Declaração de Conflito de Antígenos Plaquetários...

Antígenos Plaquetários

LEANDRA C N SILVA

Biomédica - PesquisadoraLaboratór io de Granulóci tosDiscip l ina de Hematologia e HemoterapiaUniversidade Federal de São Paulo

DECLARO QUE NÃO POSSUO CONFLITOS DE INTERESSE

Declaração de Conflito de Interesse


LEANDRA C N SILVA

Discip l ina de Hematologia e HemoterapiaUniversidade Federal de São Paulo

Estrutura da apresentação

Anticorpos plaquetários

Implicações Clínicas


Identificação de Antígenos e Anticorpos Plaquetários

Plaquetas Pequenos fragmentos celulares anucleados

Discoídes :1,5-3,0 µm diamêtro (1/3-1/4 hemácia)

Vida média na circulação: 7-11 dias

Contagem Normal: 150 - 400 x 103/ µl

Plaquetas Reparação endotelial ( 7-10000/ µl/dia)

Aderência à células dos vasos danificados Secreção de grânulos. Formação do coágulo (agregado).

Vaso sanguíneo Fluxo sangue

= Interação plaquetária com colágeno= Interação plaquetária

Ativação Plaquetária

Collagen

GPIbα/Ibβ-IX-V

GPIV [CD36]

Lysosomeα-granule

GPVI

CD63CD62P

GPIa-IIa[CD49b/29]

ACTIVATED PLATELET

FIBRINOGEN

ThrombospondinT

CD62P

GPIIb-IIIa

GPIIb-IIIa

CD63

GPIV

GPIV

vWf

ACTIVATED PLATELET

ThrombospondinT

LESION

GPIbα

GPIaIIaGPVI

GPIIb-IIIaCD62P

CD63

CD63

GPIV

GPIc-IIa GPIbβ-IX-V

C M Hurd 3/2000 v1.0Subendothelium

Blood VesselEndothelial cells

HLA class IGrupo ABO

Plaquetas em descanso Plaquetas Ativadas

Antígenos PlaquetáriosGPIbα/Ibβ-IX-V

Lysosomeα-granule

GPIV

CD63

CD62P

GPIa-IIa[CD49b/29]

HLA class I

GPIIb-IIIa[CD41/61]

CD109

ABO

Antígenos Plaquetários Específicos GP IIb/IIIa (HPA1,3) GP Ia/IIa (HPA-5) GP Ib/IX (HPA-2)

Antígenos Compartilhados ABO, I, Lewis HLA Classe I GPIV

Glicoproteínas Plaquetárias - GP IIb/IIIa

80.000 moléculas por plaquetas

Receptor para fibrinogênio, Fator von Willebrand, Fibronectina

Plaquetas, megacarócitos e células endoteliais

Alta imunogenicidade

21 antígenos plaquetários

HPA-1,-3,-4,-6,-7,-8,-9,-10,-11......

Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014) 106, 93-102

Glicoproteínas plaquetárias - GP Ia/IIa

3000-5000 moléculas por plaqueta.

Receptor para colágeno.

Também presente em células endoteliais e linf. T

HPA-5, -13


Glicoproteínas Plaquetárias – GP Ib/IX

25.000 moléculas por plaqueta.

Receptor para von Willebrand.

HPA-2


CD109

CD109 é um membro da família das proteínas α2-macroglobulinas

1000 moléculas por plaqueta

Plaquetas, linfócitos ativados, cels endotelias

Carrega o sistema HPA-15 (Gov).


35 Antígenos em 06 GPs

www.ebi.ac.uk/ipd/hpa

)

Antígenos Plaquetários Específicos

http://www.ebi.ac.uk/ipd/hpa


35 antígenos

06 sistemas bi-alélicos (HPA-1, -2,-3,-4,-5 e -15)23 antígenos de baixa frequência

Base Molecular: troca de um nucleotídeo resultando na troca de uma aminoácido na glicoproteína resultando no antígeno correspondente.

Sistema Gene Antígeno Sinônimo Subst. Subst aa.

HPA-1 GPIIIa HPA-1a PlA1, Zwa T 196 Leu 33

HPA-1b PLA2, Zwb C 196 Pro 33

Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014)

Santoso et al , Vox Sanguinis(2015)

Nomenclatura HPA

1959 - van Loghem descreveu o primeiro antígeno plaquetário Zwa, PlA1

1990 Nomeclatura HPA - ISBT

HPA – Human Platelet Antigen

2003 - PNC (Platelet Nomenclature Committee)

P. Metcalfe, Vox Sanguinis( 2004)Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis(2014)

Nomenclatura HPA HPA - Aloantígenos protéicos expressos na membrana plaquetária

Base molecular definida

Os antígenos e sistemas numerados cronologicamente: Zwa = HPA-1a

Alelos HPA designados alfabeticamente – frequência populacional ‘a’ – alta frequência ‘b’- baixa frequência

