“Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

148
1 Universidade de São Paulo Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto Departamento de Química Programa de Pós-Graduação em Química “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo via simulação molecular”. Davi Serradella Vieira Orientador: Léo Degrève Tese apresentada à Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo, como parte das exigências para a obtenção do título de Doutor em Ciências, Área: Química RIBEIRÃO PRETO -SP 2007

Transcript of “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

Page 1: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

1

Universidade de São Paulo Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto Departamento de Química Programa de Pós-Graduação em Química

“Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo via

simulação molecular”.

Davi Serradella Vieira

Orientador: Léo Degrève

Tese apresentada à Faculdade de

Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto da

Universidade de São Paulo, como parte das exigências

para a obtenção do título de Doutor em Ciências, Área:

Química

RIBEIRÃO PRETO -SP

2007

Page 2: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

2

FICHA CATALOGRÁFICA

Vieira, Davi Serradella

Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo via simulação molecular.

Ribeirão Preto, 2007. 147 p. : il. ; 30cm

Tese de Doutorado, apresentada à Faculdade de Filosofia

Ciências e Letras de Ribeirão Preto/USP – Área de concentração: Química.

Orientador: Degrève, Léo.

1. Xilanases. 2. Termoestabilidade. 3. Ligações de hidrogênio.

4. dinâmica molecular.

Page 3: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

3

Conteúdo �

������ ���������������������������������������������������������������������������������������������� �

��� ����������������������������������������������������������������������������������������������� ��

������������� ��������������������������������������������������������������������������������������

���������������������������������������������������������������������������������������������������

� ������ �������������������������������������������������������������������������������������� ��

���������������� ��� ������ ���� ��������!�������������������������������������� ���

���������������� ������������� � ��������������������������������������������� ���

��������������� ������� ���������������������������������������������������������������� ���

���������"��#��� $�� ����� � ����!��������������������������������������������������� "%�

��������� ����������������������������������������������������������������������������������� ���

&�'����������������������������������������������������������������������������������������������� (��

���������(��#��)�������������������������������������������������������������������������� ("�

�����! ������������������������������������������������������������������������������������� ��

�����"���������������� ��������������������������������������������������������������� �

� ���"�������������#� ������������������������������������������������������������������ $�

�%���&� '����"���������������������������������������������������������������������� (�

������� ���)�����������)�� ������������������������������������������������������ ��

�$�������������� ����������� ������������������������������������������ *�

�(���+����� ������ ��������������������������������������������������������������� %,�

�(�����-���������#���.���������/��������������������������������������� %,�

�(�����&�����0������������' ��� ��������������������������������������������� %��

�(� ���&� '�������� ������������� ������������������������������������� %��

�(�%���1�2�)������3����24 ���� ����������������������������������� %��

�(�����1�2�)������3����24 ���� ������������������������������������ %��

Page 4: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

4

�(�$���5���������#���������#� �� ������������������������������������������ %��

�(�(���-������2������������������������������������������������������������������� %��

�(������ ��2������� ���������������������������������������������������������� %��

�����6�� 3�� ������������� ��������������������������������������������������� %$�

�������������* �� ���������� +� ���������� �� ���������#�� � �����������

,��� ���� ����������������������������������������������������������������������������������������� ���

%�����-����������������)�� ��������������������������������������������������������� %��

%�������6�7�� ����8� ���������������������������������������������������������������� %��

%�������6�7�� ����91����������������������������������������������������������������� �%�

%��� ����� ���)�� ����������������������������������������������������������������������� $��

���������%���� � ��������� �� �-.����! ����������������������� ������ (�

������-����������������)�� ��������������������������������������������������������� $ �

�������� ���)�� ����������������������������������������������������������������������������� $$�

����������������-/������0�� ��1 �� ������������������������������������������������ ��

$ ���� �:�� �;� ��� ��������������������������������������������������������������������������� $(�

$ ���� �1�2�)����� �3����24 �� � � ����������� ��������������� (,�

$�������-����������������)�� ��������������������������������������������������� (,�

$������������ ����8�� ������������������������������������������������������������ (,�

$������������ ����91�������������������������������������������������������������� ���

$��������� ���)������������������������������������������������������������������������� *(�

$ � �� �1�2�)����� �3����24 �� � � ������������ ��������������� **�

$� �����-����������������)�� ��������������������������������������������������� **�

$� ������� ���)����������������������������������������������������������������������� ��%�

�������������2��� �����23����24�� ��� ��� -���������� ��� ���������� �"��

(���� �&��7 � ���� � ��� ������ �����.��� �����������������������������(�

(�������-����������������)�� ������������������������������������������������� ��(�

(��������� ���)����������������������������������������������������������������������� � ,�

Page 5: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

5

(���� ��� � ���� ������ ���� ��0����� ���������������������� � ,�

(�������<�������8��=�&!�>�-����������������)�� ����������������� � ,�

(�������<�������91�=�&!�>�-����������������)�� ������������������ � ��

(��� ����� ���)����������������������������������������������������������������������� �%$�

�� ����/����� ����������������������������������������������������������������������������� ����

Page 6: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

6

Resumo � 6�� 7�� ���� ?��� ������@A� � ����� ��������� ���� ��#������ ��2 �����A�

�������������3�������������2�)���B��A%����������� �������7�� A�������

0 � ��� ������������� 3�������;����� �� ������ C� 2� ��� ���� ����

0����� ��;2���� ��� 7�� ���� �� ������ � �� �������� �� ����� ���

0� .��� ��� ��� ����A� �� .��� � 7�� � /� 3��������� ��0� �� ������ ���

������������#��������������������������2 � �?�0��' �������� ��#���

���� ��������@A� ���� � ��� � . ������ ��� ���������� �������� ���������

����� ������ 6� ��������0������� �� � �������������� ���� 7�� � ���� ��

������������ ����� ��#���� ����� 2� ��� � ��������0����� ��;2���� �� ��������� .��

�� 7�� ���� �4�� ������� 6�� 7�� ���� ���������A� �8�A� ��� ��������� ;����

��D�� ?�������� ���� 0��/��� ��������� �������@� �� ����������A� �91A� ���

���������;����(,D��?����7��������� 2���� ����� �����������@� �����

������� �������#�� ��� ���� �������� ��� �� '����� C�� �������� �����

��������� ����� ����� ��� ����� E-C"C<�*$?% 6�@� �� �� �����)��� ��������

��������2���E-C"6�<� ����C��0F���#����� ��0�3��/� ������ ���������� ���

��������A�� ��2/��������� '����������������� �����������0���������7�0����

���������� ������C����������������������2���������� �����7���4 ������

�����2� ���������������2�)��� ��� �����7�� �����8�����91>����� ���#��

�����2� ������0������A�.��/������� ������A��������.��������������2� ���

��#��� ����A� �� ���� �� ���� ��� ����2��� G�� ��#��� ����� ��� ����� H0���

���3I������0������������ ��������C��� ������ ��������2�)������3����24 ���

� ���J� ������������ �� �� ���� ��� �� �� �� 2�� ��� ������ �� ��� � ���� ��

��������� ��������� �7������ ���� �� ����3��� ��� �� ������ ����

��������0�������� �7�0���� ���� ��� ������ �� �� ����� ������ .��

��������3�� ��� �� ������� ������� ��� �� ���� ��� �����3 ���� +���

�����#������ ��������%�������������2����.������������� ���� ��91����� ����

��8�A� ���� �������� ��#��� ���� �� ��������� ������� ���� �������������� �

�8��� &�� �� � ���� 2���A� � ��� � �8�� . ��� � �91A� � ����� �� ���

�0������ ��� ����� �� ������������� ��� ��� ���� ��J��2���� ��� �� �����

���0���������������� �������2���K� 3�������� ������ ��� ����������

�0������������������������ ����)���� ������������������� ��0�������

Page 7: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

7

Abstract 93��� �L����7L� ����?��� ������@������������0L���#�����������2 ����� ��

���� ���3L����L��� �3��B��A%�0� ������ �3��7L� ��� ��3� A� �3�������0 � ��

3������������ � � �����93��2����0�����3 ���2�������� ������� �3��7L� ���� ���

��� ��� ���� �������� � � � �3�� ����0���3� 2� ���������� M3� � �3�� 7L� � ���

3L����L���� ����3�23������������� ����� ��������������3����2 � �����#���93���

��������� ����� ��� �3�� �# �2�� ��� ������ �3�� �� �� ��� �3���� �� �3�������

���� � � �3�� ����0���3� 2� ��������� 93�� ��.����� ����������� ��� �

0�����3 ���2����L� ����� 7L� ��� � ����� �3������0����L� �� 3�23� ��� ��L� ����

7L� �� 93�� �����3����A� �8�A� ?����� ��������� �������@� �� �3�����3����A� �91A�

?������� ����� �� ���������@�7L� ����M�����������0L����������L �����

������� ��� 93�� �����L� ��������� ��� �3���� � �L���� ��� ������ ���������L�

������� ��M3�����3��������L���������������� ������93���0F����#������3�����L�������

2��� ����� � ��23�� � � �3�� ������� �3�� ��� ����� ��0��� ���� �3�� 7L� ���

�3������0����L��93���L������M������������0L��3��E-C"C<*$�?% 6�@�������������

�� �3���������� �L ���� ������� �� M���� ���������� 0L� �3�� E-C"6�<� ���

��N2�� � � �3�� ���������� � 2�� ����� ��� ��� �,D��� 93�� ������� �0�� ��� M��3�

0��3� 7L� ���� M���� ��������� � 93�� �7���� ��� ��� �M�� N� ��� ��� ��2�� �� M��

��� �������� ��8�� ���91>��3��������� ���� ���#��� ��3�23�L���0�������������0L�

�3�� ��������� ���� �� �� 2���� ���� ��� 93�� ���� �� ��2�� � �73�0���� ��2��

��#��� ��>� �3��� ��� �3�� �3�0� ���� �� 6� N� �� ��� H��� ������I� ����� � M��

��� ��������3���L0��� �����������3������������3��7L� ������3�����#���� �����

93�� � ���J� ���������� 3L���2� � 0� ��� �� ���� 0���2��� ���M� ��� �7��� � ��

2���� �� 2�3� �3�� �3������0����L� ������� ���� 0��M�� � �3�� �M�� � �L����� !�� M��

�����0��������� ���L��%��3�2���������������� ��� ��3���91�M��3� ���������� ��3��

�8�>� ��3� ������������0�� �� ������������ �� 2������ ������� � ��8���! �

�3������� �������3���0�����A��3���3�����������������3����� J��2�� ���� ���

���������0���3����0����L�����3���3�0����� ����� ��������K��������� ���� ��3��

��� ��L� ���� �3�� �0������ M�� ��������� 0��M�� � �3�� 7L� ���� �� ��� � � 0��

�22������ �3�� �3�� ���#��� � � ��2���� ��� �������� 9M�� M���� ��������� M����

�� �� � � �3�� ���#�� ����� ������� 2� �3��3L����L�������3 �������������� � � �3��

����������

Page 8: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

8

Lista de figuras �

5��� �����6�52����2��� �3���2��0� ���������������� ���3���2��0� �

�������?@����������/��������2���2���?�������#�����3�@���?0@�������

���/��������2��

5��� ����"6�1�2����������0������ ����������#�������� ���A��7�� ��A���

�0������ ��2��� ����� ��� ���� C�� �������� ��� ������ ��#�� �� � ���� ������

���������������������#�����3��

5��� �� ��(6� � ��2�� ��#��� ��� ������� ��� � ���� ��� �������� �� ������ ���

�������?�����@����������?��@���

5��� ��"��6�1�2�)���B��A%����������� �������7�� ��

5��� �� "�"6� <�0���������� ��� �������� ������� ��� ��� ��� 7�� ���� �91�

?�� �@����8��?�����@��

5��� �� "�(6� ����������� ��� �� �������� � �8�>� �%��O ?������@A�

�*��O ?������@����$�(O �?����2���@��9��������������������

5��� �� "��6� ����������� ��� �� �������� � �91>� $��*O ?������@A�

���$O ?������@����$��O �?����2���@��9��������*%����������

5��� �� "�%6� -������� ���������� ��� E�� � �8��� 6�� �����)��� ���� ��������

�������������E�� ��91������� �������������)��� ��8���

5��� ��(��6���������������� ��� ������7�� �����8�����91�F ��� �������

� ��2����������������

5��� ��(�"6�+ �)������������0����������26P ?�@��

5��� ��(�(6�&�����0��������� ��2���������A�+?�@A��������� �� �������������

��������7������������ ���2�� ����

5��� �����6�-"<&?�@�����7�� ����8�� �������� ���������������

5��� �� ��"6� -"<&� �/���� ���� ������� ��� � 7�� ��� �8�� �� ������ ����

�����������

5��� ����(6������������������7�� ����8�A��������)������������������E�L�

������������������������

5��� �����6�&0������3?�@�����7�� ����8�� �������� ���������������

Page 9: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

9

5��� �� ��%6� �������� ������� ��� ��� ��� ��.������ �� 7�� ��� �8�� ��

������ ���� ����������� &�� ������ ���� #��)��� ���� ����� ���� ��� ���

����������

5��� ����6�-"<&?�@�����7�� ����91���,D���

5��� �����6�-"<&?�@�����7�� ����91� �������� ���������������

5��� �����6� -"<&?�@� ��� � 7�� ��� �91� �� ��#����� ���������A� ��� ���

��������������������4 ��A��������������A����������������2�������

5��� ����76�&0������3?�@�����7�� ����91� �������� ���������������

5��� �����8>�-"<&��/�������������������7�� ����91� �������� ����

�����������

5��� �� ����>� �������� ������� ��� ��� ��� ��.������ �� 7�� ��� �91� ��

������ ���� ����������� &�� ������ ���� #��)��� ���� ����� ���� ��� ���

����������

5��� ��%��6�66<������7�� �����91����8�� �������� ���������������

5��� �� %�"6� � ��2�� �� ������ � ��� �� 7�� ���� �91� �� �8�� �� ������ ����

�����������

5��� ��%�(6�� ��2�������� ����#� ��������7�� �����91����8�� �������� ����

�����������

5��� ����>�KQ��������1:�88� ��8���

5��� ���">�KQ��������1:�8<� ��8���

5��� ���(>�KQ��������1:�<<� ��8���

5��� ����>�� ��2���/������1:�88� ��8���

5��� ���%>�� ��2���/������1:�8<� ��8���

5��� ���>�� ��2���/������1:�<<� ��8���

5��� ����>�� ��2����������1:�88� ��8���

5��� ����>�� ��2����������1:�8<� ��8���

5��� ���7>�� ��2����������1:�<<� ��8���

5��� �� ��8>� R����� ������ �� ������� ������� ��� �� �� �8�� ����� ��� ���

��������.��������������������������C�������������#�����3����������E�(����

�(�A��������������9��*A�(������*A������������9L�$�A�$*A�(*A��,A��$$����(%��

5��� �� ���>� R����� ��� ��� �� ������� ������� ��� �� �� �8�� ����� ��� ���

��������.��������������������������C�������������#�����3����������E�(����

�(�A��������������9��*A�(������*A������������9L�$�A�$*A�(*A��,A��$$����(%��

Page 10: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

10

5��� ����">�KQ��������1:�88� ��91��

5��� ����(>�KQ��������1:�8<� ��91��

5��� �����>�KQ��������1:�<<� ��91��

5��� ����%>�� ��2���/������1:�88� ��91��

5��� ����>�� ��2���/������1:�8<� ��91��

5��� �����>�� ��2���/������1:�<<� ��91��

5��� �����>�1������������� ������ �6��*(�6�2��$��

5��� ����7>�� ��2����������1:�<<��������� ��� ��91��

5��� ���"8>� &���������� ������� ��� �� ���� ��� �� �������� ���0������� ��

7�� ���� �8�� �� �91�� 6�� �� ���� ��� �� ������ ���� �� ���#��� �����

7�� �����

5��� �� �"�6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2����� ��0� ���A� �� ��

��� ������������������������8���

5��� �� �""6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2����� ��0� ���A� �� ��

��� ������������������������91��

5��� ���"(6�KQ�������������1:� ������������������2�������0� ���A��� ��

��� ������������������������8���

5��� ���"�6�KQ�������������1:� ������������������2�������0� ���A��� ��

��� ������������������������91��

5��� �� �"�6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2����� ��0� ���A� ����

��2���J���� ��A����8���

5��� �� �"%6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2����� ��0� ���A� ����

��2���J���� ��A����91��

5��� �� �"6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2����� �� �� ��� �����A� ����

��2���J���� ��A����8���

5��� �� �"�6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2����� �� �� ��� �����A� ����

��2���J���� ��A����91��

5��� �� �"�6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� �� ������ ������A� ����

��2���J���� ��A����8���

5��� �� �"76� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� �� ������ ������A� ����

��2���J���� ��A����8���

5��� �� �(86� KQ����� ����� ��� 1:� ���� �������� ����� ������ ������A� ����

��2���J���� ��A����8���

Page 11: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

11

5��� �� �(�6� KQ����� ����� ��� 1:� ���� �������� ����� ������ ������A� ����

��2���J���� ��A����91��

5��� ���("6�&����������������������������A����8�A��������������1:� ��������

� ��2�� �� ��� .�� �*�,N��������A� ��� .���� ������ ���� ' 2����� 6�� ������ ����

������)������������������������ ���J��2�)�����

5��� ���((6�&����������������������������A����91A��������������1:� ��������

� ��2�� �� ��� .�� �*�,N��������A� ��� .���� ������ ���� ' 2����� 6�� ������ ����

������)������������������������ ���J��2�)�����

5��� ���(�6�1:�� �����������A� ��8����

5��� ���(%6�1:�� �����������A� ��91���

5��� �� �(6� -������� 6��%�A� 6��*(A� 6����(A� 6��� �A� 6���*�A� E�(A� E� �A�

E� $A� E�$ A� E�*�A� E��,*A� 6�2��$A� 6�2��(� �� 6�2�$��� C�� �������� ��� 6���

������ �������A�������E�� �����#�����3���������6�2����#������

5��� �� �(�6� -������� E��,*� �� ��� ��������� %� ���/���� ��� �2� ���

���#������

5��� �� �(�6� -������� E� �?��.���@A� 6��%�?������@� �� ��� ��������� %�

���/��������2�������#������

5��� ���(76�-�������E� $?��.���@A�E�$ �?������@���6�2��(�?�� ���@������

���������%����/��������2�������#������

5��� ����86�+ �������������0���������A�26M?�@����6SC��?E�@���MS�:�?�2@��

5��� �����6�+ �������������0���������A�26M?�@����6SC&�?6��@���MS�:�?�2@��

5��� ����"6�+ �������������0���������A�26M?�@����6S::�?6�2@���MS�C�?�2@��

5��� ����(6��� ��2������.���0���������������E�*�?#�����3�@A��2�%�?��@�

�� ��� ������������/���� ��� �2���� ���#������ 6�����/���� ��� ���#�����

��� �� � ���� ��� �������� ������ ��� ���� ����� ����' ���A� ��� TA� � ���� ���

���������

5��� �� ���6� �� ��2����� �.���0��� ���� �������� E�(?#�����3�@A� 9L��%� ��

��� ��������� ���/���� ��� �2� ��� ���#������ 6�� ���/���� ��� ���#�����

��� �� � ���� ��� �������� ������ ��� ���� ����� ����' ���A� ��� TA� � ���� ���

���������

5��� �� ��%6� �� ��2����� �.���0��� ���� �������� 6��� �?#�����3�@A�

1L���*?��@A� 93����� �� ��� ��������� ���/���� ��� �2� ��� ���#������ 6��

Page 12: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

12

���/���� ��� ���#����� ��� �� � ���� ��� �������� ������ ��� ���� �����

����' ���A����TA�� ����������������

5��� �� ��6� �� ��2����� �.���0��� ���� �������� 6���*�?#�����3�@A�

6�2��?��@������������������/��������2�������#������6�����/�������

���#����� ��� �� � ���� ��� �������� ��������� ���� ����� ����' ���A� ���TA�

� ����������������

5��� �� ���6� �� ��2����� �.���0��� ���� �������� 6����(?#�����3�@A�

6�2�$�?��@������������������/��������2�������#������6�����/�������

���#����� ��� �� � ���� ��� �������� ��������� ���� ����� ����' ���A� ���TA�

� ����������������

5��� �� ���6� �� ��2����� �.���0��� ���� �������� 6��*(?#�����3�@A�

6�2��$?��@������������������/��������2�������#������6�����/�������

���#����� ��� �� � ���� ��� �������� ��������� ���� ����� ����' ���A� ���TA�

� ����������������

5��� �����>�-"<&��������������������������0� ����&!���

5��� ����">�&����� ������ �����)���2��������������������2����B��A%��

5��� ����(>�-������2��������&!������ ��������������

5��� �����>�&����� ����#��)�����7�� ����8�� ������ ������0������&!���

5��� ����%>�-"<&����8�A� ������ �����&!�A����� ��������������

5��� ����>�-"<&���������������8�A� ������ �����&!���

5��� �� ���>� &0������3?�@� ��� � 7�� ��� �8�� U� ��D� � ����� �� �� �4 ��� ���

&!���

5��� �����>�!�� �����������������������3����24 ������7�24 �������0������&!���

5��� ����7>�-�������6� ����E� (���������V����$����#�����3���

5��� �����8>�K�������W���������E�(����E��(�A����#�����3�A�6�2����������

��9L�$*����#������K���.���W�������������2������� ������������ �����

�0����������� F���������' ���� � ����X��������Y��6�����/��������2�

������������� �����������������4 ���������7����� ����,O ����������

�������������������8��U���D�A� ������ ��2������

5��� ������>�-"<&���&!�A� ���0�� ��������������#�A����� ��������������

5��� �����">�-"<&����91A� ������ �����&!�A����� ��������������

5��� �����(>�-"<&���������������91A� ������ �����&!���

Page 13: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

13

5��� ������>�&0������3?�@�����7�� ����91�U�%�D�� ������ �����4 ������

&!���

5��� �����%>�-�������E��$���E��(�A����#�����3�A�6�2������������9L�((����

#����A����0����������� F���������' ���� � ����X��������Y��6�����/����

����2�������������� �����������������4 ���������7����� ���%,O ����

�������������������������91��(,D�A� ������ ��2������

5��� �� ���>� "�� ����� ��� 3���;����� ��� .��� ��� �������� E�(�JE��$� ����

����� ��#����������.�� ���;������

5��� �� ����>� "�� ����� ��� 3���;����� � .�� � ���/��� ��� �2� �����#�� ��

�.�� ���������������������������

Page 14: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

14

Lista de tabelas �

4������ (��6�&���3��� ��0��� ��� �������� ��������� �;��2�� V&8� /� �� �;��2�� ��

������ � ��0 �������������������� A�V&8A�K=JK��������� Q���������K=���

��������� ���������������9��/�����������;����������� �����

4������(�"6�&��� ����������2�)��J���� ������������������������������������

7�� �����

4��������6�&����� �������������1:��������������������

4�������"6�+��?O @����1:�88������������������ ���� ����������#����7�� ���

�8���

4�������(6�+��?O @����1:�<<������������������ ���� ����������#����7�� ���

�8���

4���������6�� ��2����/�������N�������������+��?O @������ ������� ��

����������

4�������%6�+��?O @����1:�88������������������ ���� ����������#����7�� ���

�91��

4�������6�+��?O @����1:�8<������������������ ���� ����������#����7�� ���

�91��

4��������6�+��?O @����1:�<<������������������ ���� ����������#����7�� ���

�91��

4��������6�+�� ?O @� ���1:�88� � ������� ������7�� ����8���6��1:�������

����� �����������4 ���������������?J@��

4�������7>� +�� ?O @� ���1:�88� � ������� ���� �� 7�� ����91�� 6��1:� ������

����� �����������4 ���������������?J@��

4��������86�+��?O @����1:�8<�� ������� ������7�� ����8���

4���������6�+��?O @����1:�8<�� ������� ������7�� ����91��

4��������"6�+��?O @����1:�<<�� ������� ������7�� ����8���

Page 15: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

15

4��������(6�+��?O @����1:�<<�� ������� ������7�� ����91��

4���������6�1:� ��������������������2���������������8����K1:�/��� Q��������

1:�����������"��� ��2���/������1:� �������N����������

4��������%6�1:� ��������������������2���������������91��K1:�/��� Q��������

1:�����������"��� ��2���/������1:� �������N����������

4������ ��6� 1:� ���� �� �8�� .�� ����� ��� � ��2�� �/��� �� ��� .�������������������

�*�,N�����������6���"������������N�����������

4������ ���6� 1:� ���� �� �91� .�� ����� ��� � ��2�� �/��� �� ��� .��������������������

�*�,N����������6���"������������N�����������

4������ ���6� V���� �2��� ��� ��� ������� ��������� ���� � ��2�� �� ��� .����������

�*�,N����������

4������ ���6� +�A� ��� O A� ��� 1:� � ���� � �8�� �� �� �0������ &!��� C�� ������� ���

�7�24 �����3����24 �������0������&!�A�� ������4 �����A������� ��� ��������� �

��2��(����

4������ ��"6� +�A� ��� O A� ��� 1:� � ���� � �91� �� �� �0������ &!��� C�� ������� ���

�7�24 �����3����24 �������0������&!�A�� ������4 �����A������� ��� ��������� �

��2��(����6� ��� �����C�����C���/������������� �������������7�24 ����

���2������0�7���������������E�(����$��

Page 16: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

16

Abreviaturas �

��9���5��������#��������#� ���

:�� �#���;����&���' ���� �������� ������������������ �������2�������� �������

����������� ����������

:�<'���&���' ���� ����X����

:=2���&��7������ ����

:)���&� '������������

����� ��2��

�)���� ��2���/��������2�)������3����24 ���� ���������������������������

���������������������������������.�������

�4���� ��2������������2�)������3����24 ���� ��������������

5>�?���:����2������ ��2������ �������� ��������������������

5 ���+�������������4 ��������2�)������3����24 ���� �������������

�> ?���+ �������������0�����������

�0���1�2�)������3����24 ���?2���@��

�0� �� ���1�2�)������3����24 ���� �������������?�2���@��

�0� � ����1�2�)������3����24 ���� ������������?�2���@��

�0� �� ��� � ������1�2�)������3����24 ���� ������� �����

�0�33���1�2�)������3����24 ���� �������������������� ����������

��� ������

�0�39���1�2�)������3����24 ���� �������������������� �����������������

�0�99���1�2�)������3����24 ���� �����������������������������������

@�0���KQ����������2�)������3����24 ���� ����������������������������������

�������������������������������.�������

Page 17: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

17

@�0>� �� ?������KQ���������������2�)������3����24 ���� ��������������

*)����V�������"��3��M���

�����-������2�������

�)9:���-������ ��.�����#���� �?���#���������.��������/��@��

23������� �������������������������0��/���������������������

24������� ���������������������������� 2���� ����� �������������

Page 18: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

18

Capítulo 1

Estrutura de proteínas e Catálise �

1.1 Estrutura e função de proteínas �

6�� ��������������� ����� ��������������������� ��� ��� ����

��� ������� .�� � ����)���� 6�� �������� ����/���� �4�� ����� ������� ��� ���

�������� ��� ������� ��� .���� �#���� ��� ��2 ���)��� Z�� [� �3����� ���

���������������A���� ����A������������.��� ����� �

6����������������/����.\4 �������� ��������.������)���������

��������A������� ����������� F����������6����������� �����/����� F��

������� �������������������������� ����������� ���������� �����������

��������� ������������ ������� ������������� ��2�� �����C����� ������

�������������������� ��������������������α�3/�����A�B����3������0����6�

��������������������������U��������������� ��� ������������������� �����A���

��FA� �� �������� ��� �� � �#���� ��� ��� ������ �������������A� ����

�� ������� � ������� ���� ���/���� #��� 3�� �� ���� �� �0 ������� "����

������ �����������������������������������������������A��3�������

�0 �����A�U��.�������������������� ����)��� �����#�� �����6��������

.��� ������������������ F�������������0 ��������������� ���

6����������� �����/����0���������� ��2�)������3����24 ���� �������

2�������0� ������� ����� ���������������������������4���� �������A�

���������α�3/�����A���� ������2�� �������������������������� ��

B����3���6����������������������.��� ������������0������������ ����)���

�X ���� �� ��� ��#�� ���� Z�� [� ����A� ���� �7�����A� ������ � ���� ��������� G��

�7�������������/������������2�)������3����24 ����C��������������� ����)��� �

� �� ���������0�������������������������� ��� ��������� � ����)������

# � ���� P ���� 1�2�)��� .������ � ���� ��� ������� ��� � 7����� ��� ������ ��

�� ���0����������� ������������������������

Page 19: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

19

� 6�� � ����)��� � ������������ ��� �� ������ � ������� �� ������

� ��4 ������������������ ���Z%[��"��/��������2������������������ �������

��������� �A����0���� �����������2�)��A������� ���.� ���� ����������#���

������������������� �F� ��� ��0/�� �� �� ������������� Z�[��6�

��������������� � /�������� ��� � ��� ��� �� ��� � ��� �� ��A���

#���.���������� ���� ������������������� ��������#�����0���;2���

Z�A$[��

� 6���� ����������������� ����������������#�����#�����������������A�

�����7�����A����������A��:�������������2 �����#� ������2' ����������#����

��� �2� ����� �� �� ��� �� � ���� � Z�A�[�� C�� ���#� ���� ��2' ����� 2���

�������� ��� ���� ����� ��� � ����)��� 3�����;0���� ����� ��#���� ����

���0���������� Q�������������� ��2��0����W�#�������7�����������:��������

��2� ��.��� �� ������ � ���#�� ��� �������� ������������� �� ������� ��� ���

�2�����2�)������3����24 ����

� C� ��� ����� ��� ��� ������ �� �� ������ ��� ������ �� /� �� ���

.���)��� ���� � ��� ���� �� 0�������� .�� � �� ���� ����� �0������ 6��

����������#����������� ������� �������������������0� ������ ������

��� ��#�� ���� � ��� �� � ������������A� ����� ���� �7�����A� �������������A�

3�����;0���A� # � ���� P ��� �� ��2�)��� ��� 3����24 ��� Z�A�[�� ��� ����������

���#��A� �� � ����)��� ��� ��#�� ���� ������ ���� �������� ��� �� ��� �

������ �� 6� ��� ������ ��� �� ������ � ��� ������� .��� ���� ����� ���

�� ��� �� ��������� �� ��� U�� �������� �������� ��� ����� ���� ����

?�������� �� ��� ��� ]� ���� ����^̂@A� ����� �7������ ���� �� �����)���

������� ����� ��� Z(A�[�� K�� � � ��A� ��2 ������ ����� �2 �� � 2��� ��

0��/���� .�� ��0��#�#��� ��0� �� ���)��� �7������ ��� ��������A� �3�����

����;�����A� �������������� ��.���7�0��������0������� �/����� � ��� ����

Z*A�,[�� 6�� ������ �� ���������#���� �4�� ����� �#��� ��� ������ �������

�7������ ���� �� ��;������ ���� �� �0F���#�� ��� ������� ��� ��� ������ ���

���0���������������A���� �����J�� ��������� �#���� ������������ �A�

�� ���0� ��� ��� �� ���� #��#��� ��� ��� �#��� 0������������� ���� ���

����#����� C�� ������� F�� ��������� �2����� .�� � �������� �������� �����

��� ������ �����)�����0����������� ������������������� ������.������

������� ����� ��#���� ���� ������0�������� Z��A��[�� 6� ��������� � ����

Page 20: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

20

�����)�������� '�������������������� �������������� ������������ ���

��������� �0�� ��� �� � ���������� ���#��� ?� ��� ��� � ��� �����@A�

������������� 2���������������������� ������������������.����������� ����

�������� �����A������0���� ������ �����������2�)���.������������ ����

���0������� ���� ����� � ��#����� Z��[�� � ���� ������ ������� � #����2���A� ��

���#� �����������0������ ������#����� ����Z� ���[��

C� Q ���� ���#� ��� ���� ������' ��� 0���;2��� /� � �2A� �0��' ��� ����

0 � ��� ��� �������� #�#���� 6� �2� ������� ����� �� ����)��� ��� ����� ��

�/���� Z [A����� �����������������������/��A����� ��.� ���� ��������

� �)��A����� ����������������������������.���������2A�� �����������

�����������A�0�7��� �4 �������� �����A���.� �������#�������������

Z�$��([�� 6�/�� ������ � ��� ��������� /� ����� ��#��� ���� �������� ��� �����

������ ���� ��2�)��� ��� 3����24 ��� � ���� �� ��;����� ���/���� ��� �2� Z�A [��

������ ������� ���� ���� ����� �� � ��� �� ��� ��� ������ �� �� ��� ���� �

�.� ��� 0���;2���� 6�� ���/���� ��� �2� � ���2��� ������� ��� ���� 2�����

������� �� ����2���� ��������� ��� ���� ��� ������ ��2�)��� ��� 3����24 ��� .��

���� � ��� ���� � � �� ���� ��� �������� ����/���� Z��[� ?��2�� ���@��

V��� ��� �� ���/���� ��� �2� ������ � ���� �� 2� ���� ����� ��#���� ����

���0������������������������������.��� ������������� ��Z��[��

� ��

������������������

5��� �� ���6� 52�� ��2��� � 3���2��0� �� ������� ������� � �� 3���2��0� �������� ?@� ���� �� ���/���� ��� �2� ��2��� ?������� #�����3�@� �� ?0@� ���� �����/��������2����/������U�Z [��

Page 21: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

21

1.2 Catálise enzimática �� � �� �7������ ��� �� ���)��� � ��� ���� ��� #��>� ?�@� ������������� ?��

��2 �������#��������������������������@���?��@���������?����2 �������#������

�����������������)���.���������� ���������� �����������#@��6���������/�

���� ���� ���������������0�� �������� ��2��������������#�#���<�����������A���

���)���.������ ����������������� �������#��� ����������� �������

��� ������ Q����� C�� ����������� ���� ���������� .�� �������� ��� ��������

0���;2������������ ������6��� ���������� �������������4 ����������A�

���2���A�����������.��������������������� �/��������� ��2' �����Z [��6����

�������������� ���� ��� �0������ /� ����� ��#��� ���� � ���� ����� .��� ��

� ������������������)���Z�� [��

� 6��� ������������� ��������.�.������������0��.�����A�����������

2��� ��� ����� ��2 ���A� ����� ��� �� �� �� ��� ���)��� ������#�� �����

.��� �� ���/���� ���� ���� ���� ��2����A� � � ��2�� /� �� ���#�� ��

�� ������������������/����0���;2����������������������������/����

���������� �������� Z�� [��������� ��.\4 ���� �� ���� � �������� ��2����A�

�� #��� ���0;����� ���� ���� ��� ������ ��� ��� ����� � ��������� �� ��

�����3��� ���������#������ ��������������� �� ������#����

� 6��� ������4����2� ���������' ���������A������7�����A������� ���

��������� ��� ��2� /�����3�����������3#���������4 ������4 ��������

������� ����A������3#��� ��0/���� ���)���� ��������� ������ ?�7������

�����#����@��"�������2���7����������������0���;2����������������� ����)���

���� �� � ������ 6�� � ����� ��� ������ ������ ��� ������ ���� ��� �� ��

������� A������0/�� �� �Q�����.����A����� ������� �2�������Z�[��

� 9������� ��������������� �A��7���������.� ��2����������/�������

-K6� .�� ����� ��� ������������ ��������A� ��2�� �� ��#����� ���� ��� ��

� ��2������ �� �� ������� ����/��� ��#�� 6����A� ������ ��� �#���� ���

���������� ����/��� ���� ���� ����� ��� � ���� � ��������� 6�2��� � �����

��.����������� 2�����.��������/������ ���� ������������� �����������

������� 3�� �� � ���A� ����������7�����A����������� ?�� �� � ��2' ����@� ��

����� ����?���/�����2' ��@���

Page 22: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

22

Coordenadas da reação

Ene

rgia

livr

e, G

Coordenadas da reação

Ene

rgia

livr

e, G

6��� ��������������������������������������)���.������������A�

����0��� �������� � ��� ��� ��.����������������#��������������������

� ����A� �� ����� ��� �� �����A� �0������ �� ����� �������������� V���

�7�����A� �� � ����A%�B�7�� ���A� �� ��������� ��� 7�� ���A� ���� ����2 ���

�������� ������A�2�������2��������3��������A�� ��� �/�����������3��������A���

��0����������2����������A���������������� �����2�����������.��3���������

����������C����<�2����������������/������2 ���������� ����A%�B�7�� �����

� <��� �������� �� ���)��� ���������� ��� ��2����� ���� ���A� �� ����� ��

�Q�������� ����� �����#/������ ��#��A� ����������������#���������Q�����

6�� � ����� ������ ������ ���0����� ��� ��� ��� �� �0�� ��� ����������� � ���

�� ������� �� ������ /� � ��2������ ��� ���� �#���#���� ����� �0�� ��� /�

�� ��� �����������#�A���2�������6����/���.�������2�����������#�����������

����� ��������/��3����0�������

�� ����

�������������������

5��� ����"6�1�2����������0������ ����������#��������� ���A��7�� ��A����0��������2���������������C���������������������#����� �������������������������������#�����3��

5��� ����(6�� ��2����#����������������� ��������������� �� ������ ��� ������� ?�����@� ���������?��@���

Page 23: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

23

� 6����������������������#��/��� ������������������������ ���������F��

������ ������� ��� ��2�� �� �0������ �� ������� � �� �� ���������� 6�

�7���4 ��� ��� ������7�� � �����0������ ���� � ������ ��� �������� ���� 6����3��

P ���� ��� ���,� Z�[A� �� ��� ��0/�� �� ��� ��� ������ ��� ��� ����� ����

����������� .�� ���� ��� � �� /���� ��� ���)��� � ��������A� ����� ����� ���

��� ����������������

� 6� ��2�� �� � ������ ��.������� ��� �� ��� 3�� ��� �� ������ ���

������� �� �� ��� �� ������ ������A� .�� �� ������ � ������ � ��������

�������A� PEEPESSE +⇔⇔⇔+ ��6��� ����A� �����.��.��� ����������A�

��� ����� �� �.���0���� �� ������� 6� � ���� ��� /� 2��� �� ��������� �������

�� ��� ���� �� �� ��� ��� �.���0���� �� ������� 6�� � ����� ��� ����� ��� 3���

���� ��#��� ��� �� ��� � #��������� �� ������ �� ����� /� ������ ���� � ��� �

� ��2�������#���� **G∆ A��������0���������������������� �������6������� ��

� ���� ��� �#���� ��� � ��2�� ��� ������ � ��� ��� �� ��� ������ ��� �� ������ /�

�3������� ��2�������#�����6�#������������������������������ ��2�����

��#���A�����FA���� ��2�������#��������������� �������������� ���

6��#����������������)��������������� �����������#��������������A�

.�� �� �� �� Q����� ��� ���/���� ���� � ��2�� ������ ��� ��� ������ �

0������� ��2/����?� ��2�������#���@������

���������Referências

Z�[�1��<��L��A������ �����A�P ��:��+���� � ������ LA�K�M�_��NA�?�**�@��

Z�[�&��R���A� �̀�R���A������ �����A� �̀3 �P ���L� ��<� �A�K�M�_��NA�?�**�@��

Z [�6��1��1�3 � 2��A�&��1��K���� A�"��"����7A����������� �����������A�<�#���A�<���V��A�

?�**�@��

Z%[�C��9��A�-��&���A�6��V��� A�1��<���A�6��R������A�&��-�����A���������� ������

�� ������� ������A�&��V0���LA�#����!!��

Page 24: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

24

Z�[� 9�� ��� ����23�� A���� ��� �� ������ �� ��� ��� ����� ������ �A� P �� ��� +���� � ��

���� LA�K�M�_��NA�?�*� @��

Z$[� �̀�<��-��3���� A��� !����!��� � �A�(�A��$(A�?�*��@��

Z([�-��&LA�8�� �̀�8� �� A�<��:�A�R��&22���A�"!����!�����A�(""A���*A�?�,,�@��

Z�[�6��"��9��A�9�� �̀�G��#��A�&��6��K�� A��������!�"!A���A�� *A�?�,,�@��

Z*[����R������A�E�� �̀�a��N�A�����#���!����!�����!�� �A�%A��A�?�,,�@��

Z�,[� E�� P �� :����A� -�� P �� V��N���2���A� !�� �� ���� A� V�� &�0����A� �̀� 9����A� ��� 8���� A� <��

V/���A���� ��$������� %�&����������' ����A�"7A�((A�?�**(@��

Z��[� 1�� &�� ���#���A� 6�� 6����A� -�� ��� # � <�3�NA� :�� 6�� V����� �A� �̀� ��� R���2A� :�� �̀�

8��� ��� A���� ��A�((A��� A�?�**�@��

Z��[�9��1������A�!��1��A�"��b����A���� �!����!A�A����*A�?�**(@��

Z� [� R��-/�A� -��& A�"�� +��� �A� �̀� 1�� +� �LA�-��"��& ���A� �̀� ���<���3A����!�(���!�

����!����!�)���A�7�A�**$�A�?�,,,@��

Z�%[����1��8���N�A�"��b����A�"!����!������A�"8�A���*A�?�*�*@��

Z��[� �̀����<���3A�<�����NA�8��9����A�"��b����A�"!��� �!������A�7(A��*(%A�?�**,@��

Z�$[�+��"��-��3���A������ ��&�����A�9���������23�� �?��@A�P �����+���� � ������ LA�

K�M�_��NA�?�**�@��

Z�([�1��&�2�c#�A����d� ���� �̀�A�*� ���������������A�(�A��%,�A�?�** @��

Z��[�1��&�2�c#�A����d� ���� �̀�A��� �!�����!�+ ���A�"8�A�� ,A�?�** @��

Z�*�1��&�2�c#�A����d� ���� �̀�A�"!��� �!������A��8�A�� �*A�?�**%@��

Z�,[�&��<��R����A�1��&�2�c#�A�"!����!������!�,��� ��� ��-A�%�8A���(A�?�,,�@��

Z��[�1��8��A�1��&�2�c#�A����!������A���A����A�?�**$@��

Z��[�1��&�2�c#�A�1��8��A����������A�""�A���,A�?�**$@��

Z� [�1��&�2�c#�A�R��"�����V��A�"��6��&���A�"!��� �!������A��8>"?A�$��A�?�**(@��

Z�%[� �̀�C��8��N���A�6��b��K��-���LA������ �*� ����� �����A�V�� �A�K�M�_��NA�?�*(,@��

Z��[�6��8� �K��A�!� ���<����� �A�V�� �A�K�M�_��NA�?�*�,@��

Z�$[�_��"���A�.����� ����A� �̀�P ���L� ��<� �A�K�M�_��NA�?�*��@��

Z�([�<��#��� A�&������/������!��� �!�����A��%A�?�*��@��

Z��[� E�� 6�� �̀����LA� P �� <� 2��A� � �0���� � ������ �� ����������� ������ �A� <��� 2���

R���2A�?�**%@��

��������

Page 25: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

25

Capítulo 2

Enzimas termoestáveis

2.1 Xilanases

&������ �� �������A� � 7�� � /� �� ������������� ���� 0 � ��� ��

������6��������� �������7�� �/����������������������B�&�7������ ����

����� ���� ��2�)��� B�?��%@� Z�A�[A� ����������� � ��2�� ����� 6� 7�� � /�������

����� � ���� ���������� 3�������;����� ��� �/���� #�2����� ?������� �������

���� ���������� ��� �������������� ���������A� ����� ���� �7�����W� 7���2�� �A�

�0� �7�� �A�7�� A����@��

� �

6�7�� �������������� ������ ��� ���������������� ����A����� ���

��� �������� �������2 � A����������������7����� ����������� ������ �A���

�������������������A������7�����A���������� Z�[���7�������#��4 �������.���

7�� ���������������� ;�����������2 � �����F�� �����������2�)�����#�� ������

���.����2�)������3����24 ��������������# �����P ��� ���������������������

U� ����� ��� �������� Z [�� � ����� 3��������������� ���� ���������� ���

5��� ��"��6�1�2�)���B��A%����������� �������7�� ��

Page 26: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

26

3������������������ ����7�� ��6��� �����.����� ��������� ��������

7�� ���������7���A%�B�7������������ ��� ����A%�B�7�� ������ ��������� ���

7�� ����� ��� ���� ���� ��������� ���� #������ ��2 ������ ����� 0��/���A�

� 2��A� �2�A� ��������������� ���;�������� ���� ���������3��������� �� ��2�)���

�A%�B� �� ����� ��� ����� �� 7�� A� ������ ��� #������ 7�������2X������ ���

�������� ���� #������ Z%A�[��"����0��/���� �� � 2��� ��������7�� ����.��

��� ��������� 3�������;����� ��� ��0���� � 7������ ����� �� ������� �� ��

������� ��� �������#��A� ������� ��� .�� �� ��2 ����� ������ 3������������� ���

�7�� �Z�[���

� 6��7�� ���������������������������������� ����������������2��������

3��������>� � ������ +� ?��0/�� �� 3����� ����� �,@� �� E� ?��0/�� �� 3�����

�������@��6��7�� �������������,�����������A�����������7��������� ���

����������#������ . ���.����7�� ��������������������� ����A�����

�� ����� ������������� ��A����������������������7�� �Z�A$[��V��� ��A���

������������������ ���������7�� ������������������������ ��#��������

��������0�������0����� ��;2���������� ����A�����#�������2� ���� ��������

�������� ���Q������� ���������������Z(���[��9����������������������� ����

������������7�� ���� �������������� �����������0� .��� ������������

6�� 7�� ���� 3��������� � ����� 2���������� �� 7�� � �� ���� � ���������� ��

����A� ������ ��� � �7������ �� ��2 � � ?��� ����� ����� � ��� �� ����� .��

�� �/�� ��� 2����� ����;������ ����� ��#���� ���� ��������@� ���� � ������ �

��������Z$[��C�� ��������������7�� ����/�����0������A������� ������� ��A�

�. ������������������� ���������������A���#���.��������0�� �����4��

�������� �������)��� ��� �� ��� ��� ������ ��� ���������� ��� 0� .��� ��� �

� �Q������������A���� ������ ��� ����������������C���� ����� �6�/����

���K����A���#����U����������������������2�����#�����������0�� �����������

��2 ��������������7� ��Z� [���������������#���.����������7�� ���� ���

�������������0� .��� ����� ������������������,� ,O � ���� �������

������ �� �� ��.� ���� ��� �� ���� ����� ��� ����,O� � �7� ��� 3��24 ����

��2' ���������#����� ������� ���� Z*���[��C�������7�� ���� ����������������

����2 ��������/��3�������0��0� .��� ���Z��[��

� 6� ���� �������� 0����� ��;2��� ��� 7�� ���� ��� ��#�� ��� ������ ��� U�

����� ������>� ��� �������������� ���� 7�� � �� ��� �������� U� ��������0������A�

Page 27: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

27

�������������������������2 �������������������� ������ ����������������

���#��� ?�,��,,D�@� Z�A�%[�� 6�� ������ ��.�� ����� ��� ��������0������� ����

����������� ����� ������������ �� ����������� Z��A�$[�� �7��� ��� �� #���)���

����24 ���A����������������������������U������������� �����2� �����������>��

,�-������������������ ��������������� ,���O ����������U���������������W�

,��-�������������������� ��� ������������� �#���W��

,���-���������3������������� �������������A����/���������� ����0�������

�/����W�

6�� ������ �� ������������ ���� .���� .�A� � �/�� �� ��� ��������

��#�� ��0� �� ���)��� ���� ���#��� ��� ��������� ��� .�� �� �����������

3��;��2���&�#������������������� �������������������������������� �����

��.\4 ��������������������� ��� ����������������A���������������� ��#����

����������� ������������0������������ ������0������Z�([��

&� ��������������A�����������3������7�� ������������������� 2��

�� ����� �� ���������� ?�91@� �� ���� 0��/��� ��������� �������� ?�8�@A�

�������������������������������#�� �����

6� ��2�� ���� ����� �� � ��0���������� ��� �������� ������� ��� ��� ��

�91����8���

��5��� �� "�"6� <�0���������� ��� �������� ������� ��� ��� ��� 7�� ���� �91� ?�� �@� �� �8��

?�����@��

Page 28: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

28

6�� ��������)��� ��� ������ ���� �� ������������� ���� �������� ���

�� ���������������������� ����2����� �����%A�� ���������� ��������� ��

��� �������� ������A� ������ ��� �������� ������A� #�����3�� ��� ��������

����2���� �2��#�� ���������������2����������#�� ����! �����)�������

�������������0�����7�� ���������3������������ ����� �����������===��

C�������������������������Z��A�*[�/����������������������E��$���E��(��

��91���E�(����E��(�� ��8������0/���������������������������������

E� A�6�2���9L��������������������������6���2����������� ����������� �� ���

���������������������A�E�(����E��(�����8���

� 6��7�� ���������������2����� �������� �������� �����<K�����

����� �������� ��A� �� .�� ��� �������� ���������� E�� ��#��� ��� �����

���;������Z��A�*[��G��#������������������������� ����)���� #��#� ���������

������������������7�� ��������24 ����Z�,���[A�������������0����0�����

����� ������ � ����)��� �� ���� ��� ��������� 2��0�� ��� ���0�������� ���������

&���� ����A� �� ������ �������#�� � �#��� �������� � ���� �� ������ �

5��� ��"�(6����������������� �������� ��8�>��%��O ?������@A��*��O ?������@���� �$�(O � ?����2���@�� 9���� ��� �������������

5��� ��"��6����������������� �������� ��91>�$��*O ?������@A����$O ?������@���� �$��O � ?����2���@�� 9���� ��� �*%����������

Page 29: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

29

�������������������������������������A�������������������������

� ����)���������������������7������ ���A�/�� ��� ������������� ������

0���� ���������� �� ��������0������� �� �� ��#����� ������ � ������ �����

�� ��.\4 ��A�� �����)�����0��������� �������������������� �����������

�����0����A����������� �#����� �������������������������C�� ��������������

������/�.����� �� ���� ���������2� �A�� �#����������A�����������0�������

��������� ��������� �������0����������������)�������������� ��� �����

&���� ������#�����������A�� ���������������������� ��������)��� ���������

��� ���)��� .�� �������� ��� ���#��� ���������A� ����� ���� �7�����A� ���

���������� ��� 0� .��� ��� ��� ������ &�� �� ��� ��� #���� � ��� ��A� �

���������� ����� ������������������������������������������������ ���

��� ����� � �����)��� ������ ���� ��� �� � �� ���� ��� �� 0��� �������� ��

��������0������� ���� 0��� ����� � ������� ���������#����� ������ � ������

&����� ����A� ��� ������ � �#��� �������� /� ��� 2� ��� ������' ��� ��� ��

���������� ��;���� ���� ��� ������� �������.������� �� ��������0������A� ��

� �#���� ��� ��� ������ �� �� � ������������ �������� ���� ������� ����������

���7�� ���A���� ������ ���������� �� 2� 3������������ �A��F��� ������

/� �� ���� #��#��� ��� ��� � ����� ���� ������������� ��.��� ��� ��

�����������������

� 5��� ��"�%6�-��������������������E�� ��8���6�������)������� ���������������������E�� ��91������� �������������)��� ��8���

Page 30: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

30

Referências �

Z�[�E��C��6��� ��A�93�������������� �%� ���.%�..� �...A�6�������V����A�! ��A�1� �� A�?�*��@��

Z�[� V�� 8���LA� ����� ������ ��� ���� ��� �� � ��������� ��� ����#���� � ��� ������ �!� .�

0 ��� ������ ����� ��� ������ �A�������23� A�V���� ��V����A�1� �� A�?�** @��

Z [�������+�������+��3�A�8����"!�� �!�����!�� ��A�"�A��,* A�?�**%@��

Z%[�-��+��:��&�NN��A�E��K��-��3���A��� !���#����!��� �!������ � �A�("A��((A�?�*((@��

Z�[�K��b�N� �A�6��<3� �L�A�"��-�A�&*�������#���!�� � 1�A�"(A�%��A�?�***@��

Z$[�9��b��b��NA�9��P �� �̀������A�*2�� ���������������� ���� ����A�6����� ��3������

<�����LA�?�**$@��

Z([�-��6�V���A����� ����!�' �!�*�!�� �A��(A��,�A�?�**�@��

Z�[�:�� �̀�E��0���A�E��V��:���M���A�"!��� �!����������A��(7A���(A�?�** @��

Z*[�"��E��V���A�-�� �̀��8�� ���A�1�� ̀���NA����� ����!���� ��A�("A�� �A�?�*��@��

Z�,[� 1�� R��N��A� "�� - �A� 6�� b ���� � A� �̀� < �.���A� "�� 1� N�A����!� 3�� .�!� ���!�

���� ������������������� �.�����A�<���N3���A� ̀ �A��A�$(A�?�*�$@��

Z��[� 9�� 6�� ���NA� 6�� E��"�&� ��A� &�� �̀� <� ���A� V�� -��"L���A����� � ���4����� �

� ��� �� ��� ����1���� �� ������ �����$� �� ��� �� ������ ��� �� �� ��� # ����#�����!� .�

���� �������� �� ����� ��� ��� � �������� A� �%(A� 8����M���3�:�� � � A� 8���� A�

"6��

Z��[� �̀�-����" ���A� �̀�:����� A�&�� �̀�<� ���A�-��1��8�� ���A� �̀����E� �A�1�����"�����A�

���!�.�!�������� ���������!%�����5���� A��"(A�?�**�@��

Z� [� �̀�"���3#�A� �̀������A�V��K��A������� � ���#� ��������� ��� ��������#���� �

�� � ��� 4����� �� ��� �� � �� �� ������ ��� �� �!� ��� ����� ��� 6��� .� �������

��� �����7 ��������������.�����A�V���A�"�A� ��A�?�*�(@��

Z�%[� b�� 1�A� V�� 6���A� -�� ����� �A� �̀� 9�� A� �̀� <�� b��A� b�� 1�� ���N��� A� *2��!� ����#!�

� ����!A�"�A��*A�?�,,,@��

Z��[�������+�������+��3�A�8����"!�� �!�����!�� ��A�"�A��,* A�?�**%@��

Z�$[�6��<����2L�A����a�#���NLA������� A��A�%* A�?�,,,@��

Z�([�-�� ̀� ��N�A�E��8�3�A���!�8��!������!������A��A�( �A�?�**�@��

Z��[�<��1��1M�� A�P ��P ��P N��3NA�<��E��P ��P ��3���A������ �����A�(%A��,��,A�?�**$@��

Z�*[�<��1��1M�� A�P ��P ��P N��3NA�<��E��P ��P ��3���A������ �����A�(A����(A�?�**(@��

Z�,[�-�� ̀� ��N�A�&*�������#���!�� A���A����A�?�**$@��

Z��[�"��6��3��A�9��C�3��A���� ��*��A��8A��%*A�?�**(@��

Z��[�<��b���A�:��KN��A�9��:�3�����A�"��C�0�N�A�<��b LA�"!�����!��� � �A��$(A�

"�%(%A�?�**�@��

Page 31: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

31

Objetivos

������ ��� �� � ���� �������#A� #�� �������� �������A� ��

�� ����� ������� �������������������������������� '����A����� ����

����������A�����������������������������������7�� ����������������A�

���� �� � ����� ��� ���0������� �� 0�������������� �� ��������0������� ������

7�� ������

Page 32: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

32

Capítulo 3

Metodologia

3.1 Introdução

�C���� ����� � 2����� ����������������/���������� ������A� �������2 �����

�����3��������� ���A���� ����G?�@���������)����X����A�.��������� ���

� ��2�� ���� ���� ��� ������� . ��� ��� ������� ������ �� F���� ��

�� ��2����� ����������� K�� ���� ��� �������� ���������A� ��#�� ���� ��#��� ���

�� ��� ������ ����)���� ������������ �������������e� ������������ �������

��0/������������ ���A�#�0��)��� 2�����?������/���� ����� ����@�����

#�0��)��� ������ ��� ?��� ���/���� ��� ������ �� 2�@�� ����� ��#��� ��)���

������ ��� ���� ������� ��� ��� ���.\4 ��� ����� �� ��� .�� � ��� ������� ��A�

�� ��� ��� 2� ��� ������' ��� �� ��������� ��� �� �� �� ������� ��� ������

�������� ��#��� ���� ������� ��������� ��� ��� �� '�����������A� �� ���� ��

���7������ ��������� ��� �������� �������� ����� �� ����� ��� �����

�� ���#��#��.��/���� ������ ����������)����X������!������2 �����.��

����#��� ��)��������X ���� ��������� �������>��� ��������A��������������

� ���7������ ��� 8�� �C��� 3�����A� .�� � �� '���� �����X ��� ��� F���

� �� � ��� ��A�. ����������)����X��������A����� ��� ��� �����

������� ��� ����

Page 33: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

33

3.2 Modelos de proteínas �

��� �������� �������A� �� ������ �� ���� ��������� ���� �������� .��

�� ���������7���4 ������� #������ 2������ ��0������ � ��� ��A�������������

� ����)���� ������ ��������������!�������������� ��2��A� ��������������

�������A����#�0�����?������� ��A�#�0����� 2�����������@A������������������

��� ����)������� ������������������C��������������E-C"C<*$?% 6�@�Z�[A�/�

���7����������������� ���������� �#��������� /� ��.������ �����������

0�����/���� ��� ������� .��A� ����� ���� ����������� �7��� ��� ��� ����

�� ������ Z�[�� C� ���� ���� �����#�� ��� � ������� /� ������0���� ��� ������ ����

#������2��������0������2� ����������!���������� �����2� ��������� � ����

��� ��2������ ������>�

�� ���� �� � ����������-.��

[ ]220

2,1 4

1)( rrKrV ijvibji −= ����������������������������������������

� ��� ijr �/������' ���� �������������� i ��� j W� vibK �/����� �� ���F����

���������#����#�0���������������.������ 0r ����������' �������.���0�����

"� A�� �-.��� ���� �

[ ]22 )cos()cos(21

)( oKV θθθ θ −= �������������������������

� ��� θK � /� �� �� �� ��� � ���� F���� ��� ������#��� � #�0�����

2�������������.������ 0θ ������' 2�������.���0�����

Page 34: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

34

(� A�� �-.������ ����� � B� ���

����� [ ]203 2

1)( ξξξ ξ −= KV �����������������������������������

� ��� ξK � /� �� �� �� ��� � ���� F���� ��� ������#��� � #�0�����

������� ����;���� ���������� .�� ���� 0ξ � ����� ' 2��� ��� �.���0����� <�� ����

��������� ��������������� �%A��������.�>�

2,32,12, rrR���

×=α �

��

4,32,33, rrR���

×=α �

��2�>�

���

����

�=

3,2,

3,2,

.

