“Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...
Transcript of “Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo ...
1
Universidade de São Paulo Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto Departamento de Química Programa de Pós-Graduação em Química
“Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo via
simulação molecular”.
Davi Serradella Vieira
Orientador: Léo Degrève
Tese apresentada à Faculdade de
Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto da
Universidade de São Paulo, como parte das exigências
para a obtenção do título de Doutor em Ciências, Área:
Química
RIBEIRÃO PRETO -SP
2007
2
FICHA CATALOGRÁFICA
Vieira, Davi Serradella
Estrutura, termoestabilidade e atividade de xilanases: um estudo via simulação molecular.
Ribeirão Preto, 2007. 147 p. : il. ; 30cm
Tese de Doutorado, apresentada à Faculdade de Filosofia
Ciências e Letras de Ribeirão Preto/USP – Área de concentração: Química.
Orientador: Degrève, Léo.
1. Xilanases. 2. Termoestabilidade. 3. Ligações de hidrogênio.
4. dinâmica molecular.
3
Conteúdo �
�
������ ���������������������������������������������������������������������������������������������� �
��� ����������������������������������������������������������������������������������������������� ��
������������� ��������������������������������������������������������������������������������������
���������������������������������������������������������������������������������������������������
� ������ �������������������������������������������������������������������������������������� ��
���������������� ��� ������ ���� ��������!�������������������������������������� ���
���������������� ������������� � ��������������������������������������������� ���
��������������� ������� ���������������������������������������������������������������� ���
���������"��#��� $�� ����� � ����!��������������������������������������������������� "%�
��������� ����������������������������������������������������������������������������������� ���
&�'����������������������������������������������������������������������������������������������� (��
���������(��#��)�������������������������������������������������������������������������� ("�
�����! ������������������������������������������������������������������������������������� ��
�����"���������������� ��������������������������������������������������������������� �
� ���"�������������#� ������������������������������������������������������������������ $�
�%���&� '����"���������������������������������������������������������������������� (�
������� ���)�����������)�� ������������������������������������������������������ ��
�$�������������� ����������� ������������������������������������������ *�
�(���+����� ������ ��������������������������������������������������������������� %,�
�(�����-���������#���.���������/��������������������������������������� %,�
�(�����&�����0������������' ��� ��������������������������������������������� %��
�(� ���&� '�������� ������������� ������������������������������������� %��
�(�%���1�2�)������3����24 ���� ����������������������������������� %��
�(�����1�2�)������3����24 ���� ������������������������������������ %��
4
�(�$���5���������#���������#� �� ������������������������������������������ %��
�(�(���-������2������������������������������������������������������������������� %��
�(������ ��2������� ���������������������������������������������������������� %��
�����6�� 3�� ������������� ��������������������������������������������������� %$�
�
�������������* �� ���������� +� ���������� �� ���������#�� � �����������
,��� ���� ����������������������������������������������������������������������������������������� ���
%�����-����������������)�� ��������������������������������������������������������� %��
%�������6�7�� ����8� ���������������������������������������������������������������� %��
%�������6�7�� ����91����������������������������������������������������������������� �%�
%��� ����� ���)�� ����������������������������������������������������������������������� $��
���������%���� � ��������� �� �-.����! ����������������������� ������ (�
������-����������������)�� ��������������������������������������������������������� $ �
�������� ���)�� ����������������������������������������������������������������������������� $$�
����������������-/������0�� ��1 �� ������������������������������������������������ ��
$ ���� �:�� �;� ��� ��������������������������������������������������������������������������� $(�
$ ���� �1�2�)����� �3����24 �� � � ����������� ��������������� (,�
$�������-����������������)�� ��������������������������������������������������� (,�
$������������ ����8�� ������������������������������������������������������������ (,�
$������������ ����91�������������������������������������������������������������� ���
$��������� ���)������������������������������������������������������������������������� *(�
$ � �� �1�2�)����� �3����24 �� � � ������������ ��������������� **�
$� �����-����������������)�� ��������������������������������������������������� **�
$� ������� ���)����������������������������������������������������������������������� ��%�
�������������2��� �����23����24�� ��� ��� -���������� ��� ���������� �"��
(���� �&��7 � ���� � ��� ������ �����.��� �����������������������������(�
(�������-����������������)�� ������������������������������������������������� ��(�
(��������� ���)����������������������������������������������������������������������� � ,�
5
(���� ��� � ���� ������ ���� ��0����� ���������������������� � ,�
(�������<�������8��=�&!�>�-����������������)�� ����������������� � ,�
(�������<�������91�=�&!�>�-����������������)�� ������������������ � ��
(��� ����� ���)����������������������������������������������������������������������� �%$�
�
�� ����/����� ����������������������������������������������������������������������������� ����
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
6
Resumo � 6�� 7�� ���� ?��� ������@A� � ����� ��������� ���� ��#������ ��2 �����A�
�������������3�������������2�)���B��A%����������� �������7�� A�������
0 � ��� ������������� 3�������;����� �� ������ C� 2� ��� ���� ����
0����� ��;2���� ��� 7�� ���� �� ������ � �� �������� �� ����� ���
0� .��� ��� ��� ����A� �� .��� � 7�� � /� 3��������� ��0� �� ������ ���
������������#��������������������������2 � �?�0��' �������� ��#���
���� ��������@A� ���� � ��� � . ������ ��� ���������� �������� ���������
����� ������ 6� ��������0������� �� � �������������� ���� 7�� � ���� ��
������������ ����� ��#���� ����� 2� ��� � ��������0����� ��;2���� �� ��������� .��
�� 7�� ���� �4�� ������� 6�� 7�� ���� ���������A� �8�A� ��� ��������� ;����
��D�� ?�������� ���� 0��/��� ��������� �������@� �� ����������A� �91A� ���
���������;����(,D��?����7��������� 2���� ����� �����������@� �����
������� �������#�� ��� ���� �������� ��� �� '����� C�� �������� �����
��������� ����� ����� ��� ����� E-C"C<�*$?% 6�@� �� �� �����)��� ��������
��������2���E-C"6�<� ����C��0F���#����� ��0�3��/� ������ ���������� ���
��������A�� ��2/��������� '����������������� �����������0���������7�0����
���������� ������C����������������������2���������� �����7���4 ������
�����2� ���������������2�)��� ��� �����7�� �����8�����91>����� ���#��
�����2� ������0������A�.��/������� ������A��������.��������������2� ���
��#��� ����A� �� ���� �� ���� ��� ����2��� G�� ��#��� ����� ��� ����� H0���
���3I������0������������ ��������C��� ������ ��������2�)������3����24 ���
� ���J� ������������ �� �� ���� ��� �� �� �� 2�� ��� ������ �� ��� � ���� ��
��������� ��������� �7������ ���� �� ����3��� ��� �� ������ ����
��������0�������� �7�0���� ���� ��� ������ �� �� ����� ������ .��
��������3�� ��� �� ������� ������� ��� �� ���� ��� �����3 ���� +���
�����#������ ��������%�������������2����.������������� ���� ��91����� ����
��8�A� ���� �������� ��#��� ���� �� ��������� ������� ���� �������������� �
�8��� &�� �� � ���� 2���A� � ��� � �8�� . ��� � �91A� � ����� �� ���
�0������ ��� ����� �� ������������� ��� ��� ���� ��J��2���� ��� �� �����
���0���������������� �������2���K� 3�������� ������ ��� ����������
�0������������������������ ����)���� ������������������� ��0�������
7
Abstract 93��� �L����7L� ����?��� ������@������������0L���#�����������2 ����� ��
���� ���3L����L��� �3��B��A%�0� ������ �3��7L� ��� ��3� A� �3�������0 � ��
3������������ � � �����93��2����0�����3 ���2�������� ������� �3��7L� ���� ���
��� ��� ���� �������� � � � �3�� ����0���3� 2� ���������� M3� � �3�� 7L� � ���
3L����L���� ����3�23������������� ����� ��������������3����2 � �����#���93���
��������� ����� ��� �3�� �# �2�� ��� ������ �3�� �� �� ��� �3���� �� �3�������
���� � � �3�� ����0���3� 2� ��������� 93�� ��.����� ����������� ��� �
0�����3 ���2����L� ����� 7L� ��� � ����� �3������0����L� �� 3�23� ��� ��L� ����
7L� �� 93�� �����3����A� �8�A� ?����� ��������� �������@� �� �3�����3����A� �91A�
?������� ����� �� ���������@�7L� ����M�����������0L����������L �����
������� ��� 93�� �����L� ��������� ��� �3���� � �L���� ��� ������ ���������L�
������� ��M3�����3��������L���������������� ������93���0F����#������3�����L�������
2��� ����� � ��23�� � � �3�� ������� �3�� ��� ����� ��0��� ���� �3�� 7L� ���
�3������0����L��93���L������M������������0L��3��E-C"C<*$�?% 6�@�������������
�� �3���������� �L ���� ������� �� M���� ���������� 0L� �3�� E-C"6�<� ���
��N2�� � � �3�� ���������� � 2�� ����� ��� ��� �,D��� 93�� ������� �0�� ��� M��3�
0��3� 7L� ���� M���� ��������� � 93�� �7���� ��� ��� �M�� N� ��� ��� ��2�� �� M��
��� �������� ��8�� ���91>��3��������� ���� ���#��� ��3�23�L���0�������������0L�
�3�� ��������� ���� �� �� 2���� ���� ��� 93�� ���� �� ��2�� � �73�0���� ��2��
��#��� ��>� �3��� ��� �3�� �3�0� ���� �� 6� N� �� ��� H��� ������I� ����� � M��
��� ��������3���L0��� �����������3������������3��7L� ������3�����#���� �����
93�� � ���J� ���������� 3L���2� � 0� ��� �� ���� 0���2��� ���M� ��� �7��� � ��
2���� �� 2�3� �3�� �3������0����L� ������� ���� 0��M�� � �3�� �M�� � �L����� !�� M��
�����0��������� ���L��%��3�2���������������� ��� ��3���91�M��3� ���������� ��3��
�8�>� ��3� ������������0�� �� ������������ �� 2������ ������� � ��8���! �
�3������� �������3���0�����A��3���3�����������������3����� J��2�� ���� ���
���������0���3����0����L�����3���3�0����� ����� ��������K��������� ���� ��3��
��� ��L� ���� �3�� �0������ M�� ��������� 0��M�� � �3�� 7L� ���� �� ��� � � 0��
�22������ �3�� �3�� ���#��� � � ��2���� ��� �������� 9M�� M���� ��������� M����
�� �� � � �3�� ���#�� ����� ������� 2� �3��3L����L�������3 �������������� � � �3��
����������
8
Lista de figuras �
5��� �����6�52����2��� �3���2��0� ���������������� ���3���2��0� �
�������?@����������/��������2���2���?�������#�����3�@���?0@�������
���/��������2��
5��� ����"6�1�2����������0������ ����������#�������� ���A��7�� ��A���
�0������ ��2��� ����� ��� ���� C�� �������� ��� ������ ��#�� �� � ���� ������
���������������������#�����3��
5��� �� ��(6� � ��2�� ��#��� ��� ������� ��� � ���� ��� �������� �� ������ ���
�������?�����@����������?��@���
5��� ��"��6�1�2�)���B��A%����������� �������7�� ��
5��� �� "�"6� <�0���������� ��� �������� ������� ��� ��� ��� 7�� ���� �91�
?�� �@����8��?�����@��
5��� �� "�(6� ����������� ��� �� �������� � �8�>� �%��O ?������@A�
�*��O ?������@����$�(O �?����2���@��9��������������������
5��� �� "��6� ����������� ��� �� �������� � �91>� $��*O ?������@A�
���$O ?������@����$��O �?����2���@��9��������*%����������
5��� �� "�%6� -������� ���������� ��� E�� � �8��� 6�� �����)��� ���� ��������
�������������E�� ��91������� �������������)��� ��8���
5��� ��(��6���������������� ��� ������7�� �����8�����91�F ��� �������
� ��2����������������
5��� ��(�"6�+ �)������������0����������26P ?�@��
5��� ��(�(6�&�����0��������� ��2���������A�+?�@A��������� �� �������������
��������7������������ ���2�� ����
5��� �����6�-"<&?�@�����7�� ����8�� �������� ���������������
5��� �� ��"6� -"<&� �/���� ���� ������� ��� � 7�� ��� �8�� �� ������ ����
�����������
5��� ����(6������������������7�� ����8�A��������)������������������E�L�
������������������������
5��� �����6�&0������3?�@�����7�� ����8�� �������� ���������������
9
5��� �� ��%6� �������� ������� ��� ��� ��� ��.������ �� 7�� ��� �8�� ��
������ ���� ����������� &�� ������ ���� #��)��� ���� ����� ���� ��� ���
����������
5��� ����6�-"<&?�@�����7�� ����91���,D���
5��� �����6�-"<&?�@�����7�� ����91� �������� ���������������
5��� �����6� -"<&?�@� ��� � 7�� ��� �91� �� ��#����� ���������A� ��� ���
��������������������4 ��A��������������A����������������2�������
5��� ����76�&0������3?�@�����7�� ����91� �������� ���������������
5��� �����8>�-"<&��/�������������������7�� ����91� �������� ����
�����������
5��� �� ����>� �������� ������� ��� ��� ��� ��.������ �� 7�� ��� �91� ��
������ ���� ����������� &�� ������ ���� #��)��� ���� ����� ���� ��� ���
����������
5��� ��%��6�66<������7�� �����91����8�� �������� ���������������
5��� �� %�"6� � ��2�� �� ������ � ��� �� 7�� ���� �91� �� �8�� �� ������ ����
�����������
5��� ��%�(6�� ��2�������� ����#� ��������7�� �����91����8�� �������� ����
�����������
5��� ����>�KQ��������1:�88� ��8���
5��� ���">�KQ��������1:�8<� ��8���
5��� ���(>�KQ��������1:�<<� ��8���
5��� ����>�� ��2���/������1:�88� ��8���
5��� ���%>�� ��2���/������1:�8<� ��8���
5��� ���>�� ��2���/������1:�<<� ��8���
5��� ����>�� ��2����������1:�88� ��8���
5��� ����>�� ��2����������1:�8<� ��8���
5��� ���7>�� ��2����������1:�<<� ��8���
5��� �� ��8>� R����� ������ �� ������� ������� ��� �� �� �8�� ����� ��� ���
��������.��������������������������C�������������#�����3����������E�(����
�(�A��������������9��*A�(������*A������������9L�$�A�$*A�(*A��,A��$$����(%��
5��� �� ���>� R����� ��� ��� �� ������� ������� ��� �� �� �8�� ����� ��� ���
��������.��������������������������C�������������#�����3����������E�(����
�(�A��������������9��*A�(������*A������������9L�$�A�$*A�(*A��,A��$$����(%��
10
5��� ����">�KQ��������1:�88� ��91��
5��� ����(>�KQ��������1:�8<� ��91��
5��� �����>�KQ��������1:�<<� ��91��
5��� ����%>�� ��2���/������1:�88� ��91��
5��� ����>�� ��2���/������1:�8<� ��91��
5��� �����>�� ��2���/������1:�<<� ��91��
5��� �����>�1������������� ������ �6��*(�6�2��$��
5��� ����7>�� ��2����������1:�<<��������� ��� ��91��
5��� ���"8>� &���������� ������� ��� �� ���� ��� �� �������� ���0������� ��
7�� ���� �8�� �� �91�� 6�� �� ���� ��� �� ������ ���� �� ���#��� �����
7�� �����
5��� �� �"�6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2����� ��0� ���A� �� ��
��� ������������������������8���
5��� �� �""6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2����� ��0� ���A� �� ��
��� ������������������������91��
5��� ���"(6�KQ�������������1:� ������������������2�������0� ���A��� ��
��� ������������������������8���
5��� ���"�6�KQ�������������1:� ������������������2�������0� ���A��� ��
��� ������������������������91��
5��� �� �"�6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2����� ��0� ���A� ����
��2���J���� ��A����8���
5��� �� �"%6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2����� ��0� ���A� ����
��2���J���� ��A����91��
5��� �� �"6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2����� �� �� ��� �����A� ����
��2���J���� ��A����8���
5��� �� �"�6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2����� �� �� ��� �����A� ����
��2���J���� ��A����91��
5��� �� �"�6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� �� ������ ������A� ����
��2���J���� ��A����8���
5��� �� �"76� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� �� ������ ������A� ����
��2���J���� ��A����8���
5��� �� �(86� KQ����� ����� ��� 1:� ���� �������� ����� ������ ������A� ����
��2���J���� ��A����8���
11
5��� �� �(�6� KQ����� ����� ��� 1:� ���� �������� ����� ������ ������A� ����
��2���J���� ��A����91��
5��� ���("6�&����������������������������A����8�A��������������1:� ��������
� ��2�� �� ��� .�� �*�,N��������A� ��� .���� ������ ���� ' 2����� 6�� ������ ����
������)������������������������ ���J��2�)�����
5��� ���((6�&����������������������������A����91A��������������1:� ��������
� ��2�� �� ��� .�� �*�,N��������A� ��� .���� ������ ���� ' 2����� 6�� ������ ����
������)������������������������ ���J��2�)�����
5��� ���(�6�1:�� �����������A� ��8����
5��� ���(%6�1:�� �����������A� ��91���
5��� �� �(6� -������� 6��%�A� 6��*(A� 6����(A� 6��� �A� 6���*�A� E�(A� E� �A�
E� $A� E�$ A� E�*�A� E��,*A� 6�2��$A� 6�2��(� �� 6�2�$��� C�� �������� ��� 6���
������ �������A�������E�� �����#�����3���������6�2����#������
5��� �� �(�6� -������� E��,*� �� ��� ��������� %� ���/���� ��� �2� ���
���#������
5��� �� �(�6� -������� E� �?��.���@A� 6��%�?������@� �� ��� ��������� %�
���/��������2�������#������
5��� ���(76�-�������E� $?��.���@A�E�$ �?������@���6�2��(�?�� ���@������
���������%����/��������2�������#������
5��� ����86�+ �������������0���������A�26M?�@����6SC��?E�@���MS�:�?�2@��
5��� �����6�+ �������������0���������A�26M?�@����6SC&�?6��@���MS�:�?�2@��
5��� ����"6�+ �������������0���������A�26M?�@����6S::�?6�2@���MS�C�?�2@��
5��� ����(6��� ��2������.���0���������������E�*�?#�����3�@A��2�%�?��@�
�� ��� ������������/���� ��� �2���� ���#������ 6�����/���� ��� ���#�����
��� �� � ���� ��� �������� ������ ��� ���� ����� ����' ���A� ��� TA� � ���� ���
���������
5��� �� ���6� �� ��2����� �.���0��� ���� �������� E�(?#�����3�@A� 9L��%� ��
��� ��������� ���/���� ��� �2� ��� ���#������ 6�� ���/���� ��� ���#�����
��� �� � ���� ��� �������� ������ ��� ���� ����� ����' ���A� ��� TA� � ���� ���
���������
5��� �� ��%6� �� ��2����� �.���0��� ���� �������� 6��� �?#�����3�@A�
1L���*?��@A� 93����� �� ��� ��������� ���/���� ��� �2� ��� ���#������ 6��
12
���/���� ��� ���#����� ��� �� � ���� ��� �������� ������ ��� ���� �����
����' ���A����TA�� ����������������
5��� �� ��6� �� ��2����� �.���0��� ���� �������� 6���*�?#�����3�@A�
6�2��?��@������������������/��������2�������#������6�����/�������
���#����� ��� �� � ���� ��� �������� ��������� ���� ����� ����' ���A� ���TA�
� ����������������
5��� �� ���6� �� ��2����� �.���0��� ���� �������� 6����(?#�����3�@A�
6�2�$�?��@������������������/��������2�������#������6�����/�������
���#����� ��� �� � ���� ��� �������� ��������� ���� ����� ����' ���A� ���TA�
� ����������������
5��� �� ���6� �� ��2����� �.���0��� ���� �������� 6��*(?#�����3�@A�
6�2��$?��@������������������/��������2�������#������6�����/�������
���#����� ��� �� � ���� ��� �������� ��������� ���� ����� ����' ���A� ���TA�
� ����������������
5��� �����>�-"<&��������������������������0� ����&!���
5��� ����">�&����� ������ �����)���2��������������������2����B��A%��
5��� ����(>�-������2��������&!������ ��������������
5��� �����>�&����� ����#��)�����7�� ����8�� ������ ������0������&!���
5��� ����%>�-"<&����8�A� ������ �����&!�A����� ��������������
5��� ����>�-"<&���������������8�A� ������ �����&!���
5��� �� ���>� &0������3?�@� ��� � 7�� ��� �8�� U� ��D� � ����� �� �� �4 ��� ���
&!���
5��� �����>�!�� �����������������������3����24 ������7�24 �������0������&!���
5��� ����7>�-�������6� ����E� (���������V����$����#�����3���
5��� �����8>�K�������W���������E�(����E��(�A����#�����3�A�6�2����������
��9L�$*����#������K���.���W�������������2������� ������������ �����
�0����������� F���������' ���� � ����X��������Y��6�����/��������2�
������������� �����������������4 ���������7����� ����,O ����������
�������������������8��U���D�A� ������ ��2������
5��� ������>�-"<&���&!�A� ���0�� ��������������#�A����� ��������������
5��� �����">�-"<&����91A� ������ �����&!�A����� ��������������
5��� �����(>�-"<&���������������91A� ������ �����&!���
13
5��� ������>�&0������3?�@�����7�� ����91�U�%�D�� ������ �����4 ������
&!���
5��� �����%>�-�������E��$���E��(�A����#�����3�A�6�2������������9L�((����
#����A����0����������� F���������' ���� � ����X��������Y��6�����/����
����2�������������� �����������������4 ���������7����� ���%,O ����
�������������������������91��(,D�A� ������ ��2������
5��� �� ���>� "�� ����� ��� 3���;����� ��� .��� ��� �������� E�(�JE��$� ����
����� ��#����������.�� ���;������
5��� �� ����>� "�� ����� ��� 3���;����� � .�� � ���/��� ��� �2� �����#�� ��
�.�� ���������������������������
�
�
�
�
14
Lista de tabelas �
�
4������ (��6�&���3��� ��0��� ��� �������� ��������� �;��2�� V&8� /� �� �;��2�� ��
������ � ��0 �������������������� A�V&8A�K=JK��������� Q���������K=���
��������� ���������������9��/�����������;����������� �����
4������(�"6�&��� ����������2�)��J���� ������������������������������������
7�� �����
4��������6�&����� �������������1:��������������������
4�������"6�+��?O @����1:�88������������������ ���� ����������#����7�� ���
�8���
4�������(6�+��?O @����1:�<<������������������ ���� ����������#����7�� ���
�8���
4���������6�� ��2����/�������N�������������+��?O @������ ������� ��
����������
4�������%6�+��?O @����1:�88������������������ ���� ����������#����7�� ���
�91��
4�������6�+��?O @����1:�8<������������������ ���� ����������#����7�� ���
�91��
4��������6�+��?O @����1:�<<������������������ ���� ����������#����7�� ���
�91��
4��������6�+�� ?O @� ���1:�88� � ������� ������7�� ����8���6��1:�������
����� �����������4 ���������������?J@��
4�������7>� +�� ?O @� ���1:�88� � ������� ���� �� 7�� ����91�� 6��1:� ������
����� �����������4 ���������������?J@��
4��������86�+��?O @����1:�8<�� ������� ������7�� ����8���
4���������6�+��?O @����1:�8<�� ������� ������7�� ����91��
4��������"6�+��?O @����1:�<<�� ������� ������7�� ����8���
15
4��������(6�+��?O @����1:�<<�� ������� ������7�� ����91��
4���������6�1:� ��������������������2���������������8����K1:�/��� Q��������
1:�����������"��� ��2���/������1:� �������N����������
4��������%6�1:� ��������������������2���������������91��K1:�/��� Q��������
1:�����������"��� ��2���/������1:� �������N����������
4������ ��6� 1:� ���� �� �8�� .�� ����� ��� � ��2�� �/��� �� ��� .�������������������
�*�,N�����������6���"������������N�����������
4������ ���6� 1:� ���� �� �91� .�� ����� ��� � ��2�� �/��� �� ��� .��������������������
�*�,N����������6���"������������N�����������
4������ ���6� V���� �2��� ��� ��� ������� ��������� ���� � ��2�� �� ��� .����������
�*�,N����������
4������ ���6� +�A� ��� O A� ��� 1:� � ���� � �8�� �� �� �0������ &!��� C�� ������� ���
�7�24 �����3����24 �������0������&!�A�� ������4 �����A������� ��� ��������� �
��2��(����
4������ ��"6� +�A� ��� O A� ��� 1:� � ���� � �91� �� �� �0������ &!��� C�� ������� ���
�7�24 �����3����24 �������0������&!�A�� ������4 �����A������� ��� ��������� �
��2��(����6� ��� �����C�����C���/������������� �������������7�24 ����
���2������0�7���������������E�(����$��
�
�
16
Abreviaturas �
��9���5��������#��������#� ���
:�� �#���;����&���' ���� �������� ������������������ �������2�������� �������
����������� ����������
:�<'���&���' ���� ����X����
:=2���&��7������ ����
:)���&� '������������
����� ��2��
�)���� ��2���/��������2�)������3����24 ���� ���������������������������
���������������������������������.�������
�4���� ��2������������2�)������3����24 ���� ��������������
5>�?���:����2������ ��2������ �������� ��������������������
5 ���+�������������4 ��������2�)������3����24 ���� �������������
�> ?���+ �������������0�����������
�0���1�2�)������3����24 ���?2���@��
�0� �� ���1�2�)������3����24 ���� �������������?�2���@��
�0� � ����1�2�)������3����24 ���� ������������?�2���@��
�0� �� ��� � ������1�2�)������3����24 ���� ������� �����
�0�33���1�2�)������3����24 ���� �������������������� ����������
��� ������
�0�39���1�2�)������3����24 ���� �������������������� �����������������
�0�99���1�2�)������3����24 ���� �����������������������������������
@�0���KQ����������2�)������3����24 ���� ����������������������������������
�������������������������������.�������
17
@�0>� �� ?������KQ���������������2�)������3����24 ���� ��������������
*)����V�������"��3��M���
�����-������2�������
�)9:���-������ ��.�����#���� �?���#���������.��������/��@��
23������� �������������������������0��/���������������������
24������� ���������������������������� 2���� ����� �������������
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
18
Capítulo 1
Estrutura de proteínas e Catálise �
�
1.1 Estrutura e função de proteínas �
6�� ��������������� ����� ��������������������� ��� ��� ����
��� ������� .�� � ����)���� 6�� �������� ����/���� �4�� ����� ������� ��� ���
�������� ��� ������� ��� .���� �#���� ��� ��2 ���)��� Z�� [� �3����� ���
���������������A���� ����A������������.��� ����� �
6����������������/����.\4 �������� ��������.������)���������
��������A������� ����������� F����������6����������� �����/����� F��
������� �������������������������� ����������� ���������� �����������
��������� ������������ ������� ������������� ��2�� �����C����� ������
�������������������� ��������������������α�3/�����A�B����3������0����6�
��������������������������U��������������� ��� ������������������� �����A���
��FA� �� �������� ��� �� � �#���� ��� ��� ������ �������������A� ����
�� ������� � ������� ���� ���/���� #��� 3�� �� ���� �� �0 ������� "����
������ �����������������������������������������������A��3�������
�0 �����A�U��.�������������������� ����)��� �����#�� �����6��������
.��� ������������������ F�������������0 ��������������� ���
6����������� �����/����0���������� ��2�)������3����24 ���� �������
2�������0� ������� ����� ���������������������������4���� �������A�
���������α�3/�����A���� ������2�� �������������������������� ��
B����3���6����������������������.��� ������������0������������ ����)���
�X ���� �� ��� ��#�� ���� Z�� [� ����A� ���� �7�����A� ������ � ���� ��������� G��
�7�������������/������������2�)������3����24 ����C��������������� ����)��� �
� �� ���������0�������������������������� ��� ��������� � ����)������
# � ���� P ���� 1�2�)��� .������ � ���� ��� ������� ��� � 7����� ��� ������ ��
�� ���0����������� ������������������������
19
� 6�� � ����)��� � ������������ ��� �� ������ � ������� �� ������
� ��4 ������������������ ���Z%[��"��/��������2������������������ �������
��������� �A����0���� �����������2�)��A������� ���.� ���� ����������#���
������������������� �F� ��� ��0/�� �� �� ������������� Z�[��6�
��������������� � /�������� ��� � ��� ��� �� ��� � ��� �� ��A���
#���.���������� ���� ������������������� ��������#�����0���;2���
Z�A$[��
� 6���� ����������������� ����������������#�����#�����������������A�
�����7�����A����������A��:�������������2 �����#� ������2' ����������#����
��� �2� ����� �� �� ��� �� � ���� � Z�A�[�� C�� ���#� ���� ��2' ����� 2���
�������� ��� ���� ����� ��� � ����)��� 3�����;0���� ����� ��#���� ����
���0���������� Q�������������� ��2��0����W�#�������7�����������:��������
��2� ��.��� �� ������ � ���#�� ��� �������� ������������� �� ������� ��� ���
�2�����2�)������3����24 ����
� C� ��� ����� ��� ��� ������ �� �� ������ ��� ������ �� /� �� ���
.���)��� ���� � ��� ���� �� 0�������� .�� � �� ���� ����� �0������ 6��
����������#����������� ������� �������������������0� ������ ������
��� ��#�� ���� � ��� �� � ������������A� ����� ���� �7�����A� �������������A�
3�����;0���A� # � ���� P ��� �� ��2�)��� ��� 3����24 ��� Z�A�[�� ��� ����������
���#��A� �� � ����)��� ��� ��#�� ���� ������ ���� �������� ��� �� ��� �
������ �� 6� ��� ������ ��� �� ������ � ��� ������� .��� ���� ����� ���
�� ��� �� ��������� �� ��� U�� �������� �������� ��� ����� ���� ����
?�������� �� ��� ��� ]� ���� ����^̂@A� ����� �7������ ���� �� �����)���
������� ����� ��� Z(A�[�� K�� � � ��A� ��2 ������ ����� �2 �� � 2��� ��
0��/���� .�� ��0��#�#��� ��0� �� ���)��� �7������ ��� ��������A� �3�����
����;�����A� �������������� ��.���7�0��������0������� �/����� � ��� ����
Z*A�,[�� 6�� ������ �� ���������#���� �4�� ����� �#��� ��� ������ �������
�7������ ���� �� ��;������ ���� �� �0F���#�� ��� ������� ��� ��� ������ ���
���0���������������A���� �����J�� ��������� �#���� ������������ �A�
�� ���0� ��� ��� �� ���� #��#��� ��� ��� �#��� 0������������� ���� ���
����#����� C�� ������� F�� ��������� �2����� .�� � �������� �������� �����
��� ������ �����)�����0����������� ������������������� ������.������
������� ����� ��#���� ���� ������0�������� Z��A��[�� 6� ��������� � ����
20
�����)�������� '�������������������� �������������� ������������ ���
��������� �0�� ��� �� � ���������� ���#��� ?� ��� ��� � ��� �����@A�
������������� 2���������������������� ������������������.����������� ����
�������� �����A������0���� ������ �����������2�)���.������������ ����
���0������� ���� ����� � ��#����� Z��[�� � ���� ������ ������� � #����2���A� ��
���#� �����������0������ ������#����� ����Z� ���[��
C� Q ���� ���#� ��� ���� ������' ��� 0���;2��� /� � �2A� �0��' ��� ����
0 � ��� ��� �������� #�#���� 6� �2� ������� ����� �� ����)��� ��� ����� ��
�/���� Z [A����� �����������������������/��A����� ��.� ���� ��������
� �)��A����� ����������������������������.���������2A�� �����������
�����������A�0�7��� �4 �������� �����A���.� �������#�������������
Z�$��([�� 6�/�� ������ � ��� ��������� /� ����� ��#��� ���� �������� ��� �����
������ ���� ��2�)��� ��� 3����24 ��� � ���� �� ��;����� ���/���� ��� �2� Z�A [��
������ ������� ���� ���� ����� �� � ��� �� ��� ��� ������ �� �� ��� ���� �
�.� ��� 0���;2���� 6�� ���/���� ��� �2� � ���2��� ������� ��� ���� 2�����
������� �� ����2���� ��������� ��� ���� ��� ������ ��2�)��� ��� 3����24 ��� .��
���� � ��� ���� � � �� ���� ��� �������� ����/���� Z��[� ?��2�� ���@��
V��� ��� �� ���/���� ��� �2� ������ � ���� �� 2� ���� ����� ��#���� ����
���0������������������������������.��� ������������� ��Z��[��
� ��
������������������
5��� �� ���6� 52�� ��2��� � 3���2��0� �� ������� ������� � �� 3���2��0� �������� ?@� ���� �� ���/���� ��� �2� ��2��� ?������� #�����3�@� �� ?0@� ���� �����/��������2����/������U�Z [��
21
1.2 Catálise enzimática �� � �� �7������ ��� �� ���)��� � ��� ���� ��� #��>� ?�@� ������������� ?��
��2 �������#��������������������������@���?��@���������?����2 �������#������
�����������������)���.���������� ���������� �����������#@��6���������/�
���� ���� ���������������0�� �������� ��2��������������#�#���<�����������A���
���)���.������ ����������������� �������#��� ����������� �������
��� ������ Q����� C�� ����������� ���� ���������� .�� �������� ��� ��������
0���;2������������ ������6��� ���������� �������������4 ����������A�
���2���A�����������.��������������������� �/��������� ��2' �����Z [��6����
�������������� ���� ��� �0������ /� ����� ��#��� ���� � ���� ����� .��� ��
� ������������������)���Z�� [��
� 6��� ������������� ��������.�.������������0��.�����A�����������
2��� ��� ����� ��2 ���A� ����� ��� �� �� �� ��� ���)��� ������#�� �����
.��� �� ���/���� ���� ���� ���� ��2����A� � � ��2�� /� �� ���#�� ��
�� ������������������/����0���;2����������������������������/����
���������� �������� Z�� [��������� ��.\4 ���� �� ���� � �������� ��2����A�
�� #��� ���0;����� ���� ���� ��� ������ ��� ��� ����� � ��������� �� ��
�����3��� ���������#������ ��������������� �� ������#����
� 6��� ������4����2� ���������' ���������A������7�����A������� ���
��������� ��� ��2� /�����3�����������3#���������4 ������4 ��������
������� ����A������3#��� ��0/���� ���)���� ��������� ������ ?�7������
�����#����@��"�������2���7����������������0���;2����������������� ����)���
���� �� � ������ 6�� � ����� ��� ������ ������ ��� ������ ���� ��� �� ��
������� A������0/�� �� �Q�����.����A����� ������� �2�������Z�[��
� 9������� ��������������� �A��7���������.� ��2����������/�������
-K6� .�� ����� ��� ������������ ��������A� ��2�� �� ��#����� ���� ��� ��
� ��2������ �� �� ������� ����/��� ��#�� 6����A� ������ ��� �#���� ���
���������� ����/��� ���� ���� ����� ��� � ���� � ��������� 6�2��� � �����
��.����������� 2�����.��������/������ ���� ������������� �����������
������� 3�� �� � ���A� ����������7�����A����������� ?�� �� � ��2' ����@� ��
����� ����?���/�����2' ��@���
22
Coordenadas da reação
Ene
rgia
livr
e, G
Coordenadas da reação
Ene
rgia
livr
e, G
6��� ��������������������������������������)���.������������A�
����0��� �������� � ��� ��� ��.����������������#��������������������
� ����A� �� ����� ��� �� �����A� �0������ �� ����� �������������� V���
�7�����A� �� � ����A%�B�7�� ���A� �� ��������� ��� 7�� ���A� ���� ����2 ���
�������� ������A�2�������2��������3��������A�� ��� �/�����������3��������A���
��0����������2����������A���������������� �����2�����������.��3���������
����������C����<�2����������������/������2 ���������� ����A%�B�7�� �����
� <��� �������� �� ���)��� ���������� ��� ��2����� ���� ���A� �� ����� ��
�Q�������� ����� �����#/������ ��#��A� ����������������#���������Q�����
6�� � ����� ������ ������ ���0����� ��� ��� ��� �� �0�� ��� ����������� � ���
�� ������� �� ������ /� � ��2������ ��� ���� �#���#���� ����� �0�� ��� /�
�� ��� �����������#�A���2�������6����/���.�������2�����������#�����������
����� ��������/��3����0�������
�
�� ����
�������������������
�
5��� ����"6�1�2����������0������ ����������#��������� ���A��7�� ��A����0��������2���������������C���������������������#����� �������������������������������#�����3��
5��� ����(6�� ��2����#����������������� ��������������� �� ������ ��� ������� ?�����@� ���������?��@���
23
� 6����������������������#��/��� ������������������������ ���������F��
������ ������� ��� ��2�� �� �0������ �� ������� � �� �� ���������� 6�
�7���4 ��� ��� ������7�� � �����0������ ���� � ������ ��� �������� ���� 6����3��
P ���� ��� ���,� Z�[A� �� ��� ��0/�� �� ��� ��� ������ ��� ��� ����� ����
����������� .�� ���� ��� � �� /���� ��� ���)��� � ��������A� ����� ����� ���
��� ����������������
� 6� ��2�� �� � ������ ��.������� ��� �� ��� 3�� ��� �� ������ ���
������� �� �� ��� �� ������ ������A� .�� �� ������ � ������ � ��������
�������A� PEEPESSE +⇔⇔⇔+ ��6��� ����A� �����.��.��� ����������A�
��� ����� �� �.���0���� �� ������� 6� � ���� ��� /� 2��� �� ��������� �������
�� ��� ���� �� �� ��� ��� �.���0���� �� ������� 6�� � ����� ��� ����� ��� 3���
���� ��#��� ��� �� ��� � #��������� �� ������ �� ����� /� ������ ���� � ��� �
� ��2�������#���� **G∆ A��������0���������������������� �������6������� ��
� ���� ��� �#���� ��� � ��2�� ��� ������ � ��� ��� �� ��� ������ ��� �� ������ /�
�3������� ��2�������#�����6�#������������������������������ ��2�����
��#���A�����FA���� ��2�������#��������������� �������������� ���
6��#����������������)��������������� �����������#��������������A�
.�� �� �� �� Q����� ��� ���/���� ���� � ��2�� ������ ��� ��� ������ �
0������� ��2/����?� ��2�������#���@������
���������Referências
Z�[�1��<��L��A������ �����A�P ��:��+���� � ������ LA�K�M�_��NA�?�**�@��
Z�[�&��R���A� �̀�R���A������ �����A� �̀3 �P ���L� ��<� �A�K�M�_��NA�?�**�@��
Z [�6��1��1�3 � 2��A�&��1��K���� A�"��"����7A����������� �����������A�<�#���A�<���V��A�
?�**�@��
Z%[�C��9��A�-��&���A�6��V��� A�1��<���A�6��R������A�&��-�����A���������� ������
�� ������� ������A�&��V0���LA�#����!!��
24
Z�[� 9�� ��� ����23�� A���� ��� �� ������ �� ��� ��� ����� ������ �A� P �� ��� +���� � ��
���� LA�K�M�_��NA�?�*� @��
Z$[� �̀�<��-��3���� A��� !����!��� � �A�(�A��$(A�?�*��@��
Z([�-��&LA�8�� �̀�8� �� A�<��:�A�R��&22���A�"!����!�����A�(""A���*A�?�,,�@��
Z�[�6��"��9��A�9�� �̀�G��#��A�&��6��K�� A��������!�"!A���A�� *A�?�,,�@��
Z*[����R������A�E�� �̀�a��N�A�����#���!����!�����!�� �A�%A��A�?�,,�@��
Z�,[� E�� P �� :����A� -�� P �� V��N���2���A� !�� �� ���� A� V�� &�0����A� �̀� 9����A� ��� 8���� A� <��
V/���A���� ��$������� %�&����������' ����A�"7A�((A�?�**(@��
Z��[� 1�� &�� ���#���A� 6�� 6����A� -�� ��� # � <�3�NA� :�� 6�� V����� �A� �̀� ��� R���2A� :�� �̀�
8��� ��� A���� ��A�((A��� A�?�**�@��
Z��[�9��1������A�!��1��A�"��b����A���� �!����!A�A����*A�?�**(@��
Z� [� R��-/�A� -��& A�"�� +��� �A� �̀� 1�� +� �LA�-��"��& ���A� �̀� ���<���3A����!�(���!�
����!����!�)���A�7�A�**$�A�?�,,,@��
Z�%[����1��8���N�A�"��b����A�"!����!������A�"8�A���*A�?�*�*@��
Z��[� �̀����<���3A�<�����NA�8��9����A�"��b����A�"!��� �!������A�7(A��*(%A�?�**,@��
Z�$[�+��"��-��3���A������ ��&�����A�9���������23�� �?��@A�P �����+���� � ������ LA�
K�M�_��NA�?�**�@��
Z�([�1��&�2�c#�A����d� ���� �̀�A�*� ���������������A�(�A��%,�A�?�** @��
Z��[�1��&�2�c#�A����d� ���� �̀�A��� �!�����!�+ ���A�"8�A�� ,A�?�** @��
Z�*�1��&�2�c#�A����d� ���� �̀�A�"!��� �!������A��8�A�� �*A�?�**%@��
Z�,[�&��<��R����A�1��&�2�c#�A�"!����!������!�,��� ��� ��-A�%�8A���(A�?�,,�@��
Z��[�1��8��A�1��&�2�c#�A����!������A���A����A�?�**$@��
Z��[�1��&�2�c#�A�1��8��A����������A�""�A���,A�?�**$@��
Z� [�1��&�2�c#�A�R��"�����V��A�"��6��&���A�"!��� �!������A��8>"?A�$��A�?�**(@��
Z�%[� �̀�C��8��N���A�6��b��K��-���LA������ �*� ����� �����A�V�� �A�K�M�_��NA�?�*(,@��
Z��[�6��8� �K��A�!� ���<����� �A�V�� �A�K�M�_��NA�?�*�,@��
Z�$[�_��"���A�.����� ����A� �̀�P ���L� ��<� �A�K�M�_��NA�?�*��@��
Z�([�<��#��� A�&������/������!��� �!�����A��%A�?�*��@��
Z��[� E�� 6�� �̀����LA� P �� <� 2��A� � �0���� � ������ �� ����������� ������ �A� <��� 2���
R���2A�?�**%@��
��������
25
Capítulo 2
Enzimas termoestáveis
�
2.1 Xilanases
&������ �� �������A� � 7�� � /� �� ������������� ���� 0 � ��� ��
������6��������� �������7�� �/����������������������B�&�7������ ����
����� ���� ��2�)��� B�?��%@� Z�A�[A� ����������� � ��2�� ����� 6� 7�� � /�������
����� � ���� ���������� 3�������;����� ��� �/���� #�2����� ?������� �������
���� ���������� ��� �������������� ���������A� ����� ���� �7�����W� 7���2�� �A�
�0� �7�� �A�7�� A����@��
�
�
�
� �
�
6�7�� �������������� ������ ��� ���������������� ����A����� ���
��� �������� �������2 � A����������������7����� ����������� ������ �A���
�������������������A������7�����A���������� Z�[���7�������#��4 �������.���
7�� ���������������� ;�����������2 � �����F�� �����������2�)�����#�� ������
���.����2�)������3����24 ��������������# �����P ��� ���������������������
U� ����� ��� �������� Z [�� � ����� 3��������������� ���� ���������� ���
5��� ��"��6�1�2�)���B��A%����������� �������7�� ��
26
3������������������ ����7�� ��6��� �����.����� ��������� ��������
7�� ���������7���A%�B�7������������ ��� ����A%�B�7�� ������ ��������� ���
7�� ����� ��� ���� ���� ��������� ���� #������ ��2 ������ ����� 0��/���A�
� 2��A� �2�A� ��������������� ���;�������� ���� ���������3��������� �� ��2�)���
�A%�B� �� ����� ��� ����� �� 7�� A� ������ ��� #������ 7�������2X������ ���
�������� ���� #������ Z%A�[��"����0��/���� �� � 2��� ��������7�� ����.��
��� ��������� 3�������;����� ��� ��0���� � 7������ ����� �� ������� �� ��
������� ��� �������#��A� ������� ��� .�� �� ��2 ����� ������ 3������������� ���
�7�� �Z�[���
� 6��7�� ���������������������������������� ����������������2��������
3��������>� � ������ +� ?��0/�� �� 3����� ����� �,@� �� E� ?��0/�� �� 3�����
�������@��6��7�� �������������,�����������A�����������7��������� ���
����������#������ . ���.����7�� ��������������������� ����A�����
�� ����� ������������� ��A����������������������7�� �Z�A$[��V��� ��A���
������������������ ���������7�� ������������������������ ��#��������
��������0�������0����� ��;2���������� ����A�����#�������2� ���� ��������
�������� ���Q������� ���������������Z(���[��9����������������������� ����
������������7�� ���� �������������� �����������0� .��� ������������
6�� 7�� ���� 3��������� � ����� 2���������� �� 7�� � �� ���� � ���������� ��
����A� ������ ��� � �7������ �� ��2 � � ?��� ����� ����� � ��� �� ����� .��
�� �/�� ��� 2����� ����;������ ����� ��#���� ���� ��������@� ���� � ������ �
��������Z$[��C�� ��������������7�� ����/�����0������A������� ������� ��A�
�. ������������������� ���������������A���#���.��������0�� �����4��
�������� �������)��� ��� �� ��� ��� ������ ��� ���������� ��� 0� .��� ��� �
� �Q������������A���� ������ ��� ����������������C���� ����� �6�/����
���K����A���#����U����������������������2�����#�����������0�� �����������
��2 ��������������7� ��Z� [���������������#���.����������7�� ���� ���
�������������0� .��� ����� ������������������,� ,O � ���� �������
������ �� �� ��.� ���� ��� �� ���� ����� ��� ����,O� � �7� ��� 3��24 ����
��2' ���������#����� ������� ���� Z*���[��C�������7�� ���� ����������������
����2 ��������/��3�������0��0� .��� ���Z��[��
� 6� ���� �������� 0����� ��;2��� ��� 7�� ���� ��� ��#�� ��� ������ ��� U�
����� ������>� ��� �������������� ���� 7�� � �� ��� �������� U� ��������0������A�
27
�������������������������2 �������������������� ������ ����������������
���#��� ?�,��,,D�@� Z�A�%[�� 6�� ������ ��.�� ����� ��� ��������0������� ����
����������� ����� ������������ �� ����������� Z��A�$[�� �7��� ��� �� #���)���
����24 ���A����������������������������U������������� �����2� �����������>��
�
,�-������������������ ��������������� ,���O ����������U���������������W�
,��-�������������������� ��� ������������� �#���W��
,���-���������3������������� �������������A����/���������� ����0�������
�/����W�
6�� ������ �� ������������ ���� .���� .�A� � �/�� �� ��� ��������
��#�� ��0� �� ���)��� ���� ���#��� ��� ��������� ��� .�� �� �����������
3��;��2���&�#������������������� �������������������������������� �����
��.\4 ��������������������� ��� ����������������A���������������� ��#����
����������� ������������0������������ ������0������Z�([��
&� ��������������A�����������3������7�� ������������������� 2��
�� ����� �� ���������� ?�91@� �� ���� 0��/��� ��������� �������� ?�8�@A�
�������������������������������#�� �����
6� ��2�� ���� ����� �� � ��0���������� ��� �������� ������� ��� ��� ��
�91����8���
��5��� �� "�"6� <�0���������� ��� �������� ������� ��� ��� ��� 7�� ���� �91� ?�� �@� �� �8��
?�����@��
28
6�� ��������)��� ��� ������ ���� �� ������������� ���� �������� ���
�� ���������������������� ����2����� �����%A�� ���������� ��������� ��
��� �������� ������A� ������ ��� �������� ������A� #�����3�� ��� ��������
����2���� �2��#�� ���������������2����������#�� ����! �����)�������
�������������0�����7�� ���������3������������ ����� �����������===��
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
C�������������������������Z��A�*[�/����������������������E��$���E��(��
��91���E�(����E��(�� ��8������0/���������������������������������
E� A�6�2���9L��������������������������6���2����������� ����������� �� ���
���������������������A�E�(����E��(�����8���
� 6��7�� ���������������2����� �������� �������� �����<K�����
����� �������� ��A� �� .�� ��� �������� ���������� E�� ��#��� ��� �����
���;������Z��A�*[��G��#������������������������� ����)���� #��#� ���������
������������������7�� ��������24 ����Z�,���[A�������������0����0�����
����� ������ � ����)��� �� ���� ��� ��������� 2��0�� ��� ���0�������� ���������
&���� ����A� �� ������ �������#�� � �#��� �������� � ���� �� ������ �
5��� ��"�(6����������������� �������� ��8�>��%��O ?������@A��*��O ?������@���� �$�(O � ?����2���@�� 9���� ��� �������������
5��� ��"��6����������������� �������� ��91>�$��*O ?������@A����$O ?������@���� �$��O � ?����2���@�� 9���� ��� �*%����������
29
�������������������������������������A�������������������������
� ����)���������������������7������ ���A�/�� ��� ������������� ������
0���� ���������� �� ��������0������� �� �� ��#����� ������ � ������ �����
�� ��.\4 ��A�� �����)�����0��������� �������������������� �����������
�����0����A����������� �#����� �������������������������C�� ��������������
������/�.����� �� ���� ���������2� �A�� �#����������A�����������0�������
��������� ��������� �������0����������������)�������������� ��� �����
&���� ������#�����������A�� ���������������������� ��������)��� ���������
��� ���)��� .�� �������� ��� ���#��� ���������A� ����� ���� �7�����A� ���
���������� ��� 0� .��� ��� ��� ������ &�� �� ��� ��� #���� � ��� ��A� �
���������� ����� ������������������������������������������������ ���
��� ����� � �����)��� ������ ���� ��� �� � �� ���� ��� �� 0��� �������� ��
��������0������� ���� 0��� ����� � ������� ���������#����� ������ � ������
&����� ����A� ��� ������ � �#��� �������� /� ��� 2� ��� ������' ��� ��� ��
���������� ��;���� ���� ��� ������� �������.������� �� ��������0������A� ��
� �#���� ��� ��� ������ �� �� � ������������ �������� ���� ������� ����������
���7�� ���A���� ������ ���������� �� 2� 3������������ �A��F��� ������
/� �� ���� #��#��� ��� ��� � ����� ���� ������������� ��.��� ��� ��
�����������������
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
� 5��� ��"�%6�-��������������������E�� ��8���6�������)������� ���������������������E�� ��91������� �������������)��� ��8���
30
Referências �
Z�[�E��C��6��� ��A�93�������������� �%� ���.%�..� �...A�6�������V����A�! ��A�1� �� A�?�*��@��
Z�[� V�� 8���LA� ����� ������ ��� ���� ��� �� � ��������� ��� ����#���� � ��� ������ �!� .�
0 ��� ������ ����� ��� ������ �A�������23� A�V���� ��V����A�1� �� A�?�** @��
Z [�������+�������+��3�A�8����"!�� �!�����!�� ��A�"�A��,* A�?�**%@��
Z%[�-��+��:��&�NN��A�E��K��-��3���A��� !���#����!��� �!������ � �A�("A��((A�?�*((@��
Z�[�K��b�N� �A�6��<3� �L�A�"��-�A�&*�������#���!�� � 1�A�"(A�%��A�?�***@��
Z$[�9��b��b��NA�9��P �� �̀������A�*2�� ���������������� ���� ����A�6����� ��3������
<�����LA�?�**$@��
Z([�-��6�V���A����� ����!�' �!�*�!�� �A��(A��,�A�?�**�@��
Z�[�:�� �̀�E��0���A�E��V��:���M���A�"!��� �!����������A��(7A���(A�?�** @��
Z*[�"��E��V���A�-�� �̀��8�� ���A�1�� ̀���NA����� ����!���� ��A�("A�� �A�?�*��@��
Z�,[� 1�� R��N��A� "�� - �A� 6�� b ���� � A� �̀� < �.���A� "�� 1� N�A����!� 3�� .�!� ���!�
���� ������������������� �.�����A�<���N3���A� ̀ �A��A�$(A�?�*�$@��
Z��[� 9�� 6�� ���NA� 6�� E��"�&� ��A� &�� �̀� <� ���A� V�� -��"L���A����� � ���4����� �
� ��� �� ��� ����1���� �� ������ �����$� �� ��� �� ������ ��� �� �� ��� # ����#�����!� .�
���� �������� �� ����� ��� ��� � �������� A� �%(A� 8����M���3�:�� � � A� 8���� A�
"6��
Z��[� �̀�-����" ���A� �̀�:����� A�&�� �̀�<� ���A�-��1��8�� ���A� �̀����E� �A�1�����"�����A�
���!�.�!�������� ���������!%�����5���� A��"(A�?�**�@��
Z� [� �̀�"���3#�A� �̀������A�V��K��A������� � ���#� ��������� ��� ��������#���� �
�� � ��� 4����� �� ��� �� � �� �� ������ ��� �� �!� ��� ����� ��� 6��� .� �������
��� �����7 ��������������.�����A�V���A�"�A� ��A�?�*�(@��
Z�%[� b�� 1�A� V�� 6���A� -�� ����� �A� �̀� 9�� A� �̀� <�� b��A� b�� 1�� ���N��� A� *2��!� ����#!�
� ����!A�"�A��*A�?�,,,@��
Z��[�������+�������+��3�A�8����"!�� �!�����!�� ��A�"�A��,* A�?�**%@��
Z�$[�6��<����2L�A����a�#���NLA������� A��A�%* A�?�,,,@��
Z�([�-�� ̀� ��N�A�E��8�3�A���!�8��!������!������A��A�( �A�?�**�@��
Z��[�<��1��1M�� A�P ��P ��P N��3NA�<��E��P ��P ��3���A������ �����A�(%A��,��,A�?�**$@��
Z�*[�<��1��1M�� A�P ��P ��P N��3NA�<��E��P ��P ��3���A������ �����A�(A����(A�?�**(@��
Z�,[�-�� ̀� ��N�A�&*�������#���!�� A���A����A�?�**$@��
Z��[�"��6��3��A�9��C�3��A���� ��*��A��8A��%*A�?�**(@��
Z��[�<��b���A�:��KN��A�9��:�3�����A�"��C�0�N�A�<��b LA�"!�����!��� � �A��$(A�
"�%(%A�?�**�@��
�
31
Objetivos
������ ��� �� � ���� �������#A� #�� �������� �������A� ��
�� ����� ������� �������������������������������� '����A����� ����
����������A�����������������������������������7�� ����������������A�
���� �� � ����� ��� ���0������� �� 0�������������� �� ��������0������� ������
7�� ������
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
32
Capítulo 3
Metodologia
3.1 Introdução
�C���� ����� � 2����� ����������������/���������� ������A� �������2 �����
�����3��������� ���A���� ����G?�@���������)����X����A�.��������� ���
� ��2�� ���� ���� ��� ������� . ��� ��� ������� ������ �� F���� ��
�� ��2����� ����������� K�� ���� ��� �������� ���������A� ��#�� ���� ��#��� ���
�� ��� ������ ����)���� ������������ �������������e� ������������ �������
��0/������������ ���A�#�0��)��� 2�����?������/���� ����� ����@�����
#�0��)��� ������ ��� ?��� ���/���� ��� ������ �� 2�@�� ����� ��#��� ��)���
������ ��� ���� ������� ��� ��� ���.\4 ��� ����� �� ��� .�� � ��� ������� ��A�
�� ��� ��� 2� ��� ������' ��� �� ��������� ��� �� �� �� ������� ��� ������
�������� ��#��� ���� ������� ��������� ��� ��� �� '�����������A� �� ���� ��
���7������ ��������� ��� �������� �������� ����� �� ����� ��� �����
�� ���#��#��.��/���� ������ ����������)����X������!������2 �����.��
����#��� ��)��������X ���� ��������� �������>��� ��������A��������������
� ���7������ ��� 8�� �C��� 3�����A� .�� � �� '���� �����X ��� ��� F���
� �� � ��� ��A�. ����������)����X��������A����� ��� ��� �����
������� ��� ����
�
�
�
�
�
�
�
33
3.2 Modelos de proteínas �
��� �������� �������A� �� ������ �� ���� ��������� ���� �������� .��
�� ���������7���4 ������� #������ 2������ ��0������ � ��� ��A�������������
� ����)���� ������ ��������������!�������������� ��2��A� ��������������
�������A����#�0�����?������� ��A�#�0����� 2�����������@A������������������
��� ����)������� ������������������C��������������E-C"C<*$?% 6�@�Z�[A�/�
���7����������������� ���������� �#��������� /� ��.������ �����������
0�����/���� ��� ������� .��A� ����� ���� ����������� �7��� ��� ��� ����
�� ������ Z�[�� C� ���� ���� �����#�� ��� � ������� /� ������0���� ��� ������ ����
#������2��������0������2� ����������!���������� �����2� ��������� � ����
��� ��2������ ������>�
�
�� ���� �� � ����������-.��
�
�
[ ]220
2,1 4
1)( rrKrV ijvibji −= ����������������������������������������
�
� ��� ijr �/������' ���� �������������� i ��� j W� vibK �/����� �� ���F����
���������#����#�0���������������.������ 0r ����������' �������.���0�����
�
�
"� A�� �-.��� ���� �
�
[ ]22 )cos()cos(21
)( oKV θθθ θ −= �������������������������
�
� ��� θK � /� �� �� �� ��� � ���� F���� ��� ������#��� � #�0�����
2�������������.������ 0θ ������' 2�������.���0�����
34
(� A�� �-.������ ����� � B� ���
����� [ ]203 2
1)( ξξξ ξ −= KV �����������������������������������
� ��� ξK � /� �� �� �� ��� � ���� F���� ��� ������#��� � #�0�����
������� ����;���� ���������� .�� ���� 0ξ � ����� ' 2��� ��� �.���0����� <�� ����
��������� ��������������� �%A��������.�>�
�
2,32,12, rrR���
×=α �
��
4,32,33, rrR���
×=α �
��2�>�
���
����
�=
3,2,
3,2,
.
.cos)(
αα
ααξξRR
RRarcosign nn
��
�
�
� ��� ).()( 3,2,1
→→= αξ Rrsignsign n �/����� ����� 3,2,1 . αRr
����
�
�
35
�� A�� �-.������ ���
[ ])cos()cos(121
)(4 ϕδϕ ϕ mKV += �
� ��� ϕK ��� δ ������� �� ����.����#�������F��������������#����
#�0�����������������������<���#�0��������������������� ������������������ �%A�
�������.�>�
( )2,3
22,32,32,1
2,1,1
..r
rrrrR
�����
−=α ����αα
ααϕ,4,1
,4,1
.
.cos
RR
RR��
±= �
��� ���ϕ �/���' 2�������.���0�����
%� = �� �-/�������� ��� �C������������� ������� ���
ijijji r
jiCr
jiCrV 6
612
12,126
),(),()( −=− �
� ��� ),(12 jiC � �� ),(6 jiC � ���� ��� �������� ���� ���� ������� ��� �������� �� ���
�����A� ��������#�� ��A� .�� ���� ���� ���� ������ ��� ������� i � �� j � .��
� ���2��� �� .�� ��� ����� ������ U� ��������/��� ��� ������ ���� ���������A�
��2 ����������������#��� 3����
� = �� �-/�������� ������� ��6�� �� �-/��������� ��� ���
6� � �������� ���������2�� iq � �� jq � �����������������' ��� ijr � /�
�������������������0>�
ij
jijiCoul r
qqrV
0, 4
)(πε
= �
36
� ��� 0ε �/����������#��������#������
6�� � ����)��� �����0� �� ���� � ����)��� ��� �� 2�� �� ��� ���� ������
� �)��� � #����� ��� ��������� ��� U� ����' ��� � ���� �� ��2������ ��������
�������A� �� �� 3�� �� ���� �� ��.� �� ���� �������� ��� ������ ��� ��������
�� ������� �� � ����)��� �����0� �� �/� ����' ���� .�� �������� ����
�� �������� ������ ���� ��� ��������� ��� ����� � ���� ��� ���� ���� ������
� ����)����&����� ����2���A���� ����)��������� ���������7�������� ���
�/�������' ��A���������������A����.�����������������������������������
������� ����#����� ������)��� ��#��� ���� ���� ��� � ��������� ��� ���
�������� ��� �� � ��2��� ��� � ������� ���� �� �� ���0��)��� ��� ��2��
����� ���� �/�� ��� ���� ��� ������ �/� � ����� ����' ��� �����#���� C�� �/������
�������0�7���4�������� ���������2������ ����)�������� 2���� ��������3��
���#������������ ��� ������� ����)��� ����������������&�����/�����A�.��
��������������������0�3������������������� 2���� �������2����� ���
���������������0������ ���������M���Z A%[��� ����������������Z�[��K�
���� ��� �M��A� �� � ����)��� � ���� �� ��2�A� � ��� ��� �� ��2� �A� ����
��������������/���������# �2������������������������������������C�
�/����� ��� ����� ��� ������ ����� .�� �� � ����)��� � ���� �� ���/����
����� �����/��������' ���������������������������������� ���0������/���
��#���U����2������� �����/��������' �������������
�
3.3 Modelos de solvente
C� ���#� ��A� � �2A� ����� ���� ��������� ���� #�������������A� ��� ��������
��������������<V�� Z$[� �� <V�J�� Z([� .�� ������������ ��2����� � ��4�� �� ������ 6��
��� �������� ���������� ��2����A� �� 2��������� ��#��� ���� ������#���� !����
����������������A������7�����A��������2��������<:6b��Z�[A�<�991��Z*[���1!K�<�
Z�,[A� .�� ���� ���������� ��0/�� ��� ����� ��� ����� � ���� ��� � ��2��
���� ����.���������� ����U�� ���.\4 �������#��A� ���� �������#�0��)������
������� ���� #��#� �������������3����24 ����
�
37
3.4 Dinâmica Molecular
V����������� ������;����� ���� ������� �/���� ��0��� �� � ���0���
����������� ������� ���#�� ?�.���0���� �� ����.���0���@� ��� �������������������
V���2������������ ���0���������� ���#������.���0����������/������������
����� �#���>�"� ������������ '������������?&"@��V��2���������� ���0����
��� ����.���0���� �� ������ ��� �#� ���� �� '������ �� �� �&"�/� ��������� 6�
&"� /� �� �/� ��� ��� �������� �������� .�A� ���� ��� ��� �.�)��� ���
��#��� ��� ��������A� 2��� �� ��F��;���� �X����� .�� ������ �� �����
� �����)���������������������������;������������������������� ���
�� '����� �� �������� ��� �������� � �#��� �������� Z��A��[�� 6�� �.�)��� ���
��#��� ���������������#�������������������K��������� ���2� ������>��
NiFrrU
dttrd
m ii
Ni
i ......1,])[()(
2
2
==∂
∂−=�
�
��
�
� ��� im � /� �������������� �A� )(tri
�� ������ ������ �����������)������
�������A� ])[( NrU�
�/��� ��2������ ����������� iF��/�������� ��� �����������
V��������� ������F��;�����X��������� 2����������������2������
�2������� ��� � ��2��� �� �.�)��� �����#��� ��� ��� K�M�� A� ���� �7������ ���
�2���������������2�Z� [���R������Z�%[��C��2�����������������2����������)��� ir��
��������������#���������� iv�� ��������
2t
tδ− , onde tδ é o tempo de integração.
tm
tFttv
ttv
i
iii δδδ )(
22
��� +�
�
���
� −=��
���
� +
( ) ( ) tt
tvtrttr iii δδδ ��
���
� ++=+2
���
O algorítimo de Verlet é dado por:
( ) ( ) 2)(2 t
mtF
ttrrttri
iiii δδδ
���� +−−=+
38
C�� �2�������� �������2� �� R������ ���� �.�#�� ����� 9��� �2��������
�����0������ � �0�� ���� ��� ������������ ��������A� ��������� ��
������� '����.
�
3.5 Condições das simulações
C���������� �������������� ��������2�������� '������������
E-C"6�<� ��� Z��[� �� ��������� ����� ����� ��� ����� E-C"C<*$� ?% �@� Z�[A�
�� ���.�����������<V��Z$[� �����������������#��������/��������2��C��
�������A��� ���������������� ����7�� ��A����/��������2����� ����� ��
��� 2� ���� � ������ ��������� ��� ������A� ����� ��� ���� �)��� ��� ��Y�
?��7� �Q0��@A� #��� �0��� ���� 6�� �����)��� ����� �������� �� � ���0���
����/���������0�����A� K�9A� ��� �:� ������;2���� � ��� �� ���)��� ����;����� ��
�� #� ���������2����� ���Z�$A�([��6�������������������������� �����
�� �� ���������������������������0����������8��� ��� �Z��[������� �� ���
��� ������ ��� �������� ��� ps1.0=τ � �� ���������0������� �� �2�
115105.4 −−= barxTβ ��C������� ������������������������������������ �����0���
��������6���.�)��������#��� ��� ����� � ��2����� ����� �2������� ����
���2�Z� [A����������������� ��2����� fsdt 0.2= ��C��������������������������
#�������� �� �����������6��#����������� ������������0�������������0�����
���"7M���� ��������������F���C���������� ���������2�)���� #��#� ���
����������3����24 ��� �����/������������ �������� ��������������2�������
1!K�<� Z�,[� �� �� ���� ��� ���/���� ��� �2� ����� �2������� <�991�� Z*[�� 6��
� ����)��� ��� # � ���� P ��� ����� ������� �� ���� ��� �� ���� ��� ������ ���
��� ���6�� ��������� �� 2���� ��� ����� ������������������M��A��/�����
V"��Z A%[��������������������7��������� ���6���7�����������������������
�������$�D������8������������,D�������91A���� � ���#��������,D���6��
�����)��� ����� �.���0���� �� ��� �,,��� ���� �� &"� ��� ���������� ���
�����)�������������������7����������/����������#� ���������#����.����
� ����)��� � ������ ������������ ������ ���2� ������ ���������� � �������
����/����6��0��� �������� ���2 ������3�����0�����������������������
�
39
Tabela 3.1: &���3�����0������������������������;��2��V&8�/����;��2���������� � ��0 ����������� ��� ������ A� V&8A� K=JK�� ���� ��� Q������ ��� K=� �� ���� ����� ���� �� ������� �� 9�� /� ����������;����������� �����
2��� ���� �B�����*:3� 4�>D�?� @D�!����� @D��� �� @D����������!��� ���
�91�?����������@�
�8��?���������@�
�_K6�
��K8�
$��(,�
���
�*% ,�
�*%%,�
��=J����
�,=J� ��
$, ,��
$,�(%�
3.6 Estrutura das enzimas simuladas
6������������ ��������������)��������������� ������������������
������� �� �0����� �� 0 ��� ��� ����� ��� ������ �A� V&8� Z�*[�� 6� 7�� ��� �8��
�� �/��������������� . ����.���91��� �/���*%��6������������;�����
���������$��(,D��Z�,[�����8�����91���������#�� ����9��������;����/��
��������� �� ��7� ��� ��������� � .�� � � ���� ����� ��� �����
��#������ 6�� 7�� ���� ������� ����� ��� �� ������� ������� ��� ��
��#�����������2�)��J���� ���A��0��� ��A�.�������� ��� ���A��������������
�� ��2�� ���� � ���� ������� ?� ���A� ��� ��� �� �����@�� 6�� ��������
������� ��� ������7�� �����8�����91��������������� ���2�� ����C�������
��#�� ��� 7�� ���� �� ������ ��� ����� ��������� �� ��2���� �3���H�����IA�
��2�������������������������������� ������������� �����
�
4������(�"�&��� ����������2�)��J���� ������������������������������������7�� �����
����/��E��� � ���� �����������23�� �������������
/ ������� ����������09��� ������
:�6;<=;�>=<:>?�:@=�?3�:33�
6:�63<>>�@><:>A�:>@�:6:�:>:�@B�?A�
:�=;<>;�B=<:B@�:?6�::3�:63�
=:�=3<B>�?><:>@�:B6�:6B�:>B�?B�:;A�
8��$�?�@�/ ���A���� ���������������������� ������������������ ���� ��7�� �����?�@�6� ��2���� 3/����� �� �/�� ��� �������� ���������� ��� 3/�����α� �� ��0/�� �2 �� ������������� ���� �� �������� ��� #����� ��������� �� ������������ � ��2���� ��� 3/������������� ������� �
�
�
40
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
3.7 Ferramentas de análise
3.7.1 Raiz do desvio quadrático médio.
�
6����0���������������/�#������������#���.���������/���A�-"<&A�
.��/����� ��������>�
n
trRtRMSD
n
iii
2
1
|)(|)(
�=
−=
��
�
� ��� �/��� Q�������������������� ���������?��������������������0� ��
�� ����24 ������������� ����@A� )(tri
��/��������������������� ������������ iR
��/�
�������������������� ����������������4 ����6����� �����/��������;���
��0����������������������6������������������4 ������������.����
������� ��� ���� ������A� �0����� ��� 0 ��� ��� ����� V&8� Z�*[�� C� -"<&�
��0/�� ����� ���� ������� ���� ������A� ��# ��� ��� �� ��������� � �/���
�� �������������������
�
�
�
5��� ��(��6��������� ������� ��� ������ 7�� �����8�����91�F ��� ��� ����� ��2����������������
41
3.7.2 Distribuição de distâncias.
6�� ����' ���� � ����X����A� |)()(|)(, trtrtD jiji
�� −= A� ������ ��� �����
� �����)���Q����� ���������� '�������������� �A� ����������7��������������
��� ����������2���������2�)������3����24 ����
3.7.3 Dinâmica Essencial de Proteínas
V����� ������������������������A��� ��������������� ����.����������
.�� ���� ��� ��0��A� � �#���A� ��� �������� ����������� ���������� ��� ��
�������� � ����� 6�� ������ �� ���� ���7�#���� ��� �� � ���� � ��� �A� �����
������� ������ �����#��� ��)��� ���� ������ ������� � ��#�����0���;2���� 9���
��#��� ��)��� ��#��� ��������� � ��2���� ��� �� �0������ �� ��� ���A� �
������� ��� ������ ���� �0�� ���� �� �� ���)��A� 2��2�)��� ����������A�
F����� �� ������� ��� ��� �������� ����/������ �� ����� ����� ��#��� ��)��� ����
�3���������#��� ��)���� ��� ����6����#��� ��)���� ��� ���� #��#���
������7�� �������)��� � ���� ����#��� ��)��� �X�����.�� ���� ������� ���
����� � ����)��� � ����X������ C� ������� /� ����#�� ���� ��#��� ��)��� ���
� ����)��� � ���� ��� ������� �� ������ A� ���� �� � ����� ��� ��� ������� � ��
� ��� ������ �� ������� � �� '���� ������7� �� ������ � ��� ���� 2���
���� ����������0������Z��A��[��
+����� #����2������������)���� ����������)����/������������)���
�X����� � ������ A� ����� ����#�� ��� �����)��� ��� �� '������������ ���
������� .��� ��� ��#����� ����������� V��� ��2� ������� �� ������ ���
��#��' ��� ���� �������� ���� �X�����A� �0���#���� .�� ��������� ����)���
������ �� �� ����� ��� ��#��� ��)��� ��������� ��� ��� �� �0������ ���
�� �� ������ ? ��� ���� .�� �O @� 2��� ��� ��0�����A� �� �0������ ���� ���A�
� . ������������������2������ ��0����������0����� ��� � ���� �� �����6�
��#��� ����� ���� ��� �0������ ���� ���� ����� ���� �� ������� ����� �����
���������!������������������0����������������� ������ '������������ ��� ��
���0���������� ����[21,22]��G���� F �����������������7�� �����8����
�91A�������������������/����A���������� ����� ����������%��
42
3.7.4 Ligações de hidrogênio intramoleculares e pontes salinas: critérios utilizados.
+��������������������/�����2���/�������Z� [������������������2�)������
3����24 ��� � �����������A�1:� ��A� �� ��0/�� ����� ��������� � ��2��� ���
� ������� � ���� ��� ����� ��� ������� ������ ��� ������ 1:� ���� � C�� ��'�������
��������������/����2���/����������>�
�
�������C�����0��D�;!A6� �
���C������E0FFFF��G�::;H�
��&�IJ��� ����K���%�&�GA;L��
6���� ������� ����������������� ������������/����������' ���� �������
�� ����������������2���������2�������,� � �����
�
3.7.5 Ligações de hidrogênio intermoleculares: critérios utilizados.
! �����)�����0������������������������������������0������������
��� �����)��� �X����� �� �� ��� ��� � �)��� ��� ������0������ 6����� ��������
���.���/��� �������������0����������������������A� ),(2 ji rrg��
��� )(2 ijrg ���
��������� ��� )(rg A� ��0/�� �3��� ��� � ���� ��� ������0����� ����A� +&-�
Z�%A��[�� 6� +&-� /� � �� �� ������ ������� � �� ����' ��� r � ��� �� ������
�� ���A� �� ��FA� ��� /� ���� ��� ����� � ����� � ���� � �� ������ ����� ���
��������w ��������' ��� r ��������������� ���� A A������ ���������w �
���������������������������A��+&-� )(rg Aw ��������������������2� ���
� ���>�
w
wAw N
Vrr
rnrg
∆= 24
)()(
π�
� ��� A �/�����������������4 ����������� A� w � ������� ���������������
�7�24 ��� �� 3����24 ��� ������/���� ��� �2A� � ����' ��� � ���� A � �� w � /� r A�
)(rnw �/��� Q��������������� w �� �� �������������' ���� ���� r ��� rr ∆+ ����
43
������ A A� V � /� �� #����� ����� ��� ������� �� wN � /� �� Q����� ��� ������� w � ��
��������
C� Q��������#��� 3��� w � �������' ��� r ������������ ���� A � /�����
���>�
�=r
Aww
h drrrgVN
rN0
2)(4)( π �
�
6�� 1:� � ������������A� 1:� ���A� ���� ��� �������� ����� � �)��� ���
������0����������A�26P ?�@A�� ���6�/����������������� ���M�/������������2�?:�
�� C@A� �� ����� � ��2��� ��� � ������� ��� ����� ��� ������� �� ������ � ���� ��
���/���� ��� �2A� +?�@� #�� �� Z�$A�([�� d ��� 26P ?�@A� ����� �� ��7����� ��
�� ����� 0��� ���� ����� �2������� � �7���4 ��� ��� 1:A� �� ������ �� ��� ����
� ��2�� ��� � ������� ��� ����� ���� ������� �������� �� ����� &�� � ��2��� ���
� �������������������������/������#�����������������������1:� ����. ������
�0���#������� ������������?����0��@� ���2�������� ��2������#A�� ��2��
�2��#�� ���� �/� ��� /� �� ���� ����/����� ����� ��� �������� 1:� ���� Z�([�� 6�
�����������������+?�@�#���� ��0/������������������ ��2��������/������
1:� ����?�"@A������������� Q������/���������������������� �?K1:@���
K��������� � ���� ���������� ���� �+?�@�.��/� �������������������
�"����K1:A����������������������������,N���������Z�([���
6�2 �� �7������� ��� 26P ?�@� �� +?�@� ��������������� �� ��2��� ��� �� �$�
��������#�� ����6����2��� ����� � ���������7���������������� ��������������
C���:��������� A����������������#������&����2��� ����� � A���������#���
����� ���.�����7�24 �������0� ���/������ ������#���A�� . ���.�����
�7�24 ��������2�������0�7�����A�3����7�����3����24 ��������� ��������7�������
��� ������� ������� ��� ���#������ C� 3����24 ��� �� �� � ��� ����� /� ��
�7����������������������� ������#������
K���������$A������ ���U��1:A� �������������������������������26P ?�@���
+?�@A� �� �� ��� ��������� �7������� ��� �0��A� ��#���� � 2� ��� . ������
� �����)�����
�
44
1 2 3 4 5 60,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
g AW (
r )
r ( Angström )
H (N-terminal); gAO
O (hidroxila); gAH
H (amina secundária); gAO
O (carbonila); gAH
O (carboxilato); gAH
O (C-terminal); gAH
��
-14 -12 -10 -8 -6 -4 -2 00
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
F(E
)
E ( kcal.mol-1 )
H (N-terminal) O (hidroxila) H (amina secundária) O (carbonila) O (carboxilato) O (C-terminal)
��
5��� ��(�"6�+ �)������������0����������26P ?�@��
5��� ��(�(6�&�����0��������� ��2���������A�+?�@A��������� �� ���������������������7������������ ���2�� �����
45
3.7.6 Áreas acessíveis ao solvente.
6�������������������3�����;0����A�3�����������������������?3�����;0�����=�
3�����������@��7�����������#� ��� �����������������������A����� ����������
���� �������������0����� ���/�����������������Z��[�� ��� nmr 14.0min = �
.���������� ��������������/�������2���
�
3.7.7 Raio de giração. �
C��������2�����A� gR A�/�����������������������������A��� ���
����������������2�>�
�
�
=
==N
ii
N
ii
g
m
trtR
1
1
2|)(|)(
�
�
� ��� im �/��������������� ���� ir��/������������������� ���������������
�� ����������������/����
�
3.7.8 Energias de interação. �
6��� ��2������� �����������������������������2�>�
��=
−
≠
=N
i
N
ijijij VE
1
1
�
� ���K�/��� Q����������������������� A�����F�������������������� ���
ijV �/��� ��2������ �������� �������� ������������������F��
�
�
�
�
�
46
3.8 Alinhamento das estruturas
C� �� 3�� ��� ��� �������� ��� 7�� ���� �8�� �� �91� ���� ������ �����
���2���<M����V&8�R��M��� �(�Z�*[����
�8������������6<9&_PdKP 9�&EEE!RK6RK�E<EEK_<RKP �<K9EK+RREb�EP 99E<V+-9�
�91�������������99VK<�EP:�&E___<PP<&�EE6d69_9K1���EE9_�!<PE�&EEK1REEbE�
�
�8�����������!K_K6ERP 6V�KEKE_191_E��P 9-<V1!�__�RR&<PE9_-V�9E9_bE9Rb<�
�91�����������P KVE1K6-6!�:+�ER_dVKE�K<_16R_EP 9�-KV1R�__!R���K+E9_&V<<�
�
�8�����,�����&EE9_&!_99�9-_K6V<!&E�&-99+9d_P <�R-d<b-V9E<��K69!9+9K:R�
�91�����,����E69&1E9R���&E<!_-1Eb9�9-RK6V<!&E�9d9+&d_P<R�-d&b-9<E9R�
�
�8����������K6Pb<:E"K1�E<KP6_dR"6�9�E_d<<E<<�KR9RP �����������
�91����������d9E�:+&6P 6�-6E1KRKE&:�__d!R69�E_�+<<E_6-!9R�6&RE�
�
�
�
�
�
Referências �
Z�[�P �+��# �E ����� A�<��-��8�������A�6��6������ 2A�V��:��:\ � 0��2��A�V��b�\2��A�6�����
"�NA�P ��-��V��<����A�!��E��9��� �A������� ��������������$��� �'�8�8�?>����������
)� �'��� A�8�����A�E�� � 2� A�?�**$@��
Z�[�G��<���N��A�P ��+��# �E ����� A���� ��A��8A��%�A�?�,,,@��
Z [�9��&��� A�&��_��NA�1��V������ A�"!��� �!������A�7�A��,,�*A�?�** @��
Z%[� G�� ���� A� 1�� V����A� "�� 1�� 8��N�M���A� 9�� &��� A� :�� 1��A� 1�� V������ A�"!� �� �!�
�����A��8(A���((A�?�**�@��
Z�[�!��E��9��� �A�-��<���0A�V�����<���3A�P ��+��# �E ����� A�"!��� �!������A��8"A��%��A�
?�**�@��
Z$[�:�� �̀����8��� ��� A� �̀�V��"��V����A�P ��+��# �E ����� A� �̀�:��� �A�.� �������
��� ������1�� ��� ������������ ���������!�.$�.� ��� �����&�� ���V��� A�8������
-������V0���3� 2����� L�&������3�A�((�A�?�*��@��
Z([�:�� �̀����8��� ��� A� �̀�-��E��2��A�9��V��<�����A�"!�����!��� � �A�7�A�$�$*A�?�*�(@��
47
Z�[� �̀�V��-L�N���A�E����������A�:�� �̀����8��� ��� A�"!�������!������A�"(A� �(A�?�*((@��
Z*[�<��"�L����A�V��6��b���� A�"!�����!��� � �A��(A�*��A�?�**�@��
Z�,[�8��:���A�:��8��N��A�:�� �̀�8��� ��� A� �̀�E�����"��+��F�A�"!�����!��� � �A���A��%$ A�
?�**(@��
Z��[�"��V��6��� A�&�� �̀�9�������LA������� ��������������+������A������� �V����A�C7����A�
?�*�(@��
Z��[�&��+�� N����8��<���A�)� ���������� ��������������A�6�������V����A�?�**$@��
Z� [�-��P ��:��N �LA�<��V��E���A�"!�����!������A���>��%�A�?�*(%@��
Z�%[�1��R�����A�����!�� �A��%7A�*�A�?�*$(@��
Z��[����1� �3�A�8��:���A�&��# �����<����A�"!����!���� �A��A� ,$A�?�,,�@��
Z�$[�"��V��6��� A�&�� �̀�9�������LA������� ��������������+������A������� �V����A�C7����A�
?�*�(@��
Z�([�1��3A�6��-�A���� �������� ����%������� ����������������A�� ������� A�V�� �����:����
Z��[�:�� �̀����8��� ��� A� �̀�V��"��V����A���&�K��A� �̀�-��:NA�"!��� �!������A���A� $�%A�
?�*�%@��
Z�*[�MMM����0���2J��0�
Z�,[�K��b�N� �A�6��<3� �L�A�"��-�A�&*�������#���!�� � 1�A�"(A�%��A�?�***@��
Z��[�6��6����A�6��8��"��1� �� A�8��1�����E����A�&��"��+��# �6��� A� �̀�:�����8��� ��� A�
"!�����!�/�A��(A��$��A�?�**$@��
Z��[� 6�� 6����A� 6�� 8�� "�� 1� �� A� �̀� :�� ��� 8��� ��� A� ���� ���� �L ����� ��� ������ ���
��� �������!�&���!�' �����A�%��A�?�** @��
Z� [� E�� 6�� �̀����LA� P �� <� 2��A� � �0���� � ������ �� ����������� ������ �A� <��� 2���
R���2A�?�**%@��
Z�%[�&��6�"�d����A�������������� ������A�:����f-�MA�?�*($@��
Z��[� �̀� V�� : �� A� !�� -�� "�&� ��A� �� ��� ��� ����� � +������A� 6������� V����A� 1� �� A�
?�*�$@��
Z�$[�+��:��<���� 2��A�6A�-3� A�"!��� �!�����!%�%�A�����A�?�*(�@��
Z�([�P ��1�� �̀�2� �� A� �̀��3 ����N3�A� �̀�&��"��A�P ��-��!���LA�"��1��b�� A�"!��� �!�
����!%��7A�*�$�?�*� @��
Z��[�+������ 30��A�V��1�F ��A�V��6�2��A����< ���A�"��<�3��A�"!�����!��� � �A��A��( A�
?�**�@��
Z�*[�3���>JJMMM��7��L���2J���#J��
�
�
48
Capítulo 4
Propriedades dinâmicas do par mesofílico-termofílico de xilanases
4.1 Resultados e discussão �
4.1.1 A xilanase XBC
6� ���0������� ��� �������� 2����� �� �����)��� /� #���� �����
-"<&A� ������� ��� ��� ������� �� ����� ��� ������ 6� ��2�� %��� ������ ���
-"<&?�@�����7�� ����8�� �������� ��������������.��������������
� ��� ��������������� �����4 ��� �������� � ����� ��� ��� ���������C��
#������ �/����� ���� -"<&� �� ���� ��������#��� ���#���� ���)��� ���>� ,�� ,±�
,�,�$ ��?��D�@A�,�� *±,�,�� ��? �D�@A�,���(±,�,�% ��?%�D�@A�,��%�±,�,�� ��
?��D�@���,��$�±,�,�* ��?$�D�@��C��0�7������#�������)������������������������
���������.���0�����
6� ���7�0������J��2����� ��� �� ������ � /� ��������� ��� ������ �����
-"<&� ���� ������A� ��2�� %���� "��� ��� � ���7�0������� �� ����� ��� ����� ��
������ � �������� �0���� � �����)��� ��0��� � ���0������� ��� ������� ����
���� ���� �� ��2�)��� �� ������ �� V�.� ��� ���#���� ������� � �� ����
���������C������������#�����0���#�������������� ������������������2���� �
?E�L@�� 6� �4 ��� ��� �� 2���� ������ �� �� ������� E�L� �� ����� �� 0�7��
�������� ��� ���/����� ������ ��� �� ��#��� ����A� ����� ��� ��� �� ���
���7�0������� �� ��2���� � ��� ���� ��� � �� ���� 6�� ��2�)��J���� ���� ��� �����
���7�0����������A����� ��A�����2�)��J���� ������� ������ �����&�#�������������
.�A� .�� �� �����)��� ��� ����� ���7�0������� ���� ����� �� ���� ��� �������� ���
2���� A������ ���� ��#�����.���� �������� �����BA� ��2��%� ��6� ��2�������
�������2����A��������������-"<&�����������A�/������� ����������
49
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,00,0
0,2
0,4 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50 5,00 5,50 6,00
0,00,20,4
0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50 5,00 5,50 6,00
0,00,20,4 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50 5,00 5,50 6,00
0,00,20,4 0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50 5,00 5,50 6,00
0,00,20,4
RM
SD
( nm
)
t ( ns )
25ºC
35ºC
45ºC
55ºC
65ºC
�
0 20 40 60 80 100 120 140 160 1800,0
0,2
0,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
0,0
0,2
0,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
0,0
0,2
0,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
0,0
0,2
0,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
0,0
0,2
0,4
RM
SD
( nm
)
Resíduos
25ºC
35ºC
45ºC
55ºC
65ºC
�
5��� �����6�-"<&?�@�����7�� ����8�� �������� ���������������
5��� �� ��"6� -"<&� �/���� ���� ������� ��� � 7�� ��� �8�� �������� ���������������
50
�
�
�
�
�
�
�
�
C� ���� ��� � ���� ��� 2���A� �7��� ��� �� ��2�)��� ��� #�����BA� /� ��2����
��#����U�������B��<2�������.������7�0������������� ����������������2�)������
���� ��� � ���� ��F� ������ ��� ��� � ����� ��� �0�����A� �� #��� .�� ���
���� ������� ��� ��� ���� ��� ����� �����#��� ���� ��� ����� 0������3A� ���
�����������������0����A�����������������7�� ���������������Z�� [��
�������#��� ���0������3������������� ����������������' ���� �������� �������
��������������������� ��������������������������� ��A���2��%�%��
�
5��� �� ��(6� ������� ��� ����� �� 7�� ��� �8��� 6�� �����)��� ���������������E�L�������������������������
51
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,000,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
XBC 55ºC 45ºC 35ºC 25ºC 65ºC
Dab
re-fe
cha (
nm
)
t ( ns )
�
�
�
&���2��%�%����������0���#�A��7��������D��� ������������ �� ���
��� ���� 0���A� .�� � ��#��� ����� 0������3� �� �8�� ������ ����� ���
��������������3 �����&�#����� ����.�A� ���D�A� �;����� ��� ������� ���
�.���0��������#��� ���0������3����������������' ���� ��������� ��������
����������7����� ����� , �����������' ������� ������ �� ��� �/���
�� �������������C�������#����/���0/���0���#������ ����%�D���6���D�A��
�������� ��� ��#��� ��� 0������3� ��� ��� � ����� �� � ��� � �/��� ���
��$�±,��� �A�����FA����D���7�� ����8��� �� ������,� ������0�������
.�� ������������� ����������6�$�D����������� �� �������� ���0�������
.�����D�A����/������0�������.�� ������������� ������������D�A�����
#�����/���������� ±,��, �������������������������2����A���#���.����D��/�
� ��������� ;���� ����� � ���� Z%[A� .�� �� ����� 0����� �� �������
�����0����� �� �0������ �� ��� �� ������ ��#�� �� � ���� ���� ������ ����
�� ��.\� ���� ����� �����7�0�������������#����� ��������������
5��� �� ���6� &0������3?�@� ��� � 7�� ��� �8�� �� ������ ���������������
52
6� ��2�� %��������� �� �� F ��� ��� �������� �������� � ��� �,,��A�
���� �� '���� ���� ���A� ��� ��� ��������� �� ��� �� �����)���� 9���
���������������������0����������� ������������ ���������������4 ����
6���2��%���/� �#�����A���#������������������������0������#��� �����
0������3A��0��������� ����������� '�������� ���A� �.������0���#�.��
� ��#��� ����� � ��� �� �� 7�� ��� �8�� /� ���� ����� ��� �� 0������3�
���������������� ������ �����
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
25ºC 1 2
35ºC 1 2
5��� ����%6���������������� ��� ��������.��������7�� ����8�� �������� ���������������&�������� ����#��)������������ ��������������������
53
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
45ºC 1 2
55ºC 1 2
65ºC 1 2
5��� ����%6��� �� �����
54
6�� �������� ����� ���� � ��2�� %��� ������� ����� ��� �
���7�0������� ���� ���� ������� ��� �� ��� ������� �� ���� ��� ���� ���� ���A� �����
�����������2������������ ���������.��0��2�2� �������������������#����
6� ��2���� ��� ������ ��#�� ��#�� ���� ������ ���� ��� ��2��� ��� .�� �� ���
���������������������A� ��������������������A���F���� ���#���������
��� ���������� ���#���� <����� ��������� ����3��� ��� �� ������� $A� ��
������� ������������.��� �/����2������������2�)��������/�����
�
�
4.1.2 A xilanase XTL
C��#�������/���������-"<&�����7�� ����91���������#�������������>�
,�� %±,�,�( �� ?��D�@A� ,��%%±,�,�� �� ? �D�@A� ,��(�±,�,�� �� ?%�D�@A�
,��* ±,�, � �� ?��D�@A� ,��$ ±,�,�% �� ?$�D�@A� ,��$$±,�,�$ �� ?(,D�@� ��
,��*�±,�,�� ��?�,D�@��6��,D����91� �������.���0��� ����;��(�, ��. �����
�����-"<&��� 2��,� � �A���2��%�$���
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,000,00
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
0,30
0,35
0,40
RM
SD
( nm
)
t ( ns )
80ºC
�
�5��� ����6�-"<&?�@�����7�� ����91���,D���
55
V��������� �������.�� ������� ���)����� ������������������������
��� ����������������#�����/������C��-"<&?�@����������������������
����� ����� ���2��%�(��6��#����������� ��� ������������ ������
���������/�0��� ������� ��������-"<&?�@A� ��2��%��A�.����� �������
�������2��������������������������4 ����
�
0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,00,00,20,4
0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0
0,00,20,4
0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0
0,00,20,4
0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0
0,00,20,4
0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0
0,00,20,4
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00
0,00,20,4
t ( ns )
25ºC
35ºC
45°CRM
SD
( nm
)
55ºC
65ºC
70ºC
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
5��� �����6�-"<&?�@�����7�� ����91� �������� ���������������
56
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,000,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
80ºC 70ºC 65ºC 55ºC 45ºC 35ºC 25ºC
RM
SD
( nm
)
t ( ns )
��
�
�
�
�
6���2��%�*������ ��������' ����� �������� �����������������������
����� ���� �� �� ���� �������� ������ ��� ��� � ���� ��� ������� C0���#���� ��
2� ��������3 �� ����#����� ��2���%�����%�*A�����FA������������ ���
���-"<&�/���������������������������' ����� ��������� ����������������
���� ����� ���� ����� ���� C�-"<&� �������� ���#��� ����� 2��0�� �� ������ A�
��2��������3 �����-"<&�����&0������3�� ����.�����#��� �����2��0����
������ � ����� �� ����� ����� � ��� ���� ������ ��A� �� ��� ����� ����A� ��
��#��� ���0������3���� ������
�
�
�
�
5��� �� ���6� -"<&?�@� ��� � 7�� ��� �91� �� ��#����� ���������A���� �����������������������4 ��A��������������A����������������2�������
57
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,001,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
Dab
re-f
echa
( nm
)
t ( ns )
25ºC 35ºC 45ºC 55ºC 65ºC 70ºC 80ºC
��
�
�
d ��� U� ���7�0������� �� 7�� ��� �91A� ��� -"<&g�� ���� ������A�
����� ����� � ��2�� %��,A� ������� .�� �� ��2�)��� ���� ���7�#���� ���� ��
�7����������K����A������� ���� ���� ����� ����6� ���7�0������������������ ����
�� �A��������#�����A����������������6���������� ��8�A���������������
����������7�0������������.���������� ���� ��#������ ������������BA���2�)���
�����.��������������2���� ��&���������2���A��7�� ��� ������������91�/�
������2������.��������������8�A���������������#��������������2���%�����
%��,��6����2�)��������������7�0������������������7�#���� ��8�����.�� ��91���
�� ��2�)��� ���� ��2���A� ����� ���� �7������ �� ���� ��� ���� �� �� �����B� ���
���� ��� � ���A� ���� �.�#�� ���� ��� ����� ���7�#����� &�#����� ���0��� .��
�������� ����� ������7�#������.����8�A��7�� ����91������ ���������
�����������0����A�������������&0������3���
5��� ����76�&0������3?�@�����7�� ����91� �������� ���������������
58
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 2000,00,20,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200
0,00,20,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200
0,00,20,4
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200
0,00,20,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200
0,00,20,4
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200
0,00,20,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200
0,00,20,4
Resíduos
25ºC
35ºC
45ºC
55ºC
65ºC
RM
SD
( nm
)70ºC
80ºC
�
�
�
�
V����� '�������� �������������0���#���� �� ����������#��� �������
�� ��2�)��� ���� ���7�#����� 6� ��2�� %���� ������ �� �� F ��� ��� ��������
�������� � ��� �,,��� ��� ��� ��������A� ���� �������� ������ �����
��0����������� ������������ ���������������4 �����
e� � ������ ��� ���� � ��2�� %���� .�� � �,D�� ����� �� ��2�)��� ��
������ � ������� 2� ���� �����0�)��� � �� ������� �� .�� /� �� ������
� �����#���������� ������������ �������6��������#��� ������������ ���
��� �����������(,D�A����/���� ������ ���������0������%�D���
�
�
�
�
�
�
�
�
5��� �����8>�-"<&��/�������������������7�� ����91� �������� ���������������
59
5��� �� ����>� �������� ������� ��� ��� ��� ��.������ �� 7�� ��� �91� �� ������ ���������������&�������� ����#��)������������ ��������������������
25ºC 1 2�
35ºC 1 2�
45ºC 1 2�
60
55ºC 1 2�
65ºC 1 2�
70ºC 1 2�
5��� ������>��� �� �����
61
4.2 Conclusões
C�� ������� ���� �������� �2����� ����� ��� � �7���4 ��� ��� �����
2� ���������������2�)��� ��� �����7�� �����8�����91>����� ���#�������
2� ��� ���0������A� .�� /� �� ���� ��������A� �� � ���� .�� ����� ������� 2� ���
��#��� ����A� �� ���� �� ���� ��� ��� ���� <� ��� ����A� � ��#����� �� �
��������0������� ������ � ����� ������ ���##���� ��� � �����2��� U�
��#��� ����� 0������3� � #��#� ��� ��� ���� ���� ��� ��� �� � ���� �� U� ���
�� ���#����������������.�������������� ����������� A���� ������ ������
���� ���������� ������� �� �������������#���E� ���������� ���7�0����������
7�� �����8�����91�������������0���U���#��� ����������� ��A��� ����������
�����.����������� ���������� 2���6� ������������91� ����������������
����������������0������������������������������������ ��#���� ���
���� ��2��� ��� .�� � ���������� �8�� ��� ������ ��� ��� ���� ���� ��� �����
��#��� ������&� �������������#�#�����������.���� ��������������0��������
7�� ��� �91A� ��� ��������� U� �8�A� �������� �������� U� ��2����� �� 2� ���
������' ����
80ºC 1 2�
5��� ������>��� �� �����
62
Referências
Z�[� E�� b�� ���3�A� V3�&� �� ���A� &������ �� ��� <������� 8����2LA� ! ������� ��� V3L�����
�3������LA�b���+� �� ��G �#�����c�A�E��A�6������
Z�[� b�� E�0��A� E�� b�� ���3�A� "�� :L A� 6�� <�3��3��A� P �� <��� ��A� �� ��� b��NLA�
����� �����A�(�A�� %(�A�?�**�@��
Z [� �̀�"��A�6��9h��h � A� �̀�V��iNL�iA� �� �̀�-�#� � A���� ��A�(�A�% %A�?�**�@��
Z%[�K��b�N� �A�6��<3� �L�A�"��-�A�&*�������#���!�� � 1�A�"(A�%��A�?�***@��
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
63
Capítulo 5
Energias de interação e áreas acessíveis ao solvente.