Sistemas HPA: descrição de anticorpos para os antígenos de alta e baixa frequência. Sistema HPA-1 (Antígenos HPA-1a e HPA1b)

Descrição de anticorpos apenas contra o antígeno de baixa frequência - ‘w’ HPA-8bw P. Metcalfe, Vox Sanguinis( 2004)


Antígenos PlaquetáriosTabela 1 Antígenos plaquetários Humanos

SISTEMA ANTÍGENO NOME ORIGINAL GLICOPROTEINA

HPA-1 HPA-1a Zwa, PlA1

GPIIIaHPA-1b Zwb, PlA2

HPA-2 HPA-2b Kob

HPA-2a Koa, Siba GpIBα

HPA-3 HPA-3a Baka, Leka

GPIIbHPA-3b Bakb

HPA-4 HPA-4a Yuka, Pena

GPIIIaHPA-4b Yukb, Penb

HPA-5 HPA-5a Brb, Zavb

GPIaHPA-5b Bra, Zava

HPA-6bw Caa, Tua GPIIIa

HPA-7bw Moa

GPIIIaHPA-7cw Hita

HPA-8bw Sra GPIIIa

HPA-9bw Maxa GPIIb

HPA-10bw Laa GPIIIa

HPA-11bw Groa GPIIIa

HPA-12bw lya GPIbβ

HPA-13bw Sita GPIa

HPA-14bw Oea GPIIIa

HPA-15 HPA-15a Govb

CD109HPA-15b Gova

HPA-16bw Duva GPIIIa

HPA-17bw Vaa GPIIIa

HPA-18bw Caba GPIa

HPA-19bw Sta GPIIIa

HPA-20bw Kno GPIIb

HPA-21bw Nos GPIIIa

HPA-22bw Sey GPIIb

HPA-23bw Hug GPIIIa

HPA-24bw Cab2 GPIIb

HPA-25bw Swi GPIa

HPA-26bw Sec GPIIIa

HPA-27bw Cab3 GPIIb

HPA-28bw Var GPIIbHPA-29bw Khab GPIIIa


Castro Pereira Chiba CardoneHPA-1a 98 97.9 99 100 99.5 >99.9 - 99 96.1 100 -HPA-1b 20 28.8 26.5 0.3 2 <0.15 - 14 28.8 16 -HPA-2a 97 100 99 99.2 99 - - 97 97.8 96 -HPA-2b 15 13.5 16.5 19.7 14 - - 27 20.5 24 -HPA-3a 88 81 83.5 85.1 82.5 78.5 - 83 86.9 86 -HPA-3b 54 69.8 66.5 66.2 71.5 71.9 - 47.7 52.8 58 -HPA-4a 100 100 - 100 100 >99.9 - 100 100 100 -HPA-4b 0 0 - 2 2 <0.2 - 0 0 0 -HPA-5a 98 100 99.5 99 100 99.3 - 99 99.6 100 -HPA-5b 21 19.7 10 7 4.5 17.7 - 15 16.6 35 -HPA-6a - - 100 99.7 100 - - - - - -HPA-6b - - 2.4 4.8 4 - - - - - -HPA-15a - - - - - - 78 - - - 80HPA-15b - - - - - - 75 - - - 73

FINLANDESES JAPONESES

Frequências (%) de antígenos Plaquetários em diferentes populações 18,19,20,21,22

COREANOS BRASILEIROS HOLANDESES CHINESESAMERICANOS ALEMÃESAntígeno

Frequência de Antígenos Plaquetários

P Metcalfe Transfusion, 2000Castro et al European Journal ,1999

Chiba et al Transfusion Medicine, 2000Cardone et al Transfusion Medicine, 2004

Brian Curtis and J.G. McFarland, Vox Sanguinis,2014

HLA Classe I Genes HLA-A, HLA-B, HLA-C Todas as células nucleadas Plaquetas: 50-180.000 moléculas Hemácias

Alto Polimorfismo (IGMT/HLA/database – 11/2016)HLA*A: 3657 alelosHLA*B: 4459 alelosHLA*C: 3290 alelos

Freqüência Heterogenia

Antígenos Plaquetários não específicos

Antígenos Plaquetários não específicosABO •Determinantes A e B presentes ancoradas nas GPs•Expressão ABO Heterogenia em um mesmo indivíduo

HPA-1aCtr-

Anti-A

Br J Haematol 1985: 61, 603-609.

