Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO...

21
Universidade Federal de São João del-Rei Coordenadoria do Curso de Química Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de Buchenavia tomentosa Eichler Elisa Tatiana Silva Damasceno São João del-Rei 2015

Transcript of Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO...

Page 1: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Universidade Federal de São João del-Rei Coordenadoria do Curso de Química

Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de Buchenavia tomentosa Eichler

Elisa Tatiana Silva Damasceno

São João del-Rei – 2015

Page 2: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

DETERMINAÇÃO DO TEOR DE ÁCIDO ASCÓRBICO EM FRUTOS DE BUCHENAVIA TOMENTOSA EICHLER

Monografia de Trabalho de Conclusão de Curso, apresentado no 2º semestre do ano de 2015 ao Curso de Química, Grau Acadêmico Bacharelado, da Universidade Federal de São João del-Rei, como requisito parcial para obtenção do título Bacharel em Química. Autor: Elisa Tatiana Silva Damasceno Docente Orientador: Prof. Dr. Luiz Gustavo de Lima Guimarães Modalidade do Trabalho: Pesquisa

São João del-Rei – 2015

Page 3: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

RESUMO

O ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com

características nutricionais importantes para o organismo humano. Ele atua como um

importante antioxidante para o organismo, na síntese de colágeno e adrenalina, além de

exercer outras funções. As principais fontes de ácido ascórbico para o organismo humano

são as frutas e vegetais. Alguns estudos prévios realizados com os frutos da mirindiba

(Buchenavia tomentosa) demonstraram que este fruto apresenta um alto teor de ácido

ascórbico. Sendo assim, neste trabalho objetivou-se determinar o teor de ácido ascórbico

em polpas in natura e liofilizadas de frutos de mirindiba (Buchenavia tomentosa) por meio da

cromatografia líquida de alta eficiência empregando diferentes soluções extratoras. Foram

utilizadas cinco soluções extratoras, tendo como base uma solução de 1 mmol L-1 de

dihidrogenofosfato de sódio (NaH2PO4), 1 mmol L-1 de EDTA em água Milli Q, variando

apenas os ácidos utilizados e suas concentrações. Resultando nas soluções contendo ácido

metafosfórico 1%, ácido metafosfórico 3%, ácido oxálico 0,5%, ácido perclórico 10% e ácido

metafosfórico 1% e ácido acético 8%, EDTA 2 mmol L-1, ácido sulfúrico 0,15 mol L-1 e ácido

metafosfórico 3%. Os teores de ácido ascórbico obtidos para os frutos de mirindiba

encontram-se entre 7315,70 mg 100 g-1 e 13272,63 mg 100 g-1 para a polpa in natura, e

1337,67 mg 100 g-1 e 1503,33 mg 100 g-1 para a polpa liofilizada. Foi possível observar

influência da condição de extração no teor de ácido ascórbico da polpa in natura, uma vez

que o teor de ácido ascórbico para a extração utilizando uma solução de ácido acético 8%,

EDTA 1 mmol L-1, ácido sulfúrico 0,15 mol L-1 e ácido metafosfórico 3% foi superior aos

teores obtidos perante as demais. Em relação as polpas liofilizadas o teor de ácido

ascórbico não foi influenciado pelas condições de extração. Verifica-se pelos resultados que

os frutos de mirindiba apresentam altos teores de ácido ascórbico, demonstrando uma

importante característica nutricional para estes frutos.

Palavras chaves: Vitamina C, condições de extração, HPLC, mirindiba.

Page 4: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

SUMÁRIO

1.Introdução 01

2. Objetivos 03

3. Metodologia

Obtenção dos frutos 03

Preparo das amostras 03

Umidade 04

Extração do ácido ascórbico 04

Determinação do teor de ácido ascórbico 04

Estatística 05

4. Resultados e discussões 05

5. Conclusão 10

6. Referências bibliográficas 11

7. Anexos 17

Page 5: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

1

1. INTRODUÇÃO

O ácido ascórbico (AA), L-ascórbico ou L-ascorbato é um composto com

características nutricionais importantes, sendo a maioria dos animais capaz de

sintetizá-lo, com exceção dos porquinhos-da-índia e dos primatas, incluindo o homem

(CAMPBELL e FARRELL, 2012). Também conhecido como vitamina C, o AA é

fornecido para a nutrição humana por meio de frutas e vegetais (SPÍNOLA et al.,

2014). Este composto quando puro, apresenta-se como um sólido branco, inodoro e

solúvel em água. É facilmente oxidado para formar o ácido dehidroascórbico (Figura

1), sendo a sua oxidação um processo reversível (STANA et al., 2014). Esta oxidação

é induzida pela exposição a altas temperaturas, luz, presença de oxigênio ou de

metais (Fe3+, Ag+, Cu2+). No entanto, o ácido dehidroascórbico exibe atividade

biológica equivalente ao AA, por isso, é importante determinar a quantidade total

desses ácidos em gêneros alimentícios (LEE e KADER, 2000).

C C

C

OC

H

HO

CH2OH

O

OHHO

C C

C

OC

H

HO

CH2OH

O

OO

+ 2H+ + 2e-

Figura 1. Oxidação do ácido ascórbico em ácido dehidroascorbico.

