DETERMINAÇÃO DA FRAÇÃO CICATRIZANTE DE DETERMINAÇÃO DA FRAÇÃO CICATRIZANTE DE FUMAÇA DE FUMAÇA DE Artemisia vulgaris Artemisia vulgaris EM MODELO DE EM MODELO DE

ÚLCERA POR PRESSÃO EM CAMUNDONGOSÚLCERA POR PRESSÃO EM CAMUNDONGOS

Ricardo de oliveira Lima Emile Costa Barros

Edilberto Rocha SilveiraNayara Coriolano de AquinoTamara Gonçalves Araújo

Mariana Lima Vale

IntroduçãoPrevalência 10% a 18% hospitalização de curta permanência; 2,3% a 28% hospitalização de longa duração e 0% a 29% no atendimento domiciliar.

Dorner B, et al. Adv Skin Wound Care 2009, 22(5):212-21

1,99 bilhões de dólares no tratamento hospitalar. Entre 1990 e 2001, dos 27 milhões de óbitos nos Estados Unidos, 114.380 (0,4%) foram induzidos por úlceras de pressão

Catania, K. et al. Am J Nurs 2007, 107(4):44-52; Reed, K, et al. Health Grades, Denver, 2011.

Artemisia vulgaris - Abad MJ, et al. Molecules 2012. 2(17):2542-66; Suresh J, et al. Int J Curr Pharm Res. 2011. 3(1):49-52.Medicina tradicional chinesa - Morant, G.S. Acupuntura. Medica Panamericana. 1990; CAO D, et al. Inter. J. of Pharm 2008. 354:117-25

Justificativa

www.pinterest.comwww.ecrescer.com.br

OBJETIVOS GERAIS

•Investigar a fração do condensado da fumaça de Artemisia vulgaris responsável pela ação cicatrizante em modelo de úlcera por pressão em camundongos.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

•Separar o extrato da fumaça de moxa de Artemisia vulgaris em frações obtidas no fracionamento cromatográfico;•Fazer hidrogel de cada frações do extrato da fumaça de Artemisia vulgaris.•Avaliar o efeito da aplicação tópica do hidrogel de cada fração da fumaça de Artemísia vulgaris sobre a cicatrização de úlceras por pressão em camundongos:Avaliando parâmetros macroscópicos de cicatrização por meio da Escala - Experimental Wound Assessment Tool (EWAT) e percentual de contração da área da úlcera;Investigando a colagênese em cortes histológicos corados com Tricrômio de Mallory;Avaliando o potencial antioxidante.

P1

P2

P3

PD4

PD5

D6

D7

A8

M9

Pentano (P)Pentano/diclorometano (PD)Diclorometano (D)Acetato de etila (A)Metano (M)

0,48% P1

0,27% P2-3

1,37% PD4

0,53% PD5

0,60% D6

0,29% D7

2,36% A8

1,94% M9

Fracionamento cromatográfico

(coluna gel de silica)

1.Naïve (4 animais) 2.Controle (7 animais) 3.Veículo (7 animais) 4.Fração P1 (5 animais)5.Fração P2-3 (5 animais)6.Fração P4 (5 animais)7.Fração PD5 (5 animais) 8.Fração PD6 (5 animais)9.Fração PD7 (5 animais)10.Fração A8 (5 animais)11.Fração M9 (5 animais)

Total de 58 animais

Formol 10%

tamponado

14ºdia

Freezer -80º

Centrifugado

Sobrenadante para o teste

MDA

Parafinizado

IHQHE

T. Mallory

Análise estatística

•Resultados foram expressos como média EPM•Análise de Variância (ANOVA) seguido de Bonferroni ou Teste t para dados paramétricos•Kruskal-Wallis seguido de Dunn’s ou Teste de Mann Whitney para dados não-paramétricos•Nível de significância estatística, p < 0,05•GraphPad Prism 5 for Windows® (GraphPad software, INC., USA, 2007)

Efeito sobre a reepitelização

6 8 10 12 140

20

40

60

80

100

CP1

*

BCOMPARAÇÃO ENTRE O GRUPO CONTROLE E P1

DIAS

CO

NTR

AÇÃ

O D

A Á

REA

(%)