.cos)(

αα

ααξξRR

RRarcosign nn

��

� ��� ).()( 3,2,1

→→= αξ Rrsignsign n �/����� ����� 3,2,1 . αRr

����

Page 35: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

35

�� A�� �-.������ ���

[ ])cos()cos(121

)(4 ϕδϕ ϕ mKV += �

� ��� ϕK ��� δ ������� �� ����.����#�������F��������������#����

#�0�����������������������<���#�0��������������������� ������������������ �%A�

�������.�>�

( )2,3

22,32,32,1

2,1,1

..r

rrrrR

�����

−=α ����αα

ααϕ,4,1

,4,1

.

.cos

RR

RR��

±= �

��� ���ϕ �/���' 2�������.���0�����

%� = �� �-/�������� ��� �C������������� ������� ���

ijijji r

jiCr

jiCrV 6

612

12,126

),(),()( −=− �

� ��� ),(12 jiC � �� ),(6 jiC � ���� ��� �������� ���� ���� ������� ��� �������� �� ���

�����A� ��������#�� ��A� .�� ���� ���� ���� ������ ��� ������� i � �� j � .��

� ���2��� �� .�� ��� ����� ������ U� ��������/��� ��� ������ ���� ���������A�

��2 ����������������#��� 3����

� = �� �-/�������� ������� ��6�� �� �-/��������� ��� ���

6� � �������� ���������2�� iq � �� jq � �����������������' ��� ijr � /�

�������������������0>�

ij

jijiCoul r

qqrV

0, 4

)(πε

= �

Page 36: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

36

� ��� 0ε �/����������#��������#������

6�� � ����)��� �����0� �� ���� � ����)��� ��� �� 2�� �� ��� ���� ������

� �)��� � #����� ��� ��������� ��� U� ����' ��� � ���� �� ��2������ ��������

�������A� �� �� 3�� �� ���� �� ��.� �� ���� �������� ��� ������ ��� ��������

�� ������� �� � ����)��� �����0� �� �/� ����' ���� .�� �������� ����

�� �������� ������ ���� ��� ��������� ��� ����� � ���� ��� ���� ���� ������

� ����)����&����� ����2���A���� ����)��������� ���������7�������� ���

�/�������' ��A���������������A����.�����������������������������������

������� ����#����� ������)��� ��#��� ���� ���� ��� � ��������� ��� ���

�������� ��� �� � ��2��� ��� � ������� ���� �� �� ���0��)��� ��� ��2��

����� ���� �/�� ��� ���� ��� ������ �/� � ����� ����' ��� �����#���� C�� �/������

�������0�7���4�������� ���������2������ ����)�������� 2���� ��������3��

���#������������ ��� ������� ����)��� ����������������&�����/�����A�.��

��������������������0�3������������������� 2���� �������2����� ���

���������������0������ ���������M���Z A%[��� ����������������Z�[��K�

���� ��� �M��A� �� � ����)��� � ���� �� ��2�A� � ��� ��� �� ��2� �A� ����

��������������/���������# �2������������������������������������C�

�/����� ��� ����� ��� ������ ����� .�� �� � ����)��� � ���� �� ���/����

����� �����/��������' ���������������������������������� ���0������/���

��#���U����2������� �����/��������' �������������

3.3 Modelos de solvente

C� ���#� ��A� � �2A� ����� ���� ��������� ���� #�������������A� ��� ��������

��������������<V�� Z$[� �� <V�J�� Z([� .�� ������������ ��2����� � ��4�� �� ������ 6��

��� �������� ���������� ��2����A� �� 2��������� ��#��� ���� ������#���� !����

����������������A������7�����A��������2��������<:6b��Z�[A�<�991��Z*[���1!K�<�

Z�,[A� .�� ���� ���������� ��0/�� ��� ����� ��� ����� � ���� ��� � ��2��

���� ����.���������� ����U�� ���.\4 �������#��A� ���� �������#�0��)������

������� ���� #��#� �������������3����24 ����

Page 37: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

37

3.4 Dinâmica Molecular

V����������� ������;����� ���� ������� �/���� ��0��� �� � ���0���

����������� ������� ���#�� ?�.���0���� �� ����.���0���@� ��� �������������������

V���2������������ ���0���������� ���#������.���0����������/������������

����� �#���>�"� ������������ '������������?&"@��V��2���������� ���0����

��� ����.���0���� �� ������ ��� �#� ���� �� '������ �� �� �&"�/� ��������� 6�

&"� /� �� �/� ��� ��� �������� �������� .�A� ���� ��� ��� �.�)��� ���

��#��� ��� ��������A� 2��� �� ��F��;���� �X����� .�� ������ �� �����

� �����)���������������������������;������������������������� ���

�� '����� �� �������� ��� �������� � �#��� �������� Z��A��[�� 6�� �.�)��� ���

��#��� ���������������#�������������������K��������� ���2� ������>��

NiFrrU

dttrd

m ii

Ni

i ......1,])[()(

2

2

==∂

∂−=�

��

� ��� im � /� �������������� �A� )(tri

�� ������ ������ �����������)������

�������A� ])[( NrU�

�/��� ��2������ ����������� iF��/�������� ��� �����������

V��������� ������F��;�����X��������� 2����������������2������

�2������� ��� � ��2��� �� �.�)��� �����#��� ��� ��� K�M�� A� ���� �7������ ���

�2���������������2�Z� [���R������Z�%[��C��2�����������������2����������)��� ir��

��������������#���������� iv�� ��������

2t

tδ− , onde tδ é o tempo de integração.

tm

tFttv

ttv

i

iii δδδ )(

22

��� +�

���

� −=��

���

� +

( ) ( ) tt

tvtrttr iii δδδ ��

���

� ++=+2

���

O algorítimo de Verlet é dado por:

( ) ( ) 2)(2 t

mtF

ttrrttri

iiii δδδ

���� +−−=+

Page 38: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

38

C�� �2�������� �������2� �� R������ ���� �.�#�� ����� 9��� �2��������

�����0������ � �0�� ���� ��� ������������ ��������A� ��������� ��

������� '����.

3.5 Condições das simulações

C���������� �������������� ��������2�������� '������������

E-C"6�<� ��� Z��[� �� ��������� ����� ����� ��� ����� E-C"C<*$� ?% �@� Z�[A�

�� ���.�����������<V��Z$[� �����������������#��������/��������2��C��

�������A��� ���������������� ����7�� ��A����/��������2����� ����� ��

��� 2� ���� � ������ ��������� ��� ������A� ����� ��� ���� �)��� ��� ��Y�

?��7� �Q0��@A� #��� �0��� ���� 6�� �����)��� ����� �������� �� � ���0���

����/���������0�����A� K�9A� ��� �:� ������;2���� � ��� �� ���)��� ����;����� ��

�� #� ���������2����� ���Z�$A�([��6�������������������������� �����

�� �� ���������������������������0����������8��� ��� �Z��[������� �� ���

��� ������ ��� �������� ��� ps1.0=τ � �� ���������0������� �� �2�

115105.4 −−= barxTβ ��C������� ������������������������������������ �����0���

��������6���.�)��������#��� ��� ����� � ��2����� ����� �2������� ����

���2�Z� [A����������������� ��2����� fsdt 0.2= ��C��������������������������

#�������� �� �����������6��#����������� ������������0�������������0�����

���"7M���� ��������������F���C���������� ���������2�)���� #��#� ���

����������3����24 ��� �����/������������ �������� ��������������2�������

1!K�<� Z�,[� �� �� ���� ��� ���/���� ��� �2� ����� �2������� <�991�� Z*[�� 6��

� ����)��� ��� # � ���� P ��� ����� ������� �� ���� ��� �� ���� ��� ������ ���

��� ���6�� ��������� �� 2���� ��� ����� ������������������M��A��/�����

V"��Z A%[��������������������7��������� ���6���7�����������������������

�������$�D������8������������,D�������91A���� � ���#��������,D���6��

�����)��� ����� �.���0���� �� ��� �,,��� ���� �� &"� ��� ���������� ���

�����)�������������������7����������/����������#� ���������#����.����

� ����)��� � ������ ������������ ������ ���2� ������ ���������� � �������

����/����6��0��� �������� ���2 ������3�����0�����������������������

Page 39: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

39

Tabela 3.1: &���3�����0������������������������;��2��V&8�/����;��2���������� � ��0 ����������� ��� ������ A� V&8A� K=JK�� ���� ��� Q������ ��� K=� �� ���� ����� ���� �� ������� �� 9�� /� ����������;����������� �����

2��� ���� �B�����*:3� 4�>D�?� @D�!����� @D��� �� @D����������!��� ���

�91�?����������@�

�8��?���������@�

�_K6�

��K8�

$��(,�

���

�*% ,�

�*%%,�

��=J����

�,=J� ��

$, ,��

$,�(%�

3.6 Estrutura das enzimas simuladas

6������������ ��������������)��������������� ������������������

������� �� �0����� �� 0 ��� ��� ����� ��� ������ �A� V&8� Z�*[�� 6� 7�� ��� �8��

�� �/��������������� . ����.���91��� �/���*%��6������������;�����

���������$��(,D��Z�,[�����8�����91���������#�� ����9��������;����/��

��������� �� ��7� ��� ��������� � .�� � � ���� ����� ��� �����

��#������ 6�� 7�� ���� ������� ����� ��� �� ������� ������� ��� ��

��#�����������2�)��J���� ���A��0��� ��A�.�������� ��� ���A��������������

�� ��2�� ���� � ���� ������� ?� ���A� ��� ��� �� �����@�� 6�� ��������

������� ��� ������7�� �����8�����91��������������� ���2�� ����C�������

��#�� ��� 7�� ���� �� ������ ��� ����� ��������� �� ��2���� �3���H�����IA�

��2�������������������������������� ������������� �����

4������(�"�&��� ����������2�)��J���� ������������������������������������7�� �����

����/��E��� � ���� �����������23�� �������������

/ ������� ����������09��� ������

:�6;<=;�>=<:>?�:@=�?3�:33�

6:�63<>>�@><:>A�:>@�:6:�:>:�@B�?A�

:�=;<>;�B=<:B@�:?6�::3�:63�

=:�=3<B>�?><:>@�:B6�:6B�:>B�?B�:;A�

8��$�?�@�/ ���A���� ���������������������� ������������������ ���� ��7�� �����?�@�6� ��2���� 3/����� �� �/�� ��� �������� ���������� ��� 3/�����α� �� ��0/�� �2 �� ������������� ���� �� �������� ��� #����� ��������� �� ������������ � ��2���� ��� 3/������������� ������� �

Page 40: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

40

3.7 Ferramentas de análise

3.7.1 Raiz do desvio quadrático médio.

6����0���������������/�#������������#���.���������/���A�-"<&A�

.��/����� ��������>�

n

trRtRMSD

n

iii

2

1

|)(|)(

�=

−=

��

� ��� �/��� Q�������������������� ���������?��������������������0� ��

�� ����24 ������������� ����@A� )(tri

��/��������������������� ������������ iR

��/�

�������������������� ����������������4 ����6����� �����/��������;���

��0����������������������6������������������4 ������������.����

������� ��� ���� ������A� �0����� ��� 0 ��� ��� ����� V&8� Z�*[�� C� -"<&�

��0/�� ����� ���� ������� ���� ������A� ��# ��� ��� �� ��������� � �/���

�� �������������������

5��� ��(��6��������� ������� ��� ������ 7�� �����8�����91�F ��� ��� ����� ��2����������������

Page 41: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

41

3.7.2 Distribuição de distâncias.

6�� ����' ���� � ����X����A� |)()(|)(, trtrtD jiji

�� −= A� ������ ��� �����

� �����)���Q����� ���������� '�������������� �A� ����������7��������������

��� ����������2���������2�)������3����24 ����

3.7.3 Dinâmica Essencial de Proteínas

V����� ������������������������A��� ��������������� ����.����������

.�� ���� ��� ��0��A� � �#���A� ��� �������� ����������� ���������� ��� ��

�������� � ����� 6�� ������ �� ���� ���7�#���� ��� �� � ���� � ��� �A� �����

������� ������ �����#��� ��)��� ���� ������ ������� � ��#�����0���;2���� 9���

��#��� ��)��� ��#��� ��������� � ��2���� ��� �� �0������ �� ��� ���A� �

������� ��� ������ ���� �0�� ���� �� �� ���)��A� 2��2�)��� ����������A�

F����� �� ������� ��� ��� �������� ����/������ �� ����� ����� ��#��� ��)��� ����

�3���������#��� ��)���� ��� ����6����#��� ��)���� ��� ���� #��#���

������7�� �������)��� � ���� ����#��� ��)��� �X�����.�� ���� ������� ���

����� � ����)��� � ����X������ C� ������� /� ����#�� ���� ��#��� ��)��� ���

� ����)��� � ���� ��� ������� �� ������ A� ���� �� � ����� ��� ��� ������� � ��

� ��� ������ �� ������� � �� '���� ������7� �� ������ � ��� ���� 2���

���� ����������0������Z��A��[��

+����� #����2������������)���� ����������)����/������������)���

�X����� � ������ A� ����� ����#�� ��� �����)��� ��� �� '������������ ���

������� .��� ��� ��#����� ����������� V��� ��2� ������� �� ������ ���

��#��' ��� ���� �������� ���� �X�����A� �0���#���� .�� ��������� ����)���

������ �� �� ����� ��� ��#��� ��)��� ��������� ��� ��� �� �0������ ���

�� �� ������ ? ��� ���� .�� �O @� 2��� ��� ��0�����A� �� �0������ ���� ���A�

� . ������������������2������ ��0����������0����� ��� � ���� �� �����6�

��#��� ����� ���� ��� �0������ ���� ���� ����� ���� �� ������� ����� �����

���������!������������������0����������������� ������ '������������ ��� ��

���0���������� ����[21,22]��G���� F �����������������7�� �����8����

�91A�������������������/����A���������� ����� ����������%��

Page 42: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

42

3.7.4 Ligações de hidrogênio intramoleculares e pontes salinas: critérios utilizados.

+��������������������/�����2���/�������Z� [������������������2�)������

3����24 ��� � �����������A�1:� ��A� �� ��0/�� ����� ��������� � ��2��� ���

� ������� � ���� ��� ����� ��� ������� ������ ��� ������ 1:� ���� � C�� ��'�������

��������������/����2���/����������>�

�������C�����0��D�;!A6� �

���C������E0FFFF��G�::;H�

��&�IJ��� ����K���%�&�GA;L��

6���� ������� ����������������� ������������/����������' ���� �������

�� ����������������2���������2�������,� � �����

3.7.5 Ligações de hidrogênio intermoleculares: critérios utilizados.

! �����)�����0������������������������������������0������������

��� �����)��� �X����� �� �� ��� ��� � �)��� ��� ������0������ 6����� ��������

���.���/��� �������������0����������������������A� ),(2 ji rrg��

��� )(2 ijrg ���

��������� ��� )(rg A� ��0/�� �3��� ��� � ���� ��� ������0����� ����A� +&-�

Z�%A��[�� 6� +&-� /� � �� �� ������ ������� � �� ����' ��� r � ��� �� ������

�� ���A� �� ��FA� ��� /� ���� ��� ����� � ����� � ���� � �� ������ ����� ���

��������w ��������' ��� r ��������������� ���� A A������ ���������w �

���������������������������A��+&-� )(rg Aw ��������������������2� ���

� ���>�

w

wAw N

Vrr

rnrg

∆= 24

)()(

π�

� ��� A �/�����������������4 ����������� A� w � ������� ���������������

�7�24 ��� �� 3����24 ��� ������/���� ��� �2A� � ����' ��� � ���� A � �� w � /� r A�

)(rnw �/��� Q��������������� w �� �� �������������' ���� ���� r ��� rr ∆+ ����

Page 43: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

43

������ A A� V � /� �� #����� ����� ��� ������� �� wN � /� �� Q����� ��� ������� w � ��

��������

C� Q��������#��� 3��� w � �������' ��� r ������������ ���� A � /�����

���>�

�=r

Aww

h drrrgVN

rN0

2)(4)( π �

6�� 1:� � ������������A� 1:� ���A� ���� ��� �������� ����� � �)��� ���

������0����������A�26P ?�@A�� ���6�/����������������� ���M�/������������2�?:�

�� C@A� �� ����� � ��2��� ��� � ������� ��� ����� ��� ������� �� ������ � ���� ��

���/���� ��� �2A� +?�@� #�� �� Z�$A�([�� d ��� 26P ?�@A� ����� �� ��7����� ��

�� ����� 0��� ���� ����� �2������� � �7���4 ��� ��� 1:A� �� ������ �� ��� ����

� ��2�� ��� � ������� ��� ����� ���� ������� �������� �� ����� &�� � ��2��� ���

� �������������������������/������#�����������������������1:� ����. ������

�0���#������� ������������?����0��@� ���2�������� ��2������#A�� ��2��

�2��#�� ���� �/� ��� /� �� ���� ����/����� ����� ��� �������� 1:� ���� Z�([�� 6�

�����������������+?�@�#���� ��0/������������������ ��2��������/������

1:� ����?�"@A������������� Q������/���������������������� �?K1:@���

K��������� � ���� ���������� ���� �+?�@�.��/� �������������������

�"����K1:A����������������������������,N���������Z�([���

6�2 �� �7������� ��� 26P ?�@� �� +?�@� ��������������� �� ��2��� ��� �� �$�

��������#�� ����6����2��� ����� � ���������7���������������� ��������������

C���:��������� A����������������#������&����2��� ����� � A���������#���

����� ���.�����7�24 �������0� ���/������ ������#���A�� . ���.�����

�7�24 ��������2�������0�7�����A�3����7�����3����24 ��������� ��������7�������

��� ������� ������� ��� ���#������ C� 3����24 ��� �� �� � ��� ����� /� ��

�7����������������������� ������#������

K���������$A������ ���U��1:A� �������������������������������26P ?�@���

+?�@A� �� �� ��� ��������� �7������� ��� �0��A� ��#���� � 2� ��� . ������

� �����)�����

Page 44: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

44

1 2 3 4 5 60,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

g AW (

r )

r ( Angström )

H (N-terminal); gAO

O (hidroxila); gAH

H (amina secundária); gAO

O (carbonila); gAH

O (carboxilato); gAH

O (C-terminal); gAH

��

-14 -12 -10 -8 -6 -4 -2 00

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

9000

F(E

)

E ( kcal.mol-1 )

H (N-terminal) O (hidroxila) H (amina secundária) O (carbonila) O (carboxilato) O (C-terminal)

��

5��� ��(�"6�+ �)������������0����������26P ?�@��

5��� ��(�(6�&�����0��������� ��2���������A�+?�@A��������� �� ���������������������7������������ ���2�� �����

Page 45: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

45

3.7.6 Áreas acessíveis ao solvente.

6�������������������3�����;0����A�3�����������������������?3�����;0�����=�

3�����������@��7�����������#� ��� �����������������������A����� ����������

���� �������������0����� ���/�����������������Z��[�� ��� nmr 14.0min = �

.���������� ��������������/�������2���

3.7.7 Raio de giração. �

C��������2�����A� gR A�/�����������������������������A��� ���

����������������2�>�

=

==N

ii

N

ii

g

m

trtR

1

1

2|)(|)(

� ��� im �/��������������� ���� ir��/������������������� ���������������

�� ����������������/����

3.7.8 Energias de interação. �

6��� ��2������� �����������������������������2�>�

��=

=N

i

N

ijijij VE

1

1

� ���K�/��� Q����������������������� A�����F�������������������� ���

ijV �/��� ��2������ �������� �������� ������������������F��

Page 46: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

46

3.8 Alinhamento das estruturas

C� �� 3�� ��� ��� �������� ��� 7�� ���� �8�� �� �91� ���� ������ �����

���2���<M����V&8�R��M��� �(�Z�*[����

�8������������6<9&_PdKP 9�&EEE!RK6RK�E<EEK_<RKP �<K9EK+RREb�EP 99E<V+-9�

�91�������������99VK<�EP:�&E___<PP<&�EE6d69_9K1���EE9_�!<PE�&EEK1REEbE�

�8�����������!K_K6ERP 6V�KEKE_191_E��P 9-<V1!�__�RR&<PE9_-V�9E9_bE9Rb<�

�91�����������P KVE1K6-6!�:+�ER_dVKE�K<_16R_EP 9�-KV1R�__!R���K+E9_&V<<�

�8�����,�����&EE9_&!_99�9-_K6V<!&E�&-99+9d_P <�R-d<b-V9E<��K69!9+9K:R�

�91�����,����E69&1E9R���&E<!_-1Eb9�9-RK6V<!&E�9d9+&d_P<R�-d&b-9<E9R�

�8����������K6Pb<:E"K1�E<KP6_dR"6�9�E_d<<E<<�KR9RP �����������

�91����������d9E�:+&6P 6�-6E1KRKE&:�__d!R69�E_�+<<E_6-!9R�6&RE�

Referências �

Z�[�P �+��# �E ����� A�<��-��8�������A�6��6������ 2A�V��:��:\ � 0��2��A�V��b�\2��A�6�����

"�NA�P ��-��V��<����A�!��E��9��� �A������� ��������������$��� �'�8�8�?>����������

)� �'��� A�8�����A�E�� � 2� A�?�**$@��

Z�[�G��<���N��A�P ��+��# �E ����� A���� ��A��8A��%�A�?�,,,@��

Z [�9��&��� A�&��_��NA�1��V������ A�"!��� �!������A�7�A��,,�*A�?�** @��

Z%[� G�� ���� A� 1�� V����A� "�� 1�� 8��N�M���A� 9�� &��� A� :�� 1��A� 1�� V������ A�"!� �� �!�

�����A��8(A���((A�?�**�@��

Z�[�!��E��9��� �A�-��<���0A�V�����<���3A�P ��+��# �E ����� A�"!��� �!������A��8"A��%��A�

?�**�@��

Z$[�:�� �̀����8��� ��� A� �̀�V��"��V����A�P ��+��# �E ����� A� �̀�:��� �A�.� �������

��� ������1�� ��� ������������ ���������!�.$�.� ��� �����&�� ���V��� A�8������

-������V0���3� 2����� L�&������3�A�((�A�?�*��@��

Z([�:�� �̀����8��� ��� A� �̀�-��E��2��A�9��V��<�����A�"!�����!��� � �A�7�A�$�$*A�?�*�(@��

Page 47: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

47

Z�[� �̀�V��-L�N���A�E����������A�:�� �̀����8��� ��� A�"!�������!������A�"(A� �(A�?�*((@��

Z*[�<��"�L����A�V��6��b���� A�"!�����!��� � �A��(A�*��A�?�**�@��

Z�,[�8��:���A�:��8��N��A�:�� �̀�8��� ��� A� �̀�E�����"��+��F�A�"!�����!��� � �A���A��%$ A�

?�**(@��

Z��[�"��V��6��� A�&�� �̀�9�������LA������� ��������������+������A������� �V����A�C7����A�

?�*�(@��

Z��[�&��+�� N����8��<���A�)� ���������� ��������������A�6�������V����A�?�**$@��

Z� [�-��P ��:��N �LA�<��V��E���A�"!�����!������A���>��%�A�?�*(%@��

Z�%[�1��R�����A�����!�� �A��%7A�*�A�?�*$(@��

Z��[����1� �3�A�8��:���A�&��# �����<����A�"!����!���� �A��A� ,$A�?�,,�@��

Z�$[�"��V��6��� A�&�� �̀�9�������LA������� ��������������+������A������� �V����A�C7����A�

?�*�(@��

Z�([�1��3A�6��-�A���� �������� ����%������� ����������������A�� ������� A�V�� �����:����

Z��[�:�� �̀����8��� ��� A� �̀�V��"��V����A���&�K��A� �̀�-��:NA�"!��� �!������A���A� $�%A�

?�*�%@��

Z�*[�MMM����0���2J��0�

Z�,[�K��b�N� �A�6��<3� �L�A�"��-�A�&*�������#���!�� � 1�A�"(A�%��A�?�***@��

Z��[�6��6����A�6��8��"��1� �� A�8��1�����E����A�&��"��+��# �6��� A� �̀�:�����8��� ��� A�

"!�����!�/�A��(A��$��A�?�**$@��

Z��[� 6�� 6����A� 6�� 8�� "�� 1� �� A� �̀� :�� ��� 8��� ��� A� ���� ���� �L ����� ��� ������ ���

��� �������!�&���!�' �����A�%��A�?�** @��

Z� [� E�� 6�� �̀����LA� P �� <� 2��A� � �0���� � ������ �� ����������� ������ �A� <��� 2���

R���2A�?�**%@��

Z�%[�&��6�"�d����A�������������� ������A�:����f-�MA�?�*($@��

Z��[� �̀� V�� : �� A� !�� -�� "�&� ��A� �� ��� ��� ����� � +������A� 6������� V����A� 1� �� A�

?�*�$@��

Z�$[�+��:��<���� 2��A�6A�-3� A�"!��� �!�����!%�%�A�����A�?�*(�@��

Z�([�P ��1�� �̀�2� �� A� �̀��3 ����N3�A� �̀�&��"��A�P ��-��!���LA�"��1��b�� A�"!��� �!�

����!%��7A�*�$�?�*� @��

Z��[�+������ 30��A�V��1�F ��A�V��6�2��A����< ���A�"��<�3��A�"!�����!��� � �A��A��( A�

?�**�@��

Z�*[�3���>JJMMM��7��L���2J���#J��

Page 48: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

48

Capítulo 4

Propriedades dinâmicas do par mesofílico-termofílico de xilanases

4.1 Resultados e discussão �

4.1.1 A xilanase XBC

6� ���0������� ��� �������� 2����� �� �����)��� /� #���� �����

-"<&A� ������� ��� ��� ������� �� ����� ��� ������ 6� ��2�� %��� ������ ���

-"<&?�@�����7�� ����8�� �������� ��������������.��������������

� ��� ��������������� �����4 ��� �������� � ����� ��� ��� ���������C��

#������ �/����� ���� -"<&� �� ���� ��������#��� ���#���� ���)��� ���>� ,�� ,±�

,�,�$ ��?��D�@A�,�� *±,�,�� ��? �D�@A�,���(±,�,�% ��?%�D�@A�,��%�±,�,�� ��

?��D�@���,��$�±,�,�* ��?$�D�@��C��0�7������#�������)������������������������

���������.���0�����

6� ���7�0������J��2����� ��� �� ������ � /� ��������� ��� ������ �����

-"<&� ���� ������A� ��2�� %���� "��� ��� � ���7�0������� �� ����� ��� ����� ��

������ � �������� �0���� � �����)��� ��0��� � ���0������� ��� ������� ����

���� ���� �� ��2�)��� �� ������ �� V�.� ��� ���#���� ������� � �� ����

���������C������������#�����0���#�������������� ������������������2���� �

?E�L@�� 6� �4 ��� ��� �� 2���� ������ �� �� ������� E�L� �� ����� �� 0�7��

�������� ��� ���/����� ������ ��� �� ��#��� ����A� ����� ��� ��� �� ���

���7�0������� �� ��2���� � ��� ���� ��� � �� ���� 6�� ��2�)��J���� ���� ��� �����

���7�0����������A����� ��A�����2�)��J���� ������� ������ �����&�#�������������

.�A� .�� �� �����)��� ��� ����� ���7�0������� ���� ����� �� ���� ��� �������� ���

2���� A������ ���� ��#�����.���� �������� �����BA� ��2��%� ��6� ��2�������

�������2����A��������������-"<&�����������A�/������� ����������

Page 49: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

49

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,00,0

0,2

0,4 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50 5,00 5,50 6,00

0,00,20,4

0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50 5,00 5,50 6,00

0,00,20,4 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50 5,00 5,50 6,00

0,00,20,4 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50 5,00 5,50 6,00

0,00,20,4

RM

SD

( nm

)

t ( ns )

25ºC

35ºC

45ºC

55ºC

65ºC

0 20 40 60 80 100 120 140 160 1800,0

0,2

0,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180

0,0

0,2

0,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180

0,0

0,2

0,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180

0,0

0,2

0,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180

0,0

0,2

0,4

RM

SD

( nm

)

Resíduos

25ºC

35ºC

45ºC

55ºC

65ºC

5��� �����6�-"<&?�@�����7�� ����8�� �������� ���������������

5��� �� ��"6� -"<&� �/���� ���� ������� ��� � 7�� ��� �8�� �������� ���������������

Page 50: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

50

C� ���� ��� � ���� ��� 2���A� �7��� ��� �� ��2�)��� ��� #�����BA� /� ��2����

��#����U�������B��<2�������.������7�0������������� ����������������2�)������

���� ��� � ���� ��F� ������ ��� ��� � ����� ��� �0�����A� �� #��� .�� ���

���� ������� ��� ��� ���� ��� ����� �����#��� ���� ��� ����� 0������3A� ���

�����������������0����A�����������������7�� ���������������Z�� [��

�������#��� ���0������3������������� ����������������' ���� �������� �������

��������������������� ��������������������������� ��A���2��%�%��

5��� �� ��(6� ������� ��� ����� �� 7�� ��� �8��� 6�� �����)��� ���������������E�L�������������������������

Page 51: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

51

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,000,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

3,5

XBC 55ºC 45ºC 35ºC 25ºC 65ºC

Dab

re-fe

cha (

nm

)

t ( ns )