�
G���������������������� ��4 �����������������������#� ��A������
�����2���A� �����������������0������������/���/���#/��������������������
�����#���������#� ��A�66<��C��� ������ ������66<�������������3��������������
3�����;0�������66<���������������� ���������� ��� �������������� ������
��� ������ �� Z�[A� �� #��� .�� �� ������� �� ���� �7����� ?�� ��� ���
�������� ��� 3�����;0���@� �� �� ����� �7�������� ���� �������� 3������������
������ ������� �� ��� ������� ��0��� ��� ���������� ��� ��������0�������� ���
������ ��Z�[����
6��� ��2������� �����������������>�� ��2���������� A�.��/�� ��2��
���� �������� ���������������������� ����� ��2�������� ����#� �����
�
5.1 Resultados e discussão
�
6� ��2�� ���� ����� �� �� 66<A� ��� � ���� �� ��������A� ��� �� ���
��������������������������7�� �����6��66<�������������3�����;0����A��������
��� �8�� �� �91� ���� ����� ��;7���� ��� ����� �� ���������A� ��� ��� �� ���
%% ���� V��/�A� �� ����� ������ ���� ��� �������� 3������������ ��� ��������3��
����� �����3 ��� 6� �91� ����� �� ������� 2�� ��� �7�������� ���� ��������
3�����������������������U��8�A���������% ���������V�������#�������� ���.��
� �91� � ��� ��� �������� 3�����;0����� ����� ��� 3������������ ����� ��� ��
�7�������� �����3 ��� �� ���#� ��A� ������ ���� ��� �� �8�A� �F��� ��������
3�����;0���������� ����������2������7���������&��������A�����������
�7����� �� ���#� ��A� ��� � ������ ��������A� /������ � ������������91����
64
.�� � ���������� �8�A� ����� ������ � ��2�� ����� ���� ����� �7�������� ��
�����������/���� �����#����������' ���������#� ���������������0����������
20 30 40 50 60 70 80
36
38
40
42
44
46
48
50
52
AA
S ( n
m2 )
T ( ºC )
hidrofóbica (XBC) hidrofóbica (XTL) hidrofílica (XBC) hidrofílica (XTL)
�
�
6�� � ��2��� ������ ��� � ����)��� � ��� ?� ��2�� �� ������ @� ��
� ������������� ?� ��2�������� ��2@� ������������������������� ����
�� ��2��� ���� �� �� �� 6�� � ����)��� � ���� ������ � �����/���� ��� �2� �����
��������� ��������� �������,�( �A���������� ���� �� ���������� ����
�2��������#����A����2��������;7������������ ����� ��.\� ���� �����
���������� ���A��7��� �����������������A����2���������������������
V�������#�������� ���.����91������ ��� ��2�����������#��.���
�8�� ��������������&�������������� ��2����� � �������� ����������������
������ A� � �91� /� ���7����� ��� � �,N��������� ���� ����#��� ��� .�� �
�����������8�A������ ����� ������ ����)��������� ��2A����������� �������
��������������,N���������������� ������������������������<�� �������
������ ��A� � 7�� ��� �91� �� �� �� ���0������� ��� �$,,N��������� ����
���������8���
5��� �� %��6� 66<� ��� �� 7�� ���� �91� �� �8�� �� ������ ���������������
65
20 30 40 50 60 70 80-4900
-4850
-4800
-4750
-4700
-4650
-4600
-4550
-4500
-4450
-4400
E (k
cal.m
ol-1)
T ( ºC )
Proteína XBC XTL
��
�
20 30 40 50 60 70 80
-1900
-1850
-1800
-1750
-1700
-1650
-1600
-1550
-1500
-1450
-1400
E (k
cal.m
ol-1)
T ( ºC )
Proteína-solvente XBC XTL
�
5��� �� %�"6� � ��2�� �� ������ � ��� �� 7�� ���� �91� �� �8�� �������� ���������������
5��� ��%�(6�� ��2�������� ����#� ��������7�� �����91����8�� �������� ���������������
66
5.2 Conclusões �
6� ������' ��� �� �2� ��� � ���0������� ��� �������� ����/���� /�
#������A������� ����2���A����������������#���������#� ����6�7�� ���
�91� ����� �� ����� ��� �� ����� �7�������� ���� �������� 3������������ ����
������� U� �8�A� �7�������� ���� ������� ������ ��� 2� ���� �� �7�������� ��
����3�����;0����6�� ��2����������� ��������������� �����U�� ����������
66<� ��� �������� �� ����� .�� ��� �������� 3������������ �� ���0����� ����
������� ��� ��� � ���0������� �� �91A� ����� �����#���� ��� ��#���� �� 1:� ��
�� ���� ��� �A� ����� ����� ��������� �� ��;7���� ������A� �� ��0/�� �������
������� �����0������� �� ���#� ��� �� ���� ���91������� ��A� ���������
�7�������� ���� �������� 3������������ �� ���� �� �91� ��#�� ���� ����� ����� ��
�����.������������� ������#���������' ���������������0�������A����/����
������ ���� ����������� ��� � ����)��� ������ ��2� ��#�� ���� �������A�
� #����2 ��� �� 1:� ����� 6�� � ��2��� ��� � ������� ������ ��2� �� ������ ����
�����������
Referências Z�[�9��V��������A�-��<�� �#� A�E��&��-���A������ �����A�(A��� �A�?�**(@��
Z�[�E�������0�A�b��"��"���� �̀A�"!���!��� �!����!%��"�A�$�*�A�?�***@��
�
�
�
�
�
�
67
Capítulo 6
Ligações de hidrogênio �
6.1 Histórico
+����� ����)���� �������/������ �� ���2����3����7�������� �����
�����*������K�� ���Z�[��&��� ���������A�P �� ���� ���������� ����)��� �����
�� �������� ��� ���H#�4 ������ ����I�Z�[A�.����������������;��������������
����� X�� ������2�������3����24 ��������*���"�������P � ����� Z [��������
������������������� ������������.����������� ������H���� ���I�
���������#����� � ����)��� � ����������������7��������������������������
����)���� <2���)��� ��� .�� �� ������ ��� 3����24 ��� ��� �� �� ���� ����� ����
� ������� ����� ��������� ��� �����A� ��� �*�,A� ���� :22� �A� 1������ ��
-���0�3A� ��#/�� ��� ���� ������� ��� ��.����� ������� �� ������� Z%�$[�� � 6�/�
� ���A� ����� �� X�� �� ��� ��������� � ���� ������� ��� ���/���� ���
����� �#� � 3�� �� ��� ���� �� ����� ��� �� ���� ��A� ������� #2��� �����
�����������.����������������+�������* ��.��1� ��V�� 2A��� ������
����������� ��0�3��H6�K��������1�2�)���d�����I� � ��������� ������
��2�������3����24 ������� ������3����24 ����Z([��
6���������A������������4 �������� 3����� ������ ��� ���������1:A�
������ ��0�3��� ������ ���� #����A� ����� � �7�������� ��� H ���������I�
����� ���� ������ ��.����� ��������� Z�[A� �� ������ ��� �������� ����/����
�������������������������� ����� �������������������� ������?���3��B�
�� 3/������α@� Z*[� �� � ��������� �� ������� ��� ���� 3/����� ��� &K6� Z�,[��
&���.����#������������������������*�,���*(,A� �.��3�#��������� �
1 Os termos “ponte de hidrogênio” e “ligação de hidrogênio” são corretos. O termo “ligação de hidrogênio” tornou-se mais usual a partir da década de 40. Atualmente há muitas discussões sobre esse tema, na qual, propõe-se que o uso do termo “ponte de hidrogênio” é quimicamente mais correto para descrever uma interação entre 2 átomos mediada por outro átomo, no caso o hidrogênio.�
68
����������� �����A� ��������0��.����A���� ������ �����#����U�����.����
���V�� 2�������L�� #��#� �������� ����������1:� �������� ���������������
��������� �A����������0���Z��[A�����2� ��Z��[A�3���2��0� �Z� [A�.���� �Z�%[�
�� ����� +���� � �� ����� � ���A� .�� ��0��� �� ������� ��� �� 1:� ��F��
������� �������� ����)�������A����������� ����)���� �������������A����������
������������ ����� ����)������.���������������� ������0��.����A������
��� ��� �#���� ���.������ ���������� ������������������ ���d ���
#����� 1:� ��� F ��A� ��� �� ��� ���� ���� ������ ��� .�� ��� �����
� ��#����� ���� ����� �� X�� �� /� �� 3������ ����� ��������#����A� �� ��FA�
||||1�
=− ∆∆
n
iLHLHn GG �� ����� �� X�� �� /� � ������#���� ��� � ���� ������ ���
�� ��.\4 ������7���4 ������1:��
6��1:��4��������7���#�� ���� #����2��������������#������/� ����
��;����� �� �7������ ����� &� ���� ���� ���������� ����' ��� .' ���� Z��[A� �
�������� ��� ������� Z�$[A� � ����� ' ��� �2 /���� ����� Z�([� �� � ��������
��������Z��[��������/� �����4������������2���������� �����������#� ����
����� ������ � ����)��A� ���� 0��� ����� � �� ������' ��� �� � ��� ������
�� ������.����J0��.������6����.������������� �������������1:�/����� ����
������ �� ���� �����������2��A�� ��� �������� ������
G��1:��� �����������6���8�.������� ��������� �2��#����������
.���������������3����24 ����C�������6�/�2����� ��������������������������
��;�� A�������������2���������������:A�� . ���8A�.����#�����������������
��/��� �� ��#���� ��� � ���2��� ���� �� 2���� 6�:A� /� ��������� ����� �� ��������� ���
��;�� ����������������������������;� ���0����������� ����������� �����
1:A���'�������2���/����������������' ����6jjjj8���:jjjj8�����' 2���6�:jjj8�
���� ����������� ��� � ������������ ��� �� 1:�� � 6�/�� ���� ��'�������
2���/������� ������A� � � ��2�� ��0/�� ����� ���� ��� ��� ���������� �����
� ����)����6��0���$�������� ��������������������������� �������������1:���
�
�
�
69
4��������6�&����� �������������1:��������������������
* �� �������� 5� ��� = �� � ���! ��� 5 ����
�0��,���-�
M�����6k:jjjj8�,������-�
/� ��������� �
* ����,N��������-�
l,��$�
�(,���,�
+�����
���%,�
,��$�,����
� ,��(,�
"������
%����
m,����
*,�� ,�
+���
l%�
������
�
�
K��� 3�� �� ��� ����� ������� � ���� ��� ��4�� ������ ��� 1:A� � ��������
���������� �� ����������#�������� ���������������� �������������1:��6��1:�
��������� ������������������������������������� �A������7�����A�.����� ����
2�������0� ������� ���� ��������������� ������nCjjjj:kK���
C� ������ U�� � �����)��� � ��2/����� ��� 1:� #��� �� ��� �0����� ����
���' ���.' ���A�.����� ����2� ������������ �����������A����/��/��������
�� �� 3�������������<�������2� ������ �� ����������/������ ���#� ���
���� � �����#���� U� ���' ��� .' ����� ������ �������� ��#��A� � ���A� ������
�������� ���� �������� ��������� 6� # �2��� �� �������� �������� /� �
�����0������� U�� ������������ ������;����� ��� ������� #�� ���' ���
���������A� ��#���� �� �� F ��� ������� ���#�� ��� �� ��2��)��� ��� �� ���
��������� .�� ����� ���� �0������ 6�� 1:� ���� �������A� ������ .��
� ������� ��A� ����� ����� ��� ����A� � ���� ��� .��� �� ����� �������� /� ��
E-C"C<*$� 6�� Z�*[�� 6�� ������� ���� ����� ��� ���� � ����� �� �� ���
����/����� 2���/������A� ��� ����' ���� �� ' 2���A� ��� ��� ��������� ��� 1:�� 6��
1:� ��� ������ ��������� ����� ��� 2���/������� &� �������� ����� ����� ����/����
2���/������ �������� � � ��2�� ��� � ������� � ���� ��� ������� � #��#����� �
1:� ����
�
�
�
�
�
�
70
6.2 Ligações de hidrogênio intramoleculares
6�� ������� ��� 1:� ��� ����� �������� ������� ��� ���� ��2�)��� ��
���� ���A��������������������������������' ������1:� ����������C������ ����
����2�)�������.���������� ����� ��������� ��6��1:� ������������������ �
�����>��������� ������������� �����?88@A��������� ����������������?8<@���
����������������������?<<@��6��� ����)���� ���������������������2���
����������������� ������� �A�������3#� ��������������1:� ���� ����������
2����A������7�����A�� �������?k�CC�jjjj: K=k@���
K������������������1:� ��� ��������������,D���������������
����/��� ��� �� ��� �� �.���0���� ?������� %@� �� ��� �� � ���#��� ��� ������
��������
�
6.2.1 Resultados e discussão �
6.2.1.1 Xilanase XBC
6�� ��2��� $��A� $��� �� $� � ����� ��� �� Q����� ��� 1:� 88A� 8<� �� <<�
��������#�� ��A� ���������� ��� ������ ���� �� ����/���� ���0��������� C� ���� ���
� ����/���.������� ������� Q��������1:� ��A���������������88���� �����,�
��������8<���<<��C� Q��������1:�88����� ����������� ���� �����������
���� �������������A�� . ���.����1:�8<���<<��������� �����,�����A�
�� � ��� �� #���� ��7���� U� ��D��� C�� ���� ���������� ����� ��� ����� ���
Q���������1:�88A�8<���<<�����������3 �����K��2�����. ���������1:�8<�
��<<������ ����������#���)��������������������.��U��1:�88�������/�
���� X�� ��2�������1:A����/��������� ����� ��1:�� #��#� ����������
��������������6��1:�8<���<<������������ ��#����U�� ��2���/����A�����FA��
��#��� �����������������������#����U�����������������.������1:� ���
��F�� ����� ��0����� 6�� ��2�)��� 3/����� �� ����� ���� �� .�� ����� ��� �� ���
Q��������1:� ����6� ��2����3/���������� ������#����������1:�88A����������
���������� ���#��A� � . ��� .�� ��� �� 1:� 8<� ����� �������� �,�
71
��2�)��� � ��D�A� ���� � ��� 2����#�� ��� �/� $�D��� C� Q����� ��� 1:� <<� /�
0�7�A��� ������ ����������������������6���2��������� �������� ������
���.��%�1:� ��������������������?88A�8<���<<@��� ��������7�������������
�������
6��� ��2����/�������1:� ���������������������������� ���A�������
��������A� ������ ����� ���� �� ��2��� $�%A� $��� �� $�$� ���88A�8<� ��<<A�
��������#�� ���� �� ����� ������ ��� ���#���A� �������� �0���#�� .�� �� 1:� ���
����� �������������������� ���A������������?88A�8<���<<@A������ ���#������
�/����������3 ���W�≅����%N��������������1:�88A�≅�� �,N������������8<����
≅� � � N������������<<��K� ��2��������� ��1:� ��� ������ �������#�����.��
������������� �����6��1:�8<���<<������������� ��2������� �2��#�A������
�2 �� �������� ?���� �7�����A�E�� �� 6��@� ����� ��� ����� ������ ����2�A�
��� ����� ���������������#��
�
�
20 30 40 50 60 7005
101520253035404550556065707580859095
100
Nº d
e LH
BB
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
�
�
�
�
�
5��� ����>�KQ��������1:�88� ��8���
72
20 30 40 50 60 700
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
N°
LH B
S
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
�
�
�
�
20 30 40 50 60 700
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
24
N°
LH B
S
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
�
�
5��� ���">�KQ��������1:�8<� ��8���
5��� ���(>�KQ��������1:�<<� ��8���
73
20 30 40 50 60 70-4,0
-3,5
-3,0
-2,5
-2,0
-1,5
-1,0
-0,5
0,0
E ( k
cal/m
ol )
BB
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
��
�
20 30 40 50 60 70-7
-6
-5
-4
-3
-2
-1
0
E (k
cal/m
ol) B
S
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
�
�
�
5��� ����>�� ��2���/������1:�88� ��8���
5��� ���%>�� ��2���/������1:�8<� ��8���
74
20 30 40 50 60 70-7
-6
-5
-4
-3
-2
-1
0
E (k
cal/m
ol) S
S
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
��
�
�
�
6�� � ��2��� ������ ����� ������� ��� ��� �� � ��2��� ��� 1:� ���
��������� �� ���� ��� ��� ���� ��A� ��2��� $�(A� $��� �� $�*� ��� 88A� 8<� �� <<�
��������#�� ����6 ��� �����1:�88A��� �������.�������� ���� ����/���.��
�7�0������� ���0������A� ����� � ��� �� � ��2�� ����� ��� ���7����� ������
�� ,�,N��������A� ��� #����� ���� ����#� ��� .�� � � ��2�� ����� �0���� ���
1:� ��� ���� ���� ���������� �� ��� ���� 6�� ��2�)��� 3/����� �� ����� ���� �� �� ���
���0������������1:�88A������ � ���� ��2���≥��%,�,N����������6��� ��2���
���������1:�8<���<<������� �������#��.�����1:�88�������F������#����A���
1:� 8<� �� <<� ���� � ��#����� ��� ���� ������� ��#���� U� ����� �� ��� 2�����
����2���A����/������������� ��� Q�����.����1:�88��K��0� �������A���
1:�88����������������� �����������0������������������������ A������
�� ���0��������������������������0��������������� ���
�
5��� ���>�� ��2���/������1:�<<� ��8���
75
20 30 40 50 60 70-300-280-260-240-220-200-180-160-140-120-100-80-60-40-20
020
Ene
rgia
tota
l BB
( kc
al/m
ol)
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
��
�
20 30 40 50 60 70-100
-90
-80
-70
-60
-50
-40
-30
-20
-10
0
Ene
rgia
tota
l BS
( kc
al/m
ol )
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
�
�
5��� ����>�� ��2����������1:�88� ��8���
5��� ����>�� ��2����������1:�8<� ��8���
76
20 30 40 50 60 70-100
-90
-80
-70
-60
-50
-40
-30
-20
-10
0
10
Ene
rgia
tota
l SS
(kca
l/mol
)
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
�
�
�
�
C���������� ������� ��������#���������������0����������7�� ����
/� ������A� ����� ��������� ���F ��� ��� ������ ���� ���� ���� 0��2���� ������
������������ �����K���������%��0���#�����.����������� �������� ����
����� ���#�������������6���2������������������������#������������ ���� ���
��2������.����������������������������A� ���������������������A�
��F���� ���#�������������������������#����C����� ���� ������0/��
/� ���� ��� �� ���#��A� ���/������� ������ �������� ��� ����� #�����.�� ��2��
�� ���� ��� ���A� �� ����� ��������� ���7�#����� 6� ��2����J���7�0������� ����� ����
�����������-"<&�������������C����#���.���������/����������������������
����� � ����� ��� ������ ��� ���� �� � ����)��� .�� ��� ������� �7������ ��
������ ���������� ����)������� ������������������������� ����A������
� ����)��� ���� �� 1:� ���� 8�7��� ���#���� ��� ��� �������� ��� ���� ��������� ��
� ���A�������������������1:� �����
C�������������������' ����������A����������� ���������Z�,[A����>����
�������� E�(�� �� E��(�� .�� ��� ����� ���;����� �� ��������� �����J0���
��������#�� ��A����������6�2���A����� F ����������������� ��9L�$�A�9L�$*A�
5��� ���7>�� ��2����������1:�<<� ��8���
77
9L�(*A�9L��,A�9L��$$���9L��(%��������� ?��4�@�������� ���9��*A�9��(����9����*��
6�� ��2���$��,���$��������� ������#��)����� ��2�����������A� ����� ���
��������� ����������)������������������������������������������� ����������
��1:� �������������������������������������������6���0����$�����
$� ������ ��������)�����������4 ������O A�+�A�����������������������1:�
88� �� <<� ��������#�� ���� 6�� 1:� 8<� ��0/�� ������� ������A� ��� �� ��
�� ��2���� ���� �������� � ��7� ��� ��� � ��D�� �� � 3��� $�D���6�1:�8<�
������������9L��,�<��� ,�����+��l��,O ���
�
�
�
�
�
5��� ����8>�R���������������������������� ��� �����8������� ����������������.����������������������������C�������������#�����3����������E�(������(�A��������������9��*A�(������*A��������������9L�$�A�$*A�(*A��,A��$$������(%���
5��� �����>�R�������� �������������������� ��� �����8������� ����������������.����������������������������C�������������#�����3����������E�(������(�A��������������9��*A�(������*A��������������9L�$�A�$*A�(*A��,A��$$������(%���
78
4�������"6 +��?O @����1:�88������������������ ���� ����������#����7�� ����8��
*��9�33�K�:jjjjjCn��
"%D�� (%D�� �%D�� %%D�� %D��
��>=�'��:BA�
'��B@���:A>�
��:A@�'��B@�
'��:BA���>=�
��>?�N��:>@�
N��:>@���>?�
��@;���:A@�
� :3;���@;�
��:>>���63�
��::A��� :A=�
�� :A=���::A�
'��B;���B?�
��B?�'��B;�
��?�N��3B�
N��3B���?�
��B:����:>=�
��:;@���:A?�
��:A?���:;@�
���:>=���B:�
*$� �
��� �
*��(�
*$� �
*$�*�
*(�*�
*��,�
*,���
(����
*%���
�����
* �*�
*��,�
* � �
*(���
(��*�
*�� �
*(�%�
(*�(�
*(���
*�� �
*����
*$�*�
*%���
*����
*�� �
*����
*,���
*%���
�%���
�*�%�
*,�$�
*����
*$���
�����
* �%�
*$���
�%���
*����
*%� �
*%�$�
*(���
*,�,�
*$�*�
*��,�
�*� �
���%�
*��*�
�%���
���$�
*����
*$���
*(�%�
� ���
* ���
*$�,�
�(�(�
*(�*�
�����
*����
*��$�
*%���
*(�*�
*(���
�����
( �$�
*%�%�
((���
*��,�
*����
* �$�
*$���
�(���
*%���
*%� �
���*�
*(���
���,�
*��$�
*$���
*����
*����
*(���
�����
((���
*%�$�
(����
�*���
*�� �
* ���
*��*�
*,�%�
*%�,�
* �*�
��� �
�
79
4�������(6�+��?O @����1:�<<������������������ ���� ����������#����7�� ����8��
*��9�99� "%D�� (%D�� �%D�� %%D�� %D��
��>=�'��:BA�
��>?�'��B@�
��B:�'��B@�
��@;�'��:BA�
��>?���:>>�
��:>>����::?�
��:>>�'��B@�
'��B@�� ::B�
'��B@���@;�
��:A?�'�:AB�
�,���
$����
���%�
�(�$�
���((�
��
��
��
��
��
*��,�
�,���
����
�$���
��
�����
��
��
��
$��*�
*(���
�(���
��
�$�$�
��
��
��
��
��
$ �%�
*$�*�
%�� �
��
�(�,�
,�*�
��
���*�
��
��
$%�$�
* �*�
�(���
��
��
�$�*�
��
��
,���
�*� �
%��,�
�
�
C�.����� ������1:� ��������� ������������������4 ���A�+���9������
1:� 88� ����� ��� +�m(�O A� �� ��� .�� � ������ ������� ��� ���� ��� *,O � ���
���������������������������C���������������������� ���.����1:�88�
���� ��� � ��� ��� ������' ��� ��� ��2����� �� ����� ��� ����A� � �� ��� �
� ��2������ �� ������� ��� ������ 6� ������#���� �� ������� ��� ����A�
�����F�� �����������A� /� ������ ��� � ������ ��������0�������. �������
��#����� �� ������ �� K����� ���� �� ������ ��#�� ��������� ���� ��� �� ���#���
��#���� � �� ������ ����� ��� 1:� 88� .�� /� ������#�� ������ ��� ����
������������
C����������������� ���������������� ������������' ���������������
������ �������������1:�88�����#���A� ���� ��� ������������� ��2�)����C�
�������9L��(%�/���.�������1:�88������� ����������4 ���A�� ����%,���$,O ��
������ ��������4 ��A������������U��������1:� ��A������#����������� �� ���
��� ������� 9L��(%�� 6� 9L��(%� � �� ������ �� ���� ��� � ���A� F���� ��� ��
���7�����������#�����?��2�)��������������7�0������@A��� ��� �����������B��
C� ������� 6�2���� ����� ��������� ����� ��A� ���� ��� �� 1:�88� ������� ����
������������ ����� ���0�������� �� ��������2������������� ������������
� �����K� 3��1:�<<�����������������������������1�2��������������.��
����� ������� ���� ������' ��� �������� ��� /� � ��� ��� ���� �������� ���
80
1:� ��A� ��� ������ ������� ������ ����� � #��#����� �� ����� �� 6�2���� �
��#����� � �������� �� 7�� ���� �8��� ������#����� �7������ ���� ��A� ����
������� ��� ������ ������ ����2��� Z�,[A� .��� ��� $�O � � ��#����� 0���;2���
���������� ��#���� U� ������ �� 6�2���� ��� 6� A� �� � 3�� �������� �
��#�����. ����6�2����/��� #�������1L���C���FA�����������������2��
������#�� ���/�� ��� ���������#������������A����/����������������#��
���� ������' ��� � �������������� ��� �0�����A� ����� � 3�� �� ��� ��� � ����
����������
6�� 1:� <<� ���� �� ��� ���.\� ���� .�� �� 1:� 88�� C� ����� ��� 1:� <<� /�
� ���� �� ������ ������� ���� ����� ��2����� .�� �����0������ �� ���� 3����� ���
������������0�������������������#���6��1:�<<����������� ��������.����
.�� � #��#��� ��� �������� 9L�$�A� E��(�A� 9L�$*A� E�(�A� 9L��,� �� 9����*�� C��
��������9L�$�A�9L�$*���9L��,�������1:�<<��������������������������E�(����
E��(��� V����#���� ��� � �� ��� �� ������ ������� ������� �������� ��
���� �������.��������������������������0������ �����������������
Z�,[�����������0������������ ���� �� ���������� ������������ #��#� �����
������7�� � �����0�����A� ��� ������ ������� ��� � ��2��� ��� � ����)���
� ��������������6��1:� ��������������� ���.����������������9L���4����
������' ��� � �� ����A� ����� ���� ����� � ����� ��#���� ��� �������� ��
� �� �����������������1:�88���<<�.��� �/�����2���������2�������������
����������
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
81
6.2.1.2 Xilanase XTL
C������������0����������7�� ����91������������ �����������������
����������������������#�������8����
6�� ��2��� $���A� $�� � �� $��%� ����� ��� �� Q����� ��� 1:� 88A� 8<� �� <<�
��������#�� �������7�� ���������������91��6���������� �7�� ����8�A���
���� ���� ����/�.������� ������� Q��������1:�88A�8<���<<���
V��������0���#��.���. ���������1:� ������������ ������ ���� ����
/������ ��91����.�� ��8�� �����4�������?88A�8<���<<@����/��������������
��� ���������1:�8<���<<��+���������������������$,���2�)���88����
��� �� ��� ���������� ���A� �� �� �� ��� � ���� .�� � ���2�
�����������C�� Q���������1:�8<���<<�#�������������������������.����
1:� 88>� /� �� ������ ��������� ��� .�� .���� �7�0���� ���� �8���
6���7����� ������#���������1:�8<� ������������������������U��8�A�
�� ���.������7���A��������� �A�������������D�������������U����2�)���<<A�
������������������#��������,���2�)�������� �7�� ����91����.�� ��8���
����� ���������������� ����� ������7�� ���A����������0���#��.��
�� ���� ��� 1:� 88� ���� ���� ���� ����� ��� Q������ ��� ��2�)��� �����
��;7����A� ���� �7�����A� �� ���� ��� ������ ����� �� �� Q����� ��� 1:� 88� ���
���7����� ��� ,� ��� �0�� 7�� ���A� ��� ����� �� ����������� K������
���� ������ Q��������1:�8<���<<����� �����#�� ���������� �7�� ����91A�
�����7������������� ���������� ����� Q��������1:�8<�/���������7�� ���
�8���
82
20 30 40 50 60 700
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Nº L
H B
B
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
�
�
�
20 30 40 50 60 70
5
10
15
20
25
30
35
40
Nº L
H B
S
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
�
�
5��� ����">�KQ��������1:�88� ��91��
5��� ����(>�KQ��������1:�8<� ��91��
83
20 30 40 50 60 700
5
10
15
20
25
30
35
Nº L
H S
S
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
��
�
�
6��� ��2����/�������1:� ���������������������������� ��������2�)���
�� 7�� ��� �91A� ��� ��� ��������A� ������ ����� ���� �� ��2��� $���A�
$��$� �� $��(� ��� 88A� 8<� �� <<A� ��������#�� ���� �� ����� ��� ��� ���#���A� ��
� ��2��� �/���� ��� 1:� 88� ��� ������ ��� ���� ���� �� ��2�)��� ���� �����3 ����
U.����������������� ���2������������K���������1:�8<���<<A��0���#����
.�� �� � ��2����/���� �0����� ��� � 7�� ��� �91� ������ ������ ��7� ���
� ��2���.�����0����������8�A����/����#������������.�� ���������1:�
8<A����2�������������� ����� ��2���/�����������#����.�� ���������
���� ����������������� � �N�������������0/������������U��8����
�
�
�
�
�
�
�
5��� �����>�KQ��������1:�<<� ��91��
84
20 30 40 50 60 70-4,0
-3,5
-3,0
-2,5
-2,0
-1,5
-1,0
-0,5
0,0
E (k
cal/m
ol) B
B
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
�
�
�
�
20 30 40 50 60 70-10
-9
-8
-7
-6
-5
-4
-3
-2
-1
0
E (
kcal
/mol
) B
S
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
��
�
5��� ����%>�� ��2���/������1:�88� ��91��
5��� ����>�� ��2���/������1:�8<� ��91��
85
20 30 40 50 60 70-14
-13
-12
-11
-10
-9
-8
-7
-6
-5
-4
-3
-2
-1
0
E (
kcal
/mol
) S
S
T ( ºC )
polegar dedos palma helice corda
��
�
K� 7�� ��� �91� � ��2���� ����� /� ������ ���� �������� ������� .��
�� ��.\� ���� ����������������������1:�8<���<<��C�������������� ��#����
���� ����� 1:� ��� ���� ��� �������� 6��*(A� <��**A� �� <���,,A� .�� ��#���� U�� ���
���7���������������0/��1:�8<���<<�� ��������C��������6��*(��������
1:�<<������6�2��$�.������������ ������ ������ ���.��/A� �#�����A���
�� ��� ��� �� 6� �� ��� ��� � ������ � ���� ������ �������A� ��2�� $���A� �����
����� ���������������,O ���������� ���7��������������������$�D������
(,D�A� ���������;�������91A������� ������ � ��� �������������G��#���
.�� �� ������� 6�2��$� � �� ������ �� ���� ������ ��� ���� �� ��� ��� � /� ��
������ ��� ����� .�� �� ���0�� ��� �� �� ��� �� ��2����� ����� ��2�)��� ���
�� ���)��� 0�7�� �� ��������� ;����� V��� ��A� � �7���4 ��� ��� �� �� ���
��� � �7����� � ����� ��2����� ����� ��� ����� ���� ��� ��� ��� �� �91� ���
�������U��8���6��4 ������� ������ � ���� ���)���;���������������2 3��
������7�0������� �������������������������������� �������������� ���)����
�
�
�
5��� �����>�� ��2���/������1:�<<� ��91��
86
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
6�� � ��2��� ������ ��� 1:� 88A� 8<� �� <<� ��� ��� ���� ��J��2���� �����
������������91��6����������������������8�A������� ���� ����/�.��
�7�0������� ���0������A� ����� � ��� �� � ��2�� ����� ��� ���7����� ������
��%,�,� N��������� ?�,� N������������� ����#� ��� .�� � �8�@�� ���� � ��2�� /� ��
��0������ ��2�������������0������������1:� ����7�0������������� ������������
��� ���� 6�� ��2�)��� 3/����� �� ����� ���� �� �� ��� ���0������� ����� 1:� 88A�
����� � ��� � ��2��� ≥� �%,�,N���������� K�� � ��2��� ������ ��� 1:� 8<� �� <<�
������ �� ������� ������ ��� � ��2/����� � ���� �� ��� ����������������������� ���
7�� ����� ����� ���� ���A� ���� �� Q����� �� �����#���� ��� ����� ���
��2�)���8<���<<�������������������91��K���������1:�8<�������� ����� ����
�� ����� ���� ����� ��� �$,� N��������� �� ���� N��������A� ��������#�� ��A� ����
����#���� ��91����.�� ��8���C������������ ��������2�)��� �������� ���
� ��2�����2 ������#�� ��������� �����9������������ ��������2�)��A������7������
�� ��2����3/����A� ����� ��� � ��2������� ����#�� � 7�� ����91�� 6� ��2��
$��*��������� ��2����������1:�<<��������� ���J��2�)�����7�� ����91��&�
��������� ��� ��� 7�� ���A� ��2�� $�*� �� ��2�� $��*A� �� ������� .�� ��
������������� ����������� ������� ���J��2�)���� ���A���� ���������� ���7�
��� ���$�D����������������� �������� ��A���1:�<<�����������0�������.����
1:�88���#����U��������0�����������#��� ���������2�����������A����� ��A�
� ����� Q�����. ����� ��2�����1:�<<��������2� ��������)������� 2��
5��� �����>�1������������� ������ �6��*(�6�2��$��
87
����������������0/���������� ���������������6���� ����������� ���
�����0���#��� ������ ��������A�� ����� ��2��#����������� ,�N�������������
� ������ ��������A� � . ���.��� ��2����3/����� ����� ��������� ����
����� � ��2�� ��� �0�� �� 7�� ����� &� ���� �� ���� ��� ,� �� %�� 1:� <<�
��������� ��� ����� ��� 7�� ���� �8�� �� �91A� ��������#�� ��A� ��������
��0/�� �� �� ���� ��� ��� 6�� �� ���� ��� �� ��������� ������ ������ ��� �
�0���$�%��
�
�
20 30 40 50 60 70-200
-180
-160
-140
-120
-100
-80
-60
-40
-20
0
20
Ener
gia
tota
l SS
(kca
l/mol
)
T ( ºC )
dedao dedos palma helice corda
��
�
�
�
�
�
�
�
�
5��� ����7>�� ��2����������1:�<<��������� ��� ��91��
88
4���������6�� ��2����/�������N�������������+��?O @������ ������� ������������
23��
������������ "%F�� (%F�� �%F�� %%F�� %F�� �8F��
6�2( �6����*� ����%�?�$�,@�
�� �*�%�?����@�
��(���? ��,@�
�� ��
6�2� ��6��� � ����*�? �,@�
���*�? *�,@�
��(�%�? (�,@�
���%�? �� @�
���$�?� ��@�
��
6�2�*�6���,$� ���%�?�(�,@�
�� ���(�?� �,@�
�� �� ��
6�2� $�6��� � �����?� ��@�
�� ���*�? (��@�
�� �� ��
24��
6�2���6���*�� ���(�?��� @�
�� �� �� �� ��
6�2���6����*� �� ���?�$��@�
�� �� �� �� ��
6�2�%��E�*�� ��*���?*���@�
�� �� �� �� ��
6�2��$�6��*(� �(���?(��,@�
������?$ � @�
���� �?%%�,@�
����$�?�,��@�
������?% ��@�
��
6�2�%��6������ �����? �� @�
�� �� �� �� ��
6�2�%��E�*�� ��$�,�?$,��@�
��$� �?����@�
������?(���@�
����*�?$$�,@�
��$���?$,��@�
��$�$�?�,��@�
6�2�$��6����(� �� �� �� �� �*���?�,� @�
��
�
�
&���������2���A����� ������� ���������� �7�� ���������������91�
� ������������4 ��������������U���������������8��. �������� ��2�������
�2��#�A� �� �� ��� ����� ���0�������� 6�2��� �� ���� ��� �� ������
��������� �� ����� ��2���A� �������� ��� �� 2��2��� �X ����� C��
2��2�����X �������������������������������6��� J6�2� $J6�� �� ��������
�8�� �� ������ �������� E�*�J6�2�%�J6���% J6�2�%�� � �91�� 6� ��D�� ������
2��2���� �����������0��� �������� �� ���� ����A� ���/���������� ���0�������
�������� ��������������������/������������ ���2���� ����� ������
2��2�����X ����A������0/������� ������� ��� ��#������6���7���)��������
������ ������� ������� ��6�2� ��6��� ���6�2( �6����*� ��8���A�6�2�%��
E�*����6�2��$�6��*(� ��91��V��� ���������������������������������� ����
��� ������0����7�� ���A��0���#����.������ ������� ��6�2� ��6��� �
?�8�@���6�2�%��E�*��?�91@��������7��� ��� ���������������&����������
89
�� ��� ��� � ���� ��2���� /� �� ���#�� ��� �0�� 7�� ���� ?��2�� $��,@�� 6�
�� ���#��������������.�����0��������������������� A���������� ���
��� A� /� �� ������ � ������� ��� .�� ����� ����� ��#�� ���� ���� ���� ��� �
� �� ���� �������� �� �� ��.\� ���� ��� ��� � ��������0������J��#�����
�������� ��6�����)�����������4 ��������� ��2����/������������ ������� ��
������������ ��/���&� �0���$�%���������#���.����� ������ ��� ���#��/�
�������������#��� ��91����.�� ��8���!������2 �����.�������� ������ �
����� ����� ��� �� ��� � ����� ����� ��� ������ ?����� +�@� � ���2� ��� ����
����#�� ��� � �91� ��� .�� � �8��� � 6�� ����� ��� �� ���� ��� �� ���
� �� ������������� ������2�)������8�����91��6��� ������ ��������� ��8�A�
6�2( �6����*� ����� ��0�7� ��������� �����4 ��� ��� ����� �� ���������A�
�� � ��� �� ��7���� ��� �O � ��� �����4 ��� � ��D�A� � . ��� .�� � �� ���
��� �6�2��$�6��*(� ��91��� ������ �������% O ?$�D�@�������7�������
(�O ?��D�@� ��� �����4 ���� K� �91� �� �� ���� ��� �� 6�2�%��E�*�� �� 6�2��$�
6��*(���������;7���A��� ���0� ���� ������������2������������2���A�.��
� 2��0� ����� ���� ���� ����� ���A���� ��� ?����� � ������A� ��;7��� �� ���� ���
� ���@���������
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
� 5��� ���"8>�&���������������������� ������� �������������0������� ��7�� ���� �8�� �� �91�� 6�� �� ���� ��� �� ������ ���� �� ���#��� �����7�� �����
90
6� ��2���� �������� �� �91� ��0/�� ���� � #����2��� C�� �������� ���
������' ��� �������A� ���������� � �������� Z��[� ���>� ��� �������� E��$� ��
E��(��.���������� ���;������� ��������������J0��� ��������#�� ��A���
�������6�2���A��� �� F ��� ��� �� ��� ������ �� 9L�( A� 9L�((A� 9L���A� 9L��(�� ��
9L���,A���������� �A�9����A�����2���� �E� � $��6���0����$��A�$�$���$�(�
����� �����+�?O @�����������������������1:�88A�8<���<<���������#�� �����
�
�
4�������%6�+��?O @����1:�88������������������ ���� ����������#����7�� ����91.