Antigamente, o AA era conhecido por sua capacidade de prevenir o escorbuto,

uma doença causada pela carência de vitamina C no organismo. No entanto,

atualmente sabe-se que este composto está envolvido em vários processos biológicos,

como na síntese de colágeno e adrenalina, formação de ácidos biliares e de alguns

neurotransmissores (BAYNES e DOMINICZAK, 2015). Havendo um grande interesse

na sua funcionalidade nutricional para o organismo humano e também na sua

capacidade antioxidante (OLIVEIRA et al., 2012). Os antioxidantes são compostos

químicos que podem prevenir ou diminuir os danos oxidativos de lipídios, proteínas e

ácidos nucleicos causados por espécies de oxigênio reativo. Essas espécies geradas

no organismo são os responsáveis por danos celulares, conduzindo a várias

anormalidades fisiológicas e patológicas, tais como inflamações, doenças

cardiovasculares, câncer e envelhecimento (FREIRE et al., 2013). Recentes estudos

Page 6: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

2

indicam que o consumo de frutos está associado com a redução da mortalidade e

morbidade causadas por doenças crônicas. Esse efeito se deve aos compostos

antioxidantes presentes em várias partes das frutas e hortaliças denominadas

antioxidantes exógenos (FREIRE et al., 2013).

Grande parte da quantidade de AA da dieta humana é proveniente de frutas e

vegetais, sendo suas principais fontes as frutas cítricas, acerola, goiaba, mamão,

folhas cruas de vegetais e tomates (RICHETTO, 2003). O teor de AA nos alimentos

pode variar bastante de acordo com as condições de plantio, incidência solar, estágio

de maturação, manuseio pós-colheita, condições de estocagem e de processamento.

O conteúdo destes nutrientes no alimento in natura e sua estabilidade podem

influenciar na qualidade nutricional entre outros fatores (OLIVEIRA et al., 2010;

BARCIA et al., 2010).

A Buchenavia tomentosa é uma planta do cerrado brasileiro, conhecida

popularmente como mirindiba e pertence à família Combretaceae (MARQUETTE et

al., 2005). Constitui-se numa espécie vegetal com altura média de 2 - 6 metros de

altura, com diâmetro do tronco variando entre 21 - 35 cm com sapopemas e ramos

superiores acinzentados. Produz frutos, que são comestíveis e ácidos, nos meses de

junho, julho, agosto e setembro. Suas folhas são utilizadas para preparo de chá e sua

casca é popularmente utilizada no tratamento de tosse, sendo também utilizado com

efeito terapêutico no tratamento da diabetes (LORENZI, 2009; MARQUETTE et al.,

2005; SILVA et al., 2010)

Existem vários métodos químicos capazes de avaliar o teor de AA em

diferentes alimentos (OLIVEIRA et al., 2012). O método analítico mais empregado é o

titulométrico, porém este não quantifica o ácido dehidroascórbico, mas apenas o AA

(AOAC, 1990). Outros métodos como espectrofotometria (LISIEWSKA et al., 1996),

fluorimetria (BURINI, 2007; KALL et al., 1999), amperometria (O’CONNELL et al.,

2001), eletroforese capilar (VERSANI et al., 2004; HERRERO-MARTÍNEZ et al.,

1998), cromatografia (FRENICH et al., 2005; GIANNAKOUROU et al., 2003; BURUNI,

2007; AOAC, 1990; LISIEWSKA et al., 1996; KALL et al., 1999; O’CONNELL et al.,

2001; HERRERO-MARTÍNEZ et al., 1998; VERSARI et al., 2004; FURUSAWA,

2001;TUDELA et al., 2002; KABASAKALIS et al., 2000) e métodos enzimáticos

(SHEKHOVTSOVA, 2006) também têm sido utilizados na determinação do teor de AA.

No entanto, alguns destes métodos apresentam limitações em relação à

especificidade.

A cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) destaca-se como um método

confiável e geralmente simples. A análise do AA por HPLC é um método fácil, rápido e

preciso. O HPLC é considerado um método sensível e seletivo e, dessa forma, é

Page 7: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

3

considerado adequado para a determinação da substância ativa; sendo também

adequado para a avaliação da estabilidade em formulações nas indústrias

farmacêuticas e cosméticas (MARSHALL et al., 1995).

Para a quantificação do AA, primeiramente, é necessário extraí-lo dos tecidos

com soluções ácidas para prevenir assim, a sua oxidação. Entre os ácidos

empregados nas soluções extratoras utilizadas, encontram-se o ácido metafosfórico,

ácido oxálico, ácido acético, tricloroacético e suas combinações, ou ainda essas

mesmas soluções combinadas com o ácido etilenodiaminotetracético (EDTA)

(RIGHETTO, 2003).

2. OBJETIVOS

Este trabalho teve como objetivo determinar a influência da condição de

extração do ácido ascórbico em polpas liofilizadas e in natura de frutos de mirindiba

(Buchenavia tomentosa), utilizando a cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC)

para determinação dos teores de ácido ascórbico.