Antígenos Plaquetários não específicos

Naka – antígeno presente na Glicoproteína IV

Plaquetas,macrófagos, adipócitos e outros tecidos

3-5% africanos e asiáticos são GPIV deficiente. Caucasianos 0,06%

Anti-Naka

Formado por exposição em gravidez e transfusão. Relatos de trombocitopenia neonatal aloimune

Anticorpos plaquetários

Aloimunização gravidez, transfusão e transplantes

Implicação Clínica:

Trombocitopenia Neonatal Aloimune

Púrpura Pós Tranfusional

Refratariedade Plaquetária

Púrpura Pós Transfusional

Trombocitopenia grave após evento transfusional (CH, PL, PLQ)

Anticorpos dirigidos contra complexo GPIIbIIIa Anti-HPA-1a (80%)

Destruição de plaquetas transfundidas e autólogas

10-15% dos casos evolui a óbito por sangramento em SNC

Mulheres ( gravidez ou TX prévia)

Autolimitada – 3 semanas

Kroll, Kiefel and Santoso, Vox Sanguinis, 1998

Trombocitopenia Neonatal Aloimune (TNAI) Descrita em 1953 por Moulliner

Causada pela incompatibilidade deantígenos plaquetários feto-materna..

Anticorpos antiplaquetários IgGlevam a destruição imune mediadadas plaquetas fetais/neonato.

Equivalente a DHRNR Ahya et al. Transfusion and Apheresis Science, 2010

Kaplan, C. ISBT Science Series, 2009Kaplan C. Immunohematology, 2007

Trombocitopenia Neonatal Aloimune (TNAI)

Quadro Clínico: RN termo e saudável

↓ plaquetas ao nascimento

Pétequias

Hemorragias

Incidência:

1/1000 nascimentos

50% casos na primeira gestação

R Ahya et al. Transfusion and Apheresis Science, 2010Kaplan, C. ISBT Science Series, 2009

Kaplan C. Immunohematology, 2007

Trombocitopenia Neonatal Aloimune (TNAI)

HLA e ABO: controverso na literatura R Ahya et al. Transfusion and Apheresis Science, 2010Kaplan, C. ISBT Science Series, 2009

Kaplan C. Immunohematology, 2007

Resposta ineficaz a transfusão de Plaquetas

Causas de RefratariedadeCausas Clínicas Causas Imunes


ASCO (J Clin Oncology, 2001; 5:1519-1538)

British Guidelines, (Br J Haematol, 2003; 122:10-23).

Vassallo(Imunohematology,2009;25:119-124)

Resposta ineficaz a transfusão de Plaquetas

Causas de RefratariedadeCausas Clínicas (60%)Causas Imunes (40%)


ASCO (J Clin Oncology, 2001; 5:1519-1538)

British Guidelines, (Br J Haematol, 2003; 122:10-23).

Vassallo(Imunohematology,2009;25:119-124)

Refratariedade Plaquetária Fatores Imunes: Ac HLA Classe I : 80 - 90%.

Ac HPAs: 10-20%. Anti-HPA-1b : 55% Anti-HPA-5b: 30% Associados a HLA

Ac ABO

Diagnóstico das Trombocitopenia Aloimune

Confirmação da incompatibilidade HPA

Identificação de anticorpo anti - HPA


Genotipagem HPA Métodos

Genotipagem em larga escala: genotipagem de um grande número de amostras e em de antígenos em um único ensaio ( bead based assay e microarray) banco de doadores/suporte Transfusional



Identificação de Anticorpos Plaquetários

Três diferentes linhas:

Ensaios com plaquetas intactas

Ensaios glicoproteína específicos

Ensaios de fase sólida utilizando antígenos purificados ou recombinantes



Identificação de Anticorpos Plaquetários

Hemaglutinação

Fase sólida

Ag recombinante

Ensaios GP Específico

↑Sensibilidade↓Especificidade

HLA/HPA/ABO

EspecificidadeSensibilidade

↑Especificidade↑Sensibilidade

MPHASPRCA

MAIPA

ELISA –ACE BBA - LUMINEX

MACE

Imunofluorescência PIFT

Plaquetas Intactas

Identificação de Anticorpos PlaquetáriosMAIPA

Identificação de Anticorpos Plaquetários Recomendado utilização de técnicas

MAIPA: falsos negativos – competitividade de Acs Moab

Anti-HPA-3: anticorpos de difícil detecção Falhas com técnicas de fase sólida e com utilização de soluções detergentes. Melhores resultados em técnicas com plaquetas intactas

PIFT e MAIPA Lab de referência em Imunologia plaquetária Workshops Internacionais de plaquetas.



Síntese Plaquetas: Ag ABO, HLA Classe I e Ags específicos (HPA)

Antígenos HPA: 35 antígenos em em 06 GP.

Implicações clinicas: TNAI, PPT e RP TNAI e PPT: anti-HPA-1a RP: anti-HLA-I

Métodos: Antígenos plaquetários: genotipagem Anticorpos plaquetários: PIFT + MAIPA

Obrigada !

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Declaração de Conflito de Antígenos Plaquetários...

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