*��9�33�K�:jjjjjCn��
"%D�� (%D�� �%D�� %%D�� %D�� �8D��
'��:B@���B3�
��:3B�'��@>�
��B3�'��:B@�
'��@>����:3=�
��:@�N��6>�
N��6>���:@�
��BB�.� :B6�
.� :B6���BB�
��@@���:3B�
� :3?���@@�
��B?���:BA�
��:@;���B:�
��:A;�'�:3>�
��:AA��� :36�
�� :36���:AA�
'�:3>���:A;�
*(�*�
* ���
*$�*�
*��(�
(����
�,,�,�
*��(�
*,�$�
*����
* ���
*(�*�
��� �
*��(�
�,,�,�
*����
*(�*�
*$�%�
*,���
*����
*%�*�
*��(�
*��*�
* � �
*��$�
*����
*(�%�
(%�%�
�����
*����
���$�
�(�(�
* ���
�%���
*%���
*����
*��$�
*����
�$�*�
* �,�
*(���
*����
*��%�
$$�$�
�,�,�
*(���
( ���
$(���
*%�$�
�%���
*��*�
*��%�
*%���
(��*�
���%�
* ���
*(�(�
*����
*(���
��� �
%����
*(� �
$��$�
$ �$�
*,���
�����
*����
*����
*$� �
�$� �
�,���
*����
*��,�
*(�(�
*%�(�
(�(�
%,�,�
*����
���(�
(��$�
*,�$�
$ �$�
*,���
���(�
��� �
$ �%�
�,�,�
�*�*�
*��,�
*(�%�
*��$�
�,�,�
����
*��(�
���*�
�%���
�*���
91
4�������6�+��?O @����1:�8<������������������ ���� ����������#����7�� ����91��
*��9�39� "%D�� (%D�� �%D�� %%D�� %D�� �8D��
� BA�'��:B@�
� :?���:@�
'��:B?�'��:B@�
��@@�� :3?�
��:@;���B:�
+ �6=�'��:B@�
��=A���:BA�
��B:���:@;�
N��6>�'��:B@�
�,�
��
��
��
��
��
��
��
��
��
�*�
��
��
��
��
��
��
��
��
��
�����
,� �
(%�(�
��
��
��
��
��
��
��
��
��
$��$�
$(�$�
�%�$�
�����
��
��
��
��
��
*$�$�
��
��
(,���
��
��
��
��
��
��
% �$�
��
��
4��������6�+��?O @����1:�<<������������������ ���� ����������#����7�� ����91�
*��9�99� "%D�� (%D�� �%D�� %%D�� %D�� �8D��
��B3�'��:B@�
��BB�'��@>�
��BB���:BA�
��@@�'��@>�
��@@�'��:B@�
� :AB�'��@>�
� :>���:@�
��:BA�'��B�
��?>���@;�
��B?�'��@>�
��BB���B?�
��:AA�'�:3>�
��:A;�'�:3>�
*����
*%���
��
*����
,�,�
��
��
��
��
%%���
$%�$�
�� �
*$�*�
*$�,�
���%�
($���
*����
���,�
��
((�%�
��
��
��
��
��
��
*$� �
(��*�
���%�
�,���
��
��
(,���
��
��
��
��
��
���(�
�,���
((�(�
%����
((�%�
��
��*�
�� �
��� �
� ���
��
��
��
��
(%���
� �,�
��
*%� �
��
��
� �
$,�$�
��
��
� ���
��
��
*%���
$�� �
��
��
$��*�
(�*�
,�,�
��
��
��
��
��
��
�
�
�
92
C����������������������������������������������������7�� �����������
�������� ����� ���#���A�������# ���������������� ������������� ��2����
����A� ���� �7�����A� ��� �������� ��� ������ 2��'����� .�� ���� ����2����
�2��#�� ��������� F ������������ ��.�����������������������������F������
������������ 7�� ����8�A� �� ������ ���� ����� ��2���� /� � ������ ��������1:� ���
������ ������ �������� ��� ������' ��� ��������� � 6�� 1:� 88� .�� ����� ���
+�≅*,������������������� ��#�����������0������������������� �������
��2����� K�� ���� �� ����������� �91A� �� Q����� ����� ��� 1:� 8<� �� <<� �����
���������� ������2���A�����������U��8����9 ��� ��1:�8<���<<A������������
E��$A� E��(�A� 9L�( A� 9L�((A� 9L���� �� 9L��(�� ������� ����� ��� ����.�� ����
����������� �� �� ���� ��� ������ 1:� ��A� ��� ������ ��� �� <<�� 6�� 1:� <<�
�������� ��� ����� Q����� �� ���� ���)��� ��� �����4 ��� �� �����#���� ���
������� ��91����.�� ��8�A�����A������7�����A��� ��2�)���� ������������
9L�( �E��(����9L�((�E��$��V�������������.����1:�<<�� ����9L�( �E��(����
9L�((�E��$� ���� ���� ��� ����#���� �� ��� � �������� �� ������� ���� ��
�� ��� �� ���������� K� 7�� ��� �8�A� ���� �����3 ��� ������� ��� ���
��������9L�$����E��(���
6� ������� � ���� ��� ���� ���J��2�)��� ��0/�� ���� � #����2�� ����� 1:� ���
� ��������A�����FA���1:�� ������� �����6���0����$����$�� ������ �����1:�
� ������� ������������A�������� ����� #��#����� �����1:� ���������������#��
+�� ��� ��� ���������� C� ������� ?7@� �� �0���� $�*� �� $��,� ��� ������ �
�����������1:� ��������A�����FA����0� ��������������������1:� ��������
�� � ��� ����� ��� ������� O� �� � ��0� ��� ��� ������� O� ����� 1:� ��� ���� �
�� ���� ������������������
�
�
�
�
�
�
�
93
4��������6�+�� ?O @����1:�88� � ������� ������7�� ����8���6��1:������������ �����������4 ���������������?J@��
23��
/���������� ��P ��
�� �� ��o�� �o�� %�o�� ��o�� $�o��
�����%�?7@� �$��J*���� ����J*(�%� $���J*���� %�� J%���� $ �%J*$�*�$$��%� *��%� *%�(� *%��� *�� � *����� �$$� (*� � ��� � (���� (*��� ( � �
�/ ����������
%$��$%� %$��� $���� $�� � ���%� %�������
�%%?7@�*%��J*��%� *,� J*���� *,�*J* ��� *���J*���� *���J*����
� ��%�?7@�
*(��J*��*� *$� J�*�(� *���J����� *���J�(�(� *%�*J� �$�
�/ ����:/�����
%*��%$� (���� %���� *��� �� ��@B�>A� (%� � (���� $%��� $*�$� $ ���/ ����
������
@@�>A� (%��� �,��� (���� $ ��� %����
B@�:A>� *��(� *�� � *%� � ��� � ���,�@;�:A@� *,��� *���� *(�*� *(��� *(� �@A�:3;� **� � *��%� *,�*� �%�%� �����B>�:A>� %%��� (*�*� ( ��� $��� �����B@�:A@� *��(� *���� *%�$� *���� *��(�@;�:3;� *,��� *���� �*��� ����� �����
���
��������� ���
@A�:3A� **� � **�%� *��*� *���� *��$��
94
4�������7>� +�� ?O @����1:�88� � ������� ������7�� ����91��6��1:������������ �����������4 ���������������?J@��
24��
/���������� ��P ��
�� �� ��o�� �o�� %�o�� ��o�� $�o�� (,o��
���$,�
��,?7@�*���� *,�(J*%��� *�� J* � � �*��� *��%� ( ���
$���%�?7@�
*��(J*(�*� *(��J( ��� *(��J�%�*� *(�(� *$�*� *��%�
�/ ����09��� �
�������
���%� �(��� (,�%� �(��� ($��� ��
(%�*�?7@�
*$��J* �(�� �(�$J�*�$� �$��J�,��� ���J�%��� ���,� (*���
B6�?:� % ��� $,��� ���$� %���� ��� � � �*�B;�?=� � ��� %���� ����� %��� �$��� �$���?6�BA� *��(� * �*� ����� �(��� $$��� �,���@>�:3=�
*��*� *%�*� *��$� *%��� *$� � ��� �
@@�:3B�
*���� *���� *��%� *���� *(�(� *(�%�
?;�:3?�
*��(� *,�*� *�� � *,��� *�� � *��%�
@6�:3=�
$,�%� *��,� $$�,� %,�(� �� ��
@>�:3B�
* �(� *,��� *%��� *��*� *���� *��$�
@@�:3?�
* �(� *(�%� *��%� *(��� *%�(� *%�$�
�����
������/ ����
?;�:6:�
*��*� *���� **��� *��*� *��(� *����
4��������86�+��?O @����1:�8<�� ������� ������7�� ����8���
23��
/���������� ��P �� �� �� ��o�� �o�� %�o�� ��o�� $�o�����
A�6A� %$��� �� %���� ���� %�$�6�63� $���� $���� �*�(� �%��� %(���
�������/ ����
>B�@:� %��(� %,��� *�%� ����� �,���������:/����� (���$�� $��$� (���� ���*� ���,� ((�$���������� ��� @;�:3;� ��$� %�� � $,�$� ��� � ��
@?�:3A� *��$� *$�$� �(��� ����� (%�%���� ��������@?�:3:� ���(� ���*� ���$� �%��� ���(�:;:�:6=� $��(� �� �� �� ��:A@�:=?� ($� � (*��� �*��� �*��� � � �
���� ���:/�����
:A?�:=3� ,�*� �� �� �� �
95
4���������6�+��?O @����1:�8<�� ������� ������7�� ����91��
24��
/���������� ��P �� �� �� ��o�� �o�� %�o�� ��o�� $�o�� (,o�����
=@�:=A� *��*� ���$� $ �$� %,�(� %$��� %%�*�>6�:6B� �� %��(� %��� �%��� %��$� �(�(�
�/ ����:/�����
=>�:=A� ����� ���� �(�%� %,�(� %���� ��������:/����� �,��$$� �� $��� �*� � � � � �*�%� ��
==�:B3� * ��� $,��� %%��� %�� � %$�%� %,�$��������/ ���� ?A�:6=� ��%� �� �� �� �� ��
:3B�:>=� *(�*� ($��� $,��� �%�(� %��(� �������� ���:/����� :3@�:=?� *%��� ����� ��%� %���� �(�(� �(���
�
�
4��������"6�+��?O @����1:�<<�� ������� ������7�� ����8���
23��
/���������� ��P �� �� �� ��o�� �o�� %�o�� ��o�� $�o�����
6�63� $���� * ��� ����� (��(� $$�(�>3�@3� ����� *$��� *���� �*�$� �����=@�@6� %��%� ���� ,�*� �� ��
��
/ ����������
@;�:BA� �(�$� �$��� �%�(� �$�*� ����������� ��� @3�:;=� (*�(� $���� (���� ���*� %*������ ���:/����� :;?�:6=� ((��� ���%� �� �� ��
�
�
4��������(6�+��?O @����1:�<<�� ������� ������7�� ����91��
24��
/���������� ��P �� �� �� ��o�� �o�� %�o�� ��o�� $�o�� (,o�����
B�:B:� *%��� �� �� �� �� ��=@�:B3� *%��� ��%� �(�%� �%�*� �� ��
�/ ����������
@@�:B@� %�*� ���,$� �� �� �� ��/ ����:/����� >3�:6B� �� (� � �(�$� ��� ���$� �,�%���������� ��� ?:�::=� $,�%� ( ��� � � � $��%� �%�,� ���(�
�
�
�
�
�
�
96
&�� �0���� ��� $��� � $�� � �������� �� ����� .�� �� . ������� ��� 1:�
� ������� ���� ���� �����3 ���� ��� �0�� �� 7�� ���� ?�� ����� ��� �
��������� � ���� ��� ������� ���� ���@�� C� .�� ����� ��� �� ����� 2�� ���� ���
���� ��������2�)���� #��#���� �����1:�� ������� ������� ����� �����1:�88�
� ������� ���A� � �8�� ����� �� (� 1:� ��� � ���� ��� ���� ���� ������ �� ��� ��A�
�� ���.����91� �������� �� � 3��1:�88�� �������������� �����6��1:�8<�
��0/������������� ����� �������������� ���� ��8������ ���� ��91A��� ��
�������1:�<<�� �����91��������8������� ����� ����1:� ���� ����������
���� �����6��91������ ���� Q�������2 ������#�� �����������1:�88�� ����
������� ������������� �������.����8�A������� �����������2������������2����
?�����@A� �����F�� ���� �������� �������� ���� 6�� 1:�8<� ��<<� � ���� ��� ���� ����
� �����������A�����0����7�� ���A������� ������.\� �������.����1:�88���
���������� ��#����U�����������6�7�� ����8������� ����1:�<<�� �������
��������6��%?� ���@���93�% ?�����@�.�����0����������2����K������ ���K�
�91� � 1:� <<� �.�#�� ��� ? � ����� �������� ������@� /� � E�(?� ���@� ����
9L��(�?�����@A� .�� ����� ���� ��� �����4 ��� ���.�� �1:�<<���������������
K� 3�� 1:� ��� � ���� ��� ���� ���� � ���� �� ��� ��� ���� ��������� 6�� 1:� ���
� #��#� �������2�)����������3/�����������.���������� �������� ��� Q�����
�������� ����������4 �����
&�� �� � ���� 2���A� ��� ���� ����� ���A������� ����� ��� ���� ��� .��
���� � ���2��� ���� 1:� ��A� �� ��� .�� ���� ������� �� ����� ��� ������ ����
� ����� �� ��� 7�� ����� K�� ���� ��� 1:� ��� � ���� ��� ���� ���� � ���� ��
�����A� �0�� �� 7�� ���� ����� ��� �����3 ���� � ��2��� ��� ���0��������
?�������� ��2������1:�88A�8<���<<�� �������������� ���@�.��#�������� ��
� �%�N������������� �� ����� ����������K�7�� ����8�A���������������
������� ������ ��������� ���2� �������������� ������������� ������������.��
��91A�� ����� ����1:� ������ ��������� ����������������������#����� ��
�������%A� ��9��/��� ��� ���7�#��� ���.����8�A����/������� ���������
�����������0�����?����#��� ���H0������3I��� ������ �)���������@��6�
����� �����1:� ���� ����������� ������� ��� ?������������@��������� ��8��
�7����� �� ���� ����� � ���� �7�0��� �� �� ��� 0����� ������� ���� ��
���2��������������
97
e� ������ ��� �������� .�A� �/� ��� �#���� �� ��)��A� .�� �� ���� ���
��� ������91��7������ �����������������A������ �������.�� ��8�A�
.�������� 2�������.\4 �������#��� �����H0������3I���������A����� ����
��� ��?F����������@��K��91���� ���. ���������1:�� ������������������
������� ������ ��� ���������� ��������A� ������������ ������8�A� �� �����
�� ����� ��0������ �� �� ��� � ����� �������� ��� ��� ��A� F������ ��� �
�����0�����������������0��������������������
�
6.2.2 Conclusões
6�� 1:� ��A� F ��� ��� ���� �� �� ���� ��� �A� ������ ���� �� ��������
�����2�� �������� ����������������#������ �� �����������������/���
��� ������C��� ������ ��������� � ����)������� 2����������������� ����
�� ��������� �������� �7������ ���� �� ����3��� ��� �� ������ ����
��������0�������� �7�0���� ���� ��� ������ �� �� ����� ������ .��
��������3�� ��� �� ������� ������� ��� �� ���� ��� �����3 ��� ��
�� ��.\� ���� ��� ��� �� ����� ��#����� 0���;2���� V����� �� ���������#����
����.����.���� ��2��A�����2��� ���A��7�0�����#�������0��� ���)���
������#��� ���������A�����FA��� ��2���� �������������A��������
�� ��� �� ������������� ��������� ���������� ��� �� ��#����A� ��� ����
�����������K������� ��7��A���������������������������� ���A�� . ���.��
���3��������������������� �������� ������������+��������#������0������A�
��������������� #����2�������1:� ��A�.���7������2� ���������� ���� ������
����������������������������������6��1:�88���������� Q�����������3 ���� ��
��� ��� 7�� ���� �� ���� ������� ��� ��2��� ��� ����� �� ���������A�
��� ������ ��� ������� ����� �����������A�.��F ������������H�����IA����2����
��������� V��/�A� �� 1:� 8<� �� <<� �� �� �� ���� ��� �� �X������ ��� ������� ��
��� ������ ������ ��� � ���� �� 7�� ����� G�� Q����� �� �����#���� ��� �����
������1:� ��� ����� ����� ��� �� ���� ��� �� �������������� ��� � 7�� ���
������������ K� ����������A� � ����� . ������ ��� �� ���� ��� �� ����� ����
��0/�� U� ����� �����4 ��� ������ � ����)��� . ��� �������� ���� �
���������A� ��� �������� ��2����6������ ��2������� ������������������������
. ��� ��������� � ��2���� �������A� .�� /� ���� ��� ��2��� ��� �0��
98
7�� ���A����/�� ��������������1:�<<������ ���� ������2�����������������
������� ����� ��������������� �����������������������������������������
6���� ������� ������0����� ������ ������������#��.����1:� ��A���
�/������������������4 �����#������������#����������� ��.���������2���
�����������#���/���������� �������� ��&�����������7���4 �������� ����
��� ����������#���� �����������A���� ������ ��� ������� ����� ����������2��
/� ������ ������ ����������0�������������� ������ ����6������� ���������
�� ���� ��� �� ����� ��2�)��� ��#��� ���� ������ ���� ��� �� 2 3�� ���
��������0������A� #����� .�� � ����������� ����� �� �� �� ��� ��� � ����
��2����.��/��� ���#�� ����������A��������������������4 �������0/��
�� �� ��� ��� � �7��� �� ����#��� ���� ����� ��2���A� ���/�� �� ��� �
����������� K��� ��� ����� ����� ������� � �7���4 ��� ��� �� �� ��� ���������� �
����������� .�� ����� �� ��� � ���������A� ����� ������ ��� �����
��������0���� ��������� �/�������2�)�����2�����#�� ���� ��������������
�� ����� �� ��2���������� 2� ��� � ����� ��2�)��A� �� ���A� � �� ��� ����������
�� ���� � ��2���� 3/����� �� ���� ��� ��� ��� ?����� � ������@A� �� ��FA� �� ���� ���
��� ��� ����� ��0� � ��4 ���� �������� ������.������ ���� ����0��������
+��� ����� � ���A� .�� . ��� ���� � ���� ���� �� ������ .�� ������ 2��� �
��#��� ����� ������ ��� �� . ������� ��2��� /� � ������A� ������ ����
2���A������/�������' ���U����������Z�%[��
e� ������ ��� �������� .�A� ���� ������ ��� . ��� U�� � ����)���
� �������������������� �������� ����)���� �������������?������ ��2@A�
#����� .�� �� ���#� ��� ��0/�� ���� � �������� ��� ���0������ � ���������� ��
������ ���
�
�
�
�
�
�
�
�
�
99
6.3 Ligações de hidrogênio intermoleculares
K� � #����2���� ��� 1:� ���A� ����� �� ��������� �� �� ��� �������
����� �������2�����������A�������������������Q �������������� ������1:� ����
�������2���E��������������0/������������ ������������������2��0��
������#�����?�������3�����;0���@A����/�� ����������������������1:� ����������
����� ��� ������ �� �0�������� �� ����� ���� ������� <�� �� ���0��)��� ������
�������� ������������� ����)��������� ��2�F������� �������
6��1:� ��������������������������>��������� �������������������K�
����� ��� ����� �� ��������� ��� 2����� ��0� ��� �� �� � ��� ����� �� ��
����������������������2�����3����7���A���0�7�����A�2 ��� ������� ����
�
6.3.1 Resultados e discussão
As���2������$�����$��%A������ ����� ��2����������� Q�������������
1:� ���� �������� ���� ����� ��� ����� �� ������ ��� ��� 7�� ���� V�������
�� ������2� �������������� ����#��������������� ���������0����
7�� ����� d ��� �� ������ ������A� � � ��2�� ��� 1:� ���� /� ����� ��� ��,�
N�����������������#� ��91��.����������7����� ��� ,�1:� ������������
.����8���6�� ��2����������� Q�������������1:� �������������.� ��������)���
������� ���������������
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
100
20 30 40 50 60 70-800
-700
-600
-500
-400
-300
-200
-100
0
100
E T ( k
cal.m
ol-1 )
T ( ºC )
XBC carbonilas aminas secundárias grupos laterais
��
�
�
20 30 40 50 60 70 80-800
-700
-600
-500
-400
-300
-200
-100
0
100
E T ( k
cal.m
ol-1 )
T ( ºC )
XTL carbonilas aminas secundárias grupos laterais
�
�
5��� �� �"�6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2�������0� ���A� �� �� ��� ������ �� ������ ������� ���8���
5��� �� �""6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2�������0� ���A� �� �� ��� ������ �� ������ ������� ���91��
101
20 30 40 50 60 700
50
100
150
200
250
300
NLH
(inte
r)T
T ( ºC )
XBC carbonilas aminas secundárias grupos laterais
��
�
20 30 40 50 60 70 800
50
100
150
200
250
300
NLH
(inte
r)T
T ( ºC )
XTL carbonilas aminas secundárias grupos laterais
��
5��� �� �"(6� KQ����� ����� ��� 1:� ���� �������� ������2����� ��0� ���A� �� �� ��� ������ �� ����������������8���
5��� �� �"�6� KQ����� ����� ��� 1:� ���� �������� ������2����� ��0� ���A� �� �� ��� ������ �� ����������������91��
102
���� �� � ����� ��� ����� ������ ��� � ���#����� ������ � ����A� ��
������ ������2�)��J���� ���������� #����2������������������#�� ��A���
��FA������ ����������������� ���J��2�)���� ������������ ����7�� ������
�� ����� ��� ��������� ��� � ����� ��� ��� ��2���A� ��2��� ��� $��%� �
$��(A����������0���#�A�.�������7������������� ���� ����� ����� ��2�������
��� 1:� ���� /� �� �����#���� ��� ���� ����#� � �91� ��� .�� � �8�A� ��
������ �� ��� ����� ��� � ,N��������� ��� �� ��0� ���� �� ��,N��������� ��� ��
�� ����� �������C������������ ��������� ���� ��2��������3 �������
�0��7�� ������
�
�
20 30 40 50 60 70
-140
-120
-100
-80
-60
-40
-20
0Carbonilas
E T ( k
cal.m
ol-1 )
T ( ºC )
XBC Dedos Palma Polegar Hélice Corda
�
�
�
�
�
�
�
�
5��� �� �"�6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2�������0� ���A�������2���J���� ��A����8����
103
20 30 40 50 60 70 80
-140
-120
-100
-80
-60
-40
-20
0Carbonilas
E T ( k
cal.m
ol-1 )
T ( ºC )
XTL Dedos Palma Polegar Hélice Corda
��
�
20 30 40 50 60 70-100
-90
-80
-70
-60
-50
-40
-30
-20
-10
0Aminas secundárias
ET (
kca
l.mol
-1 )
T ( ºC )
XBC Dedos Palma Polegar Hélice Corda
�5��� �� �"6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2������� ����� �����A�������2���J���� ��A����8����
5��� �� �"%6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2�������0� ���A�������2���J���� ��A����91���
104
20 30 40 50 60 70 80-100
-90
-80
-70
-60
-50
-40
-30
-20
-10
0Aminas secundárias
E T ( k
cal.m
ol-1 )
T ( ºC )
XTL Dedos Palma Polegar Hélice Corda
��
�
�
6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� �� ������ ������A� ��� ��� ��2���A� ����
������� �� ��2���$������$��*��K�������� �������������#���/������#���
#�������� ������������������ ��� ����#������������� ���J��2�)���������
7�� ����� 6�� �� ��� ���� ���� ����� ����� ��� � ��2��� ����� �����3 ���A�
����� ��� ��,N��������� ��� ����� �� ���������� ��� �� ��� 7�� ����� C��
������ ���� ���J��2�)��� ����� ��� � ��2��� ���� ����#�� ��� � �91� ����
������� U��8�A� ������ ������ �� /� ��� ��,N��������� ��� ��� ���� ����� ���� ��
��� ����e�� ������ ��� ����.����,D�A���������� �.����������0���#��
�� ������� ��� ��� �����A� .�� ����� ��� ������ ��� �� ���� ���� � ���A� �
� ��2����������1:� ����������� ����� ������ 2������ ����?����������@����
�,o��� 6�� ��2��� $� ,� �� $� �� ����� ������ Q������ ���1:� ���� ���������� ��
������ ������� ��� ��� ���� ��J��2����� 6� ����� ������ �� ��� �� ��
���������� ����������� ������������� ����7�� �������������� ��������� ���
� �����K������ ���� ������91������ ����� Q��������1:� �����������������A�
5��� �� �"�6� � ��2�� ����� ��� 1:� ���� ��� ��� 2������� ����� �����A�������2���J���� ��A����91���
105
� . ��� � �8�� �� ��� �� ��7���� $,� 1:� ����� C�� ������ ���� ���J��2�)���
����� ��� Q���������1:� ����������������������0����7�� �����
�
20 30 40 50 60 70-300-280-260-240-220-200-180-160-140-120-100-80-60-40-20
0Cadeias Laterais
E T ( k
cal.m
ol-1 )
T ( ºC )
XBC Dedos Palma Polegar Hélice Corda
�
�
20 30 40 50 60 70 80-300-280-260-240-220-200-180-160-140-120-100-80-60-40-20
0
Cadeias laterais
ET (
