Universidade Federal de Uberlndia Instituto de Cincias Biomdicas rea de Cincias Fisiolgicas Disciplina de Biofsica

Tema: Determinao do teor de Caseina no leite (Pela reao do Birueto). Prof. Dr Elisngela Rosa Cordeiro Discentes: Fernanda Rodrigues Silva 11111MED045 Laura Jorge Diniz Povoa 11111MED052 Lusa Vieira Tinoco 11111MED058 Mariana Menezes de Rezende Vieira 11111MED049 Matheus de Oliveira Machado 11111MED050 Wilson Brabo Formigosa Neto 11111MED051

Uberlndia 2011

Introduo Os mtodos para a determinao da concentrao de protenas totais so muito variados, no entanto, as metodologias mais utilizadas so as espectrofotomtricas. Espectrofotmetros so instrumentos capazes de registrar dados de absorbncia ou transmitncia em funo do comprimento de onda. Este registro chamado de espectro de absoro ou de espectro de transmisso, segundo o dado registrado for de absorbncia ou transmitncia, respectivamente. O espectro de absoro caracterstico para cada espcie qumica, sendo possvel a identificao de uma espcie qumica por seu espectro de absoro. Ao longo dos anos, muitos mtodos espectrofotomtricos, tm sido propostos para a determinao de protenas totais, porm no existe uma metodologia considerada de uso universal para todos os meios. Um dos mtodos utilizados para dosagem de protena chamado de mtodo do Biureto (reagente analtico feito de hidrxido de potssio KOH e sulfato de cobre (II) CuSO4 ).Esse mtodo faz uso da propriedade de ons Cu2em meio alcalino, que reagem de modo quantitativo com as protenas. Desta reao (reao de biureto) resulta uma colorao prpura intensa, que absorve fortemente a radiao a 540nm. Este fato pode ser explorado para se determinar por colorimetria a quantidade de protena de uma soluo. A cor desenvolvida numa reao de ons de Cu2 em meio alcalino com estas protenas deve-se exclusivamente s ligaes peptdicas e a sua intensidade proporcional a quantidade de tais ligaes. Utilizou-se o leite para fazer a demonstrao de como utilizar um espectrofotmetro. O leite essencial numa dieta bem balanceada e possui diversos nutrientes e substncias fisiologicamente ativas ele composto por 87,5% de gua, 3,6% de gordura, 4,5%de lactose, 0,8% de sais minerais e 3,6% de protenas, h trs tipos de protenas diferentes: 7-12%de -Lactoalbumina, 2-5% de Lactoglobulina e o restante de casena. Objetivo

Colocar em prtica os contedos ministrados em sala de aula sobre o manuseio de um espectrofotmetro, para assim poder analisar a concentrao de casena e o valor nutricional do leite.

Materiais Reagente do Birueto (pesar 0,075g de CuSO 5HO e 0,3g de tartarato duplo de sdio e potssio, dissolvelos em gua destilada completando o volume a aproximadamente 25ml. Juntar, sob agitao, 15ml de NaOH 10% e completar para 50ml); Padro de Casena (5 mg/mL); gua destilada; Leite; 1 espectrofotmetro (540nm); 7 tubos de ensaio em uma estante; 1 pipeta graduada de 5mL; 2 pipetas graduadas de 10 mL; Metodologia No laboratrio de Biofsica os grupos ocuparam suas bancadas, as quais continham relatrios a serem seguidos no decorrer da aula prtica. Neste relatrio havia uma tabela a qual continha os valores a serem adicionados dos materiais citados acima.

TUBO (N) 0 1 2 3 4 5 6

GUA DESTIL. 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5 3,0

CASIN A (5mg/m L) 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 1mL leite

CASEN A (mg/mL)

X

REATIV O BIURET O 5 5 5 5 5 5 5

ABSORB . 540nm

diludo (1:100)

Aps os clculos da casena e da absorbncia constatamos os seguintes resultados:

TUBO (N) 0 1 2 3 4 5 6

GUA DESTIL. 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 1,5 3,0

CASIN A (5mg/m L) 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 1mL leite diludo (1:100)

CASEN A (mg/mL) 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 X

REATIV O BIURET O 5 5 5 5 5 5 5

ABSORB . 540nm 0,069 0,148 0,218 0,275 0,365 0,178

Grfico da relao, absorbncia por concentrao de casena, baseado nas solues montadas durante a aula prtica:

C n e t a d C s n o c nr o e a e a0 ,4 0,3 5 Ab orb nc s ia 0 ,3 0,2 5 0 ,2 0,1 5 0 ,1 0,0 5 0 0 5 1 0 C s n ae a 1 5 A bsorbncia L ar (A ine bsorbncia) y= ,0 6 x+ ,0 7 0 24 0 03

Valor da concentrao de casena: y= 0,0264x + 0,0073 0,178 = 0,0264x + 0,0073 x = 0,1707 0,0264 x = 6,46 mg/mL Ou: 2,5 ----- 0,069 x ----- 0,178 x = 6,46 mg/mL Mdia da quantidade de casena: x = 6,46 + 6,449 2 x = 6,46 mg/mL Concentrao de casena em 100mL: 6,46mg ----- 1mL x ----- 100mL x = 646 mg/100mL de leite.

Em cada 100mL de leite encontramos 646mg de casena. Quantidade adequada de casena: 200mL ---------- 6,0g 100mL ---------- x 200mL x = 600g/mL x = 600g/mL / 200mL x = 3g ou x = 3000mg 3000 . 0,82 => 2460mg ou seja, 2460mg de casena em 100mL de leite. O valor de casena encontrado em nossa amostra de leite foi de 646mg/100mL, abaixo do valor adequado, segundo o valor nutricional do leite, que diz que 82% das protenas esto na forma de casena. Ao verificar na embalagem de leite integral foi constatado que, em 200mL de leite, 6g so de protena e, 82% desse valor, na forma de casena. - O que ocorre com a casena do leite quando o valor de pH fica abaixo de 6,5? Como o ponto isoeltrico (ponto em que ela se precipita) da casena 4,6 abaixo do valor de 6,5 ela tende a coagular. Bibliografia HENEINE, I. F. et al. Biofsica Bsica. Mtodos Biofsicos de Estudo. Atheneu. 1996. p. 175-87. http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/index.html http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/componentes.html