3. METODOLOGIA

3.1. Obtenção dos frutos

Os frutos foram provenientes de plantas nativas, localizadas na cidade de

Gurupi-TO. A colheita foi realizada no ano de 2014 no mês de agosto. Estes foram

colhidos manualmente, nas primeiras horas da manhã, e acondicionados em sacos

plásticos e congelados a -20 ºC.

3.2. Preparo das amostras

Os frutos congelados foram lavados em água destilada, selecionados mediante o

seu estado de conservação e ausência de defeitos causados por pragas. Em seguida

foram despolpados manualmente, sendo a polpa obtida dividida em duas frações.

Uma das frações foi congelada em freezer -20ºC e a segunda fração foi submetida ao

processo de liofilização.

O processo de liofilização é uma técnica de secagem de fruta que consiste na

retirada de umidade do material por meio de congelamento da parte líquida e posterior

sublimação do gelo. Durante esse processo é utilizado baixas temperaturas na

presença de vácuo.

Page 8: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

4

3.4. Umidade

A determinação do teor de umidade da amostra in natura foi feita com base no

procedimento descrito por AOCS (1994), adaptado por Pimentel et al. (2006). Foram

pesados 5 g da polpa da fruta in natura e colocadas em 80 mL de cicloexano (C6H12),

em um balão volumétrico com capacidade de 250 mL. O balão volumétrico foi

acoplado a um condensador de bolas, e a um coletor volumetricamente graduado, tipo

“dean stark”. O aquecimento foi realizado por meio de manta aquecedora, controlando-

se a temperatura de ebulição do cicloexano (80,74 ºC). O sistema ficou em refluxo por

2 horas, contados a partir da primeira gota de água coletada, em seguida procedeu-se

a leitura do volume de água presente no “dean stark” (AOCS, 1994; PIMENTEL et al.,

2006). O procedimento experimental foi feito em quadriplicata.

3.5. Extração do ácido ascórbico

Para avaliação da melhor condição de extração do AA da polpa liofilizada e in

natura dos frutos de mirindiba, foram utilizadas cinco soluções extratoras. As soluções

extratoras foram preparadas tendo como base uma solução de 1 mmol L-1 de

NaH2PO4, 1 mmol L-1 de EDTA em água Milli Q, variando apenas em relação aos

ácidos utilizados e suas concentrações. Sendo utilizadas as seguintes soluções:

solução contendo ácido metafosfórico a 1% (OLIVEIRA et al., 2012); ácido

metafosfórico 3% (OLIVEIRA et al., 2012); ácido oxálico 0,5% (COUTO et al., 2010);

ácido perclórico 10% e ácido metafosfórico 1% (VALENTE et al., 2014) e ácido acético

8%, EDTA 2 mmol L-1, ácido sulfúrico 0,15 mol L-1 e ácido metafosfórico 3% (FRANKE

et al., 2004).

Foi empregado o mesmo procedimento de extração para todas as soluções

extratoras. Para extração do ácido ascórbico na polpa liofilizada e in natura foram

pesados 0,5 e 1,0 g, respectivamente. Em seguida foram adicionados 10 mL da

solução extratora. A mistura resultante foi homogeneizada, colocada em banho

ultrassom por 5 minutos, posteriormente centrifugada por 5 minutos a 3000 rpm. O

sobrenadante foi recolhido e filtrado em filtro micropore de PVDF de 0,45 µm para

posterior análise em HPLC.

3.5. Determinação do teor de ácido ascórbico

A determinação do teor de AA da fruta de mirindiba, in natura e liofilizada, foi

feita por análise cromatográfica com base nos procedimentos de Cabral et al. (2014),

com pequenas modificações.

As análises cromatográficas foram feitas em um HPLC Agilent® 1220 (Palo

Alto, CA, EUA) constituído por módulo único (G4286B), contendo um injetor

Page 9: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

5

automático modelo (G1313), um detector UV-Vis. Os dados foram adquiridos e o

instrumento controlado pelo software Agilent Open LAB Chromatography Data

System® (CDS). As separações cromatográficas do ácido ascórbico foram feitas

utilizando uma coluna Phenomenex® Gemini C18 (150 mm x 4,6 mm, 5 µm) e fase

móvel composta por água Milli Q, contendo 1 mmol L-1 de NaH2PO4, 1 mmol L-1 de

EDTA, ajustando o pH 3,0 com H3PO4 a uma vazão de 1,0 mL min -1. Os dados

cromatográficos obtidos foram adquiridos a 245 nm. Todos os métodos

cromatográficos foram realizados a 25 ± 3 °C e o volume de injeção foi de 20 µL para

o padrão e as amostras de fruta liofilizada e in natura. Os teores de ácido ascórbico

obtidos foram expressos em mg 100 g-1 de fruta livre de umidade.

Para a quantificação foi preparada uma curva analítica, com base nos

procedimentos descritos por Valente et al. (2014), com concentrações de AA iguais a

75, 100, 125, 150, 175, 200 µg mL-1, sendo analisadas sobre as mesmas condições

das amostras.

