Pedro Marcus de Souza Confort NUSP:6459531

Colorao diferencial de Gram.

A Colorao diferencial de Gram , em microbiologia, uma tcnica utilizada para discriminar espcies bacterianas entre os grupos de parede celular peptideo-glicana espessa, daqueles de paredes celular mais fina. Que posteriormente ao desenvolvimento deste mtodo vieram a ser denominadas como Gram + e Gram -, respectivamente. O mtodo baseia-se portanto, na diferente composio da parede celular dos grupos Gram + e Gram -.O protoloco para este tipo de colorao amplamente difundido, sendo utilizado rotineiramente como um primeiro passo na identificao de bactrias. A colorao realizada atravs dos seguintes passos:1) Esfregao das culturas bacterianas a serem diferenciadas.2) Fixao em bico de bunsen3) Adio de soluo de cristal violeta(60 segundos de repouso)4) Lavagem da lmina com gua esterelizada.5) Adio de Lugol (60 segundos de repouso).6) Lavagem da lmina com lcool.7) Adio de Safranina (30 segundos de repouso).8) Lavagem com gua.Inicia-se a descrio do procedimento de colorao partir da adio do cristal violeta, este componente, uma vez em soluo aquosa, libera ons de Cl- e CV+(Cristal Violeta), estes ons penetram a parede e membrana celular tanto de bactrias Gram negativas quanto Gram positivas, dentro da clula bacteriana este on interage com componentes celulares dando a colorao roxa ao citoplasma. Posteriormente o Lugol libera ons de iodo, que penetram a clula e formam complexos com o Cristal Violeta, este complexo CV+ + I- prende o corante dentro da clula, impedindo a perda dos Ions liberados pelo cristal violeta.Com a adio do lcool no passo 4, ocorre o incio do processo de diferenciao dos grupos bacterianos, uma vez que o lcool interage com a membrana celular externa das clulas de bactrias Gram negativas, as removendo. Sem a membrana celular externa, a fina parede celular peptideo glicana das bactrias Gram negativas permite a passagem dos complexos de cristal violeta e iodo, enquanto nas bactrias Gram positivas, a caracterstica multiestratificada da sua espessa parede celular, continua a prender o corante. As bactrias Gram negativas se tornam portanto descoloridas novamente, e necessitam de um agente colorante adicional que as diferencie, esta a funo da Safranina, que colore de vermelho/rosa as clulas descoloridas. Este contraste entre o roxo do cristal violeta e o rosado da safranina, , salvo excees, o suficiente para identificar a caracterstica negativa ou postitiva dos grupos de Gram.