Contextualização

Mariana Bridi Costa

Um caso que chocou o país!http://www.youtube.com/watch?v=HVbzICCJu-U&list=WLFGpiEnH7QcQYrFWqP-DFo-6D2QELjd5Y

https://www.youtube.com/watch?v=-TnHCd4sY24&list=PL52AFB8EF8CB7E4CD

Técnicas de microbiologia

• QUESTÕES PARA AS PROVAS;• CONTEÚDO DAS AULAS;• ATIVIDADES ON-LINE;

MICROBIOLOGIA – AULA1 Fundamentos de

Microbiologia e Anatomia Funcional das

Células Procarióticas

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Os micróbios em nossas vidas

Neve fabricada com Snomax, uma proteína produzida por bactérias geneticamente modificadas, que faz com que a água congele em temperatura mais elevada que a normal;

Os micróbios em nossas vidas

Tendência a associar microrganismos somente a infecções desagradáveis;

No entanto,

Microrganismos marinhos e de água doce

Microrganismos do soloCertas bactérias e algas realizam a fotossíntese

Microrganismos e síntese de vitaminas

Os micróbios em nossas vidas

Os microrganismos também possuem muitas aplicações comerciais;

• Utilizados na síntese de produtos químicos;• Na produção de alimentos;• Na produção de substâncias terapêuticas através da

engenharia genética;

Embora somente uma minoria seja patogênica, devemos considerar que as doenças infecciosas ainda são a maior causa de morte no mundo;

Uma breve história da microbiologia

Observação das células em 1665 por Robert HookeCartas de Leewenhoek à Sociedade Real de

Londres descrevendo os “animálculos

O debate sobre a geração espontânea

Muitos cientistas e filósofos acreditavam que algumas formas de vida poderiam aparecer espontaneamente da matéria morta;

GERAÇÃO ESPONTÂNEA

Outros cientistas preconizavam que células vivas poderiam surgir somente a partir de células vivas preexistentes;

TEORIA DA BIOGÊNESEExperimentos de Pasteur que refutaram a teoria da geração espontânea

A idade de ouro da Microbiologia

Teoria do germe e da doença

Postulados de Koch

A idade de ouro da Microbiologia

A idade de ouro da Microbiologia

1888 – Roux e Yersin – toxina diftérica;

1890 – Von Behring e kitasato – antitoxina no sangue de indivíduos em recuperação da difteria;

Humoralistas Celularistas

Outras descobertas importantes:

Técnicas de cultura pura

Os microrganismos na natureza normalmente existem em culturas mistas, com muitas espécies diferentes ocupando o mesmo ambiente;

Portanto, o primeiro passo é isolar as diferentes espécies contidas em uma amostra;

Para o isolamento dos microrganismos devemos utilizar técnicas de semeadura e meios indicados de acordo com a espécie:

Técnicas de cultura pura

O equipamento necessário para a inoculação primária de amostras é relativamente simples:

Técnicas de cultura pura

Espalhamento nos quatro quadrantes

Repique por picada com movimento em S

Ágar semi-sólido para provas de motilidade

Aspecto da placa após a semeadura por estrias

O meio de cultura estéril fundido e resfriado a 45 – 48°C, em quantidade de cerca de 20 mL, é vertido sobre cada uma das placas contendo amostra, realizamos então a homogeneização com movimentos em S ou 8 sobre a bancada de trabalho, as quais permanecem até solidificação a temperatura ambiente;

Pour Plate:

Consiste na transferência de alíquota de 1 a 2 mL da diluição da amostra (de cada diluição a ser considerada) para réplicas de placas de Petri estéreis (usualmente de 2 a 3 a cada diluição);

Técnicas de cultura pura

Técnicas de cultura pura

Pour Plate:

Segue-se incubação das placas, em estufa, na posição invertida;

Após 2 a 5 dias de incubação a 30 – 35°C, para bactérias e 5 a 7 dias para bolores e leveduras, a 20 – 25°C, as colônias são contadas;

Técnicas de cultura pura

A escolha do meio de cultura, condições de incubação e cálculos para determinação da carga contaminante viável equivalem ao descrito para a técnica Pour Plate;

Semeadura da amostra em superfície:

O meio de cultura é preparado e distribuído previamente em placas de Petri. Empregando-se pipetas estéreis, volumes de 0,1 a 0,5 mL de cada diluição considerada são distribuídos na superfície do gel já solidificado, sendo o espalhamento efetuado com movimentos cuidadosos ou com o auxílio de bastão de vidro ou alça de Drigalski;

Na dependência da densidade da amostra, haverá absorção total pelo meio. As placas invertidas são então incubadas;

Técnicas de cultura pura

Mycobacterium bovis

Staphylococcus aureus

Para a conservação dos microrganismos há a possibilidade de refrigeração ou liofilização;

Microscópios

O microscópio óptico pode ampliar um objeto por aproximadamente 2000 vezes, mas sua ampliação máxima útil é de 1000 vezes o tamanho original;

Existem lentes no condensador, nas objetivas e na ocular;

As objetivas podem ser de baixo poder, alto poder e de imersão;

A ampliação útil é limitada pela resolução;

Microscópios

Microscópio Eletrônico de varredura (MEV)

Microscópio Eletrônico de transmissão (MET)

Microscopia

Microscopia de campo claro:

Utiliza uma fonte de luz direta semelhante a uma lâmpada de luz ou à luz do dia, que ilumina todo o campo contendo a amostra, como a maioria das técnicas de coloração mata os microrganismos esta é uma limitação;

Microscopia de campo escuro:

Utiliza um microscópio luminoso equipado com uma objetiva e um condensador especial para iluminar os microrganismos em uma amostra, contra um fundo escuro;

Microscopia

Microscopia de fluorescência:

É a técnica de microscopia óptica utilizada na prática clínica para a observação de espécimes corados com um corante fluorescente que absorve a energia da luz com comprimentos de onda curtos, como aqueles da luz azul;

Microscopia de contraste de fase:

Utiliza um microscópio luminoso modificado que permite maior contraste entre materiais de espessuras ou densidades diferentes. O resultado é uma imagem com graus variáveis de luminosidade (contraste);

Microscopia

Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET):

Geralmente são utilizadas quando utilizamos corantes ou cortamos os microrganismos em seções finas. Aqui os feixes de elétrons atravessam o espécime e transmissão destes feixes forma uma imagem;

O feixe de elétrons se move para trás e para frente da superfície dos microrganismos. Fornece uma visão tridimensional da superfície celular e dá uma ideia sobre certos aspectos físicos, tais como aderência;

Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV):

Microscopia

Microscopia de campo escuroMicroscopia de contraste de fase

Par obter uma imagem clara e detalhada em um microscópio óptico, as amostras devem ter um alto contraste com seu meio. Assim devemos diferenciar o índice de refração das amostras daquele do seu meio;

Anatomia funcional das células procarióticas

Teoria endossimbiôntica

MitocôndriaCloroplasto

Procarióticos e Eucarióticos

A célula procariótica

Estrutura da parede celular bacteriana

Estrutura da parede celular bacteriana

Estrutura da parede celular bacteriana

Técnica de coloração de Gram

OBRIGADO