3.6. Estatística

As extrações foram realizadas em triplicatas. Foram feitas as análises de

variância, para verificar a influência da condição de extração do ácido ascórbico em

polpas liofilizadas e in natura. Utilizou-se o Teste de Tukey (5%) para comparar os

efeitos médios, sendo todas as análises realizadas utilizando o programa SISVAR

(FERREIRA, 2011).

4. RESULTADOS E DISCUSSÃO

As frutas são amostras complexas que contêm grandes quantidades de

compostos potencialmente interferentes. Portanto, além do método cromatográfico, a

escolha do processo de preparo de amostras é importante para uma quantificação

eficaz do AA (PHILLIPS et al., 2010). O teor de umidade da polpa in natura dos frutos

de mirindiba foi igual a 47%, sendo encontrado para cada 5,00 g da polpa da fruta 2,35

± 0,62 g de água. A análise do teor de umidade foi realizada a fim de que as polpas de

mirindiba, in natura e liofilizada, quando submetidas ao processo de extração

estivessem nas mesmas condições, ou seja, livre de umidade, para que então seus

teores de AA determinados pudessem ser comparados. E dessa forma o teor de água

foi considerado para os cálculos da determinação de AA na amostra in natura de

mirindiba.

Os teores de AA encontrados nas polpas liofilizadas e in natura dos frutos de

mirindiba, submetidas às diferentes soluções extratoras encontram-se na Figura 2.

Page 10: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

6

Sendo os mesmos determinados pela equação da reta obtida por meio da curva

analítica do AA (Figura 3).

Figura 2. Teores de ácido ascórbico nas polpas liofilizadas e in natura dos frutos de

mirindiba, submetidas às diferentes soluções extratoras. *1. Ácido metafosfórico 1%; *2. Ácido metafosfórico 3%; *3 Ácido oxálico

0,5%; *4. Ácido perclórico 10%; *5. Ácido acético 8%, 1mmol L-1 EDTA, 0,15

mol L-1 H2SO4.

Figura 3. Curva analítica utilizada na determinação dos teores de ácido ascórbico.

De acordo com a Figura 2, é possível observar os altos valores de ácido

ascórbico encontrados nas amostras liofilizadas e in natura da mirindiba. O maior teor

Page 11: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

7

médio de vitamina C obtido foi de 13272,63 mg 100 g-1 para a amostra in natura e o

menor igual a 7315,7 mg 100 g-1. Já para a amostra liofilizada, não houve uma grande

variação entre os teores observados, estando estes entre 1147,333 mg 100 g-1 e

1503,333 mg 100 g-1. Apesar de ser observado uma diferença grande entre a

concentração da fruta in natura e liofilizada, as duas apresentaram altos teores de

ácido ascórbico.

Segundo Andrade et al. (2002) as fontes de ácido ascórbico são classificadas

em diferentes níveis, de acordo com o teor de ácido ascórbico presente nos alimentos,

podendo ser: fonte elevada (contém de 100-300 mg 100 g-1 de fruta); fonte média

(contêm de 50-100 mg 100 g-1 de fruta) e fonte baixa (contém de 25-50 mg 100 g-1 de

fruta). Sendo assim, com base nesses dados, pode-se afirmar que a mirindiba, é uma

fonte elevada de ácido ascórbico.

Os estudos dos frutos de Buchenavia tomentosa, são ainda recentes e por

isso, não há dados na literatura sobre os parâmetros deste fruto. Ao se comparar os

teores de ácido ascórbico de frutos de mirindiba, com os teores apresentados por

algumas frutas tropicais exóticas, é possível observar que os teores apresentados

pelos frutos de B. tomentosa são muito superiores àqueles apresentados pelos frutos

de Bacuri (2,4 mg 100 g-1); Cajá (26,5 mg 100 g-1); Carnaúba (78,1 mg 100 g-1);

Gurguri (27,5 mg 100 g-1); Jambolão (112 mg 100 g-1); Jussara (186 mg 100 g-1); Murta

(181 mg 100 g-1) (RUFINO et al., 2010) e cupuaçu (3,3 mg 100 g-1) (CANUTO et al.,

2010).

Os teores de AA encontrados para os frutos de Buchenavia tomentosa foram

superiores aos apresentados por frutas como acerola e caju, frutas reconhecidas por

possuírem altos teores deste composto. Scherer et al. (2008) avaliando os teores de

AA nessas frutas, encontraram valores médios variando de 441 a 494 mg 100 g-1 em

polpas de acerola, e de 109 e 115 mg 100 g-1 para os pseudofrutos de caju. Já

estudos de Lima et al. (2014), relatam teores deste composto em frutos de acerola

variando entre 1114,07 mg 100 g-1 a 1456,22 mg 100 g-1. Valores que se encontram

próximos ao determinado por Rufino et al. (2010), também para frutos de acerola, que

foi de 1357 mg 100 g-1.

Outra fruta com um alto teor de AA é o camu-camu (Myrciaria dubia), uma fruta

nativa da Região Amazônia. Segundo Rufino et al. (2010), o teor de AA determinado

na polpa desta fruta foi de 1882 mg 100 g-1. Já em estudos feitos por Sandoval et al.