&���2��%�%����������0���#�A��7��������D��� ������������ �� ���

��� ���� 0���A� .�� � ��#��� ����� 0������3� �� �8�� ������ ����� ���

��������������3 �����&�#����� ����.�A� ���D�A� �;����� ��� ������� ���

�.���0��������#��� ���0������3����������������' ���� ��������� ��������

����������7����� ����� , �����������' ������� ������ �� ��� �/���

�� �������������C�������#����/���0/���0���#������ ����%�D���6���D�A��

�������� ��� ��#��� ��� 0������3� ��� ��� � ����� �� � ��� � �/��� ���

��$�±,��� �A�����FA����D���7�� ����8��� �� ������,� ������0�������

.�� ������������� ����������6�$�D����������� �� �������� ���0�������

.�����D�A����/������0�������.�� ������������� ������������D�A�����

#�����/���������� ±,��, �������������������������2����A���#���.����D��/�

� ��������� ;���� ����� � ���� Z%[A� .�� �� ����� 0����� �� �������

�����0����� �� �0������ �� ��� �� ������ ��#�� �� � ���� ���� ������ ����

�� ��.\� ���� ����� �����7�0�������������#����� ��������������

5��� �� ���6� &0������3?�@� ��� � 7�� ��� �8�� �� ������ ���������������

Page 52: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

52

6� ��2�� %��������� �� �� F ��� ��� �������� �������� � ��� �,,��A�

���� �� '���� ���� ���A� ��� ��� ��������� �� ��� �� �����)���� 9���

���������������������0����������� ������������ ���������������4 ����

6���2��%���/� �#�����A���#������������������������0������#��� �����

0������3A��0��������� ����������� '�������� ���A� �.������0���#�.��

� ��#��� ����� � ��� �� �� 7�� ��� �8�� /� ���� ����� ��� �� 0������3�

���������������� ������ �����

25ºC 1 2

35ºC 1 2

5��� ����%6���������������� ��� ��������.��������7�� ����8�� �������� ���������������&�������� ����#��)������������ ��������������������

Page 53: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

53

45ºC 1 2

55ºC 1 2

65ºC 1 2

5��� ����%6��� �� �����

Page 54: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

54

6�� �������� ����� ���� � ��2�� %��� ������� ����� ��� �

���7�0������� ���� ���� ������� ��� �� ��� ������� �� ���� ��� ���� ���� ���A� �����

�����������2������������ ���������.��0��2�2� �������������������#����

6� ��2���� ��� ������ ��#�� ��#�� ���� ������ ���� ��� ��2��� ��� .�� �� ���

���������������������A� ��������������������A���F���� ���#���������

��� ���������� ���#���� <����� ��������� ����3��� ��� �� ������� $A� ��

������� ������������.��� �/����2������������2�)��������/�����

4.1.2 A xilanase XTL

C��#�������/���������-"<&�����7�� ����91���������#�������������>�

,�� %±,�,�( �� ?��D�@A� ,��%%±,�,�� �� ? �D�@A� ,��(�±,�,�� �� ?%�D�@A�

,��* ±,�, � �� ?��D�@A� ,��$ ±,�,�% �� ?$�D�@A� ,��$$±,�,�$ �� ?(,D�@� ��

,��*�±,�,�� ��?�,D�@��6��,D����91� �������.���0��� ����;��(�, ��. �����

�����-"<&��� 2��,� � �A���2��%�$���

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,000,00

0,05

0,10

0,15

0,20

0,25

0,30

0,35

0,40

RM

SD

( nm

)

t ( ns )

80ºC

�5��� ����6�-"<&?�@�����7�� ����91���,D���

Page 55: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

55

V��������� �������.�� ������� ���)����� ������������������������

��� ����������������#�����/������C��-"<&?�@����������������������

����� ����� ���2��%�(��6��#����������� ��� ������������ ������

���������/�0��� ������� ��������-"<&?�@A� ��2��%��A�.����� �������

�������2��������������������������4 ����

0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,00,00,20,4

0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0

0,00,20,4

0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0

0,00,20,4

0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0

0,00,20,4

0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0

0,00,20,4

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00

0,00,20,4

t ( ns )

25ºC

35ºC

45°CRM

SD

( nm

)

55ºC

65ºC

70ºC

5��� �����6�-"<&?�@�����7�� ����91� �������� ���������������

Page 56: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

56

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,000,0

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

80ºC 70ºC 65ºC 55ºC 45ºC 35ºC 25ºC

RM

SD

( nm

)

t ( ns )

��

6���2��%�*������ ��������' ����� �������� �����������������������

����� ���� �� �� ���� �������� ������ ��� ��� � ���� ��� ������� C0���#���� ��

2� ��������3 �� ����#����� ��2���%�����%�*A�����FA������������ ���

���-"<&�/���������������������������' ����� ��������� ����������������

���� ����� ���� ����� ���� C�-"<&� �������� ���#��� ����� 2��0�� �� ������ A�

��2��������3 �����-"<&�����&0������3�� ����.�����#��� �����2��0����

������ � ����� �� ����� ����� � ��� ���� ������ ��A� �� ��� ����� ����A� ��

��#��� ���0������3���� ������

5��� �� ���6� -"<&?�@� ��� � 7�� ��� �91� �� ��#����� ���������A���� �����������������������4 ��A��������������A����������������2�������

Page 57: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

57

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,001,0

1,5

2,0

2,5

3,0

3,5

Dab

re-f

echa

( nm

)

t ( ns )

25ºC 35ºC 45ºC 55ºC 65ºC 70ºC 80ºC

��

d ��� U� ���7�0������� �� 7�� ��� �91A� ��� -"<&g�� ���� ������A�

����� ����� � ��2�� %��,A� ������� .�� �� ��2�)��� ���� ���7�#���� ���� ��

�7����������K����A������� ���� ���� ����� ����6� ���7�0������������������ ����

�� �A��������#�����A����������������6���������� ��8�A���������������

����������7�0������������.���������� ���� ��#������ ������������BA���2�)���

�����.��������������2���� ��&���������2���A��7�� ��� ������������91�/�

������2������.��������������8�A���������������#��������������2���%�����

%��,��6����2�)��������������7�0������������������7�#���� ��8�����.�� ��91���

�� ��2�)��� ���� ��2���A� ����� ���� �7������ �� ���� ��� ���� �� �� �����B� ���

���� ��� � ���A� ���� �.�#�� ���� ��� ����� ���7�#����� &�#����� ���0��� .��

�������� ����� ������7�#������.����8�A��7�� ����91������ ���������

�����������0����A�������������&0������3���

5��� ����76�&0������3?�@�����7�� ����91� �������� ���������������

Page 58: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

58

0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 2000,00,20,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200

0,00,20,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200

0,00,20,4

0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200

0,00,20,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200

0,00,20,4

0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200

0,00,20,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200

0,00,20,4

Resíduos

25ºC

35ºC

45ºC

55ºC

65ºC

RM

SD

( nm

)70ºC

80ºC

V����� '�������� �������������0���#���� �� ����������#��� �������

�� ��2�)��� ���� ���7�#����� 6� ��2�� %���� ������ �� �� F ��� ��� ��������

�������� � ��� �,,��� ��� ��� ��������A� ���� �������� ������ �����

��0����������� ������������ ���������������4 �����

e� � ������ ��� ���� � ��2�� %���� .�� � �,D�� ����� �� ��2�)��� ��

������ � ������� 2� ���� �����0�)��� � �� ������� �� .�� /� �� ������

� �����#���������� ������������ �������6��������#��� ������������ ���

��� �����������(,D�A����/���� ������ ���������0������%�D���

5��� �����8>�-"<&��/�������������������7�� ����91� �������� ���������������

Page 59: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

59

5��� �� ����>� �������� ������� ��� ��� ��� ��.������ �� 7�� ��� �91� �� ������ ���������������&�������� ����#��)������������ ��������������������

25ºC 1 2�

35ºC 1 2�

45ºC 1 2�

Page 60: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

60

55ºC 1 2�

65ºC 1 2�

70ºC 1 2�

5��� ������>��� �� �����

Page 61: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

61

4.2 Conclusões

C�� ������� ���� �������� �2����� ����� ��� � �7���4 ��� ��� �����

2� ���������������2�)��� ��� �����7�� �����8�����91>����� ���#�������

2� ��� ���0������A� .�� /� �� ���� ��������A� �� � ���� .�� ����� ������� 2� ���

��#��� ����A� �� ���� �� ���� ��� ��� ���� <� ��� ����A� � ��#����� �� �

��������0������� ������ � ����� ������ ���##���� ��� � �����2��� U�

��#��� ����� 0������3� � #��#� ��� ��� ���� ���� ��� ��� �� � ���� �� U� ���

�� ���#����������������.�������������� ����������� A���� ������ ������

���� ���������� ������� �� �������������#���E� ���������� ���7�0����������

7�� �����8�����91�������������0���U���#��� ����������� ��A��� ����������

�����.����������� ���������� 2���6� ������������91� ����������������

����������������0������������������������������������ ��#���� ���

���� ��2��� ��� .�� � ���������� �8�� ��� ������ ��� ��� ���� ���� ��� �����

��#��� ������&� �������������#�#�����������.���� ��������������0��������

7�� ��� �91A� ��� ��������� U� �8�A� �������� �������� U� ��2����� �� 2� ���

������' ����

80ºC 1 2�

5��� ������>��� �� �����

Page 62: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

62

Referências

Z�[� E�� b�� ���3�A� V3�&� �� ���A� &������ �� ��� <������� 8����2LA� ! ������� ��� V3L�����

�3������LA�b���+� �� ��G �#�����c�A�E��A�6������

Z�[� b�� E�0��A� E�� b�� ���3�A� "�� :L A� 6�� <�3��3��A� P �� <��� ��A� �� ��� b��NLA�

����� �����A�(�A�� %(�A�?�**�@��

Z [� �̀�"��A�6��9h��h � A� �̀�V��iNL�iA� �� �̀�-�#� � A���� ��A�(�A�% %A�?�**�@��

Z%[�K��b�N� �A�6��<3� �L�A�"��-�A�&*�������#���!�� � 1�A�"(A�%��A�?�***@��

Page 63: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

63

Capítulo 5

Energias de interação e áreas acessíveis ao solvente.

G���������������������� ��4 �����������������������#� ��A������

�����2���A� �����������������0������������/���/���#/��������������������

�����#���������#� ��A�66<��C��� ������ ������66<�������������3��������������

3�����;0�������66<���������������� ���������� ��� �������������� ������

��� ������ �� Z�[A� �� #��� .�� �� ������� �� ���� �7����� ?�� ��� ���

�������� ��� 3�����;0���@� �� �� ����� �7�������� ���� �������� 3������������

������ ������� �� ��� ������� ��0��� ��� ���������� ��� ��������0�������� ���

������ ��Z�[����

6��� ��2������� �����������������>�� ��2���������� A�.��/�� ��2��

���� �������� ���������������������� ����� ��2�������� ����#� �����

5.1 Resultados e discussão

6� ��2�� ���� ����� �� �� 66<A� ��� � ���� �� ��������A� ��� �� ���

��������������������������7�� �����6��66<�������������3�����;0����A��������

��� �8�� �� �91� ���� ����� ��;7���� ��� ����� �� ���������A� ��� ��� �� ���

%% ���� V��/�A� �� ����� ������ ���� ��� �������� 3������������ ��� ��������3��

����� �����3 ��� 6� �91� ����� �� ������� 2�� ��� �7�������� ���� ��������

3�����������������������U��8�A���������% ���������V�������#�������� ���.��

� �91� � ��� ��� �������� 3�����;0����� ����� ��� 3������������ ����� ��� ��

�7�������� �����3 ��� �� ���#� ��A� ������ ���� ��� �� �8�A� �F��� ��������

3�����;0���������� ����������2������7���������&��������A�����������

�7����� �� ���#� ��A� ��� � ������ ��������A� /������ � ������������91����

Page 64: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

64

.�� � ���������� �8�A� ����� ������ � ��2�� ����� ���� ����� �7�������� ��

�����������/���� �����#����������' ���������#� ���������������0����������

20 30 40 50 60 70 80

36

38

40

42

44

46

48

50

52

AA

S ( n

m2 )

T ( ºC )

hidrofóbica (XBC) hidrofóbica (XTL) hidrofílica (XBC) hidrofílica (XTL)

6�� � ��2��� ������ ��� � ����)��� � ��� ?� ��2�� �� ������ @� ��

� ������������� ?� ��2�������� ��2@� ������������������������� ����

�� ��2��� ���� �� �� �� 6�� � ����)��� � ���� ������ � �����/���� ��� �2� �����

��������� ��������� �������,�( �A���������� ���� �� ���������� ����

�2��������#����A����2��������;7������������ ����� ��.\� ���� �����

���������� ���A��7��� �����������������A����2���������������������

V�������#�������� ���.����91������ ��� ��2�����������#��.���

�8�� ��������������&�������������� ��2����� � �������� ����������������

������ A� � �91� /� ���7����� ��� � �,N��������� ���� ����#��� ��� .�� �

�����������8�A������ ����� ������ ����)��������� ��2A����������� �������

��������������,N���������������� ������������������������<�� �������

������ ��A� � 7�� ��� �91� �� �� �� ���0������� ��� �$,,N��������� ����

���������8���

5��� �� %��6� 66<� ��� �� 7�� ���� �91� �� �8�� �� ������ ���������������

Page 65: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

65

20 30 40 50 60 70 80-4900

-4850

-4800

-4750

-4700

-4650

-4600

-4550

-4500

-4450

-4400

E (k

cal.m

ol-1)

T ( ºC )

Proteína XBC XTL

��

20 30 40 50 60 70 80

-1900

-1850

-1800

-1750

-1700

-1650

-1600

-1550

-1500

-1450

-1400

E (k

cal.m

ol-1)

T ( ºC )

Proteína-solvente XBC XTL

5��� �� %�"6� � ��2�� �� ������ � ��� �� 7�� ���� �91� �� �8�� �������� ���������������

5��� ��%�(6�� ��2�������� ����#� ��������7�� �����91����8�� �������� ���������������

Page 66: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

66

5.2 Conclusões �

6� ������' ��� �� �2� ��� � ���0������� ��� �������� ����/���� /�

#������A������� ����2���A����������������#���������#� ����6�7�� ���

�91� ����� �� ����� ��� �� ����� �7�������� ���� �������� 3������������ ����

������� U� �8�A� �7�������� ���� ������� ������ ��� 2� ���� �� �7�������� ��

����3�����;0����6�� ��2����������� ��������������� �����U�� ����������

66<� ��� �������� �� ����� .�� ��� �������� 3������������ �� ���0����� ����

������� ��� ��� � ���0������� �� �91A� ����� �����#���� ��� ��#���� �� 1:� ��

�� ���� ��� �A� ����� ����� ��������� �� ��;7���� ������A� �� ��0/�� �������

������� �����0������� �� ���#� ��� �� ���� ���91������� ��A� ���������

�7�������� ���� �������� 3������������ �� ���� �� �91� ��#�� ���� ����� ����� ��

�����.������������� ������#���������' ���������������0�������A����/����

������ ���� ����������� ��� � ����)��� ������ ��2� ��#�� ���� �������A�

� #����2 ��� �� 1:� ����� 6�� � ��2��� ��� � ������� ������ ��2� �� ������ ����

�����������

Referências Z�[�9��V��������A�-��<�� �#� A�E��&��-���A������ �����A�(A��� �A�?�**(@��

Z�[�E�������0�A�b��"��"���� �̀A�"!���!��� �!����!%��"�A�$�*�A�?�***@��

Page 67: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

67

Capítulo 6

Ligações de hidrogênio �

6.1 Histórico

+����� ����)���� �������/������ �� ���2����3����7�������� �����

�����*������K�� ���Z�[��&��� ���������A�P �� ���� ���������� ����)��� �����

�� �������� ��� ���H#�4 ������ ����I�Z�[A�.����������������;��������������

����� X�� ������2�������3����24 ��������*���"�������P � ����� Z [��������

������������������� ������������.����������� ������H���� ���I�

���������#����� � ����)��� � ����������������7��������������������������

����)���� <2���)��� ��� .�� �� ������ ��� 3����24 ��� ��� �� �� ���� ����� ����

� ������� ����� ��������� ��� �����A� ��� �*�,A� ���� :22� �A� 1������ ��

-���0�3A� ��#/�� ��� ���� ������� ��� ��.����� ������� �� ������� Z%�$[�� � 6�/�

� ���A� ����� �� X�� �� ��� ��������� � ���� ������� ��� ���/���� ���

����� �#� � 3�� �� ��� ���� �� ����� ��� �� ���� ��A� ������� #2��� �����

�����������.����������������+�������* ��.��1� ��V�� 2A��� ������

����������� ��0�3��H6�K��������1�2�)���d�����I� � ��������� ������

��2�������3����24 ������� ������3����24 ����Z([��

6���������A������������4 �������� 3����� ������ ��� ���������1:A�

������ ��0�3��� ������ ���� #����A� ����� � �7�������� ��� H ���������I�

����� ���� ������ ��.����� ��������� Z�[A� �� ������ ��� �������� ����/����

�������������������������� ����� �������������������� ������?���3��B�

�� 3/������α@� Z*[� �� � ��������� �� ������� ��� ���� 3/����� ��� &K6� Z�,[��

&���.����#������������������������*�,���*(,A� �.��3�#��������� �

1 Os termos “ponte de hidrogênio” e “ligação de hidrogênio” são corretos. O termo “ligação de hidrogênio” tornou-se mais usual a partir da década de 40. Atualmente há muitas discussões sobre esse tema, na qual, propõe-se que o uso do termo “ponte de hidrogênio” é quimicamente mais correto para descrever uma interação entre 2 átomos mediada por outro átomo, no caso o hidrogênio.�

Page 68: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

68

����������� �����A� ��������0��.����A���� ������ �����#����U�����.����

���V�� 2�������L�� #��#� �������� ����������1:� �������� ���������������

��������� �A����������0���Z��[A�����2� ��Z��[A�3���2��0� �Z� [A�.���� �Z�%[�

�� ����� +���� � �� ����� � ���A� .�� ��0��� �� ������� ��� �� 1:� ��F��

������� �������� ����)�������A����������� ����)���� �������������A����������

������������ ����� ����)������.���������������� ������0��.����A������

��� ��� �#���� ���.������ ���������� ������������������ ���d ���

#����� 1:� ��� F ��A� ��� �� ��� ���� ���� ������ ��� .�� ��� �����

� ��#����� ���� ����� �� X�� �� /� �� 3������ ����� ��������#����A� �� ��FA�

||||1�

=− ∆∆

n

iLHLHn GG �� ����� �� X�� �� /� � ������#���� ��� � ���� ������ ���

�� ��.\4 ������7���4 ������1:��

6��1:��4��������7���#�� ���� #����2��������������#������/� ����

��;����� �� �7������ ����� &� ���� ���� ���������� ����' ��� .' ���� Z��[A� �

�������� ��� ������� Z�$[A� � ����� ' ��� �2 /���� ����� Z�([� �� � ��������

��������Z��[��������/� �����4������������2���������� �����������#� ����

����� ������ � ����)��A� ���� 0��� ����� � �� ������' ��� �� � ��� ������

�� ������.����J0��.������6����.������������� �������������1:�/����� ����

������ �� ���� �����������2��A�� ��� �������� ������

G��1:��� �����������6���8�.������� ��������� �2��#����������

.���������������3����24 ����C�������6�/�2����� ��������������������������

��;�� A�������������2���������������:A�� . ���8A�.����#�����������������

��/��� �� ��#���� ��� � ���2��� ���� �� 2���� 6�:A� /� ��������� ����� �� ��������� ���

��;�� ����������������������������;� ���0����������� ����������� �����

1:A���'�������2���/����������������' ����6jjjj8���:jjjj8�����' 2���6�:jjj8�

���� ����������� ��� � ������������ ��� �� 1:�� � 6�/�� ���� ��'�������

2���/������� ������A� � � ��2�� ��0/�� ����� ���� ��� ��� ���������� �����

� ����)����6��0���$�������� ��������������������������� �������������1:���

Page 69: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

69

4��������6�&����� �������������1:��������������������

* �� �������� 5� ��� = �� � ���! ��� 5 ����

�0��,���-�

M�����6k:jjjj8�,������-�

/� ��������� �

* ����,N��������-�

l,��$�

�(,���,�

+�����

���%,�

,��$�,����

� ,��(,�

"������

%����

m,����

*,�� ,�

+���

l%�

������

K��� 3�� �� ��� ����� ������� � ���� ��� ��4�� ������ ��� 1:A� � ��������

���������� �� ����������#�������� ���������������� �������������1:��6��1:�

��������� ������������������������������������� �A������7�����A�.����� ����

2�������0� ������� ���� ��������������� ������nCjjjj:kK���

C� ������ U�� � �����)��� � ��2/����� ��� 1:� #��� �� ��� �0����� ����

���' ���.' ���A�.����� ����2� ������������ �����������A����/��/��������

�� �� 3�������������<�������2� ������ �� ����������/������ ���#� ���

���� � �����#���� U� ���' ��� .' ����� ������ �������� ��#��A� � ���A� ������

�������� ���� �������� ��������� 6� # �2��� �� �������� �������� /� �

�����0������� U�� ������������ ������;����� ��� ������� #�� ���' ���

���������A� ��#���� �� �� F ��� ������� ���#�� ��� �� ��2��)��� ��� �� ���

��������� .�� ����� ���� �0������ 6�� 1:� ���� �������A� ������ .��

� ������� ��A� ����� ����� ��� ����A� � ���� ��� .��� �� ����� �������� /� ��

E-C"C<*$� 6�� Z�*[�� 6�� ������� ���� ����� ��� ���� � ����� �� �� ���

����/����� 2���/������A� ��� ����' ���� �� ' 2���A� ��� ��� ��������� ��� 1:�� 6��

1:� ��� ������ ��������� ����� ��� 2���/������� &� �������� ����� ����� ����/����

2���/������ �������� � � ��2�� ��� � ������� � ���� ��� ������� � #��#����� �

1:� ����

Page 70: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

70

6.2 Ligações de hidrogênio intramoleculares

6�� ������� ��� 1:� ��� ����� �������� ������� ��� ���� ��2�)��� ��

���� ���A��������������������������������' ������1:� ����������C������ ����

����2�)�������.���������� ����� ��������� ��6��1:� ������������������ �

�����>��������� ������������� �����?88@A��������� ����������������?8<@���

����������������������?<<@��6��� ����)���� ���������������������2���

����������������� ������� �A�������3#� ��������������1:� ���� ����������

2����A������7�����A�� �������?k�CC�jjjj: K=k@���

K������������������1:� ��� ��������������,D���������������

����/��� ��� �� ��� �� �.���0���� ?������� %@� �� ��� �� � ���#��� ��� ������

��������

6.2.1 Resultados e discussão �

6.2.1.1 Xilanase XBC

6�� ��2��� $��A� $��� �� $� � ����� ��� �� Q����� ��� 1:� 88A� 8<� �� <<�

��������#�� ��A� ���������� ��� ������ ���� �� ����/���� ���0��������� C� ���� ���

� ����/���.������� ������� Q��������1:� ��A���������������88���� �����,�

��������8<���<<��C� Q��������1:�88����� ����������� ���� �����������

���� �������������A�� . ���.����1:�8<���<<��������� �����,�����A�

�� � ��� �� #���� ��7���� U� ��D��� C�� ���� ���������� ����� ��� ����� ���

Q���������1:�88A�8<���<<�����������3 �����K��2�����. ���������1:�8<�

��<<������ ����������#���)��������������������.��U��1:�88�������/�

���� X�� ��2�������1:A����/��������� ����� ��1:�� #��#� ����������

��������������6��1:�8<���<<������������ ��#����U�� ��2���/����A�����FA��

��#��� �����������������������#����U�����������������.������1:� ���

��F�� ����� ��0����� 6�� ��2�)��� 3/����� �� ����� ���� �� .�� ����� ��� �� ���

Q��������1:� ����6� ��2����3/���������� ������#����������1:�88A����������

���������� ���#��A� � . ��� .�� ��� �� 1:� 8<� ����� �������� �,�

Page 71: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

71

��2�)��� � ��D�A� ���� � ��� 2����#�� ��� �/� $�D��� C� Q����� ��� 1:� <<� /�

0�7�A��� ������ ����������������������6���2��������� �������� ������

���.��%�1:� ��������������������?88A�8<���<<@��� ��������7�������������

�������

6��� ��2����/�������1:� ���������������������������� ���A�������

��������A� ������ ����� ���� �� ��2��� $�%A� $��� �� $�$� ���88A�8<� ��<<A�

��������#�� ���� �� ����� ������ ��� ���#���A� �������� �0���#�� .�� �� 1:� ���

����� �������������������� ���A������������?88A�8<���<<@A������ ���#������

�/����������3 ���W�≅����%N��������������1:�88A�≅�� �,N������������8<����

≅� � � N������������<<��K� ��2��������� ��1:� ��� ������ �������#�����.��

������������� �����6��1:�8<���<<������������� ��2������� �2��#�A������

�2 �� �������� ?���� �7�����A�E�� �� 6��@� ����� ��� ����� ������ ����2�A�

��� ����� ���������������#��

20 30 40 50 60 7005

101520253035404550556065707580859095

100

Nº d

e LH

BB

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

5��� ����>�KQ��������1:�88� ��8���

Page 72: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

72

20 30 40 50 60 700

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

22

24

LH B

S

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

20 30 40 50 60 700

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

22

24

LH B

S

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

5��� ���">�KQ��������1:�8<� ��8���

5��� ���(>�KQ��������1:�<<� ��8���

Page 73: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

73

20 30 40 50 60 70-4,0

-3,5

-3,0

-2,5

-2,0

-1,5

-1,0

-0,5

0,0

E ( k

cal/m

ol )

BB

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

��

20 30 40 50 60 70-7

-6

-5

-4

-3

-2

-1

0

E (k

cal/m

ol) B

S

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

5��� ����>�� ��2���/������1:�88� ��8���

5��� ���%>�� ��2���/������1:�8<� ��8���

Page 74: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

74

20 30 40 50 60 70-7

-6

-5

-4

-3

-2

-1

0

E (k

cal/m

ol) S

S

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

��

6�� � ��2��� ������ ����� ������� ��� ��� �� � ��2��� ��� 1:� ���

��������� �� ���� ��� ��� ���� ��A� ��2��� $�(A� $��� �� $�*� ��� 88A� 8<� �� <<�

��������#�� ����6 ��� �����1:�88A��� �������.�������� ���� ����/���.��

�7�0������� ���0������A� ����� � ��� �� � ��2�� ����� ��� ���7����� ������

�� ,�,N��������A� ��� #����� ���� ����#� ��� .�� � � ��2�� ����� �0���� ���

1:� ��� ���� ���� ���������� �� ��� ���� 6�� ��2�)��� 3/����� �� ����� ���� �� �� ���

���0������������1:�88A������ � ���� ��2���≥��%,�,N����������6��� ��2���

���������1:�8<���<<������� �������#��.�����1:�88�������F������#����A���

1:� 8<� �� <<� ���� � ��#����� ��� ���� ������� ��#���� U� ����� �� ��� 2�����

����2���A����/������������� ��� Q�����.����1:�88��K��0� �������A���

1:�88����������������� �����������0������������������������ A������

�� ���0��������������������������0��������������� ���

5��� ���>�� ��2���/������1:�<<� ��8���

Page 75: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

75

20 30 40 50 60 70-300-280-260-240-220-200-180-160-140-120-100-80-60-40-20

020

Ene

rgia

tota

l BB

( kc

al/m

ol)

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

��

20 30 40 50 60 70-100

-90

-80

-70

-60

-50

-40

-30

-20

-10

0

Ene

rgia

tota

l BS

( kc

al/m

ol )

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

5��� ����>�� ��2����������1:�88� ��8���

5��� ����>�� ��2����������1:�8<� ��8���

Page 76: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

76

20 30 40 50 60 70-100

-90

-80

-70

-60

-50

-40

-30

-20

-10

0

10

Ene

rgia

tota

l SS

(kca

l/mol

)

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

C���������� ������� ��������#���������������0����������7�� ����

/� ������A� ����� ��������� ���F ��� ��� ������ ���� ���� ���� 0��2���� ������

������������ �����K���������%��0���#�����.����������� �������� ����

����� ���#�������������6���2������������������������#������������ ���� ���

��2������.����������������������������A� ���������������������A�

��F���� ���#�������������������������#����C����� ���� ������0/��

/� ���� ��� �� ���#��A� ���/������� ������ �������� ��� ����� #�����.�� ��2��

�� ���� ��� ���A� �� ����� ��������� ���7�#����� 6� ��2����J���7�0������� ����� ����

�����������-"<&�������������C����#���.���������/����������������������

����� � ����� ��� ������ ��� ���� �� � ����)��� .�� ��� ������� �7������ ��

������ ���������� ����)������� ������������������������� ����A������

� ����)��� ���� �� 1:� ���� 8�7��� ���#���� ��� ��� �������� ��� ���� ��������� ��

� ���A�������������������1:� �����

C�������������������' ����������A����������� ���������Z�,[A����>����

�������� E�(�� �� E��(�� .�� ��� ����� ���;����� �� ��������� �����J0���

��������#�� ��A����������6�2���A����� F ����������������� ��9L�$�A�9L�$*A�

5��� ���7>�� ��2����������1:�<<� ��8���

Page 77: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

77

9L�(*A�9L��,A�9L��$$���9L��(%��������� ?��4�@�������� ���9��*A�9��(����9����*��

6�� ��2���$��,���$��������� ������#��)����� ��2�����������A� ����� ���

��������� ����������)������������������������������������������� ����������

��1:� �������������������������������������������6���0����$�����

$� ������ ��������)�����������4 ������O A�+�A�����������������������1:�

88� �� <<� ��������#�� ���� 6�� 1:� 8<� ��0/�� ������� ������A� ��� �� ��

�� ��2���� ���� �������� � ��7� ��� ��� � ��D�� �� � 3��� $�D���6�1:�8<�

������������9L��,�<��� ,�����+��l��,O ���

5��� ����8>�R���������������������������� ��� �����8������� ����������������.����������������������������C�������������#�����3����������E�(������(�A��������������9��*A�(������*A��������������9L�$�A�$*A�(*A��,A��$$������(%���

5��� �����>�R�������� �������������������� ��� �����8������� ����������������.����������������������������C�������������#�����3����������E�(������(�A��������������9��*A�(������*A��������������9L�$�A�$*A�(*A��,A��$$������(%���

Page 78: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

78

4�������"6 +��?O @����1:�88������������������ ���� ����������#����7�� ����8��

*��9�33�K�:jjjjjCn��

"%D�� (%D�� �%D�� %%D�� %D��

��>=�'��:BA�

'��B@���:A>�

��:A@�'��B@�

'��:BA���>=�

��>?�N��:>@�

N��:>@���>?�

��@;���:A@�

� :3;���@;�

��:>>���63�

��::A��� :A=�

�� :A=���::A�

'��B;���B?�

��B?�'��B;�

��?�N��3B�

N��3B���?�

��B:����:>=�

��:;@���:A?�

��:A?���:;@�

���:>=���B:�

*$� �

��� �

*��(�

*$� �

*$�*�

*(�*�

*��,�

*,���

(����

*%���

�����

* �*�

*��,�

* � �

*(���

(��*�

*�� �

*(�%�

(*�(�

*(���

*�� �

*����

*$�*�

*%���

*����

*�� �

*����

*,���

*%���

�%���

�*�%�

*,�$�

*����

*$���

�����

* �%�

*$���

�%���

*����

*%� �

*%�$�

*(���

*,�,�

*$�*�

*��,�

�*� �

���%�

*��*�

�%���

���$�

*����

*$���

*(�%�

� ���

* ���

*$�,�

�(�(�

*(�*�

�����

*����

*��$�

*%���

*(�*�

*(���

�����

( �$�

*%�%�

((���

*��,�

*����

* �$�

*$���

�(���

*%���

*%� �

���*�

*(���

���,�

*��$�

*$���

*����

*����

*(���

�����

((���

*%�$�

(����

�*���

*�� �

* ���

*��*�

*,�%�

*%�,�

* �*�

��� �

Page 79: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

79

4�������(6�+��?O @����1:�<<������������������ ���� ����������#����7�� ����8��

*��9�99� "%D�� (%D�� �%D�� %%D�� %D��

��>=�'��:BA�

��>?�'��B@�

��B:�'��B@�

��@;�'��:BA�

��>?���:>>�

��:>>����::?�

��:>>�'��B@�

'��B@�� ::B�

'��B@���@;�

��:A?�'�:AB�

�,���

$����

���%�

�(�$�

���((�

��

��

��

��

��

*��,�

�,���

����

�$���

��

�����

��

��

��

$��*�

*(���

�(���

��

�$�$�

��

��

��

��

��

$ �%�

*$�*�

%�� �

��

�(�,�

,�*�

��

���*�

��

��

$%�$�

* �*�

�(���

��

��

�$�*�

��

��

,���

�*� �

%��,�

C�.����� ������1:� ��������� ������������������4 ���A�+���9������

1:� 88� ����� ��� +�m(�O A� �� ��� .�� � ������ ������� ��� ���� ��� *,O � ���

���������������������������C���������������������� ���.����1:�88�

���� ��� � ��� ��� ������' ��� ��� ��2����� �� ����� ��� ����A� � �� ��� �

� ��2������ �� ������� ��� ������ 6� ������#���� �� ������� ��� ����A�

�����F�� �����������A� /� ������ ��� � ������ ��������0�������. �������

��#����� �� ������ �� K����� ���� �� ������ ��#�� ��������� ���� ��� �� ���#���

��#���� � �� ������ ����� ��� 1:� 88� .�� /� ������#�� ������ ��� ����

������������

C����������������� ���������������� ������������' ���������������

������ �������������1:�88�����#���A� ���� ��� ������������� ��2�)����C�

�������9L��(%�/���.�������1:�88������� ����������4 ���A�� ����%,���$,O ��

������ ��������4 ��A������������U��������1:� ��A������#����������� �� ���

��� ������� 9L��(%�� 6� 9L��(%� � �� ������ �� ���� ��� � ���A� F���� ��� ��

���7�����������#�����?��2�)��������������7�0������@A��� ��� �����������B��

C� ������� 6�2���� ����� ��������� ����� ��A� ���� ��� �� 1:�88� ������� ����

������������ ����� ���0�������� �� ��������2������������� ������������

� �����K� 3��1:�<<�����������������������������1�2��������������.��

����� ������� ���� ������' ��� �������� ��� /� � ��� ��� ���� �������� ���

Page 80: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

80

1:� ��A� ��� ������ ������� ������ ����� � #��#����� �� ����� �� 6�2���� �

��#����� � �������� �� 7�� ���� �8��� ������#����� �7������ ���� ��A� ����

������� ��� ������ ������ ����2��� Z�,[A� .��� ��� $�O � � ��#����� 0���;2���

���������� ��#���� U� ������ �� 6�2���� ��� 6� A� �� � 3�� �������� �

��#�����. ����6�2����/��� #�������1L���C���FA�����������������2��

������#�� ���/�� ��� ���������#������������A����/����������������#��

���� ������' ��� � �������������� ��� �0�����A� ����� � 3�� �� ��� ��� � ����

����������

6�� 1:� <<� ���� �� ��� ���.\� ���� .�� �� 1:� 88�� C� ����� ��� 1:� <<� /�

� ���� �� ������ ������� ���� ����� ��2����� .�� �����0������ �� ���� 3����� ���

������������0�������������������#���6��1:�<<����������� ��������.����

.�� � #��#��� ��� �������� 9L�$�A� E��(�A� 9L�$*A� E�(�A� 9L��,� �� 9����*�� C��

��������9L�$�A�9L�$*���9L��,�������1:�<<��������������������������E�(����

E��(��� V����#���� ��� � �� ��� �� ������ ������� ������� �������� ��

���� �������.��������������������������0������ �����������������

Z�,[�����������0������������ ���� �� ���������� ������������ #��#� �����

������7�� � �����0�����A� ��� ������ ������� ��� � ��2��� ��� � ����)���

� ��������������6��1:� ��������������� ���.����������������9L���4����

������' ��� � �� ����A� ����� ���� ����� � ����� ��#���� ��� �������� ��

� �� �����������������1:�88���<<�.��� �/�����2���������2�������������

����������

Page 81: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

81

6.2.1.2 Xilanase XTL

C������������0����������7�� ����91������������ �����������������

����������������������#�������8����

6�� ��2��� $���A� $�� � �� $��%� ����� ��� �� Q����� ��� 1:� 88A� 8<� �� <<�

��������#�� �������7�� ���������������91��6���������� �7�� ����8�A���

���� ���� ����/�.������� ������� Q��������1:�88A�8<���<<���

V��������0���#��.���. ���������1:� ������������ ������ ���� ����

/������ ��91����.�� ��8�� �����4�������?88A�8<���<<@����/��������������

��� ���������1:�8<���<<��+���������������������$,���2�)���88����

��� �� ��� ���������� ���A� �� �� �� ��� � ���� .�� � ���2�

�����������C�� Q���������1:�8<���<<�#�������������������������.����

1:� 88>� /� �� ������ ��������� ��� .�� .���� �7�0���� ���� �8���

6���7����� ������#���������1:�8<� ������������������������U��8�A�

�� ���.������7���A��������� �A�������������D�������������U����2�)���<<A�

������������������#��������,���2�)�������� �7�� ����91����.�� ��8���

����� ���������������� ����� ������7�� ���A����������0���#��.��

�� ���� ��� 1:� 88� ���� ���� ���� ����� ��� Q������ ��� ��2�)��� �����

��;7����A� ���� �7�����A� �� ���� ��� ������ ����� �� �� Q����� ��� 1:� 88� ���

���7����� ��� ,� ��� �0�� 7�� ���A� ��� ����� �� ����������� K������

���� ������ Q��������1:�8<���<<����� �����#�� ���������� �7�� ����91A�

�����7������������� ���������� ����� Q��������1:�8<�/���������7�� ���

�8���

Page 82: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

82

20 30 40 50 60 700

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Nº L

H B

B

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

20 30 40 50 60 70

5

10

15

20

25

30

35

40

Nº L

H B

S

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

5��� ����">�KQ��������1:�88� ��91��

5��� ����(>�KQ��������1:�8<� ��91��

Page 83: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

83

20 30 40 50 60 700

5

10

15

20

25

30

35

Nº L

H S

S

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

��

6��� ��2����/�������1:� ���������������������������� ��������2�)���

�� 7�� ��� �91A� ��� ��� ��������A� ������ ����� ���� �� ��2��� $���A�

$��$� �� $��(� ��� 88A� 8<� �� <<A� ��������#�� ���� �� ����� ��� ��� ���#���A� ��

� ��2��� �/���� ��� 1:� 88� ��� ������ ��� ���� ���� �� ��2�)��� ���� �����3 ����

U.����������������� ���2������������K���������1:�8<���<<A��0���#����

.�� �� � ��2����/���� �0����� ��� � 7�� ��� �91� ������ ������ ��7� ���

� ��2���.�����0����������8�A����/����#������������.�� ���������1:�

8<A����2�������������� ����� ��2���/�����������#����.�� ���������

���� ����������������� � �N�������������0/������������U��8����

5��� �����>�KQ��������1:�<<� ��91��

Page 84: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

84

20 30 40 50 60 70-4,0

-3,5

-3,0

-2,5

-2,0

-1,5

-1,0

-0,5

0,0

E (k

cal/m

ol) B

B

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

20 30 40 50 60 70-10

-9

-8

-7

-6

-5

-4

-3

-2

-1

0

E (

kcal

/mol

) B

S

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

��

5��� ����%>�� ��2���/������1:�88� ��91��

5��� ����>�� ��2���/������1:�8<� ��91��

Page 85: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

85

20 30 40 50 60 70-14

-13

-12

-11

-10

-9

-8

-7

-6

-5

-4

-3

-2

-1

0

E (

kcal

/mol

) S

S

T ( ºC )

polegar dedos palma helice corda

��

K� 7�� ��� �91� � ��2���� ����� /� ������ ���� �������� ������� .��

�� ��.\� ���� ����������������������1:�8<���<<��C�������������� ��#����

���� ����� 1:� ��� ���� ��� �������� 6��*(A� <��**A� �� <���,,A� .�� ��#���� U�� ���

���7���������������0/��1:�8<���<<�� ��������C��������6��*(��������

1:�<<������6�2��$�.������������ ������ ������ ���.��/A� �#�����A���

�� ��� ��� �� 6� �� ��� ��� � ������ � ���� ������ �������A� ��2�� $���A� �����

����� ���������������,O ���������� ���7��������������������$�D������

(,D�A� ���������;�������91A������� ������ � ��� �������������G��#���

.�� �� ������� 6�2��$� � �� ������ �� ���� ������ ��� ���� �� ��� ��� � /� ��

������ ��� ����� .�� �� ���0�� ��� �� �� ��� �� ��2����� ����� ��2�)��� ���

�� ���)��� 0�7�� �� ��������� ;����� V��� ��A� � �7���4 ��� ��� �� �� ���

��� � �7����� � ����� ��2����� ����� ��� ����� ���� ��� ��� ��� �� �91� ���

�������U��8���6��4 ������� ������ � ���� ���)���;���������������2 3��

������7�0������� �������������������������������� �������������� ���)����

5��� �����>�� ��2���/������1:�<<� ��91��

Page 86: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

86

6�� � ��2��� ������ ��� 1:� 88A� 8<� �� <<� ��� ��� ���� ��J��2���� �����

������������91��6����������������������8�A������� ���� ����/�.��

�7�0������� ���0������A� ����� � ��� �� � ��2�� ����� ��� ���7����� ������

��%,�,� N��������� ?�,� N������������� ����#� ��� .�� � �8�@�� ���� � ��2�� /� ��

��0������ ��2�������������0������������1:� ����7�0������������� ������������

��� ���� 6�� ��2�)��� 3/����� �� ����� ���� �� �� ��� ���0������� ����� 1:� 88A�

����� � ��� � ��2��� ≥� �%,�,N���������� K�� � ��2��� ������ ��� 1:� 8<� �� <<�

������ �� ������� ������ ��� � ��2/����� � ���� �� ��� ����������������������� ���

7�� ����� ����� ���� ���A� ���� �� Q����� �� �����#���� ��� ����� ���

��2�)���8<���<<�������������������91��K���������1:�8<�������� ����� ����

�� ����� ���� ����� ��� �$,� N��������� �� ���� N��������A� ��������#�� ��A� ����

����#���� ��91����.�� ��8���C������������ ��������2�)��� �������� ���

� ��2�����2 ������#�� ��������� �����9������������ ��������2�)��A������7������

�� ��2����3/����A� ����� ��� � ��2������� ����#�� � 7�� ����91�� 6� ��2��

$��*��������� ��2����������1:�<<��������� ���J��2�)�����7�� ����91��&�

��������� ��� ��� 7�� ���A� ��2�� $�*� �� ��2�� $��*A� �� ������� .�� ��

������������� ����������� ������� ���J��2�)���� ���A���� ���������� ���7�

��� ���$�D����������������� �������� ��A���1:�<<�����������0�������.����

1:�88���#����U��������0�����������#��� ���������2�����������A����� ��A�

� ����� Q�����. ����� ��2�����1:�<<��������2� ��������)������� 2��

5��� �����>�1������������� ������ �6��*(�6�2��$��

Page 87: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

87

����������������0/���������� ���������������6���� ����������� ���

�����0���#��� ������ ��������A�� ����� ��2��#����������� ,�N�������������

� ������ ��������A� � . ���.��� ��2����3/����� ����� ��������� ����

����� � ��2�� ��� �0�� �� 7�� ����� &� ���� �� ���� ��� ,� �� %�� 1:� <<�

��������� ��� ����� ��� 7�� ���� �8�� �� �91A� ��������#�� ��A� ��������

��0/�� �� �� ���� ��� ��� 6�� �� ���� ��� �� ��������� ������ ������ ��� �

�0���$�%��

20 30 40 50 60 70-200

-180

-160

-140

-120

-100

-80

-60

-40

-20

0

20

Ener

gia

tota

l SS

(kca

l/mol

)

T ( ºC )

dedao dedos palma helice corda

��

5��� ����7>�� ��2����������1:�<<��������� ��� ��91��

Page 88: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

88

4���������6�� ��2����/�������N�������������+��?O @������ ������� ������������

23��

������������ "%F�� (%F�� �%F�� %%F�� %F�� �8F��

6�2( �6����*� ����%�?�$�,@�

�� �*�%�?����@�

��(���? ��,@�

�� ��

6�2� ��6��� � ����*�? �,@�

���*�? *�,@�

��(�%�? (�,@�

���%�? �� @�

���$�?� ��@�

��

6�2�*�6���,$� ���%�?�(�,@�

�� ���(�?� �,@�

�� �� ��

6�2� $�6��� � �����?� ��@�

�� ���*�? (��@�

�� �� ��

24��

6�2���6���*�� ���(�?��� @�

�� �� �� �� ��

6�2���6����*� �� ���?�$��@�

�� �� �� �� ��

6�2�%��E�*�� ��*���?*���@�

�� �� �� �� ��

6�2��$�6��*(� �(���?(��,@�

������?$ � @�

���� �?%%�,@�

����$�?�,��@�

������?% ��@�

��

6�2�%��6������ �����? �� @�

�� �� �� �� ��

6�2�%��E�*�� ��$�,�?$,��@�

��$� �?����@�

������?(���@�

����*�?$$�,@�

��$���?$,��@�

��$�$�?�,��@�

6�2�$��6����(� �� �� �� �� �*���?�,� @�

��

&���������2���A����� ������� ���������� �7�� ���������������91�

� ������������4 ��������������U���������������8��. �������� ��2�������

�2��#�A� �� �� ��� ����� ���0�������� 6�2��� �� ���� ��� �� ������

��������� �� ����� ��2���A� �������� ��� �� 2��2��� �X ����� C��

2��2�����X �������������������������������6��� J6�2� $J6�� �� ��������

�8�� �� ������ �������� E�*�J6�2�%�J6���% J6�2�%�� � �91�� 6� ��D�� ������

2��2���� �����������0��� �������� �� ���� ����A� ���/���������� ���0�������

�������� ��������������������/������������ ���2���� ����� ������

2��2�����X ����A������0/������� ������� ��� ��#������6���7���)��������

������ ������� ������� ��6�2� ��6��� ���6�2( �6����*� ��8���A�6�2�%��

E�*����6�2��$�6��*(� ��91��V��� ���������������������������������� ����

��� ������0����7�� ���A��0���#����.������ ������� ��6�2� ��6��� �

?�8�@���6�2�%��E�*��?�91@��������7��� ��� ���������������&����������

Page 89: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

89

�� ��� ��� � ���� ��2���� /� �� ���#�� ��� �0�� 7�� ���� ?��2�� $��,@�� 6�

�� ���#��������������.�����0��������������������� A���������� ���

��� A� /� �� ������ � ������� ��� .�� ����� ����� ��#�� ���� ���� ���� ��� �

� �� ���� �������� �� �� ��.\� ���� ��� ��� � ��������0������J��#�����

�������� ��6�����)�����������4 ��������� ��2����/������������ ������� ��

������������ ��/���&� �0���$�%���������#���.����� ������ ��� ���#��/�

�������������#��� ��91����.�� ��8���!������2 �����.�������� ������ �

����� ����� ��� �� ��� � ����� ����� ��� ������ ?����� +�@� � ���2� ��� ����

����#�� ��� � �91� ��� .�� � �8��� � 6�� ����� ��� �� ���� ��� �� ���

� �� ������������� ������2�)������8�����91��6��� ������ ��������� ��8�A�

6�2( �6����*� ����� ��0�7� ��������� �����4 ��� ��� ����� �� ���������A�

�� � ��� �� ��7���� ��� �O � ��� �����4 ��� � ��D�A� � . ��� .�� � �� ���

��� �6�2��$�6��*(� ��91��� ������ �������% O ?$�D�@�������7�������

(�O ?��D�@� ��� �����4 ���� K� �91� �� �� ���� ��� �� 6�2�%��E�*�� �� 6�2��$�

6��*(���������;7���A��� ���0� ���� ������������2������������2���A�.��

� 2��0� ����� ���� ���� ����� ���A���� ��� ?����� � ������A� ��;7��� �� ���� ���

� ���@���������

� 5��� ���"8>�&���������������������� ������� �������������0������� ��7�� ���� �8�� �� �91�� 6�� �� ���� ��� �� ������ ���� �� ���#��� �����7�� �����

Page 90: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

90

6� ��2���� �������� �� �91� ��0/�� ���� � #����2��� C�� �������� ���

������' ��� �������A� ���������� � �������� Z��[� ���>� ��� �������� E��$� ��

E��(��.���������� ���;������� ��������������J0��� ��������#�� ��A���

�������6�2���A��� �� F ��� ��� �� ��� ������ �� 9L�( A� 9L�((A� 9L���A� 9L��(�� ��

9L���,A���������� �A�9����A�����2���� �E� � $��6���0����$��A�$�$���$�(�

����� �����+�?O @�����������������������1:�88A�8<���<<���������#�� �����

4�������%6�+��?O @����1:�88������������������ ���� ����������#����7�� ����91.

*��9�33�K�:jjjjjCn��

"%D�� (%D�� �%D�� %%D�� %D�� �8D��

'��:B@���B3�

��:3B�'��@>�

��B3�'��:B@�

'��@>����:3=�

��:@�N��6>�

N��6>���:@�

��BB�.� :B6�

.� :B6���BB�

��@@���:3B�

� :3?���@@�

��B?���:BA�

��:@;���B:�

��:A;�'�:3>�

��:AA��� :36�

�� :36���:AA�

'�:3>���:A;�

*(�*�

* ���

*$�*�

*��(�

(����

�,,�,�

*��(�

*,�$�

*����

* ���

*(�*�

��� �

*��(�

�,,�,�

*����

*(�*�

*$�%�

*,���

*����

*%�*�

*��(�

*��*�

* � �

*��$�

*����

*(�%�

(%�%�

�����

*����

���$�

�(�(�

* ���

�%���

*%���

*����

*��$�

*����

�$�*�

* �,�

*(���

*����

*��%�

$$�$�

�,�,�

*(���

( ���

$(���

*%�$�

�%���

*��*�

*��%�

*%���

(��*�

���%�

* ���

*(�(�

*����

*(���

��� �

%����

*(� �

$��$�

$ �$�

*,���

�����

*����

*����

*$� �

�$� �

�,���

*����

*��,�

*(�(�

*%�(�

(�(�

%,�,�

*����

���(�

(��$�

*,�$�

$ �$�

*,���

���(�

��� �

$ �%�

�,�,�

�*�*�

*��,�

*(�%�

*��$�

�,�,�

����

*��(�

���*�

�%���

�*���

Page 91: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

91

4�������6�+��?O @����1:�8<������������������ ���� ����������#����7�� ����91��

*��9�39� "%D�� (%D�� �%D�� %%D�� %D�� �8D��

� BA�'��:B@�

� :?���:@�

'��:B?�'��:B@�

��@@�� :3?�

��:@;���B:�

+ �6=�'��:B@�

��=A���:BA�

��B:���:@;�

N��6>�'��:B@�

�,�

��

��

��

��

��

��

��

��

��

�*�

��

��

��

��

��

��

��

��

��

�����

,� �

(%�(�

��

��

��

��

��

��

��

��

��

$��$�

$(�$�

�%�$�

�����

��

��

��

��

��

*$�$�

��

��

(,���

��

��

��

��

��

��

% �$�

��

��

4��������6�+��?O @����1:�<<������������������ ���� ����������#����7�� ����91�

*��9�99� "%D�� (%D�� �%D�� %%D�� %D�� �8D��

��B3�'��:B@�

��BB�'��@>�

��BB���:BA�

��@@�'��@>�

��@@�'��:B@�

� :AB�'��@>�

� :>���:@�

��:BA�'��B�

��?>���@;�

��B?�'��@>�

��BB���B?�

��:AA�'�:3>�

��:A;�'�:3>�

*����

*%���

��

*����

,�,�

��

��

��

��

%%���

$%�$�

�� �

*$�*�

*$�,�

���%�

($���

*����

���,�

��

((�%�

��

��

��

��

��

��

*$� �

(��*�

���%�

�,���

��

��

(,���

��

��

��

��

��

���(�

�,���

((�(�

%����

((�%�

��

��*�

�� �

��� �

� ���

��

��

��

��

(%���

� �,�

��

*%� �

��

��

� �

$,�$�

��

��

� ���

��

��

*%���

$�� �

��

��

$��*�

(�*�

,�,�

��

��

��

��

��

��

Page 92: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

92

C����������������������������������������������������7�� �����������

�������� ����� ���#���A�������# ���������������� ������������� ��2����

����A� ���� �7�����A� ��� �������� ��� ������ 2��'����� .�� ���� ����2����

�2��#�� ��������� F ������������ ��.�����������������������������F������

������������ 7�� ����8�A� �� ������ ���� ����� ��2���� /� � ������ ��������1:� ���

������ ������ �������� ��� ������' ��� ��������� � 6�� 1:� 88� .�� ����� ���

+�≅*,������������������� ��#�����������0������������������� �������

��2����� K�� ���� �� ����������� �91A� �� Q����� ����� ��� 1:� 8<� �� <<� �����

���������� ������2���A�����������U��8����9 ��� ��1:�8<���<<A������������

E��$A� E��(�A� 9L�( A� 9L�((A� 9L���� �� 9L��(�� ������� ����� ��� ����.�� ����

����������� �� �� ���� ��� ������ 1:� ��A� ��� ������ ��� �� <<�� 6�� 1:� <<�

�������� ��� ����� Q����� �� ���� ���)��� ��� �����4 ��� �� �����#���� ���

������� ��91����.�� ��8�A�����A������7�����A��� ��2�)���� ������������

9L�( �E��(����9L�((�E��$��V�������������.����1:�<<�� ����9L�( �E��(����

9L�((�E��$� ���� ���� ��� ����#���� �� ��� � �������� �� ������� ���� ��

�� ��� �� ���������� K� 7�� ��� �8�A� ���� �����3 ��� ������� ��� ���

��������9L�$����E��(���

6� ������� � ���� ��� ���� ���J��2�)��� ��0/�� ���� � #����2�� ����� 1:� ���

� ��������A�����FA���1:�� ������� �����6���0����$����$�� ������ �����1:�

� ������� ������������A�������� ����� #��#����� �����1:� ���������������#��

+�� ��� ��� ���������� C� ������� ?7@� �� �0���� $�*� �� $��,� ��� ������ �

�����������1:� ��������A�����FA����0� ��������������������1:� ��������

�� � ��� ����� ��� ������� O� �� � ��0� ��� ��� ������� O� ����� 1:� ��� ���� �

�� ���� ������������������

Page 93: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

93

4��������6�+�� ?O @����1:�88� � ������� ������7�� ����8���6��1:������������ �����������4 ���������������?J@��

23��

/���������� ��P ��

�� �� ��o�� �o�� %�o�� ��o�� $�o��

�����%�?7@� �$��J*���� ����J*(�%� $���J*���� %�� J%���� $ �%J*$�*�$$��%� *��%� *%�(� *%��� *�� � *����� �$$� (*� � ��� � (���� (*��� ( � �

�/ ����������

%$��$%� %$��� $���� $�� � ���%� %�������

�%%?7@�*%��J*��%� *,� J*���� *,�*J* ��� *���J*���� *���J*����

� ��%�?7@�

*(��J*��*� *$� J�*�(� *���J����� *���J�(�(� *%�*J� �$�

�/ ����:/�����

%*��%$� (���� %���� *��� �� ��@B�>A� (%� � (���� $%��� $*�$� $ ���/ ����

������

@@�>A� (%��� �,��� (���� $ ��� %����

B@�:A>� *��(� *�� � *%� � ��� � ���,�@;�:A@� *,��� *���� *(�*� *(��� *(� �@A�:3;� **� � *��%� *,�*� �%�%� �����B>�:A>� %%��� (*�*� ( ��� $��� �����B@�:A@� *��(� *���� *%�$� *���� *��(�@;�:3;� *,��� *���� �*��� ����� �����

���

��������� ���

@A�:3A� **� � **�%� *��*� *���� *��$��

Page 94: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

94

4�������7>� +�� ?O @����1:�88� � ������� ������7�� ����91��6��1:������������ �����������4 ���������������?J@��

24��

/���������� ��P ��

�� �� ��o�� �o�� %�o�� ��o�� $�o�� (,o��

���$,�

��,?7@�*���� *,�(J*%��� *�� J* � � �*��� *��%� ( ���

$���%�?7@�

*��(J*(�*� *(��J( ��� *(��J�%�*� *(�(� *$�*� *��%�

�/ ����09��� �

�������

���%� �(��� (,�%� �(��� ($��� ��

(%�*�?7@�

*$��J* �(�� �(�$J�*�$� �$��J�,��� ���J�%��� ���,� (*���

B6�?:� % ��� $,��� ���$� %���� ��� � � �*�B;�?=� � ��� %���� ����� %��� �$��� �$���?6�BA� *��(� * �*� ����� �(��� $$��� �,���@>�:3=�

*��*� *%�*� *��$� *%��� *$� � ��� �

@@�:3B�

*���� *���� *��%� *���� *(�(� *(�%�

?;�:3?�

*��(� *,�*� *�� � *,��� *�� � *��%�

@6�:3=�

$,�%� *��,� $$�,� %,�(� �� ��

@>�:3B�

* �(� *,��� *%��� *��*� *���� *��$�

@@�:3?�

* �(� *(�%� *��%� *(��� *%�(� *%�$�

�����

������/ ����

?;�:6:�

*��*� *���� **��� *��*� *��(� *����

4��������86�+��?O @����1:�8<�� ������� ������7�� ����8���

23��

/���������� ��P �� �� �� ��o�� �o�� %�o�� ��o�� $�o�����

A�6A� %$��� �� %���� ���� %�$�6�63� $���� $���� �*�(� �%��� %(���

�������/ ����

>B�@:� %��(� %,��� *�%� ����� �,���������:/����� (���$�� $��$� (���� ���*� ���,� ((�$���������� ��� @;�:3;� ��$� %�� � $,�$� ��� � ��

@?�:3A� *��$� *$�$� �(��� ����� (%�%���� ��������@?�:3:� ���(� ���*� ���$� �%��� ���(�:;:�:6=� $��(� �� �� �� ��:A@�:=?� ($� � (*��� �*��� �*��� � � �

���� ���:/�����

:A?�:=3� ,�*� �� �� �� �

Page 95: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

95

4���������6�+��?O @����1:�8<�� ������� ������7�� ����91��

24��

/���������� ��P �� �� �� ��o�� �o�� %�o�� ��o�� $�o�� (,o�����

=@�:=A� *��*� ���$� $ �$� %,�(� %$��� %%�*�>6�:6B� �� %��(� %��� �%��� %��$� �(�(�

�/ ����:/�����

=>�:=A� ����� ���� �(�%� %,�(� %���� ��������:/����� �,��$$� �� $��� �*� � � � � �*�%� ��

==�:B3� * ��� $,��� %%��� %�� � %$�%� %,�$��������/ ���� ?A�:6=� ��%� �� �� �� �� ��

:3B�:>=� *(�*� ($��� $,��� �%�(� %��(� �������� ���:/����� :3@�:=?� *%��� ����� ��%� %���� �(�(� �(���

4��������"6�+��?O @����1:�<<�� ������� ������7�� ����8���

23��

/���������� ��P �� �� �� ��o�� �o�� %�o�� ��o�� $�o�����

6�63� $���� * ��� ����� (��(� $$�(�>3�@3� ����� *$��� *���� �*�$� �����=@�@6� %��%� ���� ,�*� �� ��

��

/ ����������

@;�:BA� �(�$� �$��� �%�(� �$�*� ����������� ��� @3�:;=� (*�(� $���� (���� ���*� %*������ ���:/����� :;?�:6=� ((��� ���%� �� �� ��

4��������(6�+��?O @����1:�<<�� ������� ������7�� ����91��

24��

/���������� ��P �� �� �� ��o�� �o�� %�o�� ��o�� $�o�� (,o�����

B�:B:� *%��� �� �� �� �� ��=@�:B3� *%��� ��%� �(�%� �%�*� �� ��

�/ ����������

@@�:B@� %�*� ���,$� �� �� �� ��/ ����:/����� >3�:6B� �� (� � �(�$� ��� ���$� �,�%���������� ��� ?:�::=� $,�%� ( ��� � � � $��%� �%�,� ���(�

Page 96: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

96

&�� �0���� ��� $��� � $�� � �������� �� ����� .�� �� . ������� ��� 1:�

� ������� ���� ���� �����3 ���� ��� �0�� �� 7�� ���� ?�� ����� ��� �

��������� � ���� ��� ������� ���� ���@�� C� .�� ����� ��� �� ����� 2�� ���� ���

���� ��������2�)���� #��#���� �����1:�� ������� ������� ����� �����1:�88�

� ������� ���A� � �8�� ����� �� (� 1:� ��� � ���� ��� ���� ���� ������ �� ��� ��A�

�� ���.����91� �������� �� � 3��1:�88�� �������������� �����6��1:�8<�

��0/������������� ����� �������������� ���� ��8������ ���� ��91A��� ��

�������1:�<<�� �����91��������8������� ����� ����1:� ���� ����������

���� �����6��91������ ���� Q�������2 ������#�� �����������1:�88�� ����

������� ������������� �������.����8�A������� �����������2������������2����

?�����@A� �����F�� ���� �������� �������� ���� 6�� 1:�8<� ��<<� � ���� ��� ���� ����

� �����������A�����0����7�� ���A������� ������.\� �������.����1:�88���

���������� ��#����U�����������6�7�� ����8������� ����1:�<<�� �������

��������6��%?� ���@���93�% ?�����@�.�����0����������2����K������ ���K�

�91� � 1:� <<� �.�#�� ��� ? � ����� �������� ������@� /� � E�(?� ���@� ����

9L��(�?�����@A� .�� ����� ���� ��� �����4 ��� ���.�� �1:�<<���������������

K� 3�� 1:� ��� � ���� ��� ���� ���� � ���� �� ��� ��� ���� ��������� 6�� 1:� ���

� #��#� �������2�)����������3/�����������.���������� �������� ��� Q�����

�������� ����������4 �����

&�� �� � ���� 2���A� ��� ���� ����� ���A������� ����� ��� ���� ��� .��

���� � ���2��� ���� 1:� ��A� �� ��� .�� ���� ������� �� ����� ��� ������ ����

� ����� �� ��� 7�� ����� K�� ���� ��� 1:� ��� � ���� ��� ���� ���� � ���� ��

�����A� �0�� �� 7�� ���� ����� ��� �����3 ���� � ��2��� ��� ���0��������

?�������� ��2������1:�88A�8<���<<�� �������������� ���@�.��#�������� ��

� �%�N������������� �� ����� ����������K�7�� ����8�A���������������

������� ������ ��������� ���2� �������������� ������������� ������������.��

��91A�� ����� ����1:� ������ ��������� ����������������������#����� ��

�������%A� ��9��/��� ��� ���7�#��� ���.����8�A����/������� ���������

�����������0�����?����#��� ���H0������3I��� ������ �)���������@��6�

����� �����1:� ���� ����������� ������� ��� ?������������@��������� ��8��

�7����� �� ���� ����� � ���� �7�0��� �� �� ��� 0����� ������� ���� ��

���2��������������

Page 97: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

97

e� ������ ��� �������� .�A� �/� ��� �#���� �� ��)��A� .�� �� ���� ���

��� ������91��7������ �����������������A������ �������.�� ��8�A�

.�������� 2�������.\4 �������#��� �����H0������3I���������A����� ����

��� ��?F����������@��K��91���� ���. ���������1:�� ������������������

������� ������ ��� ���������� ��������A� ������������ ������8�A� �� �����

�� ����� ��0������ �� �� ��� � ����� �������� ��� ��� ��A� F������ ��� �

�����0�����������������0��������������������

6.2.2 Conclusões

6�� 1:� ��A� F ��� ��� ���� �� �� ���� ��� �A� ������ ���� �� ��������

�����2�� �������� ����������������#������ �� �����������������/���

��� ������C��� ������ ��������� � ����)������� 2����������������� ����

�� ��������� �������� �7������ ���� �� ����3��� ��� �� ������ ����

��������0�������� �7�0���� ���� ��� ������ �� �� ����� ������ .��

��������3�� ��� �� ������� ������� ��� �� ���� ��� �����3 ��� ��

�� ��.\� ���� ��� ��� �� ����� ��#����� 0���;2���� V����� �� ���������#����

����.����.���� ��2��A�����2��� ���A��7�0�����#�������0��� ���)���

������#��� ���������A�����FA��� ��2���� �������������A��������

�� ��� �� ������������� ��������� ���������� ��� �� ��#����A� ��� ����

�����������K������� ��7��A���������������������������� ���A�� . ���.��

���3��������������������� �������� ������������+��������#������0������A�

��������������� #����2�������1:� ��A�.���7������2� ���������� ���� ������

����������������������������������6��1:�88���������� Q�����������3 ���� ��

��� ��� 7�� ���� �� ���� ������� ��� ��2��� ��� ����� �� ���������A�

��� ������ ��� ������� ����� �����������A�.��F ������������H�����IA����2����

��������� V��/�A� �� 1:� 8<� �� <<� �� �� �� ���� ��� �� �X������ ��� ������� ��

��� ������ ������ ��� � ���� �� 7�� ����� G�� Q����� �� �����#���� ��� �����

������1:� ��� ����� ����� ��� �� ���� ��� �� �������������� ��� � 7�� ���

������������ K� ����������A� � ����� . ������ ��� �� ���� ��� �� ����� ����

��0/�� U� ����� �����4 ��� ������ � ����)��� . ��� �������� ���� �

���������A� ��� �������� ��2����6������ ��2������� ������������������������

. ��� ��������� � ��2���� �������A� .�� /� ���� ��� ��2��� ��� �0��

Page 98: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

98

7�� ���A����/�� ��������������1:�<<������ ���� ������2�����������������

������� ����� ��������������� �����������������������������������������

6���� ������� ������0����� ������ ������������#��.����1:� ��A���

�/������������������4 �����#������������#����������� ��.���������2���

�����������#���/���������� �������� ��&�����������7���4 �������� ����

��� ����������#���� �����������A���� ������ ��� ������� ����� ����������2��

/� ������ ������ ����������0�������������� ������ ����6������� ���������

�� ���� ��� �� ����� ��2�)��� ��#��� ���� ������ ���� ��� �� 2 3�� ���

��������0������A� #����� .�� � ����������� ����� �� �� �� ��� ��� � ����

��2����.��/��� ���#�� ����������A��������������������4 �������0/��

�� �� ��� ��� � �7��� �� ����#��� ���� ����� ��2���A� ���/�� �� ��� �

����������� K��� ��� ����� ����� ������� � �7���4 ��� ��� �� �� ��� ���������� �

����������� .�� ����� �� ��� � ���������A� ����� ������ ��� �����

��������0���� ��������� �/�������2�)�����2�����#�� ���� ��������������

�� ����� �� ��2���������� 2� ��� � ����� ��2�)��A� �� ���A� � �� ��� ����������

�� ���� � ��2���� 3/����� �� ���� ��� ��� ��� ?����� � ������@A� �� ��FA� �� ���� ���

��� ��� ����� ��0� � ��4 ���� �������� ������.������ ���� ����0��������

+��� ����� � ���A� .�� . ��� ���� � ���� ���� �� ������ .�� ������ 2��� �

��#��� ����� ������ ��� �� . ������� ��2��� /� � ������A� ������ ����

2���A������/�������' ���U����������Z�%[��

e� ������ ��� �������� .�A� ���� ������ ��� . ��� U�� � ����)���

� �������������������� �������� ����)���� �������������?������ ��2@A�

#����� .�� �� ���#� ��� ��0/�� ���� � �������� ��� ���0������ � ���������� ��

������ ���

Page 99: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

99

6.3 Ligações de hidrogênio intermoleculares

K� � #����2���� ��� 1:� ���A� ����� �� ��������� �� �� ��� �������

����� �������2�����������A�������������������Q �������������� ������1:� ����

�������2���E��������������0/������������ ������������������2��0��

������#�����?�������3�����;0���@A����/�� ����������������������1:� ����������

����� ��� ������ �� �0�������� �� ����� ���� ������� <�� �� ���0��)��� ������

�������� ������������� ����)��������� ��2�F������� �������

6��1:� ��������������������������>��������� �������������������K�

����� ��� ����� �� ��������� ��� 2����� ��0� ��� �� �� � ��� ����� �� ��

����������������������2�����3����7���A���0�7�����A�2 ��� ������� ����

6.3.1 Resultados e discussão

As���2������$�����$��%A������ ����� ��2����������� Q�������������

1:� ���� �������� ���� ����� ��� ����� �� ������ ��� ��� 7�� ���� V�������

�� ������2� �������������� ����#��������������� ���������0����

7�� ����� d ��� �� ������ ������A� � � ��2�� ��� 1:� ���� /� ����� ��� ��,�

N�����������������#� ��91��.����������7����� ��� ,�1:� ������������

.����8���6�� ��2����������� Q�������������1:� �������������.� ��������)���

������� ���������������

Page 100: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

100

20 30 40 50 60 70-800

-700

-600

-500

-400

-300

-200

-100

0

100

E T ( k

cal.m

ol-1 )

T ( ºC )

XBC carbonilas aminas secundárias grupos laterais

��

20 30 40 50 60 70 80-800

-700

-600

-500

-400

-300

-200

-100

0

100

E T ( k

cal.m

ol-1 )

T ( ºC )

XTL carbonilas aminas secundárias grupos laterais

5��� �� �"�6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2�������0� ���A� �� �� ��� ������ �� ������ ������� ���8���

5��� �� �""6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2�������0� ���A� �� �� ��� ������ �� ������ ������� ���91��

Page 101: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

101

20 30 40 50 60 700

50

100

150

200

250

300

NLH

(inte

r)T

T ( ºC )

XBC carbonilas aminas secundárias grupos laterais

��

20 30 40 50 60 70 800

50

100

150

200

250

300

NLH

(inte

r)T

T ( ºC )

XTL carbonilas aminas secundárias grupos laterais

��

5��� �� �"(6� KQ����� ����� ��� 1:� ���� �������� ������2����� ��0� ���A� �� �� ��� ������ �� ����������������8���

5��� �� �"�6� KQ����� ����� ��� 1:� ���� �������� ������2����� ��0� ���A� �� �� ��� ������ �� ����������������91��

Page 102: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

102

���� �� � ����� ��� ����� ������ ��� � ���#����� ������ � ����A� ��

������ ������2�)��J���� ���������� #����2������������������#�� ��A���

��FA������ ����������������� ���J��2�)���� ������������ ����7�� ������

�� ����� ��� ��������� ��� � ����� ��� ��� ��2���A� ��2��� ��� $��%� �

$��(A����������0���#�A�.�������7������������� ���� ����� ����� ��2�������

��� 1:� ���� /� �� �����#���� ��� ���� ����#� � �91� ��� .�� � �8�A� ��

������ �� ��� ����� ��� � ,N��������� ��� �� ��0� ���� �� ��,N��������� ��� ��

�� ����� �������C������������ ��������� ���� ��2��������3 �������

�0��7�� ������

20 30 40 50 60 70

-140

-120

-100

-80

-60

-40

-20

0Carbonilas

E T ( k

cal.m

ol-1 )

T ( ºC )

XBC Dedos Palma Polegar Hélice Corda

5��� �� �"�6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2�������0� ���A�������2���J���� ��A����8����

Page 103: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

103

20 30 40 50 60 70 80

-140

-120

-100

-80

-60

-40

-20

0Carbonilas

E T ( k

cal.m

ol-1 )

T ( ºC )

XTL Dedos Palma Polegar Hélice Corda

��

20 30 40 50 60 70-100

-90

-80

-70

-60

-50

-40

-30

-20

-10

0Aminas secundárias

ET (

kca

l.mol

-1 )

T ( ºC )

XBC Dedos Palma Polegar Hélice Corda

�5��� �� �"6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2������� ����� �����A�������2���J���� ��A����8����

5��� �� �"%6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2�������0� ���A�������2���J���� ��A����91���

Page 104: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

104

20 30 40 50 60 70 80-100

-90

-80

-70

-60

-50

-40

-30

-20

-10

0Aminas secundárias

E T ( k

cal.m

ol-1 )

T ( ºC )

XTL Dedos Palma Polegar Hélice Corda

��

6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� �� ������ ������A� ��� ��� ��2���A� ����

������� �� ��2���$������$��*��K�������� �������������#���/������#���

#�������� ������������������ ��� ����#������������� ���J��2�)���������

7�� ����� 6�� �� ��� ���� ���� ����� ����� ��� � ��2��� ����� �����3 ���A�

����� ��� ��,N��������� ��� ����� �� ���������� ��� �� ��� 7�� ����� C��

������ ���� ���J��2�)��� ����� ��� � ��2��� ���� ����#�� ��� � �91� ����

������� U��8�A� ������ ������ �� /� ��� ��,N��������� ��� ��� ���� ����� ���� ��

��� ����e�� ������ ��� ����.����,D�A���������� �.����������0���#��

�� ������� ��� ��� �����A� .�� ����� ��� ������ ��� �� ���� ���� � ���A� �

� ��2����������1:� ����������� ����� ������ 2������ ����?����������@����

�,o��� 6�� ��2��� $� ,� �� $� �� ����� ������ Q������ ���1:� ���� ���������� ��

������ ������� ��� ��� ���� ��J��2����� 6� ����� ������ �� ��� �� ��

���������� ����������� ������������� ����7�� �������������� ��������� ���

� �����K������ ���� ������91������ ����� Q��������1:� �����������������A�

5��� �� �"�6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2������� ����� �����A�������2���J���� ��A����91���

Page 105: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

105

� . ��� � �8�� �� ��� �� ��7���� $,� 1:� ����� C�� ������ ���� ���J��2�)���

����� ��� Q���������1:� ����������������������0����7�� �����

20 30 40 50 60 70-300-280-260-240-220-200-180-160-140-120-100-80-60-40-20

0Cadeias Laterais

E T ( k

cal.m

ol-1 )

T ( ºC )

XBC Dedos Palma Polegar Hélice Corda

20 30 40 50 60 70 80-300-280-260-240-220-200-180-160-140-120-100-80-60-40-20

0

Cadeias laterais

ET (

kca

l.mol

-1 )

T ( ºC )

XTL Dedos Palma Polegar Hélice Corda

5��� ���"�6� � ��2�� ����� ���1:� ���� ��� �� ������������A�������2���J���� ��A����8����

5��� ���"76� � ��2�� ����� ���1:� ���� ��� �� ������������A�������2���J���� ��A����8����

Page 106: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

106

20 30 40 50 60 700

20

40

60

80

100

120Cadeias laterais

NLH

(inte

r)to

t

T ( ºC )

XBC Dedos Palma Polegar Hélice Corda

��

20 30 40 50 60 70 800

20

40

60

80

100

120Cadeias laterais

NLH

(inte

r)to

t

T ( ºC )

XTL Dedos Palma Polegar Hélice Corda

5��� �� �(86� KQ����� ����� ��� 1:� ���� �������� �����������������A�������2���J���� ��A����8����

5��� �� �(�6� KQ����� ����� ��� 1:� ���� �������� �����������������A�������2���J���� ��A����91���

Page 107: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

107

&����� ������A� ��#����� ������� .�� ��� ����� ���� ���� .�� ������ �

��2�����������A�� �����������A������ �������)�������� ������������#� ����6�

������ /� �� ���� ��� ��� 0�7� �7�������� �� ���#� ��A� � . ��� .�� �� ���� ���

� ���A� ����� ���� ��� �� ������ A� /� �� .�� �7�0�� ����� �7�������A� �� ���� ���

����� �����0������� U�� ���/���� ��� �2�� C�� ����� ��� ���#����� ��� ��

�������������������������� �������������������Z�,A��[�������� ���������

������' ��� �������� ������ ����� ����� �� �0���� $��%� �� $���� ��� ��

7�� �����8�����91A���������#�� ����

Tabela 6.14: 1:� ��������������������2���������������8����K1:�/��� Q��������1:�����������"��� ��2���/������1:� �������N����������

"%D�� (%D�� �%D�� %%D�� %D��23��

Glu78 Glu172 Arg112 Tyr65 Tyr69 Tyr79 Tyr80

Tyr166 Tyr174 Trp9

Trp71

NLH

1.3 2.8 2.0 1.2 0.9 1.0 0.2 2.0 2.2 0.5 0.2

EM

-11.7 -10.5 -12.3 -3.2 -3.0 -1.8 -4.0 -3.2 -3.2 -2.2 -2.2

NLH

1.5 2.9 1.9 1.2 0.9 1.0 -

1.7 2.1 0.6 0.2

EM

-9.0 -9.8

-12.6 -3.5 -3.8 -1.8

- -3.2 -3.2 -2.2 -2.2

NLH

1.4 2.6 1.9 1.4 0.8 1.0 0.3 2.1 2.1 0.6 0.2

EM

-11.0 -10.5 -12.8 -2.8 -3.2 -1.2 -3.5 -3.0 -3.2 -2.2 -2.2

NLH

2.2 2.2 1.6 1.2 0.9 1.0 0.7 1.5 2.0 0.6 -

EM

-12.2 -12.0 -12.6 -3.0 -3.5 -1.5 -3.5 -3.2 -3.2 -2.2

-

NLH

1.2 3.2 1.4 1.1 0.4 1.0 1.0 1.1 1.9 0.5 0.4

EM

-11.5 -11.0 -12.6 -3.0 -3.5 -1.2 -3.5 -3.0 -3.5 -2.2 -2.2

Tabela 6.15: 1:� ��������������������2���������������91��K1:�/��� Q��������1:�����������"��� ��2���/������1:� �������N����������

"%D�� (%D�� �%D�� %%D�� %D�� �8D�� �8D��24��

Glu86 Glu178 Arg122 Tyr73 Tyr77 Tyr88

Tyr172 Tyr180 Trp18

Gln136

NLH

1.8 3.0 1.8 0.5 0.5 1.2 1.1 2.2 0.5 1.0

EM

-10.0 -10.0 -12.0 -4.8 -4.0 -2.8 -3.5 -3.2 -2.2 -6.4

NLH

2.7 2.9 1.7 1.0 0.6 1.2 1.0 2.0 -

1.0

EM

-11.0 -10.0 -12.0 -3.8 -3.8 -3.5 -3.2 -3.2

- -6.0

NLH

2.6 3.0 1.8 1.1 0.6 1.3 1.1 1.8 -

1.0

EM

-9.3 -10. -12. -3.2 -3.8 -3.0 -3.0 -3.2

- -6.0

NLH

1.8 1.6 1.9 1.0 0.9 1.1 1.2 1.5 -

0.9

EM

-11.0 -10.0 -12.0 -2.8 -3.0 -3.0 -3.8 -3.5

- -6.2

NLH

1.6 1.9 1.3 1.0 0.9 1.1 1.1 1.9 -

0.7

EM

-11.0 -10.0 -13.0 -3.0 -3.0 -3.2 -3.5 -3.5

- -6.4

NLH

2.5 2.3 1.4 1.0 1.0 0.9 1.1 2.1 -

0.7

EM

-10. -11. -13. -3.5 -3.5 -3.5 -3.5 -3.2

- -6.4

NLH

2.5 2.3 1.4 1.0 1.0 0.9 1.1 2.1 -

0.7

EM

-10.0 -11.0 -13.0 -3.5 -3.5 -3.5 -3.5 -3.2

- -7.0

Page 108: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

108

&� ��������� ��� �0���� $��%� �� $���A� �������� �0���#�� � 2� ���

����������� ����#������������������������������E��(�����(�����8�����$�

���(�����91������0����7�� �������������������������� ������#����A�

���#���������.����� � �� �������� �������0���������������6��������

������� ������� �������� ��������� ��� �� � ��� 1:� ��� ����#���A� ���

�����4 ��A��������������������0/���������� ������#���������������

����������� &�#���� ��� ���� ����� ��� ��/��� �� ��#���A� �� 2���� ��0�7����� /�

���� ��� ������ 1:� ��� ��0���� ��� �� ������ ������ ���/���� ��� �2�

���� ���������������������#�������

C���� ������� .�� �7�0�� �������� ������ ��� ���#����� ���� �������� ���

E�� /� � 6�2� ���� �� �8�� �� ���� �� �91�� ����� ��������� �������� ��A� ������

�������� ���������������1:� ��� ��� � 3�����7�� ���A� �� .����������

#���.������������������ �� ������������� ���� #��#��������1:� ������������

�� ����������� C�� �������� ��� 6�2� ����� ��� �� Q����� �/���� ���

���#����������������������� ��2���/������� ��2����������7����� ������

����,� N��������� �� ��� 7�� ����� &�� ������ ���� ������ ��������A� ��������

������ .�� ������ �������� ��� 6�2� ���� �� ���� .�� ����� ��� � ��2��� ���

���#�������������#��������������� ��

C� �� F ��� ��� ������ �� ����� ���� � ��2���� �������� ��0/������� ��

���#����� �������� ����� ��� �� ��� 7�� ����� ���� �7������ �� 9L��,� ��

�8��.�� �����������9L���������� �� ��� ��91A������������������� ��

����� ��� �����)��� �������� �� ���W� 9L�$�?�8�@�9L�( ?�91@A� 9L�$*?�8�@�

9L�((?�91@A� 9L�(*?�8�@�9L���?�91@A� 9L��$�?�8�@�9L��(�?�91@� �� 9L��(%?�8�@�

9L���,?�91@���C����4������������������������� ���������� �� �����������������

�� �� ���� �� ��2���� �������A� � . ��� ��� �����Q������� ���������� ����������

�������������A��� �����������3������#�������

C�� ������� �������� �����������������������#������ ��������A�����

��������#���������K1:�p�,�$����"�≅�����N�����������

6� ����� ������ �� � ���#����� ������� �������� �� ��2���� �������� /�

��#����U������ ���������������E� � $� �������������K��8�� ���3���������

�������� �� ��� .�� ��� ���#��� ���� 0��� . ��� �� E� � $� �� �91�� C� �������

E� � $� ����� �� 1:� ���� ���� � ��2�� �/��� �"� p� �$�,N��������� ��� ����� ��

Page 109: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

109

���������A����������/�������2�0��������� ��������7�24 ����������

��������

��� �� 3�� 2����A� � � #����2���� ��0��� � ���#����� ������ 7�� ����

�������.������������������� ���0�������������������#��������.��

��������� ������������� A���.��/����������������������� ��2��0������&�

��������� � ���� �� 7�� ���� �91� �� �8�A� �X������ �� ����� .�� �� ���� ���

� ����� �� ������������������ ��� �������A������ � ���� ��2����� Q�����

����1:� ���������#���#����U�7�� ����91����.�� ��8����

:�� �� ������#��� �����4 ��� ��� 1:� ���� ���� � ��2��� ���� ��� ����#�A�

����������7������ ���������6�2�������������� ���������6� �������������

1:� ����/��� ���� ��� ������� �� ��������� ���������������0�������.��

��#��������#���������� ���������1:� ����� ����� ������������ �������0���

��� �� ����/���� �0�������� ��� �� ����� ��� ���� ���)��� � �� ��A� ����/���� .��

�� ������ ��� ������� �� �� 1:� ���� .�� ����� ��� � ��2��� �/���� � ��������� �������

�*�,N����������K� 3�����1:� �������������� ������0������������ ����/����

��#���.������� ���� ��2�����������.������N�����������

K�� ������ ������� ������������ 1:� ���� ���� � ��2��� .�� #���� ���

�������������������*�,��/��� N��������A�#����0����$��$���$��(��C����0����H�q�H�

����6�2��$�/����� ��0���$��(����� �����.���������������������

�� ������ ���������������/�$�����

&�� �0���� $��$� �� $��(� �����#��� .�� ����� ��� 1:� ���� ������� ���

���7���������� ���� ��2����������.���*�,N��������A�����0��7�� �����

V�������������.�A����� ����� ��A������1:� ����������� ����� �� ���� ���

������������������������� ��2���� ������� �,����*�,N����������6�$�D�� ��

���� �� �8�� �� � �,D�� � �91A� �������� �0���#�� .�� ����� �� 1:� ���� � ������

����� ��������� ��2���� ���.���*�,N����������

Page 110: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

110

Tabela 6.16: 1:� �������8��.������� ���� ��2���/����� ���.�� �*�,N���������� �6���"������������N�����������

�������� �)�>"%D�?� �)�>(%D�?� �)>�%D�?� �)>%%D�?� �)>%D�?�

Asp4 -10.7 -10.5 -10.2 -10.2 -10.5

Gln7 -10.2 -9.0 -10.0 -10.4 -10.0

Asn8 -10.2 -9.2 -10.0 -9.0 -10.4

Asp11 -10.2 -10.2 -10.2 -10.4 -11.0

Asn17 -10.0 -9.8 -10.0 -10.4 -9.6

Asn20 -8.5 -9.5 -8.9 -9.9 -10.2

Asn29 -10.2 -10.7 -10.2 -10.0 -10.6

Asn32 -9.8 -9.8 -9.6 -10.0 -10.2

Asn35 -9.8 -9.4 -9.2 -10.0 -9.5

Arg49 -12.1 -12.0 -12.2 -11.8 -12.2

Asn52 -10.3 -9.5 -10.1 -10.0 -9.8

Asn54 -9.9 -8.0 -10.4 -10.5 -10.0

Asn61 -10.0 -9.7 -10.4 -10.2 -10.6

Asn63 -9.1 -10.3 -10.5 -9.8 -10.0

Arg73 -12.3 -12.0 -12.5 -12.5 -12.6

Arg78 -11.8 -10.2 -10.4 -11.8 -11.5

Asp83 -7.0 -9.2 -7.0 -8.8 -11.4

Asp101 -10.3 -11.0 -10.8 -10.7 -10.4

Asp106 -11.0 -10.6 -10.8 -11.0 -10.7

Arg112 -12.3 -12.6 -12.8 -12.6 -12.6

Asn114 -9.8 -9.2 -9.5 -9.7 -9.2

Asp119 -10.0 -10.5 -10.2 -10.3 -10.4

Asp121 -10.2 -10.5 -10.9 -10.5 -11.0

Arg122 -12.3 -12.4 -12.7 -12.6 -12.6

Gln133 -8.6 -10.9 -10.7 -10.4 -10.8

Asp136 -12.8 -11.9 -12.2 -12.4 -12.8

Asn141 -9.2 -10.5 -10.2 -9.0 -10.0

Asn148 -8.0 -10.8 -10.5 -9.0 -10.2

Asn151 -10.1 -9.7 -10.1 -11.2 -10.4

Asn159 -8.9 -10.4 -10.0 -9.7 -9.8

Asn163 -10.2 -10.0 -10.4 -10.5 -10.7

Glu172 -10.5 -10.0 -10.5 -11.5 -11.0

Gln175 -10.2 -10.5 -9.8 -9.0 -10.5

Page 111: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

111

Arg181 -11.0 -10.2 -9.9 -10.0 -10.0

�� �� ��-.��������������>�1:� �������8��.������� ���� ��2���/����� ���.�������*�,N�����������6���"������������N�����������

Tabela 6.17: 1:� �������91�.������� ���� ��2���/����� ���.���*�,N����������6���"������������N�����������

�������� �)>"%D�?� �)>(%D�?� �)>�%D�?� �)>%%D�?� �)>%D�?� �)>�8D�?� �)>�8D�?�

Asn5 -8.6 -8.0 -8.9 -10.2 -10.0 -10.2 -10.2

Glu7 -11.0 -11.3 -11.5 -12.0 -11.8 -11.8 -11.5

Asp11 -11.0 -10.7 -10.7 -10.2 -10.0 -10.8 -11.0

Asp20 -10.2 -10.0 -10.8 -10.2 -10.4 -10.4 -10.5

Gln24 -10.2 -10.7 -10.1 -8.9 -10.0 -9.9 -10.5

Glu31 -10.7 -11.0 -10.6 -10.0 -10.7 -10.4 -10.4

Glu36 -11.4 -11.8 -10.7 -10.5 -10.5 -11.2 -11.3

Asp41 -11.3 -10.8 -10.5 -10.4 -11.0 -10.7 -10.7

Asn44 -8.6 -9.3 -10.3 -8.7 -10.9 10.7 -10.4

Asn52 -8.0 -8.3 -8.6 -10.3 -10.5 -9.7 -9.0

Asn56 -10.8 -8.9 -10.9 -10.0 -10.2 -10.0 -9.8

Arg58 -11.4 -12.0 -12.3 -12.1 -11.8 -12.3 -12.8

Glu63 -10.4 -10.7 -10.7 -10.7 -11.5 -10.9 -10.7

Gln67 -10.3 -11.0 -10.2 -9.9 -10.0 -9.8 -10.9

Asn69 -11.3 -11.8 -9.1 -10.7 -9.5 -9.5 -9.8

Asn71 -10.7 -10.5 -9.0 -9.7 -9.4 -9.5 -11.2

Arg81 -12.1 -12.6 -12.6 -12.8 -12.3 -12.6 -12.8

Asn82 -9.4 -10.8 -10.6 -9.7 -10.2 -10.2 -9.7

Glu86 -10.2 -10.8 -10.4 -11.4 -11.0 -10.4 -9.5

Glu91 -9.4 -9.5 -11.3 -10.5 -10.6 -11.0 -11.7

Asp97 -11.0 -11.5 -10.7 -10.0 -10.0 -10.5 -11.8

Asp104 -10.7 -10.5 -10.2 -10.2 -10.4 -10.5 -10.2

Glu109 -10.5 -10.7 -10.7 -11.0 -10.7 -11.0 -10.7

Asp111 -10.7 -10.6 -10.4 -10.4 -10.7 -10.2 -10.7

Page 112: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

112

Arg116* - - - - - -12.1 -12.6

Arg122 -12.3 -12.6 -12.0 -12.0 -13.0 -12.8 -12.6

Asn124 -9.5 -10.7 -10.2 -10.0 -10.2 -10.0 -10.5

Asp129 -10.7 -11.0 -10.6 -10.7 -10.2 -10.4 -10.7

Gln132 -10.3 -10.1 -9.7 -9.5 -10.0 -10.0 -10.4

Asp135 -10.8 -10.4 -10.5 -10.7 -11.0 -10.2 -10.5

Gln142 -7.6 -10.5 -10.4 -9.7 -10.7 -10.4 -10.0

Asp143 -10.0 -10.8 -10.5 -10.7 -10.2 -10.0 -10.5

Arg145 -12.6 -12.6 -13.0 -12.6 -13.0 -11.5 -10.6

Gln151 -9.2 -9.5 -9.2 -9.5 -9.2 -9.2 -9.9

Asp157 -10.5 -10.2 -10.2 -10.7 -10.4 -10.7 -10.2

Arg161 -12.6 -12.3 -12.3 -12.8 -12.8 -12.6 -13.6

Asn165 -9.6 -9.0 -9.9 -10.3 -10.9 -10.4 -10.9

Asn167 -10.3 -9.0 -10.2 -11.0 -10.4 -10.5 -9.7

Asp169 -10.1 -11.0 -10.5 -10.0 -10.5 -11.0 -11.0

Glu178 -10.2 -10.7 -10.4 -10.7 -10.5 -11.8 -11.2

Arg187 -12.1 -12.0 -12.6 -12.6 -12.6 -12.3 -12.0

Asp192 -10.4 -10.0 -10.9 -11.3 -11.0 -11.0 -11.0

�� �� ��-.���������������6�1:� �������91�.������� ���� ��2���/����� ���.�������*�,N����������

6� �91� ����� �� %�� 1:� ���� �� ��� %� �� �8��� 6�� ��2��� $� �� �� $� �

����������������������������������������A�����8�����91���������#�� ��A�

���.���������� ����' 2�����

Page 113: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

113

5��� �� �("6� &���������� ������� ���� �������A� �� �8�A� ���������� ��� 1:� ���� ����� ��2���� ���.���*�,N��������A����.���������� ����' 2�����6�������� ����������)������������������������ ���J��2�)�����

Page 114: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

114

&����2���$� ����$� ����������0���#��.����������������������������

�� ��������������������������1:� ����� #��#������������ ���������������

�� ���/��A� ��� ������ ��� ��� ���� ���� � ���A� �� ��FA� � ���������� ������

� ����� ���� ���� ��� ���#���� �� ��� � ���� �7������ ��� ����#���� G��

���������� ���� ��� ���#������������.������ ��2���A�� ��������� �������

5��� �� �((6� &���������� ������� ���� �������A� �� �91A� ���������� ��� 1:� ���� ����� ��2�� �� ��� .�� �*�,N��������A� ��� .���� ������ ���� ' 2����� 6�� ������ ����������)������������������������ ���J��2�)�����

Page 115: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

115

���������1:� ��A���2���$� %���$� �A�/������ ��A������0� ����.���� ���

�������� ����� �#����������0������� ������������������#�����0���;2�����

K�� ���� ��� ������ �� ���������#���� ������ �������� �������� ��� �����A�

��# ��� ����� ������ �� � �� �#��� ��� ���0������� �������� ��� ��� ������ ��

������������#����� ����� ������� � ����)��� ���� ���������� � ���7�0������� ��

������ A� ��� ����� ���� ��2���� �� �� ��.� ���� ��� ���� ����� ���� U��

�� ���)����7��������

�������������#�������0����$��$���$��(A���91��7�0���� Q����������

������1:� �������� �������#�A�������������U��8�������/��������1:� ����

����� ������ ��2�������,�*�±�,�*�N��������� ��91�����,�(�±���,�N���������

� �8�A� #������ ������ �2���� <�� ��� �� � ��2��� ������ 1:� ���� �������

���7����� ��� �%���(N��������� �� � %���N��������� ��� �91� �� �8�A�

��������#�� ��A� ��� ��� ���������� &���� ����A� ����� 1:� ���� � �91� ����

����� ��#���� ���� �� ������ �� � � ��2�� ��� ��� �$N��������� ���� ������� U�

�8���

5��� ���(�6�1:�� �����������A� ��8���� 5��� ���(%6�1:�� �����������A� ��91���

Page 116: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

116

&���������������0����$��$���$��(A��0����������� �2��A������������

������������������������1:� ��������� ��2���� ���.���*�,N��������A��0���

$�����

Tabela 6.18: V���� �2������������������������������ ��2���� ���.���*�,N����������

���������� 23�>G ?� 24�>G ?�

6� �

E� �

6���

E��

6�2�

%(���

����

�,�$�

��*�

�(�$�

� ���

���*�

���$�

�*�,�

�$�(�

e�� ������ ��� ����.����������������6� ������������ ���� ��8�� ��

����� �2���.��/�����0������������4 ��� ��91��C�������������E� ���6�2�

����� ��� ���7����� ��� � ����� ����� �2��� �� ��� 7�� ���A� ���

��� ����� ����� ��� �������� ����2���� �2��#�� ��A� 6��� �� E�A� ������

����� ����������������� �2��� ��91��6��������������������������������

���6� ����8������� �� ������ ������ ���� ���A��2� ���������������������

6�����E�����91���0/�������� ���������� ������ ���� �����! #����2 �����

�����)�������������������2���A�E�A�6�����6�2A� �����7�� ��A��� �������

.�� �2 �� ������� �������� ���� �� ���#���� �� ������ �����)��� �� ���

7�� ���A����/�������� ����6��91������������������6�2A�6�����E��.�� ���

����� ����������� �� ���� ��8�A���2��$� $���

K���2��$� $����������0���#����������������������6�2A�6�����E�A�.��

������1:� ��������� ��2���� ���.���*�,N��������A�.������������� ���� ��91�

��.�� �������� ����������� �4 ��� ��8���

C�������������6��������� �������A�������E�� �����#�����3���������

6�2����#������

Page 117: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

117

&������ �������A� (� ������ ���������� �� ���� ��� � ���� 6���%A� 6����,A�

E�(A� E�� A� E�$,A� E� $A� �� 6�2�,$A� �� ��� .�� � 6�2�,$� /� �� ������� �F�

����������������1:� ����������� ���� ��2���������A��� �$N����������&����

����A� ��0�� �����/2�� ��� �� �� ��� �� ��������0������� �� �8�� �����

�����#������)��A���� ������ ��� ������ ���� ���A��0����� ��������������

��� �����)��� ���� ���� ���� ������ �������� �� ���� � �� ������ � �91��

V��� �����#/������������������� #����2�������1:� ���A�/������#�����������%�

���)���.����#����������������������� ����������������A��#� ���� ��A���

�7������ ���� ��� ��0/�� ��� ������#�� � #������ ����� 3��;�����

� ��� ������1:� ������

� 6 ��� ��� � ��#����� ��� ��� �� ������� �%� �������� ���� ������� U��

���/��������2�.��������#��A��0���#����.����������������#���������������

2�����.���������� 2�������� �������� ���#����>�,�-� .����� �F�� #��� 3 ��

�������� ������ ������ ��� ���/���� ��� �2� U� ����� ������ �� ,��-� .����� .��

������� �������� ����2���� �J�� ������� ���� ��;7����� .�� ����� ���

���/��������2�������#�������� ��� ����������K����������������4��������

5��� �� �(6� -������� 6���%A� 6��(*A� 6���(�A� 6��� ,A� 6����,A� E��A� E�� A�E�$,A�E� $A�E��*A�E��,�A�6�2�,$A�6�2��(���6�2�����C�������������6��������� �������A�������E�� �����#�����3���������6�2����#������

Page 118: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

118

�������� E�� A� E�$,A� E� $A� E��*A� 6��� �%� �� 6�2��(A� ����� ������� ��

��2��� $� (� � $� *�� 6�� ��2��� $� (� � $� *�������� �� %����/���� ��� �2��

������;7����������������������

5��� ���(�6�-�������E��*���������������%����/��������2�������#������

5��� �� �(�6� -������� E�� ?��.���@A� 6���%?������@� �� ��� ��������� %����/��������2�������#������

Page 119: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

119

6� ��2��$� *������������������E�$,A�E� $���6�2��(����� ���������

���� ����.�� ����7���������/��������2���� ��� ��������A�����FA� ���

�7������ ���/���� ��� �2� .�� ����� ���� U� ���� ��� ���#����� ��� �����

������ ������������������� ���

6��� �)���26P ?�@������������������7�24 �����3����24 ������������������

����������� ���� ����2���$�%,��$�%�A�� ���C��������������������7�24 ��A�

�.�#�� ���A� �� ����� ������ ���� �������� ��� E�A� C&� ���� ��� ������� ���

�7�24 ��A��.�#�� ���A�����������������������������6�����::���������������

���3����24 �������������������������������6�2��&����2���$�%,��$�%�������

����0���#��.�������������E�� A�E�$,A�E� $A�E���*A�6����%���6�2��(�����

���.�� ����� ��� ��#�����3��� ���� ���� �� ���������� �������� � �� �����A�

�����������������������������A�� ��� ��������� �����������������

��� ���#����A� ������������� ��� ������� .�� ���� ���� ��� �����#���� �����

���#� ����

5��� �� �(76� -������� E�$,?��.���@A� E� $� ?������@� �� 6�2��(� ?�� ���@� �� ������������%����/��������2�������#������

Page 120: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

120

1 2 3 4 50,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

g OE

,H (

r )

r ( Angström )

Glu7 Glu31 Glu36 Glu63 Glu91 Glu109

1 2 3 4 50,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

g OD

,H (

r )

r ( Angström )

Asp41 Asp97 Asp135 Asp157 Asp192

5��� ����86�+ �������������0���������A�26M?�@����6SC��?E�@���MS�:�?�2@��

5��� �����6�+ �������������0���������A�26M?�@����6SC&�?6��@���MS�:�?�2@��

Page 121: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

121

1 2 3 4 50,0

0,2

0,4

0,6

0,8

1,0

1,2

1,4

1,6

1,8

2,0

g HH

,O (

r )

r ( Angström )

Arg116 Arg161 Arg187

��

C��������������������� ��������)��� �������)������ �� �����������

������ ������ ���� U��������� ������� ���#������6����� ������� � �� ������

�������������������������������� ����������' ����������������������������

��� ������� �� ������ A� �F� ���� ��� ���#����� ������ � ��� ��� ��� ������

������� �� ������ A� ��#���� U� ���7������� � ���� ������ 6�� ��2��� $�% � � $�%��

����� ��� ��� �������� .�� ��� ���#��� ��� ������ ���� � ��2 �� ������ ���

���#����A���������� ���������6����2���$�% ��$�%��������0����������

�� ��2������.���0������o�A�#�����.�� ��������������� � 3�����/���

����2�����������������������������4 ����� ������#���?m��,O @���������������

�� ��2��������������� �����������������A����/�A������� �� �����������

���/���� ��� �2�� 6� �� �� ��� ����� ��������/���� ��� �2� � ���� ��������

��;7����� �� ����2���� ���� ��2�� ������A� ���� ������� �����3 ��� �� ��� ��

�� ��� ��� A� � ��� � ��2������ ��� . ��� �� ����� ��A� ������ ������ ��

������� �� ��� ��#��� ������� ��������� 6�2 �� �������� ������A� .��

5��� ����"6�+ �������������0���������A�26M?�@����6S::�?6�2@���MS�C�?�2@��

Page 122: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

122

����� ���2�����3����7��A������9L����93�A� ��0/���� ��2��� � ��� ������

��������3�����/��������2�������#��������������������2�������

��

5��� �� ��(6� �� ��2����� �.���0��� ������������ E�*�?#�����3�@A6�2�%�?��@� ����� ��������� ���/���� ��� �2� ������#������ 6�� ���/���� ��� ���#�������� �� � ���� ��� �������� ������ ��� �������������' ���A����TA�� ����������������

5��� �����6��� ��2������.���0��������������� E�(?#�����3�@A� 9L��%� �� ���������������/��������2�������#������6�� ���/���� ��� ���#����� ��� �� � ������� �������� ������ ��� ���� ���������' ���A����TA�� ����������������

5��� �� ��%6� �� ��2����� �.���0��� ������������6��� �?#�����3�@A�1L���*?��@A�93������� ��� ��������� ���/���� ��� �2� ������#������ 6�� ���/���� ��� ���#����� ��� ��� ���� ��� �������� ������ ��� ���� ���������' ���A����TA�� ����������������

5��� �� ��6� �� ��2����� �.���0��� ������������ 6���*�?#�����3�@A� 6�2��?��@� �� ������������ ���/���� ��� �2� ��� ���#������ 6�����/���� ��� ���#����� ��� �� � ���� ����������� ������ ��� ���� ����� ����' ���A� ���TA�� ����������������

Page 123: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

123

&� ���� �� ���/���� ��� �2� ���� ��;7���� ��������A� �2��� �����

������� ����7�������Y����� ������� ������ �������.�� ��������3�������

���/���� �� ��� ����� ��� ���#������ ����� #���� ���� ��� ������ ���� ��

�� ���� �� � ���� 26P ?�@� ����� ��� ���A� .�� ���� �� � �������� ���� ���

���#������ �6�� �� ��������6��� �A� ��.�������/��������2���� ��

���������� ������������ �Y�����������������K������������������� ������

�� ������� ����26P ?�@����#�������������.�� �Y������#���� ��4 ��������

�������A�1L���*���93������

�6� �� ����� ������A� ����� � #����2��� �� 1:� ��A� �� .�� ��#�� �

��� ��������������������������������� ������� �� ��91�.���������� ����

� �8��� ������ �������� ��0/�� ��#��� ���� �� ��������� ����� � ������� �

���)�������� ������2������������� �����������6�2�%��E�*����6�2��$�

6��*(� � �91�� K� �8�� � �� ��� ��� � 6�2� ��6��� � /� � �������� �� ��� ��

6�2�%��E�*�� �� �91A� ���/�� ���� �� �� ��� �����4 ��� ��� ����� ��

�����������K��������A������������� ���������������������������� �#�

�� ������ � ��8��.���������� �����U��6�2��$�6��*(� ��91��

5��� �� ���6� �� ��2����� �.���0��� ������������ 6����(?#�����3�@A� 6�2�$�?��@� ����� ��������� ���/���� ��� �2� ������#������6�����/����������#�������� ��� ���� ��� �������� ������ ��� ���� ���������' ���A����TA�� ����������������

5��� �� ���6� �� ��2����� �.���0��� ������������6��*(?#�����3�@A�6�2��$?��@� �� ���������������/��������2�������#������6�����/���� ��� ���#����� ��� �� � ���� �������������������� �������������' ���A����TA�� ����������������

Page 124: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

124

6.3.2 Conclusões

6� � #����2���� �� ���#����� ��� 7�� ���� �8�� �� �91� ������� .�� ��

������ ������� �� ���0��� ����� ���� ��� � ���#����� ��� .�� � �����

��� ������������� A���.��/����������������������� ��2��0�����Z��A�%[���

6� ���#����� ���� �������� ��� ������' ��� �������� ����� �� �� ������

��������� ��� �����7�� ���A�����FA� � 3�������� ����2 ������#� �

���#����������������� ��������������2���������������8���������������

��� �������� �� ��� � �91� ���� ��������� 6� �7������ ���� ���� �� �� ��� �������

E� � $������ ��� ��91��� �����#���� ���0������#�����������.�� ���3��

�������� �� ��� ��8����

C� ���� ���� ���� /� �� ���� ��J��2���� �� ������ � .�� ����� �� �������

Q����� ��� 1:� ���� �� ��0/�� �� � ��2��� ���� ����#�� ��� ����� 1:� ����� C�

���� ������ ��� /� �� ��2 ��� ���� ������� ���#����� � �� ����� ��� �� �� �

���#����� ��� ������ ������A� ������� .�� �� ���� ��� � ���� /� ����� �������������������

��,,N��������� ���� ���0������� ����� �2�� ��� .�� �� ��� ��A� ��� �0�� ��

7�� ����� C� ���� ��� �����A� ����������� ���� �� ����� ��� ����� 1:� ��A� /�

�����2����������#� ����������� ������������ �����6�������7�������������#� ���

������� ���������������� ���� ���)��������������� ��.�������������

����/���� ������ ���� 0������ &� ��������� � ���� �� 7�� ���� �91� �� �8�A�

�X������ �� ����� .�� �� ���� ���� ���� 0��2� �� ���� ������ ���� ������ ���

� ����������C����� ���� ����0��2�����2�)���K���������� ����6��91������ ��

�� ����� 2�� ��� ��� *� �������� � ��2���� K������ �A� ��� ��������� ���� �

�8�A���.���� ������������������2��������������1:� ��������������B�

#��� 3������0/��� ��������������&�� ��������������#���� ��������.��

�� ���� ���� ���� ������� ����� ��� �� ������ �� H������#I� ��� � �91� ����

������� U� �8�A� �� ��FA� � �91� �� � ����)��� � #����2��� ������ ����� ���� ���

����� Q�������� ���2� �����������#�� ��A�������� ���������������������

�������� ��� ������ ���������� ������V��� ���������� �����������)���

����� ���� ��A� ��������� �7�����A� �������A� ��#�� ���� �������� �� ������#����

��� � ��������0������� �� � ��#����� � �������A� ����� ���� ���� ������

�7������ ���� ���Z��[���

Page 125: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

125

�� ����� ��� �� 1:� ���� ���� ����#���� ���� � ��2�� �� ��� .�� �*�,�

N��������A����������#������ ��������%�������������2���A��� ����E�A�6�����6�2A�

.�� ������ ����� ���� � �91� �� �� ���� � �8�A� ���� ��� ���� �� ��������� ���

�������.�� ��#������������������ ��� ���������)��� ��8�������� � ����� ���

�� ������������0���������7�� ��������������&�������%��������A�(�������

���������� ������ ���� ���A���.��/��������������#��4 ����� ������' ���

��� ���� ��� � ���� ��� � ��������0������� ����� ������ ��� � ������ C�

��� ����� ��� ���#����� ������� �������� ��� ��� ���� ������ ���� � �����)���

��0����� ��2������ �������#��� ������������� �������������������U��

���/��������2��6� #��� 3 ��������� �������� ���� ������' ��� � ��� ���

���.�� � ��2��� ������2 ����� ��������d ��� � #��� 3 �� ��� ��������

�������� ��� ���/����� ��� � ���7������ ��� ���/���� ��� �2A� ���� ����

�������� E� �A� E� $A� E�$ A� E��,*A� 6��%�� �� 6�2��(A� �0���#���� .�� ��

���/���� ��� �2� �� ��2��� ��� ���� ��� ���� �� ���� 0�7� � ��4 ��� ���

�������������#��� 3�A��� ��.\� ���� ��A����������������������#�����/�

�0����� d ��� � #��� 3 �� /� ��;7��� �� ������ ��� �� ����� �� �������

����J����2�A� ��� ���� � ���� ��� ���#����� ��� ������� ��� .������ ���

�����.�������/��������2���� �������� ��U�������������#��������

������ ������������������� �?��������� �����������@��K��������A��������������

����� � � ���2��� � ������� ��� #�� ���/��� ��� �2A� ��� ��� ��� �������

������� ��� �� �� ��� ��� � �� 1:� �����A� ��������� ��� ��2����� ����� ��

���0��������

Page 126: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

126

Referências Z�[�P ��K�� ��A�Q!�����!��� � A��A���,A�?��*�@��

Z�[�6��P �� ��A�+� #���!��!��� � A�(""A��$�A�?�*,�@��

Z [�9��<��"����A�9��+��P � ����A�"!��� �!����A��8�A��$ �A�?�*��@��

Z%[�"��:22� ��A�����!�� �A��7A�% $A�?�*��@��

Z�[�P ��"��1�����A�P ��:��-���0�3A�"!��� �!�����A��"A��%�*A�?�*�,@��

Z$[�P ��:��-����0�3A����!�&�!�����A�(8A�((�A�?�* %@���

Z([� 1�� V�� 2A��� � ��� � ����� � �� ������ #��A� ��� ���� G �#�� V����A� !�3�A� K�M�_��NA�

?�* *@���

Z�[�1��V�� 2A�!��� �!�����A�%�A��$�,A�?�* �@��

Z*[�1��V�� 2A�-��8������LA����!�(���!�����!�����A�(�A�� �A�?�*��@��

Z�,[� �̀�&��P ��� A�+��:���������NA�(��� A����A�( (A�?�*� @��

Z��[�1��V�� 2A�-��8������LA����!�(���!�����!�����A�(�A��$�A�?�*��@��

Z��[�1��V�� 2A�-��8������LA����!�(���!�����!�����A�(�A��(�A�?�*��@��

Z� [�1��V�� 2A�-��8������LA����!�(���!�����!�����A�(�A����A�?�*��@��

Z�%[�1��V�� 2A�-��8������LA����!�(���!�����!�����A�(�A���$A�?�*��@��

Z��[�K��b�0N�A� �̀� �̀�& � 0��2A�"!�����!��� � �A��8�A��, �*A�?�,, @��

Z�$[�E��-��&����F%����!��� �!�� ��A�(%A��$�A�?�,,�@��

Z�([�-��b� ��A�"��9���� 2��A�E��b� �7��A�8��b�i����A�������!��� � �A��(8A�*$�A�?�***@��

Z��[�E��8� ���� �A�"��-��1��� �� �A�1��&�2�c#�A�' �!����!�� �A�%>"?A� �,A�?�,,$@����

Z�*[�P ��+��# �E ������A�<��-��8�������A�6��6������ 2A�V��:��:\ � 0��2��A�V��b�\2��A�6�����

"�NA�P ��-��V��<����A�!��E��9��� �A�� ������� ��������������$��� �'�8�8�?>����������

)� �'��� A�8�����A�E�� � 2� A�?�**$@��

Z�,[� P �� P �� P N��3NA� -�� 1�� ���0���A� P �� 1�� < 2A� �̀� &#����A� "�� _2�3�A� ��� ��

��� � A�(A�%$(A�?�**%@��

Z��[�b��E�0��A�E��b�� ���3�A�"��:L A�6��<�3��3��A�P ��<��� ��A����b��NLA������ �����A�

(�A�� %(�A�?�**�@��

Z�%[�"��9��"�N��A�-��b��6� �A�&��<��R����A�1��&�2�c#�A�-��-����A�-�� �̀�P ��A�&*���+ ��A��

%�7A�$�,�A�?�,,�@��

Z��[�P � 2�1��< 2� ����!%�"��������� ����7L� �����������#���3�����3������LA��N��3������L�

�� �3������0����LA�K��� �� -�����3� �� ���� ��� � �A� V�� �� �0��>� ��$$%,�A�

?�**�@��

Page 127: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

127

Capítulo 7

Xilanases XBC e XTL na presença do substrato

7.1 Di-xilopiranose em solução aquosa �

6� ���7������ ���� ?&!�@A� ���/��� ������ ���� ����� �������� ��� B�&�

7������ ���A� ���� ��� � �������� ������ 7�� ���� ��� � � #����2�������

� ����)��� � �����0������� V��/�A� ���� �� �� ��������� �� ������ ���

������7��� �����0�����A�����Q�����#�����������������������.�������

��� ����������������������������� ��������0�������������������� �������

������ ��� ��������� �� ��� ��������� ��� . ��� ����� ��� � �� ���� ���

���� ��������2��������������� ������

7.1.1 Resultados e discussão �

6� ������� � ����� ��&!�� ���� �0���� ���0 ������ ����� ��� ������ �� Z�[�

�;��2�� �8�����0�� C� �;��2�� ��������� �� �/�� � ������� ��� ������7�� 7�� ���

?�� ������8�@=&!������������.��A������#��������������������������

��&!�� �������������� �����������������������C�-"<&A� ��2��(��A� ����

�������� �������������4 ������������������0� ������ /����6���2��(���

������ ����� ��� ��� ��2�)��� ����� ��A� .�� �� ���� ��� �� �����)���

������ ������#�������������������� ������2����Bk�A%�?��2����� ������������

�����������7������ ���@��6����������������2���#������� ��������������� �A�

���/��#��� ���U�������� ��2������ ����A���2��(���A��/�.�A�����#�������

��� �A� � ������� ��� ���0����� � �� ��2����� �� ��2�� (���0�� 6� �������.��

������ ������ ���� ������� ��#�������������������/���% �A���2��(����

K� ��2 �������� �� �������A� � ������� ��� �Q��� ���� ���� � �#�

�� �������� �/� �� �� �A� �� ��� .�� �2��� ����)��� ��� ��������� �����

Page 128: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

128

�0���#��� ���������G����.� ����� ����A������������,�,� �A��������

��� 2�����A� ��2�� (� A� /� �0���#��� !���� ��� ��#�� � �� ����������A� ���

���7����� ���*oA����' 2���� ���������0� �������%A���������� ���2��(��A�

������� ��.\4 ��������������#�������2�����

�K� 3�� 1:� ��� ���� �������� �� �� 2�� �� ��������� K� 3�� �����

���0���� ��A� .�� �#����� � �� �������� ���� �������� ���� ��������A�

���##���� ��� � ������� �� ��2���� Bk�A%� ��#�� �� ������ ���������� ��A� #�����

.�� ���� ����� ������ �� ��#���� ���� C� ������ ������� ����� ��� ���� �����

������ ��� ��� �������� ���� ������� �������� �� ��2����� 6� �� ���� 2���

� ������������������%�/�������7����� ����N��������A�������������.���

� ��2���/����A�������� �������������������#��������� ������2����Bk�A%��

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,000,00

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

RM

SD (

nm )

t ( ns )

��

5��� �����>�-"<&��������������������������0� ����&!���

Page 129: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

129

��

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00

0,30

0,31

0,32

0,33

0,34

0,35

0,36

Rg

( nm

)

t ( ns )

5��� ����">�&����� ������ �����)���2��������������������2����B��A%��

5��� ����(>�-������2��������&!������ ��������������

Page 130: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

130

7.1.2 Conclusões

6�����������&!������������.���/������� ��� ���� �����������#���

��������������������������. ����������� �� ���� ���0�� ������������

��7�� ����K����������������A�����������#������ �����#�#�����#����U������ ��

���������������2������������A�����������7�����A��������� ������ ���� ��

�������$A�.���������� ������������������1:��������2�����3����7������&!���

9�� ���� ��#�� ���� �� ������� �� �7������� ����� ������ ��� ������� ���������

?7�� ��=&!�@A���.���������� ����������������������������������������� �

������������7��������0������ ������������������

7.2 Xilanases na presença de substrato

7.2.1 Sistema XBC+DIX � Resultados e discussões

6���2��(�%������ �����#��)���������������������7���8�=&!���

6����0������������������2����� �������)���/�#������0/��

�����-"<&A������������������������������� ������C�-"<&����8�������

-"<&g���������������������� ����� ����2���(�����(�$A���������#�� ����C��

#������ �/����� ���� -"<&g�� �� ���� ��������#��� ���#���� ���)��� ���>�

,����±,�,�% �� ?��D�@A� ,����±,�,�� �� ?%�D�@A� ,��%�±,�,�� �� ?��D�@� ��

,���,±,�,�( ��?$�D�@��������#�����������������������������.������0������

�����8�� ��4 �������0�������0���# ������.��������� �� �� ������

���� ����#��� � ����� �� ��� �0������ ��� .�� . ��� ����� ���#� �� ����

6 ��� ��� ������ ��� ���� ��� ��������A� �� �������.�� �� ��2�)���.��

���� ������������� ��� ��#��A� �� ��� ����� ��#��� ����� � �4 ��� ���

�0�����A� ��0/�� ��� ���� � ����� �� ��� �0�����A� ���/�� ���� �2���

������ ����C����� ������ ��A� ���� ��� ����������#��� ������� ������ � �

�4 �������0��������������#��� ��������������������� ������������

Page 131: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

131

6���#��� �������������������� ���� ���A���#�����BA�/������ ������ �����

�0�������C����� ���������/��2��� �����2��������0�������������

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,000,00,10,20,3

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00

0,00,10,20,3

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00

0,00,10,20,3

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00

0,00,10,20,3

RM

SD

( nm

)

t ( ns )

