CROMOSSOMOS HUMANOS

IVANISE C.S.MOTA

O Ciclo Celular

Compactação do Material Genético

MitoseCélula mãe

A cromatina condensa-se em cromossomos e a carioteca é desfeita

Alinhamento dos cromossomos

Separação das cromátides irmãs

Descondensação das cromatinas, divisão do citoplasma

Duas células filhas

Anáfase

Telófase

Metáfase

Prófase

Conferências:Denver (1960)

Londres (1963)

Chicago (1966) Paris (1971,1975) ISCN (1978 a 1995)

Padronização Cariotípica

Conferência de Denver (1960)

Propostas• Classificação básica para cromossomos mitóticos humanos• Divisão em 7 grupos, distribuídos de acordo com tamanho e morfologia

p

q

Conferência de Londres (1963)

Propostas• Os 7 grupos foram denominados com letras(A a G)• Descrição morfológica detalhada dos grupos A, C, D, E e G

Conferência de Chicago (1966)

Propostas• Regras para a descrição do cariótipo (fórmula cariotípica)• Criação dos símbolos utilizados na descrição de cariótipos normais e anormais, em coloração convencional

46,XX mulher46, XY homem47,XY+21 - homem, trissomia do 2145,X0 - mulher com Síndrome de Turner

SanguePeriférico

• Protocolos otimizados• Microcultura e macrocultura• Cultura a curto prazo - 48 a 72h• Cultura a longo prazo - 92h• Pouco invasivo

linfócito

Meiode Cultura

• RPMI 1640• Fitohemaglutinina• Soro fetal bovino• Penicilina• Estreptomicina• L-Glutamina• Colchicina

RotinaCitogenética

Diante da cultura efetivada realiza-se a técnica de squash, a qual consiste de gotejar o material cultivado sobre uma lâmina de vidro (com um breve afastamento para ação da gravidade).

Observa-se a metáfase mais apropriada para avaliação, fotografa, amplia e realiza o cariótipo simples. Caso seja solicitação de Cariótipo por bandeamentos cora-se o material com a banda adequada e posteriormente realiza-se o cariótipo.

Obs.: A técnica de bandeamento refere-se a frações sensíveis a corantes expostos e não a frações gênicas.

Classificação dos cromossomos

Metacêntrico → Centrômero posicionado no centro do cromossomo;

Submetacêntrico → Centrômero deslocado para uma das extremidades do cromossomo;

Acrocêntrico → Cromossomo portador de uma esfera terminal (satélite), localizada na extremidade do braço curto;

Telocêntrico → Cromossomo formado por apenas um braço, com centrômero estritamente terminal.

Classificação Universal de DenverGrupos Morfologia Pares

A Grandes - Metacêntricos ou Submetacêntricos

1 a 3

B Grandes – Submetacêntricos 4 e 5

C Médios – Submetacêntricos 6 a 12 – X

D Médios -Acrocêntricos 13 a 15

E Pequenos – Metacêntricos ou Submetacêntricos

16 a 18

F Pequenos – Metacêntricos 19 e 20

G Muito Pequenos – Acrocêntricos 21 e 22 -Y

Bandeamento G

Os cromossomos são inicialmente tratados com tripsina, para a desnaturação das proteínas cromossômicas e em seguida são corados com o corante Giemsa.

Identificação dos Cromossomos

Bandeamento GTG• Permitiu o pareamento cromossômico• Localizar o local afetado• Identificar bandas claras e escuras

Bandeamento GTG

Tripsina 5%

NaCl 100%

Giemsa 4%

dH2O

Identificação dos Cromossomos

Bandeamento Q

Os cromossomos são tratados com mostarda de quinacrina ou compostos semelhantes e, em seguida, examinados por microscopia de fluorescência. Os cromossomos coram-se num padrão específico de bandas brilhantes e opacas

Identificação dos Cromossomos

Bandeamento ROs cromossomos recebem pré-tratamento com calor antes da coloração Giemsa. Nesse caso, as bandas claras e escuras resultantes são o inverso das produzidas por bandeamento G.

Bandeamento C Envolve a coloração da região centromérica de cada cromossomo e outras regiões que contenham heterocromatina.

Identificação dos Cromossomos

Bandeamento de alta resoluçãoEsse tipo de bandeamento cora cromossomos preparados num estágio inicial da mitose (prófase ou prometáfase) que estão ainda em uma condição relativamente não-condensada.

Citogenética molecularPodem-se usar sondas de DNA específicas para cromossomos ou regiões cromossômicas particulares ou diagnosticar rapidamente a existência de um número anormal de cromossomos no material clínico.

Banda NORIdentificação cromossômica mediante o

uso de nitrato de prata.

AutoradiografiaOs cromossomos são identificados

mediante a eliminação de substâncias radiotivas expelidas. É prejudicada a visualização em detrimento de não haver homeostasia celular.

AnáliseCitogenética

• Indicação Clínica• Tipo de Amostra• Qualidade do material• Experiência do analista• Recursos de análise

Tiposde Amostras

Sangue periférico e biópsia de peleContagem: 15-20 célulasAnálise: 4-5 célulasCariótipo: 2 células

linfócito

fibroblastos

Medula ÓsseaContagem: 15-20 célulasAnálise: 4-5 célulasCariótipo: 2 células

Tiposde Amostras

Tiposde Amostras

Líquido AmnióticoCultura em frascosContagem: 15-20 células de duas culturasAnálise: 4-5 célulasCariótipo: 2 célulasAMNIONCENTESE

Vilosidades CoriônicasDiretoContagem: 15-20 células, se possívelAnálise: 4-5 células, se possívelCariótipo: 2 células (1 de cada teste)

CulturaContagem: 15-20 células (de cada cultura)Análise: 4-5 célulasCariótipo: 2 (de cada cultura)

Tiposde Amostras

Tiposde Amostras

Células TumoraisContagem: Não se recomenda apenas a contagem sem a análise completa da célulaAnálise: 15-20 célulasCariótipo: 2 células

Métodos e Ferramentas de

Análise

Métodos e Ferramentas de Análise

Axioplan-Imaging®Carl Zeiss

Aspectos Metodológicos e Aplicações

1p22.2 Cromossomo: 1

Braço: Curto Região: 2 Banda: 2 Sub-banda:2

Componente Explicação

6 Número do cromossomo.

p Encontra-se no braço curto do cromossomo (p);

21.3

O número seguinte a letra representa a posição no braço: banda 21, sub-banda 3. As bandas são visíveis ao microscópio quando o cromossomo está devidamente corado. Cada banda é numerada sendo a número 1 a mais próxima do centrômero. Sub-bandas e sub-sub-bandas são visíveis a resoluções mais altas.

Ex.: 6p21.3 – Síndrome de Marfan – HAD (fibrilina – 15)