Ensaio Imunossorventeligado à enzima-

ELISA

M.V. Thaís Gasparini Baraldi

Mestranda em Medicina Veterinária

Laboratório de Pesquisa em Suínos – FCAV/Unesp

Prof. Helio José MontassierResp. Disciplina Imunologia

Veterinária

Melhores Métodos Diagnósticos

5 pré-requisitos:•Rapidez• Simplicidade• Sensibilidade• Especificidade •Baixo custo

MURPHY et al. (1999)

Por que realizar testes diagnósticos?

Enzyme-linked immunosorbent assay - ELISA

• Teste de ligação primária

• ELISA indireto

• ELISA competitivo

• ELISA sanduíche (de captura)

• ELISA competitivoDETECÇÃO DE ANTÍGENOS (Ag)

DETECÇÃO DE ANTICORPOS (Ac)

Cuidados na colheita de soros para uso no

ELISA

Etapas ELISA

1. Diluição do soro sanguíneo2. Incubação3. Lavagem4. Anticorpo conjugado à enzima5. Incubação6. Lavagem7. Substrato8. Incubação9. Solução de parada 10. Leitura

COR

ELISA INDIRETO

BOVINOS:- Detecção de Acs anti-BVDV, anti-BoHV, anti-Paramyxovirus (Parainfluenza bovina), etc.SUÍNOS:- Detecção de Acs anti-SIV, anti-Circovirus, anti-Parvovirus, anti-Mycoplasma, anti-Actinobacillus, etc.CÃES:- Detecção de Acs anti-Virus da cinomose, anti-parvovírus, anti-vírus rábico, anti-leptospira, etc.

ELISA INDIRETO

ELISA-SANDUÍCHE (Captura)

ELISA COMPETITIVO- detecção de Acs

BOVINOS:- Detecção de Acs anti-FMDV.SUÍNOS:- Detecção de Acs anti-SIV.

Ensaio Imunoenzimático

VANTAGENS

• Alta sensibilidade

• Boa especificiade

• Baixo custo

• Kits

• Versatilidade (amostras individuais e grande escala)

DESVANTAGENS

• Aparelhos para a lavagem das placas

• Espectofotômetro-leitura da reação

• Reações inespecíficas

• Problemas na pureza do antígeno para alguns tipos de vírus

Thaís Gasparini Baraldithaisbaraldi@hotmail.com

Obrigada!