(2010) o teor deste composto encontrado no camu-camu foi de 840 mg 100 g-1 para o

extrato liofilizado. E segundo estudos realizado por Alves et al. (2000) o camu-camu

apresentou valor de 2061,04 mg 100 g-1, em frutos predominantemente vermelhos.

Apesar dos teores de AA na polpa liofilizada dos frutos de Buchenavia tomentosa

Page 12: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

8

terem sido muito inferiores aos encontrados na polpa in natura, estes teores ainda são

muito elevados quando comparados com os valores obtidos para outros frutos, que

são considerados pela literatura como ricos em AA, como por exemplo os frutos de

acerola e camu-camu.

Os teores de AA das polpas liofilizada e in natura dos frutos de Buchenavia

tomentosa, obtidos pelas diferentes condições de extração se encontram na Tabela 1.

Tabela 1. Teores de ácido ascórbico das polpas liofilizada e in natura dos frutos de

mirindiba obtidos pelas diferentes condições de extração.

Condição de extração

Teor de ácido ascórbico (mg/100 g)

Liofilizada In natura

Ácido metafosfórico 1% 1439,13 a 7365,73 a

Ácido metafosfórico 3% 1147,33 a 7432,40 a

Ácido oxálico 0,5% 1337,67 a 7315,70 a

Ácido perclórico 10 % e ácido

metafosfórico 1% 1503,33 a 8591,17 a

Ácido acético 8%, EDTA 1 mmol L-1, ácido

sulfúrico 0,15 mol L-1 e ácido metafosfórico

3%

1496,13 a 13272,63 b

* Médias seguidas da mesma letra, nas colunas, não diferem significativamente pelo teste de

Tukey (p = 0,05).

De acordo com análise estatística, Tabela 1, nota-se que para a polpa

liofilizada não houve uma variação significativa no teor de AA em relação à condição

de extração, demonstrando que as condições de extração não influenciam no teor de

AA obtido. Já para a fruta in natura, é possível observar que a condição de extração

influencia no teor de AA, no entanto, apenas a extração utilizando uma solução de

ácido acético 8%, EDTA 1 mmol L-1 ácido sulfúrico 0,15 mol L-1 e ácido metafosfórico

3% diferiu das demais, apresentando o maior teor de AA (13272,63 mg 100 g-1). Na

Figura 4 encontra-se o cromatograma obtido para a melhor condição de extração da

polpa in natura dos frutos de mirindiba.

Page 13: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

9

Figura 4. Cromatograma obtido para determinação do teor de ácido ascórbico na polpa in natura dos frutos de mirindiba submetidos à solução extratora contendo ácido acético 8%, EDTA 1 mM, ácido sulfúrico 0,15 M e ácido metafosfórico 3%.

Este resultado corrobora com os estudos de Franke et al. (2004), onde foi

possível observar uma maior extração de AA em diferentes frutos, utilizando solução

extratora constituída de ácido metafosfórico 1%, ácido acético 8%, EDTA 1 mmol L-1,

ácido sulfúrico 0,15 mol L-1 e ácido metafosfórico 3%. Ainda segundo estes autores,

durante o processo de extração pode ocorrer a degradação do AA e a presença dos

ácidos metafosfórico, acético, sulfúrico vão auxiliar na inibição da oxidação do AA,

enquanto o EDTA vai complexar os íons metálicos presentes, dessa forma será obtido

um maior teor de ácido ao final da extração.

O maior teor de AA encontrado na polpa in natura em relação aos

apresentados pela polpa liofilizada pode ser justificado tendo em vista uma possível

Page 14: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

10

diminuição dos processos oxidativos do ácido ascórbico, bem como uma menor

aderência do AA às fibras e tecidos in natura. Outras justificativas para as diferenças

encontradas entre os teores de AA, podem ser relacionadas também com a

sensibilidade do AA ao calor, teor de umidade, oxigênio, pH, temperatura, luz,

presença de íons metálicos (YAMASHITA et al., 2003; UDDIN et al., 2002; FENNEMA

et al., 1993). A perda no teor de ácido da polpa liofilizada é considerada elevada por

se tratar de um processo de liofilização, que é considerado como o melhor método de

secagem de frutos quando comparados com outros métodos. Segundo Marques

(2008), é importante ressaltar que, devido à estrutura porosa dos produtos liofilizados,

um armazenamento inadequado pode ocasionar reações oxidativas que vão

influenciar no teor de ácido ascórbico no produto final.

Outro fator importante para manter o teor de AA nas frutas e vegetais é a

administração da temperatura na pós-colheita. As perdas deste nutriente aumentam

devido aos longos períodos de estocagens, elevadas temperaturas, baixa umidade

relativa, danos físicos e resfriamentos (LEE e KADER, 2000). A concentração de sal e

açúcar e a presença de enzimas também podem contribuir para a deterioração desta

vitamina (RIGHETTO, 2003).