COMPARAÇÃO ENTRE O GRUPO CONTROLE E M9

6 8 10 12 140

20

40

60

80

100

CM9

***

*

C

DIAS

CO

NTR

AÇÃO

DA

ÁREA

(%)

6 8 10 12 140

20

40

60

80

100

CVP1P2-3P4PD5PD6PD7A8M9

COMPARAÇÃO ENTRE TODOS OS GRUPOSA

DIAS

CO

NTR

AÇÃO

DA

ÁREA

(%)

Todas as frações Fração P1 Fração M9

Efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris sobre percentual de contração da ferida

Efeito sobre a cicatrização

Grupo Dia 5 Dia 7 Dia 14Controle 18(15-20) 17 (0 – 21) 9,5 (0 - 18)Veículo 18 (13 - 22) 16,5 (13 - 21) 11 (0 - 16)P1 16,50 (15 - 20) 14,5 (0 - 18) 5 (0 - 13)P2/3 20,5 (18 – 22) 18 (15 - 20) 1 (0 - 18)P4 21 (21 – 22) 19 (18 -20) 16 (0 - 16)PD5 18 (15 - 19) 14,5 (12 - 17) 0 (0 - 16)D6 18 (15 - 19) 16,5 (14 - 19) 6 (0 - 19)D7 18,5 (15 - 19) 14,5 (6 - 19) 10,5 (0 - 16)A8 17,5 (14 – 22) 18,5 (17 - 21) 0 (0 - 16)M9 20,5 (16 – 22) 16 (0 - 17) 0 (0 - 8)ab

Efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris sobre Escores EWAT

Efeito sobre a colagênese

N C V P1 P2-3 P4 PD5 PD6 PD7 A8 M90

500

1000

1500

2000

2500

*##+

14º dia

espe

ssur

a da

der

me

(

m)

Efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris sobre a camada de colágeno na derme da ferida

Avaliação do efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris na dosagem de MDA no leito da ferida.

N C V P1 P2-3 PD4 PD5 D6 D7 A8 M90.00

0.02

0.04

0.06

0.08

0.10

****

***

MD

A (p

pm)

Efeito Antioxidante

Efeito anti-inflamatória, antioxidante e antinitrosante

N C V P1 P2-3 PD4 PD5 D6 D7 A8 M90123456789

101112

*#

perc

enta

gem

de

pixe

ls (%

)

N C V P1 P2-3 PD4 PD5 D6 D7 A8 M90123456789

101112

******

******

** **pe

rcen

tage

m d

e pi

xels

(%)

iNOS Nitrotirosina

Efeito das frações da fumaça de Artemisia vulgaris sobre imunoexpressão de NOSi e nitrotirosina no leito da ferida ou na cicatriz

NaïveD6

Controle

Veículo

P1

P2-3

PD4

PD5

D7

A8

M9

Análise dos espectros de Ressonância Magnética Nuclear Protônica (RMN¹H) Extrato etanólico das folhas

de Artemisia vulgaris

Fração M9

Extrato etanólico das folhas de Artemisia vulgaris

Extrato etanólico dos palitos de moxa

Fumaça de Artemisia vulgaris

Fração P1

CONCLUSÕES

A formulação de hidrogel com a fração M9 utilizada foi a que mais acelerou o processo de cicatrização, mostrando:•Menores escores na escala EWAT •Maiores percentuais de contração da área das úlcerasOs resultados podem ser atribuídos por:•A diminuição dos marcadores de estresse nitrosativo, relacionado a diminuição da expressão de NOSi•Diminuição nos níveis de radicais livres de oxigênio e de nitrogênio pode esta envolvida em sua atividade cicatrizante

A formulação de hidrogel com a fração P1 também teve uma ação cicatrizante evidenciada por:•Aumento da contração da área de ulcera no 7º dia•Estimulação da colagênese Os resultados podem ser atribuídos por:•Atividade sequestradora de radicais livres de nitrogênio, evidenciado pela diminuição da marcação para nitrotirosina

•A moxa palito e a fumaça de moxa apresentaram um espectro semelhante ao extrato etanólico das folhas Artemísia vulgaris.