia para a preparação de esfregaços permanentes.

– Reagentes: • Clara de ovos de galinha

• Glicerina

• Salicilato de sódio, timol, tintura de mertiolato, formaldeído 37% a 40%.

Controle de qualidade (CQ) dos preservadores

• Os preservadores são testados pelo fabricante com protozoários vivos antes de o produto ser vendido.

• As soluções devem ser controladas com frequência e devem seguir uma rotina de controle de qualidade.

Controle de qualidade (CQ) dos preservadores

• A fixação apropriada depende dos seguintes parâmetros:

• Observar o tempo limite entre a excreção da amostra fecal e a preservação

• Usar correta proporção entre o preservador e a amostra fecal

• Misturar vagarosamente o preservador e a amostra.

• Usar os corantes apropriados para cada preservador.

Exame macroscópico da amostra fecal

• Deve sempre anteceder o exame microscópico;

• Deve-se determinar: – Consistência

• Fezes formadas

• Semiformadas

• Pastosas

• Líquidas

– Cor • Produtos químicos ou medicamentos

– Odor

– Presença de sangue ou muco • Problemas do trato gastrointestinal

– Presença de proglotes e vermes adultos

Exame macroscópico da amostra fecal

• O material fecal líquido ou pastoso deve ser examinado primeiro, sendo seguido pelos espécimes semiformados e formados. – Trofozoítos: fezes líquidas, pastosas e mucosanguinolentas

– Cistos: fezes formadas ou semiformadas

– Ovos e larvas de helmintos: todos os tipos

• O exame macroscópico pode ser realizado pela simples observação ou pela tamisação.

• Examinar e revolver com bastão de vidro todo o material fecal evacuado

Tamisação

• Emulsionar as fezes com água e coar a emulsão com peneira metálica.

• Vermes adultos como Ascaris lumbricoides e Enterobius vermiculares, proglotes de tênias ou outros helmintos podem ser encontrados.

Identificação de Proglotes de Taenia spp.

• Dois métodos principais:

– Método do Ácido Acético Glacial • Depois de colocada em uma placa de petri com o ácido, a proglote

é comprimida entre duas lâminas.

– Tinta da China • Injeção da tinta nas proglotes grávidas cora as ramificações

uterinas mostrando as diferenças entre as tênias.

Bibliografia:

• Carli, G.A; Parasitologia Clínica. Ed. Atheneu.

CENAPRO

• http://www.cenapro.com.br/index.asp