A determinação do teor de AA em alimentos é importante tanto pelo seu valor

nutricional, como também pelo fato de ser usada pela indústria de alimentos como um

aditivo antioxidante (BIANCHI et al., 2009). Segundo Aguiar (2001) a importância de

ingredientes ricos deste nutriente é ainda mais relevante, considerando-se que este

composto não é sintetizado pelo organismo humano, sendo indispensável sua

ingestão pela dieta. Estudos evidenciam que a redução no risco de desenvolvimento

de doenças degenerativas se dá pela combinação de micronutrientes, antioxidantes,

substâncias fitoquímicas e fibras presentes nos alimentos de origem vegetal. Diante

disto, frutos com boas fontes de AA, representam alternativa à inserção na dieta

alimentar dos brasileiros.

5. CONCLUSÃO

De acordo com os resultados obtidos conclui-se que a polpa dos frutos de

mirindiba (Buchenavia tomentosa) apresentam altos teores AA. No entanto,

constataram-se menores teores deste composto nas polpas liofilizadas quando

comparado aos teores apresentados pelas polpas in natura. Em relação às diferentes

condições de extração não foi observado influência destas sobre os teores de AA

apresentados pela polpa liofilizada. Já para a polpa in natura apenas a solução

extratora composta de ácido acético 8%, EDTA 2 mmol L-1, ácido sulfúrico 0,15 mol L-1

Page 15: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

11

e ácido metafosfórico 3% se diferenciou das demais, se mostrando a condição mais

eficiente para extração.

Apesar da diferença entre os valores obtidos para a fruta in natura e liofilizada,

pode-se afirmar que os frutos de mirindiba apresentam altos teores de AA quando

comparados com outras frutas, reconhecidas por apresentarem altos teores deste

composto, sendo todos os valores encontrados nas referências bibliográficas inferiores

aos obtidos neste trabalho. Dessa forma, a mirindiba pode ser considerada como

umas das frutas com maior teor de AA até então relatadas na literatura.

6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

AOAC, Official methods of analysis of the Association of Official Analytical

Chemists, 15ª ed., Arlington, VA, 1990.

AOCS Official Method Da2b-42. Official methods and recommended practices of

the American Oil Chemists Society. 4ª ed., American Oil Chemists Society,

Champaign, USA, 1994.

AGUIAR, L. P. β-caroteno, vitamina C e outras características de qualidade de acerola,

caju e melão em utilização no melhoramento genético. 2001. Dissertação (Mestrado

em Tecnologia de Alimentos), Universidade Federal do Ceará, Fortaleza.

ALVES, R. E. et al. Caracterização de frutas nativas da América Latina. Serie Frutas

Nativas, v.9, p.66, 2000.

ANDRADE, R. S. G. DINIZ, M. C. T.; NEVES, E. A. et al. Determination and

distribution of ascorbic acid in three tropical fruits. Ecletíca Química. v.27, p.393- 401,

2002.

BARCIA, M. T.; Jacques, A. C.; PERTUZATTI, P. B.; ZAMBIAZI, R. C. Determinação

de ácido ascórbico e tocoferóis em frutas por CLAE. Semina: Ciências Agrárias,

v.31, p.381-390, 2010.

BAYNES, J. W.; DOMINICZAK, M. H. Bioquímica médica, 4ª ed., Rio de Janeiro:

Elsevier, 2015.

Page 16: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

12

BIANCHI, M. L. P.; ANTUNES, L. M. G. Radicais livres e os principais antioxidantes da

dieta. Journal of Nutrition. v.12, n.2, p.123-130, 2009.

BURINI, G.; Development of a quantitative method for the analysis of totalL-ascorbic

acid in foods by high-performance liquid chromatography. Journal of

Chromatography, v. 1154, p. 97, 2007.

CABRAL, T. A.; CARDOSO, L. DE M.; PINHEIRO-SANT’ANA, H. M. Chemical

composition, vitamins and minerals of a new cultivar of lychee (Litchi chinensis cv.

Tailandes) grown in Brazil. Fruits, v.69, p.425–434. 2014.

CAMPBELL, M. K.; FARRELL, S. O. Bioquímica, 5ª ed., Cengage Learning: São

Paulo, 2012.

CAMPOS, F. M.; RIBEIRO, S. M. R., DELLA LUCIA, C. M.; PINHEIRO- SANT’ANA, H.

M.; STRINGHETA, P. C. Optimization of methodology to analyse ascorbic and

dehydroascorbic acid in vegetables. Quimica Nova, v. 32, n.1, p.87–91, 2009.

CANUTO, G. A. B.; XAVIER, A. A. O.; NEVES, L. C. et al. Caracterização físico-

química de polpas de frutos da Amazônia e sua correlação com a atividade anti-radical

livre. Revista Brasileira de Fruticultura. v.32, n.4, 2010.

COUTO, M. A. L.; CANNIATTI- BRAZACA, S. G.; Quantificação de vitamina C e

capacidade antioxidante de variedades cítricas. Ciência e Tecnologia de Alimentos,

v.30, n.1, p.15-19, 2010.

FERREIRA, D. F. Sisvar: a computer statistical analysis system. Ciência e

Agrotecnologia. v.35, n.6, p.1039-1042, 2011.