25ºC

45ºC

55ºC

65ºC

� 5��� ����%>�-"<&����8�A� ������ �����&!�A����� ��������������

5��� �����>�&����� ����#��)�����7�� ����8�� ������ ������0������&!���

Page 132: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

132

6� ������� �� ��#��� ����� ��� ���� ��� ��� ��� ����� ���� #�������

����� ���������� ������ ���������' ���H0������3I��������� ���������%A�

� ��� ��� ���� �� � ��#��� ����� H0������3I� ����� �� ��� � ��#��� ����� ���

������������� ������� ������ ���A� ��� ���������������' ���� ��������� �����

��� ����� ������� ���� ����� "��������� .�� � ��D�A� ��������� ;���A� �

������� �� �#� �� ����� 0������ 6� ��2�� (�(� ����� �� � fechaabreD − � U�

��D�� ��� � 7�� ��� �8�� � ����� �� �� � �4 ��� ��� �0������� V�������

�0���#������2��(�(�.�������� ������0������&!��/��������.�������� 2��

�� �����#���� ������#��� �����H0������3I��������� ����

0 20 40 60 80 100 120 140 160 1800,00,10,20,30,4

0 50 100 150

0,00,10,20,30,4

0 20 40 60 80 100 120 140 160 180

0,00,10,20,30,4

0 20 40 60 80 100 120 140 160 180

0,00,10,20,30,4

Resíduos

25ºC

45ºC

RM

SD

( nm

)

55ºC

65ºC

5��� ����>�-"<&���������������8�A� ������ �����&!���

Page 133: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

133

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,000,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

55ºC XBC XBC+DIX

Dab

re-f

echa

( nm

)

t ( ns )

6��1:� ���������� �&!��������������>���������������� ��0���(����

C�������������7�24 �����������������3����24 ��A�� #��#��������1:� ���������� �

&!�A�������� ��������� ���2��(�����

9���� ��3����7���� ��� �0������&!������ � #��#���� ���1:� ���� ������ �

&!��� C�� ������� ��� �7�24 ��� C��� �� C�� ��� ��������� ��� � 3�� 1:�� &���

���������������� ��0���(��A��� ����E� (A�6� ����V����$� �������������

�������������� ������������������� ������������� ���������������Z�[��C�

����������V����$��������������� ��� ��������� ������ ��A�� . ���.�����

��������E� (���6� �������� ������ ���� ���A���2��(�*��V��������������������

����������������������4 ������1:� ���������� �&!������������ ������ ���

���� 6� �� �� V����$A� �������� ������ .�� ������ �������� � ��� ���� �

� �� �����������������������3�� ������ ������0��������

5��� �����>�&0������3?�@�����7�� ����8��U���D�� ������ �����4 ������&!���

Page 134: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

134

4���������6�+�A����O A����1:�� ������8�������0������&!���C�������������7�24 �����3����24 �������0������&!�A�� ������4 �����A���������� ��������� ���2��(����C������������� ���������q�����.������� ���������������� ��������� �����������������

�0� "%D�>G ?� �%D�>G ?� %%D�>G ?� %D�>G ?�

'�B�/.R,8A-�

'�B�/.R,83-�

��3=�/.R,8:A-�

��B:�/.R,86A-S�

��::A�/.R,8AA-S�

��::A�/.R,8:A-S�

��>?�/.R,0A-S�

��:>>�/.R,03-S�

'��B@�/.R,0AA-S�

'��:BA�/.R,0:A-S�

��::>�/.R,86-�

�����

�����

( � �

( �,�

(����

�%���

**�,�

**�,�

**�,�

$��,�

**�,�

�*� �

(��(�

(����

$�� �

(��*�

�����

**� �

� �,�

**� �

���%�

*����

�����

����

(��*�

%,�,�

(��,�

���*�

**�,�

���*�

**�,�

�,�,�

*��,�

��

���*�

((���

��

(,�,�

�,�%�

**� �

�,� �

*(�,�

(���

(*� �

H32O32

H22

O22

O12H12

O52

O42

O2

O3

O4

O5

H2

H3

H4

H32O32

H22

O22

O12H12

O52

O42

O2

O3

O4

O5

H2

H3

H4

5��� �� ���>� !�� ��������� ���� ������� ��� 3����24 ��� �� �7�24 ��� ����0������&!���

Page 135: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

135

C�� �������� ��� ������' ��� �������� .�� ������� 1:� ���� ������ �&!��

���������4 �������/�**O ����>�6�2���A�9L�$*A�9L��$$A�E�(����E��(����

6� 6�2���� ����� �������� ����� ��;7��� �� ������� V����$A� �� ����� ���

���� ������ ��������� ����#����� ���������$A��6�2���� ��� �����1:�<<� ���

�� ��� ��� � ���� � 3�� ����� ������� #��� 3�A� ���� ��� � �� ������' ���

����� ������� ��������� ��� ��#�� U�� 1:� ���� ������ �&!�� ����#���� .�� ������� /�

���� ��� ������� &�#���� U� ����� �� ��� �� ��2� ��.��� ������#� � �����

������ �� 6�2A� ��� ������� ���� �� ����� �������� ��� � ������� ���� ��

�0������ ��� .�� ��� �������� E� (A� 6� �� �� V����$�� 6����� �� ��A� �� �������

6�2���� ��#�� ���� �� ����� ������ ��� ��0/�� � � �� ���� �� �������

���3����� ������ ��������������� ������������3���;�������7�� ��

C����������E�(�����(�A���9L�$*����$$A�������1:� ���������� �&!������

������7���������������/�������0������ ��������A�����������������

������7�����7�� �������������3������� ���������������7������ ���?&!�@��

6��1:� ���������� �&!��������������������������� ���������������A������ ����

������������4 ������������������������6��9L�g�������2��������� ������

3����24 ����:����: �� . ���.�����E�g�������2������������� �� ������

5��� ����7>�-�������6� ����E� (���������V����$����#�����3���

Page 136: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

136

���3����24 ����:�����:����������1:�� �4�������������&!������#����������

���0�� ��������������#���

"��������� .�A� .�A� ��� 9L�g�� �� ���� ���� �������� Z�[� �����

������ ���� ��������� ��A� ���� ��� �� 9L�$*� �� 9L��$$� ������ ������� ���

� #��#�����������0�������6�������������� ��������1:�88���<<������� ����

���� �� ���������������� �������������� ��� �������������#����

! #����2 ��� �� ���/���� ��� �2� � ��2���� ��� �����A� � ���������

;���A� ����������� .�� ��� ������� ��� �7�24 ��� ��� 2���� ��0�7����� �� E�(��

������ ������� ������� ��� ���#����� ���� ���/���� ��� �2>� ��� ������� ���

�����4 ��� #��� ��� �� � �%O � ��� ������ ����� � . ��� .�� �� � ��2��� ��� 1:�

�������� �� ���� ����� ��� � ��2��� �/���� ��� ��,� � �/� ����N���������� <���

��4�� �� �2�� ��� ���#����>� � �������� ���#�� �� ���� ������� ��� �7�24 ���

�� ����%O ����������?� ��2���*�,N��������@�������������������� �O �?��,� �

N��������@A� ��� � ��2 �� �2� ������� ��O � ?��,�(N��������@� �� �O� ?�������������������

����N��������@� � . ��� .�� � �������� ���/��� ��� �2� ���#�� ���� ��� ��

��2 ����7�24 ������� (O �?�$� �N��J���@���

5��� �����8>�C����������E�(����E��(��������������� ��������#�����3�A��6�2�������������9L�$*����#�������

H�����

H����"�

Page 137: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

137

&�� ���A��������������������7�24 ������2������0�7�������E�(��������

���#��������� � ���� ����������/��������2��������2��������#�����

������������3�������������������#�����������������E��(�A�6�2������

9L�$*A���2��(��,��K� 3���������/�������2������������� ���2�������

������������������������4 �������������O ��

��������� ���� �������� ��A� ��� ��������E�(�����(����9L�$*� ���$$�

������1:� ���������� �&!������������7���������������/�������0�������

&���������������� ���9L��$$� ��������������1:�������������/�������

�2���������A�����FA������������E�(�A�E��(����9L�$*��������� ��� ���

������' ��� ��� � �������� � �������A� ����� ���� ������� ��� � #��#����� �

��7��������0��������������/��������2�.����#������� ��������������

3���;�������

&������� ����������3���;������ #��#� ���7�� ���������������������

���� ��� ���������� Z*[�� ��� �0��� ��� ����A� 3�� ���������� �� ����� �� ���

�� ���/��� ��� �2� �� ���7�������� ��� ������� E�(�� � �8��� C�

������� �� ��� ����� ���/��� ��� �2A� ����� �0����� ���� �������A� �����

����� ��� � ��� ������� � ������ ��� ������� V��/�� � �����)��� ����

��������� ��0��� �� ��� ����� ��� ���� �� 7�� ��� �8�� ��� ����� �����������

����� � �����)��� ������ ���� �0����� #�� �/� ���� ��� ���' ��� .' ���A�

d"J""���

C� -"<&� �� &!�� ����� ����� ���� � ��2�� (����� V������� �� ����� ��

��2��(����.�� ���3��������������� ������2����Bk�A%A������������������

&!�� ��#��� ��� ������� .���� ����� ��������� ��� /� �0���#��� ��� ����� ��

����������������� ��.\4 ���������.\� ����1:� ���������� �&!����� . ���

.�� � ���/��� ��� &!�� ��#��� ��� ������� .��� �� ��� �� -"<&� ���

���7����� ��� ,��% �A� �� �0�� ��� ��������� � ���/��� ��� ���0����� ����

#�������,�,� ���

Page 138: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

138

0,00 1,00 2,00 3,00 4,000,00

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

0,12

0,14

0,16

0,18

0,20

0,22

0,24

RM

SD

( nm

)

t ( ns )

7.2.2 Sistema XTL+ DIX � Resultados e discussão

C��-"<&g������91A����� ��������������������������A���������������

��� ������ ���� ����������� ����� ���� ����� ����� �� ��2��� (���� �� (�� A�

��������#�� ����C������#�������/���������,��,±,�,� ��?��D�@A�,���±,�,�� ��

?%�D�@A� ,��(±,�, �� ?��D�@� �� ,��$±,�,� �� ?(,D�@�� ����� ��� ������ #������

��������0������ ��4 �������0������ ?,�� ±,�,� �����D�A�,��(±,�, ���

%�D�A�,��*±,�,% �����D����,��(±,�, ���(,D�@A��0���#����.�� ������ ��

������������#�������/��������-"<&������� ������ ��� ���.������������

� ����/��������0������� ������ ������0�������C�������������� ������

�� �8��� 6� ��D�A� �� ������ ��� �������� /� ���� �� 2�A� ��#���� U� �����

��#��� ���������2����K������ ���K������� �� ����� ���7����������������

��������� ��� ������������&�#��������0���.����������������������

5��� ������>�-"<&���&!�A� ���0�� ��������������#�A����� ��������������

Page 139: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

139

�����������/��Q�������������0���� ���������� ��������K��������

�����������D�A�������������������������������7������ ���Z�[���

&���2��(�� ��0���#����.�������� ������ ������������� �� ���� ���

������� �����������7�#��������2����A���������#�� ��A��������� ��C����� ������

�� ����������7�0��������������� ���� ���������#�����������������E�L������ ����

�� ��2�)��� .�� �� ����� �� �����B�� K� �91A� ������ ���� ��� ��� �0���#��� �

�4 �������0�����A������� ������0������2��������0������������� ���

��� ��� ������������� ���������U����������;���A�(,D���K����������

;���A� ������ ������ ��� ����� ���������������#�����&����� ���� 2���A�

� ��� � �8�� . ��� � �91A� � ����� �� ��� �0������ ��� ����� ��

������������� ��� ��� ���� ��J��2���A� ��� �� ����� ����� ���0������� ��� ��

���� ��� ��� ��A� �� .�� ����� ���� #����� ����� ��� ����� ����' ���� fechaabreD − �

�� ������� ��� ������� �������0���#�������0�������������A������/��

%�D����

0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 10,000,00,10,20,30,4 0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 10,00

0,00,10,20,30,4 0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 10,00

0,00,10,20,30,4 0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 10,00

0,00,10,20,30,4

t ( ns )

25ºC

RM

SD

( nm

)

45ºC

55ºC

70ºC

�5��� �����">�-"<&����91A� ������ �����&!�A����� ��������������

Page 140: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

140

0 20 40 60 80 100 120 140 160 1800,00,10,20,30,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180

0,00,10,20,30,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180

0,00,10,20,30,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180

0,00,10,20,30,4

Resíduos

25ºC

45ºC

RM

SD

( nm

)55ºC

70ºC

��

0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,001,2

1,4

1,6

1,8

2,0

2,2

2,4

2,6

2,8

3,0

Dab

re-f

echa

( nm

)

t ( ns )

45ºC XTL+DIX XTL

5��� �����(>�-"<&���������������91A� ������ �����&!���

5��� ������>�&0������3?�@�����7�� ����91�U�%�D�� ������ �����4 ������&!���

Page 141: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

141

6���2��(��%������ ��� fechaabreD − �U�%�D������7�� ����91� ������ ��

�� � �4 ��� ��� �0������� V������� �0���#��.�A� ����� ����� ������� ��� �

�8�A������� ������0������&!��/��������.�������� 2���� �����#���� ����

��#��� �����H0������3I��������� ��

6� ���0������� ����� �� �� ��� ���� � ����� � ����� �� ��� ���

�0������ ���� ����� �������� ��� ������ ��0�3��� Z%��[A� ��� ������ ��� ���

������� U� ������������ ��� ������ �A� � ��� � ����� �� ��� �0�����A� ��� �2 ��

����A�/��� �������� ��� �������������������������������������� ����

���������������� ��� ��Z%��[��

6�� � ��2��� ��� � ������� � ����������� ������ �&!�� ������� ��� ���

�������� �8�=&!�� �� �91=&!�� ��� ��� ��������� ���� �0��� �2��� �1.8.40.85 −±−≅ molkcal � ��� �0�� 7�� ����� ����� ���� ���� ���� .�� �

�� �����������0������/���������������7�� ���A�#�����.���������)���

�� ������ ���� �������� ��� ������' ��� �������� ���� �� ���#��� ����� ���

����������������������� ��� 7�� ���� Z�� [�� ��� �� ���)��� �2��A� 0�7�� ���

���������� ;����A� �� ��#������ ��� �0�� �� � ����� ���� ��4 ����� �� .��

���������0/��.����� ��2��������#���������2������ #/�����0���.����

��.\4 ���� ��������� ���� �� ����� ��#��� ���� ������ ���� ��� � ������ ����

����������

6��1:� ���������� �&!��������������������� ��0���(����C���������

����7�24 �����3����24 ���� #��#��������1:� ���������� �&!������ ��� ��������� �

��2��(�����

C�� ��������.�� ������1:� ���� ������ �&!�� �������#���+�� ���>�E�(A�

6�2���A� 9L�((A� 9L��(�A� E��$� �� E��(��� ����� ��� ���� � �8�A� �0���#����

.�� ������ �������� ������ ���������� �� ������ �����)��� ���� �������� E� (A�

6�2���A� 9L�$*A� 9L��$$A� E�(�� �� E��(�� �� �8��� -�2������ ��A� ��� ��������

E�(?�91@���E� (?�8�@� ������� �� �����7��� ��� ����������������#����

�� ���� �� �91� ����� ��� �� ��2���� K������ �� ������ ��� � ��� ��� �����

. �������7�� ���A����/���0��������� �������������B�������� ���� �����6�

����� ������ ��� ������� E�(� /� ����2�� �2��#�� ��� ��� ����� .�� ��

� ����)��� � ������������� ������ �&!�� �������� ����#��.�� �� ���E� (���

�8��� K�� ������� $A� ����������� �%� �������� �� �91� .�� ����� �#��

� ��2����/�������1:� ����?�������2�@���������#��.����*�,N��������������

Page 142: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

142

�������� �� ���� ��8���� �����������%��������A�� �� ��������E�(��&��0���

(��A� �������� #��� .�A� ��� � ���� �� ��������A� �� ������� E�(� ����� 1:� ����

������ �&!������+����� ���� �����%O A�����FA� ������������ ������������

1:� �����������2�����������1:�����#�����������0�������

4��������"6�+�A����O A����1:�� ������91������0������&!���C�������������7�24 �����3����24 �������0������ &!�A� � ���� ��4 �����A� ���� ��� ��������� � ��2�� (���� 6� ��� ����� C��� �� C��� /������������� �������������7�24 �������2������0�7���������������E�(����$��

�0� "%D�>G ?� �%D�>G ?� %%D�>G ?� �8D�>G ?�

'��B,8*:-�/.R,06-�

'��B,8*A-�/.R,03-�

��66�/.R,8:A-�

��:AA�/.R,8AA-�

��:AA�/.R,8:A-�

��BB�/.R,0A-�

��:BA�/.R,03-�

'��@>,8*:-�/.R,03A-�

'��@>,8*A-�/.R,03A-�

'��:B@�/.R,0AA-�

*�� �

**�,�

��(�

$*���

,�,�

**���

**�,�

���,�

� � �

���,�

**���

*(���

�(�,�

$,�,�

���%�

**���

**���

���,�

���,�

$,� �

*,�$�

*(�,�

��

��� �

�%���

**�,�

���(�

(��*�

�,�$�

�����

�%���

*(���

��

%��$�

��

**� �

$ �,�

�����

�,�,�

%(� �

C�������� ��������6�2���A�9L�((A� 9L��(�A�E��$���E��(������� ���

+�����1:� �����������0�����������3 ��������������� ���2������8��������

� �����)��� �7������ 2� ��� ����� �� �����3 �� ��� � ��2��� ������ ���

� ����)���� ��������������8�k&!�����91k&!���

V���������������������� �����)����������� ���������������/�������

�2� .�� ��� � �� ���� � ��2���� ��� �����A� ����� ����� ���� ������ ��� � �8���

&��������� �� �� ��2���������� �����3 ��� U.��� �0���� ��� � �8�A� #���

��2��(�����K���������91A���������������2��(���A���0/������� �� �����

���/��������2������� ������#�������������������4 ����<���������/����

�� ���.��������������#���������7�24 �������2������0�7������� ���% O�

��� ������ ?� ��2�� �/��� ���*N��������@� �� �� ��2 ��� �7�24 ��� �� ��� (O� ���

������ ?��,� N��������@�� V�� � ��2 �� �2� ������ Q������ ���� ��� $O��������������

Page 143: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

143

?�$� N��������@����%�O �?��,��N��������@��V��/�� � 3��������������/����

��� �2� ����� ��;7��� ��� ������� E��(�A� ��� ���� ������ �� ���7�������� ����

��������E��$���6�2�����C�������/��������2������������ ���� ����������

�91A����������� ��8�A�����������������������4 ����� �����.���O ���

6� ����� ����������/��� ��� �2� ���0������ �� ���7�������� ����

�������� E�(�?�8�@� �� E��$?�91@� /� ���� �� 2� ��� �����3 �� � ���� ��

7�� �����8�����91��K������ ��������������������3���;���������2�����A%�

�� &!�A� ������ �������� ��� ����� ���;������ Z [A� �� #��� .�� ������ ���

��� ������������������.�����.�������������E�(�?�8�@���E��$?�91@� ���

��F������� �����K���������7�� ��������������A������ ���������������

/�.���������.������������������ ���;�����������#�������������������

���/�������2� ��������� ��C:����:=��6���2��(��$������ ������.���

��������� ����� ���3���;����� ����� 7�� �����8�� ���91�� 6����/��� ��� �2�

���0������ �� ���7�������� ���� �������� E�(�� �� �8�� �� E��$� �� �91� /�

�� ������������� ��� ��� �

5��� �� ���%>� -������� E��$� �� E��(�A� ���#�����3�A� 6�2���� ��� ��� �� 9L�((� ��� #����A� ���0������ ��� �� F� �� �� ����' ����� ����X����� ��� Y�� 6�� ���/���� ��� �2��������� ����� ��� ������ ��� �����4 ��� ������7����� ��� %,O � ��� ������ ����� ��������������91��(,D�A� ������ ��2������

H����

H������

Page 144: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

144

K�� ��� ����� ����� � ��� � ��2�� (��$A� �� �.�� ����������� /�

��������������������E�(�� ��8����E��$� ��91A����/���������� �����

���������������������������� ����A� ������������.�� �����������/���������

�������/�������2�.�� ��� ������������������������C:����:=A������������

��/��� �� ��#���� ��� �7�24 ��� ����/��� ��� �2� �� ������ U����/��� ��� �2�

���������� ���;����Z*A�,[A���2��(��(���

&�� �� ����� 2���A� ��� ������ ���� � �������� Z*���[A� �� 7�� ���� ��

������ ��� �7�0��� ��� ������ ��� �� ��� ����� ��� ���� � ��� �� �.��

����������� ������� ����� ������� E�� �� 6��� �������� ��A� ���� �0��.\� ���

���0�������� ��� �� � �7���0� ��A� ����� ������ ��� �� �����A� ���� � ����)���

�������������� ���� �������� ������� ���E�� �� 6��� �������� ���� C�� ��������

5��� �����>�"�� ��������3���;����� ���.��� ��� ��������E�(�JE��$� ���� ����� ��#����������.�� ���;��������

I H����>23�?�E�H���>24�?

I H����">23�?�E�H�����>24�?

I H����>23�?�E�H���>24�?

I H����">23�?�E�H�����>24�?

Page 145: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

145

E����6�������� �������������������� ��#��������� �������������������

0�������0�������������

�����������������������.������� ����A� ���/������#���� �������

��� ������������ ������������7�� ���A��������������������� ��U�����

� ����������� ����A�.��/����� ���������������/��������2� ����������#���

V������� ������ .�� �� 1:� ���� ������ �&!�� F ��� ��� ���� � ��� ��������� ���

���/��������2������ ���� ����������#�� �����7��������������������E�(��

� �8�� �� E��$� � �91� �� ���� �� �� ��2����� ������������ ��� ��

�0�� ��� ���������� 9������ ���0������� � �������� ����� ?��2����� �� ��2���� ���

�����@A����0��������������������������0������?� ����)���� ������������A�1:@�

�������� ��������/��������2���������2��������0������� ���2�����

I H����>23�?�E�H���>24�?

I H����">23�?�E�H�����>24�?

I H����>23�?�E�H���>24�?

I H����">23�?�E�H�����>24�?

5��� �� ����>� "�� ����� ��� 3���;����� � .�� � ���/��� ��� �2� �����#�� �� �.�� ����������������������������

Page 146: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

146

7.2.3 Conclusões

&�� �� � ���� 2���A� � ��� � �8�� . ��� � �91A� � ����� �� ���

�0������ ��� ����� �� ������������� ���� ���� ���� �� ��2�)��A� ��� �� �����

���0������� �� ���� ��� ��� ���� V��� � #����2���� ��� � ����)���

� ������������� ������ ��0�����A� �� �������� .�� 3�� �� 2� ���

����������� � ���� �� ��� ����������������������� ��� 7�� ����� 6�2 �� ��������

�� ����A��������������������������������A������������ ������������� ���

��� ������� 1:� ���� ������ �&!��� C�� �������� ���������� ����� ������ ����

��������������1:� ���������� �&!�������� ���#����������������� �����

�����7�� ���A���������>�E�(A�6�2���A�9L�((A�9L��(�A�E��$���E��(�� �

�91� �� E� (A� 6�2���A� 9L�$*A� 9L��$$A� E�(�� �� E��(�� � �8��� &�#���� U��

���.\� ����1:�.�����������������������������0�����A���������������.��

����� ���� ��� 2� ���� ����� ��#���� ���� ��7���� ��� �0������ �� ������ ��#�� ��

�� ��.� ���� ������� ������ �0������ ���������� �#���#������.���

3���;����� ������� "��/���� ��� �2� ���� ���#��� ������ ��� �����4 ��� �����

��������� ���2��������������&�����������/��������2�������������� ��

���7�������� ���� 2����� ��0�7������ ���� �������� ����������E�(�� ��8����

E��$� � �91� ���� 1:� ���� � ��2�� �� ������ ��� ��,b���������� ����� ���

���/���� ��� �2� ���#��� ���� ��� ��� ��� ����� ������� ��� �7�24 ��� ����

��0�7������� 9��� ���/���� ��� �2� ���� ���##���� ��� ������� ����� ���

����������� �� 3���;����A� #����� .�� ��� ��� �����A� ����������

�7������ ���� ��A��� �����������������������.�0�������/�������2�

������� ��.\4 �������.����� �����������������/�������2������#� ���

�.�� ����������� ���� .�� ������ � ������������ 6� ����� �� ��� �2�� ����

������� ��� ��2��� ��� �������� ���������� ��� ���� ���������� ��� ���� �������

������ ���������3���;������ ����������������������������������� ������

Page 147: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

147

Referências �

Z�[�MMM����0���2J��0�

Z�[� P �� P �� P N��3NA� -�� 1�� ���0���A� P �� 1�� < 2A� �̀� &#����A� "�� _2�3�A� ��� ��

��� � A�(A�%$(A�?�**%@��

Z [�b��E�0��A�E��b�� ���3�A�"��:L A�6��<�3��3��A�P ��<��� ��A����b��NLA������ �����A�

(�A�� %(�A�?�**�@��

Z%[����:��� 2�"�A�6��:�� �̀�P 2A���� ��A�A�**$A�?�,,(@��

Z�[� �̀�a�22A�b��E�0��A�"��E22 �2A�G�E��P 2 ��A����b��NLA���� ����� � A��A��**,A�

?�**,@��

Z$[�"��6��C1!R�!-6A�8��E��EG!"6-6�<A� �̀�-��-���G<<!C1A�+�� �̀�"�&-6KCA�+�����ECaaCA�

1�����<��K�99CA�"!����!�����A�(%7>"?A�% A�?�,,$@��

Z([� �̀�+��<��� �� A�C��<�00��� A��*/�A��7>%?A��,�A�?�,,$@��

Z�[�1��1��1�22��A�<��b��2� ��A�b����N���A�<����� 9��7���A�"��b��83�A���� 6 ����A� -��P ��

V��N���2���A�<��1��� A�+�8<�1���A�%87>"?A� , A�?�,,�@��

Z*[�K��b�N� �A�6��<3� �L�A�"��-�A�&*�������#���!�� � 1�A�"(A�%��A�?�***@��

Z�,[�"��1��<� ��A��� �!�� !%�78A���(�A�?�**,@��

Z��[� &�� 9��A� <�� E�� P ��3���A� K�� -�� E��N��A� &�� E�� b��0� A� -�� 6 �� LA� �̀� P ��� A� -��

6��0������A�"!�����!��� � �A�"A���$�A�?�**�@���

Page 148: “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...

148

Conclusões gerais

6� ��������0������� ��� 7�� ���� ������� ���� �� 0��� ��������

� ��� ������������� ���>�

,�-� ���2��������2� ���������������������/������������������� ������#�W�

,��-� �������#����������������W�

6� ��2����� /� �� �� ��.\4 ��� ��� ������ ��� � ����)��� � ��� ��

� ������������� ����#��� 6�� � ����)��� � ������������ �������� ��� �����

Q�������������������.\4 ��� ��91�.�� ��8���d ���U����#����A���91�

����� ���%� �������� ����2���A� ������������ �� ���� ��8�A� �F�� ������

�������������1:�� ������������������ ��2������� �������#����

C� ���� ��� � ���� 0��2� �� ���� ������ ���� ������ ��� � ���� �����

7�� ���A� ������ ��� .�� �� ���0��� ��� �7������ �� ������ ����

��������0���������6������� ��A���������������.�������� ���� ���A� ����������

��� � ����A� /� � ��2���� .�� ��#�� ���� � ��������� ����� �#�� ��� ���)��� ��

�� ���#������������������� �������������0������������������� ���

6�� ������������� ���� �������� ��� ��2�)��� ��������� ���� �����3 ���A�

��������� ��� ��� ������� ��#��� �������� �����3 ���� �� �� ��.� ���� ���

� ����)��� ���� �� �0������ ��0/�� ����� �����3 ����� !���� ������ ���

��#������ �� � ��2��� ��� ��#���� ���������� C��� �� ��.\4 ��A� /� .�� ��

���/���� ��� �2� ����� ���� �� ������ ��#�� ��� ������� �� ��0/�� ���

�� ��2��)��� �����3 ���� ��� �����)��� ��;7���� ��� �������� ��� ����

���������� .�� ���� ��#��� � 3���;����� �� ��2���� �A%�� ������ ���������

�����0���������� �������������������������������� ������