FENNEMA, O. In: Química de los alimentos. Zaragoza, ed. Acribia, Spain, 1993.

FRANKE, A. A.; CUSTER, L. J.; ARAKAKI, C.; MURPHY, S. P. Vitamin C and

flavonoid levels of fruits and vegetables consumed in Hawaii. Journal of Food

Composition and Analysis, v. 17, n.1, p. 1–35, 2004.

Page 17: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

13

FREIRE, J. M.; ABREU, C. M. P.; ROCHA, D. A.; CORRÊA, A. D.; MARQUES, N. R.;

Quantificação de compostos fenólicos e ácido ascórbico em frutos e polpas

congeladas de acerola, caju, goiaba e morango. Ciência Rural, v.43, p.2291-2296,

2013.

FURUSAWA, N.; Rapid high-performance liquid chromatographic identification/

quantification of total vitamin C in fruit drinks. Food Control, v.12, p.27-29, 2001.

FRENICH, A. G.; TORRES, M. E. H.; VEGA, A. B.; VIDAL, J. L. M.; BOLANÕS, P. P.

Determination of Ascorbic Acid and Carotenoids in Food Commodities by Liquid

Chromatography with Mass Spectrometry Detection. Journal Agricultural and Food

Chemistry, v.53, p.7371, 2005.

GIANNAKOUROU, M. C.; TAOUKIS, P. S. Kinetic modelling of vitamin C loss in frozen

green vegetables under variable storage conditions. Food Chemistry, v.83, p.33-41,

2003.

HERRERO- MARTÍNEZ, J. M.; SIMÓ- ALFONSO, E.; DELTORO, V. I.; CALATAYUD,

A.; RAMIS- RAMOS, G.; Determination ofl-Ascorbic Acid and Total Ascorbic Acid in

Vascular and Nonvascular Plants by Capillary Zone Electrophoresis. Analytical

Biochemistry, v.265, p.275, 1998.

KABASAKALIS, V.; SIOPIDOU, D.; MOSHATOU, E.; Ascorbic acid content of

commercial fruit juices and its rate of loss upon storage. Food Chemistry, v.70, p.325,

2000.

KALL, M. A.; ANDERSEN, C. Improved method for simultaneous determination of

ascorbic acid and dehydroascorbic acid, isoascorbic acid and dehydroisoascorbic acid

in food and biological samples. Journal of Chromatography B: Biomedical

Sciences and Applications, v.730, p.101, 1999.

LEE, S. K., KADER, A. A.; Preharvest and postharvest factors influencing vitamin C

content of horticultural crops. Postharvest Biology and Technology, v.20, p.207–

220, 2000.

Page 18: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

14

LIMA P. C. C.; SOUZA, B. S.; BORGES, S. S.; ASSIS, M. D. O. Caracterização e

avaliação de frutos de aceroleira. Revista Brasileira de Fruticultura, v.36, n.3, p.

550- 555, 2014.

LISIEWSKA, Z; KMIECIK, W Effects of level of nitrogen fertilizer, processing conditions

and period of storage of frozen broccoli and cauliflower on vitamin C retention. Food

Chemistry, v.57, p.261, 1996.

LORENZI, H. Árvores brasileiras: Manual de identificação e cultivo de plantas

arbóreas do Brasil. 3º ed. Nova Odessa: Instituto Plantarum, v.2, p.384, 2009

MARQUES, L.G. Liofilização de frutas tropicais. 2008. 293 f. Tese (Doutorado em

Engenharia Química), Universidade Federal de São Carlos, São Carlos.

MARQUETTE, N. F. S.; VALENTE, M. C. Flora da Reserva Ducke, Amazonas, Brasil,

Combretaceae. Rodriguésia, v.56, n.86, p.131-140, 2005.

MARSHALL, P. A.; TRENERRY, V. C.; THOMPSON, C. O. The determination of total

ascorbic acid in beers, wines, and fruit drinks by micellar electrokinetic capillary

chromatography. Journal of Chromatographic Science. v.33, p.426-431, 1995.

O’CONNELL, P. J.; GORMALLY, C.; PRAVDA, M.; GUILBAULT, G. G. Development of

an amperometric L-ascorbic acid (Vitamin C) sensor based on electropolymerised

aniline for pharmaceutical and food analysis. Analytica Chimica Acta, v.431, p.239-

247, 2001.

OLIVEIRA, R. G.; GODOY, H. T.; PRADO, M. A. Quantificação dos isômeros ácido L-

ascórbico e ácido D-iso- ascórbico em geleias de frutas por cromatografia líquida de

alta eficiência. Química Nova, v. 35, p. 1020-1024, 2012.

OLIVEIRA, R. G.; GODOY, H. T.; PRADO, M. A. Otimização de metodologia

colorimétrica para a determinação de ácido ascórbico em geleias de frutas. Ciência

Tecnologia de Alimentos, v.30, n.1, p.244- 249, 2010.

PHILLIPS, K. M.; TARRAGO- TRANI, M. T.; GEBHARDT, S. E.; EXLER, J.;

PATTERSON, K. Y.; HAYTOWITZ, D. B., et al. Stability of vitamin C in frozen raw fruit

Page 19: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

15

and vegetable homogenates. Journal of Food Composition and Analysis, v.23,

p.253–259, 2010.

PIMENTEL, F. A.; CARDOSO, M. G.; SALGADO, A. P. S. P.; AGUIAR, P. M.; SILVA,

V. F.; MORAIS, A. R.; NELSON, D. L. A convenient method for the determination of

moisture in aromatic plants. Química Nova, v.29, p.373-375, 2006.

RIGHETTO, A. M. Caracterização físico-química e estabilidade de suco de acerola

verde microencapsulado por atomização e liofilização. Tese de Doutorado, FEA/

UNICAMP, p.176, 2003.

RUFINO, M. DO S. M.; ALVES, R. E.; BRITO, E. S.; PÉREZ- JIMÉNEZ, J.; SAURA-

CALIXTO, F.; MANCINI-FILHO, J. Bioactive compounds and antioxidant capacities of

18 non-traditional tropical fruits from Brazil. Food Chemistry. v.121. p.996-1002, 2010.

SANDOVAL, M.; MELCHOR, V.; OKUHAMA, N. Antioxidante and biological properties

of Myrciaria dúbia: role in cytoprotection. Free Radical Biology and Medicine, v.31,

p.S37- S37, 2001.

SCHERER, R., RYBKA, A.C.P., GODOY, H.T. Determinação simultânea dos ácidos

orgânicos tartárico, málico, ascórbico, e cítrico em polpas de acerola, açaí e caju e

avaliação da estabilidade em sucos de caju. Química Nova, v.31, n.5, p.1137-1140,

2008.

SHEKHOVTSOVA, T. N.; MUGINOVA, S. V.; LUCHININA, J. A.; GALIMOVA, A. Z.;

Enzymatic methods in food analysis: determination of ascorbic acid. Analytica

Chimica Acta, v.573-574, p.125-132, 2006.

SILVA, M. A. B.; MELO, L. V. L.; RIBEIRO, R. V.; SOUZA, J. P. M.; LIMA, J. C. S.;

MARTINS, D. T. O.; SILVA, R. M. Levantamento etnobotânico de plantas utilizadas

como anti-hiperlipidêmicas e anorexígenas pela população de Nova Xavantina-MT,

Brasil, Revista Brasileira de Farmacognosia, v.20, n.4, p.549-562, 2010.

SPÍNOLA, V.; EULOGIO J. LORENT- MARTÍNEZ, E. J.; CASTILHO, P. C.

Determination of vitamin C in foods: Current state of method validation. Journal of

Chromatography A, v.1369, p.2–17, 2014.

Page 20: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

16

STANA, M.; SORANA, M. L.; MARUTOIUB, C. Extraction and HPLC Determination of

the Ascorbic Acid Content of Three Indigenous Spice Plants. Journal of Analytical

Chemistry, v.69, p.998–1002, 2014.

TUDELA, J. A.; ESPÍN, J. C.; GIL, M. I. Vitamin C retention in fresh-cut potatoes.

Postharvest Biology and Technology, v.26, p.75, 2002.

UDDIN, M. S., HAWLADER, M. N. A., LUO DING & MUJUMDAR, A. S. Degradation of

ascorbic acid in dried guava during storage. Journal of Food Engineering, v.51,

p.21-26, 2002.

VALENTE, A.; SANCHES- SILVA, A.; ALBUQUERQUE, T. G.; COSTA, H. S.

Development of an orange juice in-house reference material and its application to

guarantee the quality of vitamin C determination in fruits, juices and fruit pulps. Food

Chemistry, v.154, p.71-77, 2014.

VERSANI, A.; MATTIOLI, A.; PARPINELLO, G. P.; GALASSI, S.; Rapid analysis of

ascorbic and isoascorbic acids in fruit juice by capillary electrophoresis. Food Control,

v.15, p.355, 2004.

YAMASHITA, F.; BENASSI, M. T.; TONZAR, A. C.; MORIYA, S.; FERNANDES, J. G.

Produtos de acerola: estudos de estabilidade de vitamina C. Ciência e Tecnologia de

Alimentos, v.23, n.1, p.92-94, 2003.

Page 21: Determinação do teor de ácido ascórbico em frutos de · PDF fileO ácido ascórbico, comumente denominado de vitamina C, é um composto com características nutricionais importantes

Monografia de TCC – Química – Bacharelado – UFSJ - 2015

17

Anexos

Tabela 1A - Análise de variância com aplicação do teste F (0,05%) para os valores determinados de ácido ascórbico nos frutos in natura e liofilizados de mirindiba, avaliando as condições de extração.

FV GL SQ QM FC Pr>Fc

amostra 1 411900415.88 411900415.88 529.65 0.00

extração 4 41769815.84 10442453.96 13.43 0.00

amostra*extração 4 37029884.18 9257471.05 11.90 0.00

erro 20 15553560.91 777678.05

Total corrigido 29 506253676.81

CV (%) =

Média geral:

17.32

5090.12

Número de observações: 30