kca
l.mol
-1 )
T ( ºC )
XTL Dedos Palma Polegar Hélice Corda
�
5��� ���"�6� � ��2�� ����� ���1:� ���� ��� �� ������������A�������2���J���� ��A����8����
5��� ���"76� � ��2�� ����� ���1:� ���� ��� �� ������������A�������2���J���� ��A����8����
106
20 30 40 50 60 700
20
40
60
80
100
120Cadeias laterais
NLH
(inte
r)to
t
T ( ºC )
XBC Dedos Palma Polegar Hélice Corda
��
20 30 40 50 60 70 800
20
40
60
80
100
120Cadeias laterais
NLH
(inte
r)to
t
T ( ºC )
XTL Dedos Palma Polegar Hélice Corda
�
�
5��� �� �(86� KQ����� ����� ��� 1:� ���� �������� �����������������A�������2���J���� ��A����8����
5��� �� �(�6� KQ����� ����� ��� 1:� ���� �������� �����������������A�������2���J���� ��A����91���
107
&����� ������A� ��#����� ������� .�� ��� ����� ���� ���� .�� ������ �
��2�����������A�� �����������A������ �������)�������� ������������#� ����6�
������ /� �� ���� ��� ��� 0�7� �7�������� �� ���#� ��A� � . ��� .�� �� ���� ���
� ���A� ����� ���� ��� �� ������ A� /� �� .�� �7�0�� ����� �7�������A� �� ���� ���
����� �����0������� U�� ���/���� ��� �2�� C�� ����� ��� ���#����� ��� ��
�������������������������� �������������������Z�,A��[�������� ���������
������' ��� �������� ������ ����� ����� �� �0���� $��%� �� $���� ��� ��
7�� �����8�����91A���������#�� ����
�
Tabela 6.14: 1:� ��������������������2���������������8����K1:�/��� Q��������1:�����������"��� ��2���/������1:� �������N����������
"%D�� (%D�� �%D�� %%D�� %D��23��
�
Glu78 Glu172 Arg112 Tyr65 Tyr69 Tyr79 Tyr80
Tyr166 Tyr174 Trp9
Trp71
NLH
1.3 2.8 2.0 1.2 0.9 1.0 0.2 2.0 2.2 0.5 0.2
EM
-11.7 -10.5 -12.3 -3.2 -3.0 -1.8 -4.0 -3.2 -3.2 -2.2 -2.2
NLH
1.5 2.9 1.9 1.2 0.9 1.0 -
1.7 2.1 0.6 0.2
EM
-9.0 -9.8
-12.6 -3.5 -3.8 -1.8
- -3.2 -3.2 -2.2 -2.2
NLH
1.4 2.6 1.9 1.4 0.8 1.0 0.3 2.1 2.1 0.6 0.2
EM
-11.0 -10.5 -12.8 -2.8 -3.2 -1.2 -3.5 -3.0 -3.2 -2.2 -2.2
NLH
2.2 2.2 1.6 1.2 0.9 1.0 0.7 1.5 2.0 0.6 -
EM
-12.2 -12.0 -12.6 -3.0 -3.5 -1.5 -3.5 -3.2 -3.2 -2.2
-
NLH
1.2 3.2 1.4 1.1 0.4 1.0 1.0 1.1 1.9 0.5 0.4
EM
-11.5 -11.0 -12.6 -3.0 -3.5 -1.2 -3.5 -3.0 -3.5 -2.2 -2.2
Tabela 6.15: 1:� ��������������������2���������������91��K1:�/��� Q��������1:�����������"��� ��2���/������1:� �������N����������
"%D�� (%D�� �%D�� %%D�� %D�� �8D�� �8D��24��
Glu86 Glu178 Arg122 Tyr73 Tyr77 Tyr88
Tyr172 Tyr180 Trp18
Gln136
NLH
1.8 3.0 1.8 0.5 0.5 1.2 1.1 2.2 0.5 1.0
EM
-10.0 -10.0 -12.0 -4.8 -4.0 -2.8 -3.5 -3.2 -2.2 -6.4
NLH
2.7 2.9 1.7 1.0 0.6 1.2 1.0 2.0 -
1.0
EM
-11.0 -10.0 -12.0 -3.8 -3.8 -3.5 -3.2 -3.2
- -6.0
NLH
2.6 3.0 1.8 1.1 0.6 1.3 1.1 1.8 -
1.0
EM
-9.3 -10. -12. -3.2 -3.8 -3.0 -3.0 -3.2
- -6.0
NLH
1.8 1.6 1.9 1.0 0.9 1.1 1.2 1.5 -
0.9
EM
-11.0 -10.0 -12.0 -2.8 -3.0 -3.0 -3.8 -3.5
- -6.2
NLH
1.6 1.9 1.3 1.0 0.9 1.1 1.1 1.9 -
0.7
EM
-11.0 -10.0 -13.0 -3.0 -3.0 -3.2 -3.5 -3.5
- -6.4
NLH
2.5 2.3 1.4 1.0 1.0 0.9 1.1 2.1 -
0.7
EM
-10. -11. -13. -3.5 -3.5 -3.5 -3.5 -3.2
- -6.4
NLH
2.5 2.3 1.4 1.0 1.0 0.9 1.1 2.1 -
0.7
EM
-10.0 -11.0 -13.0 -3.5 -3.5 -3.5 -3.5 -3.2
- -7.0
�
�
108
&� ��������� ��� �0���� $��%� �� $���A� �������� �0���#�� � 2� ���
����������� ����#������������������������������E��(�����(�����8�����$�
���(�����91������0����7�� �������������������������� ������#����A�
���#���������.����� � �� �������� �������0���������������6��������
������� ������� �������� ��������� ��� �� � ��� 1:� ��� ����#���A� ���
�����4 ��A��������������������0/���������� ������#���������������
����������� &�#���� ��� ���� ����� ��� ��/��� �� ��#���A� �� 2���� ��0�7����� /�
���� ��� ������ 1:� ��� ��0���� ��� �� ������ ������ ���/���� ��� �2�
���� ���������������������#�������
C���� ������� .�� �7�0�� �������� ������ ��� ���#����� ���� �������� ���
E�� /� � 6�2� ���� �� �8�� �� ���� �� �91�� ����� ��������� �������� ��A� ������
�������� ���������������1:� ��� ��� � 3�����7�� ���A� �� .����������
#���.������������������ �� ������������� ���� #��#��������1:� ������������
�� ����������� C�� �������� ��� 6�2� ����� ��� �� Q����� �/���� ���
���#����������������������� ��2���/������� ��2����������7����� ������
����,� N��������� �� ��� 7�� ����� &�� ������ ���� ������ ��������A� ��������
������ .�� ������ �������� ��� 6�2� ���� �� ���� .�� ����� ��� � ��2��� ���
���#�������������#��������������� ��
C� �� F ��� ��� ������ �� ����� ���� � ��2���� �������� ��0/������� ��
���#����� �������� ����� ��� �� ��� 7�� ����� ���� �7������ �� 9L��,� ��
�8��.�� �����������9L���������� �� ��� ��91A������������������� ��
����� ��� �����)��� �������� �� ���W� 9L�$�?�8�@�9L�( ?�91@A� 9L�$*?�8�@�
9L�((?�91@A� 9L�(*?�8�@�9L���?�91@A� 9L��$�?�8�@�9L��(�?�91@� �� 9L��(%?�8�@�
9L���,?�91@���C����4������������������������� ���������� �� �����������������
�� �� ���� �� ��2���� �������A� � . ��� ��� �����Q������� ���������� ����������
�������������A��� �����������3������#�������
C�� ������� �������� �����������������������#������ ��������A�����
��������#���������K1:�p�,�$����"�≅�����N�����������
6� ����� ������ �� � ���#����� ������� �������� �� ��2���� �������� /�
��#����U������ ���������������E� � $� �������������K��8�� ���3���������
�������� �� ��� .�� ��� ���#��� ���� 0��� . ��� �� E� � $� �� �91�� C� �������
E� � $� ����� �� 1:� ���� ���� � ��2�� �/��� �"� p� �$�,N��������� ��� ����� ��
109
���������A����������/�������2�0��������� ��������7�24 ����������
��������
��� �� 3�� 2����A� � � #����2���� ��0��� � ���#����� ������ 7�� ����
�������.������������������� ���0�������������������#��������.��
��������� ������������� A���.��/����������������������� ��2��0������&�
��������� � ���� �� 7�� ���� �91� �� �8�A� �X������ �� ����� .�� �� ���� ���
� ����� �� ������������������ ��� �������A������ � ���� ��2����� Q�����
����1:� ���������#���#����U�7�� ����91����.�� ��8����
:�� �� ������#��� �����4 ��� ��� 1:� ���� ���� � ��2��� ���� ��� ����#�A�
����������7������ ���������6�2�������������� ���������6� �������������
1:� ����/��� ���� ��� ������� �� ��������� ���������������0�������.��
��#��������#���������� ���������1:� ����� ����� ������������ �������0���
��� �� ����/���� �0�������� ��� �� ����� ��� ���� ���)��� � �� ��A� ����/���� .��
�� ������ ��� ������� �� �� 1:� ���� .�� ����� ��� � ��2��� �/���� � ��������� �������
�*�,N����������K� 3�����1:� �������������� ������0������������ ����/����
��#���.������� ���� ��2�����������.������N�����������
K�� ������ ������� ������������ 1:� ���� ���� � ��2��� .�� #���� ���
�������������������*�,��/��� N��������A�#����0����$��$���$��(��C����0����H�q�H�
����6�2��$�/����� ��0���$��(����� �����.���������������������
�� ������ ���������������/�$�����
&�� �0���� $��$� �� $��(� �����#��� .�� ����� ��� 1:� ���� ������� ���
���7���������� ���� ��2����������.���*�,N��������A�����0��7�� �����
V�������������.�A����� ����� ��A������1:� ����������� ����� �� ���� ���
������������������������� ��2���� ������� �,����*�,N����������6�$�D�� ��
���� �� �8�� �� � �,D�� � �91A� �������� �0���#�� .�� ����� �� 1:� ���� � ������
����� ��������� ��2���� ���.���*�,N����������
�
�
�
�
�
�
110
Tabela 6.16: 1:� �������8��.������� ���� ��2���/����� ���.�� �*�,N���������� �6���"������������N�����������
�������� �)�>"%D�?� �)�>(%D�?� �)>�%D�?� �)>%%D�?� �)>%D�?�
Asp4 -10.7 -10.5 -10.2 -10.2 -10.5
Gln7 -10.2 -9.0 -10.0 -10.4 -10.0
Asn8 -10.2 -9.2 -10.0 -9.0 -10.4
Asp11 -10.2 -10.2 -10.2 -10.4 -11.0
Asn17 -10.0 -9.8 -10.0 -10.4 -9.6
Asn20 -8.5 -9.5 -8.9 -9.9 -10.2
Asn29 -10.2 -10.7 -10.2 -10.0 -10.6
Asn32 -9.8 -9.8 -9.6 -10.0 -10.2
Asn35 -9.8 -9.4 -9.2 -10.0 -9.5
Arg49 -12.1 -12.0 -12.2 -11.8 -12.2
Asn52 -10.3 -9.5 -10.1 -10.0 -9.8
Asn54 -9.9 -8.0 -10.4 -10.5 -10.0
Asn61 -10.0 -9.7 -10.4 -10.2 -10.6
Asn63 -9.1 -10.3 -10.5 -9.8 -10.0
Arg73 -12.3 -12.0 -12.5 -12.5 -12.6
Arg78 -11.8 -10.2 -10.4 -11.8 -11.5
Asp83 -7.0 -9.2 -7.0 -8.8 -11.4
Asp101 -10.3 -11.0 -10.8 -10.7 -10.4
Asp106 -11.0 -10.6 -10.8 -11.0 -10.7
Arg112 -12.3 -12.6 -12.8 -12.6 -12.6
Asn114 -9.8 -9.2 -9.5 -9.7 -9.2
Asp119 -10.0 -10.5 -10.2 -10.3 -10.4
Asp121 -10.2 -10.5 -10.9 -10.5 -11.0
Arg122 -12.3 -12.4 -12.7 -12.6 -12.6
Gln133 -8.6 -10.9 -10.7 -10.4 -10.8
Asp136 -12.8 -11.9 -12.2 -12.4 -12.8
Asn141 -9.2 -10.5 -10.2 -9.0 -10.0
Asn148 -8.0 -10.8 -10.5 -9.0 -10.2
Asn151 -10.1 -9.7 -10.1 -11.2 -10.4
Asn159 -8.9 -10.4 -10.0 -9.7 -9.8
Asn163 -10.2 -10.0 -10.4 -10.5 -10.7
Glu172 -10.5 -10.0 -10.5 -11.5 -11.0
Gln175 -10.2 -10.5 -9.8 -9.0 -10.5
111
Arg181 -11.0 -10.2 -9.9 -10.0 -10.0
�� �� ��-.��������������>�1:� �������8��.������� ���� ��2���/����� ���.�������*�,N�����������6���"������������N�����������
Tabela 6.17: 1:� �������91�.������� ���� ��2���/����� ���.���*�,N����������6���"������������N�����������
�������� �)>"%D�?� �)>(%D�?� �)>�%D�?� �)>%%D�?� �)>%D�?� �)>�8D�?� �)>�8D�?�
Asn5 -8.6 -8.0 -8.9 -10.2 -10.0 -10.2 -10.2
Glu7 -11.0 -11.3 -11.5 -12.0 -11.8 -11.8 -11.5
Asp11 -11.0 -10.7 -10.7 -10.2 -10.0 -10.8 -11.0
Asp20 -10.2 -10.0 -10.8 -10.2 -10.4 -10.4 -10.5
Gln24 -10.2 -10.7 -10.1 -8.9 -10.0 -9.9 -10.5
Glu31 -10.7 -11.0 -10.6 -10.0 -10.7 -10.4 -10.4
Glu36 -11.4 -11.8 -10.7 -10.5 -10.5 -11.2 -11.3
Asp41 -11.3 -10.8 -10.5 -10.4 -11.0 -10.7 -10.7
Asn44 -8.6 -9.3 -10.3 -8.7 -10.9 10.7 -10.4
Asn52 -8.0 -8.3 -8.6 -10.3 -10.5 -9.7 -9.0
Asn56 -10.8 -8.9 -10.9 -10.0 -10.2 -10.0 -9.8
Arg58 -11.4 -12.0 -12.3 -12.1 -11.8 -12.3 -12.8
Glu63 -10.4 -10.7 -10.7 -10.7 -11.5 -10.9 -10.7
Gln67 -10.3 -11.0 -10.2 -9.9 -10.0 -9.8 -10.9
Asn69 -11.3 -11.8 -9.1 -10.7 -9.5 -9.5 -9.8
Asn71 -10.7 -10.5 -9.0 -9.7 -9.4 -9.5 -11.2
Arg81 -12.1 -12.6 -12.6 -12.8 -12.3 -12.6 -12.8
Asn82 -9.4 -10.8 -10.6 -9.7 -10.2 -10.2 -9.7
Glu86 -10.2 -10.8 -10.4 -11.4 -11.0 -10.4 -9.5
Glu91 -9.4 -9.5 -11.3 -10.5 -10.6 -11.0 -11.7
Asp97 -11.0 -11.5 -10.7 -10.0 -10.0 -10.5 -11.8
Asp104 -10.7 -10.5 -10.2 -10.2 -10.4 -10.5 -10.2
Glu109 -10.5 -10.7 -10.7 -11.0 -10.7 -11.0 -10.7
Asp111 -10.7 -10.6 -10.4 -10.4 -10.7 -10.2 -10.7
112
Arg116* - - - - - -12.1 -12.6
Arg122 -12.3 -12.6 -12.0 -12.0 -13.0 -12.8 -12.6
Asn124 -9.5 -10.7 -10.2 -10.0 -10.2 -10.0 -10.5
Asp129 -10.7 -11.0 -10.6 -10.7 -10.2 -10.4 -10.7
Gln132 -10.3 -10.1 -9.7 -9.5 -10.0 -10.0 -10.4
Asp135 -10.8 -10.4 -10.5 -10.7 -11.0 -10.2 -10.5
Gln142 -7.6 -10.5 -10.4 -9.7 -10.7 -10.4 -10.0
Asp143 -10.0 -10.8 -10.5 -10.7 -10.2 -10.0 -10.5
Arg145 -12.6 -12.6 -13.0 -12.6 -13.0 -11.5 -10.6
Gln151 -9.2 -9.5 -9.2 -9.5 -9.2 -9.2 -9.9
Asp157 -10.5 -10.2 -10.2 -10.7 -10.4 -10.7 -10.2
Arg161 -12.6 -12.3 -12.3 -12.8 -12.8 -12.6 -13.6
Asn165 -9.6 -9.0 -9.9 -10.3 -10.9 -10.4 -10.9
Asn167 -10.3 -9.0 -10.2 -11.0 -10.4 -10.5 -9.7
Asp169 -10.1 -11.0 -10.5 -10.0 -10.5 -11.0 -11.0
Glu178 -10.2 -10.7 -10.4 -10.7 -10.5 -11.8 -11.2
Arg187 -12.1 -12.0 -12.6 -12.6 -12.6 -12.3 -12.0
Asp192 -10.4 -10.0 -10.9 -11.3 -11.0 -11.0 -11.0
�
�� �� ��-.���������������6�1:� �������91�.������� ���� ��2���/����� ���.�������*�,N����������
6� �91� ����� �� %�� 1:� ���� �� ��� %� �� �8��� 6�� ��2��� $� �� �� $� �
����������������������������������������A�����8�����91���������#�� ��A�
���.���������� ����' 2�����
�
�
�
�
�
�
�
�
113
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
5��� �� �("6� &���������� ������� ���� �������A� �� �8�A� ���������� ��� 1:� ���� ����� ��2���� ���.���*�,N��������A����.���������� ����' 2�����6�������� ����������)������������������������ ���J��2�)�����
114
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
&����2���$� ����$� ����������0���#��.����������������������������
�� ��������������������������1:� ����� #��#������������ ���������������
�� ���/��A� ��� ������ ��� ��� ���� ���� � ���A� �� ��FA� � ���������� ������
� ����� ���� ���� ��� ���#���� �� ��� � ���� �7������ ��� ����#���� G��
���������� ���� ��� ���#������������.������ ��2���A�� ��������� �������
5��� �� �((6� &���������� ������� ���� �������A� �� �91A� ���������� ��� 1:� ���� ����� ��2�� �� ��� .�� �*�,N��������A� ��� .���� ������ ���� ' 2����� 6�� ������ ����������)������������������������ ���J��2�)�����
115
���������1:� ��A���2���$� %���$� �A�/������ ��A������0� ����.���� ���
�������� ����� �#����������0������� ������������������#�����0���;2�����
K�� ���� ��� ������ �� ���������#���� ������ �������� �������� ��� �����A�
��# ��� ����� ������ �� � �� �#��� ��� ���0������� �������� ��� ��� ������ ��
������������#����� ����� ������� � ����)��� ���� ���������� � ���7�0������� ��
������ A� ��� ����� ���� ��2���� �� �� ��.� ���� ��� ���� ����� ���� U��
�� ���)����7��������
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�������������#�������0����$��$���$��(A���91��7�0���� Q����������
������1:� �������� �������#�A�������������U��8�������/��������1:� ����
����� ������ ��2�������,�*�±�,�*�N��������� ��91�����,�(�±���,�N���������
� �8�A� #������ ������ �2���� <�� ��� �� � ��2��� ������ 1:� ���� �������
���7����� ��� �%���(N��������� �� � %���N��������� ��� �91� �� �8�A�
��������#�� ��A� ��� ��� ���������� &���� ����A� ����� 1:� ���� � �91� ����
����� ��#���� ���� �� ������ �� � � ��2�� ��� ��� �$N��������� ���� ������� U�
�8���
5��� ���(�6�1:�� �����������A� ��8���� 5��� ���(%6�1:�� �����������A� ��91���
116
&���������������0����$��$���$��(A��0����������� �2��A������������
������������������������1:� ��������� ��2���� ���.���*�,N��������A��0���
$�����
�
Tabela 6.18: V���� �2������������������������������ ��2���� ���.���*�,N����������
���������� 23�>G ?� 24�>G ?�
6� �
E� �
6���
E��
6�2�
%(���
����
�,�$�
��*�
�(�$�
� ���
���*�
���$�
�*�,�
�$�(�
�
�
e�� ������ ��� ����.����������������6� ������������ ���� ��8�� ��
����� �2���.��/�����0������������4 ��� ��91��C�������������E� ���6�2�
����� ��� ���7����� ��� � ����� ����� �2��� �� ��� 7�� ���A� ���
��� ����� ����� ��� �������� ����2���� �2��#�� ��A� 6��� �� E�A� ������
����� ����������������� �2��� ��91��6��������������������������������
���6� ����8������� �� ������ ������ ���� ���A��2� ���������������������
6�����E�����91���0/�������� ���������� ������ ���� �����! #����2 �����
�����)�������������������2���A�E�A�6�����6�2A� �����7�� ��A��� �������
.�� �2 �� ������� �������� ���� �� ���#���� �� ������ �����)��� �� ���
7�� ���A����/�������� ����6��91������������������6�2A�6�����E��.�� ���
����� ����������� �� ���� ��8�A���2��$� $���
K���2��$� $����������0���#����������������������6�2A�6�����E�A�.��
������1:� ��������� ��2���� ���.���*�,N��������A�.������������� ���� ��91�
��.�� �������� ����������� �4 ��� ��8���
�
C�������������6��������� �������A�������E�� �����#�����3���������
6�2����#������
�
�
�
117
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
&������ �������A� (� ������ ���������� �� ���� ��� � ���� 6���%A� 6����,A�
E�(A� E�� A� E�$,A� E� $A� �� 6�2�,$A� �� ��� .�� � 6�2�,$� /� �� ������� �F�
����������������1:� ����������� ���� ��2���������A��� �$N����������&����
����A� ��0�� �����/2�� ��� �� �� ��� �� ��������0������� �� �8�� �����
�����#������)��A���� ������ ��� ������ ���� ���A��0����� ��������������
��� �����)��� ���� ���� ���� ������ �������� �� ���� � �� ������ � �91��
V��� �����#/������������������� #����2�������1:� ���A�/������#�����������%�
���)���.����#����������������������� ����������������A��#� ���� ��A���
�7������ ���� ��� ��0/�� ��� ������#�� � #������ ����� 3��;�����
� ��� ������1:� ������
� 6 ��� ��� � ��#����� ��� ��� �� ������� �%� �������� ���� ������� U��
���/��������2�.��������#��A��0���#����.����������������#���������������
2�����.���������� 2�������� �������� ���#����>�,�-� .����� �F�� #��� 3 ��
�������� ������ ������ ��� ���/���� ��� �2� U� ����� ������ �� ,��-� .����� .��
������� �������� ����2���� �J�� ������� ���� ��;7����� .�� ����� ���
���/��������2�������#�������� ��� ����������K����������������4��������
5��� �� �(6� -������� 6���%A� 6��(*A� 6���(�A� 6��� ,A� 6����,A� E��A� E�� A�E�$,A�E� $A�E��*A�E��,�A�6�2�,$A�6�2��(���6�2�����C�������������6��������� �������A�������E�� �����#�����3���������6�2����#������
118
�������� E�� A� E�$,A� E� $A� E��*A� 6��� �%� �� 6�2��(A� ����� ������� ��
��2��� $� (� � $� *�� 6�� ��2��� $� (� � $� *�������� �� %����/���� ��� �2��
������;7����������������������
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
5��� ���(�6�-�������E��*���������������%����/��������2�������#������
5��� �� �(�6� -������� E�� ?��.���@A� 6���%?������@� �� ��� ��������� %����/��������2�������#������
119
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
6� ��2��$� *������������������E�$,A�E� $���6�2��(����� ���������
���� ����.�� ����7���������/��������2���� ��� ��������A�����FA� ���
�7������ ���/���� ��� �2� .�� ����� ���� U� ���� ��� ���#����� ��� �����
������ ������������������� ���
6��� �)���26P ?�@������������������7�24 �����3����24 ������������������
����������� ���� ����2���$�%,��$�%�A�� ���C��������������������7�24 ��A�
�.�#�� ���A� �� ����� ������ ���� �������� ��� E�A� C&� ���� ��� ������� ���
�7�24 ��A��.�#�� ���A�����������������������������6�����::���������������
���3����24 �������������������������������6�2��&����2���$�%,��$�%�������
����0���#��.�������������E�� A�E�$,A�E� $A�E���*A�6����%���6�2��(�����
���.�� ����� ��� ��#�����3��� ���� ���� �� ���������� �������� � �� �����A�
�����������������������������A�� ��� ��������� �����������������
��� ���#����A� ������������� ��� ������� .�� ���� ���� ��� �����#���� �����
���#� ����
�
�
�
�
5��� �� �(76� -������� E�$,?��.���@A� E� $� ?������@� �� 6�2��(� ?�� ���@� �� ������������%����/��������2�������#������
120
1 2 3 4 50,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
g OE
,H (
r )
r ( Angström )
Glu7 Glu31 Glu36 Glu63 Glu91 Glu109
�
�
1 2 3 4 50,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
g OD
,H (
r )
r ( Angström )
Asp41 Asp97 Asp135 Asp157 Asp192
�
�
5��� ����86�+ �������������0���������A�26M?�@����6SC��?E�@���MS�:�?�2@��
5��� �����6�+ �������������0���������A�26M?�@����6SC&�?6��@���MS�:�?�2@��
121
1 2 3 4 50,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
1,8
2,0
g HH
,O (
r )
r ( Angström )
Arg116 Arg161 Arg187
��
�
�
C��������������������� ��������)��� �������)������ �� �����������
������ ������ ���� U��������� ������� ���#������6����� ������� � �� ������
�������������������������������� ����������' ����������������������������
��� ������� �� ������ A� �F� ���� ��� ���#����� ������ � ��� ��� ��� ������
������� �� ������ A� ��#���� U� ���7������� � ���� ������ 6�� ��2��� $�% � � $�%��
����� ��� ��� �������� .�� ��� ���#��� ��� ������ ���� � ��2 �� ������ ���
���#����A���������� ���������6����2���$�% ��$�%��������0����������
�� ��2������.���0������o�A�#�����.�� ��������������� � 3�����/���
����2�����������������������������4 ����� ������#���?m��,O @���������������
�� ��2��������������� �����������������A����/�A������� �� �����������
���/���� ��� �2�� 6� �� �� ��� ����� ��������/���� ��� �2� � ���� ��������
��;7����� �� ����2���� ���� ��2�� ������A� ���� ������� �����3 ��� �� ��� ��
�� ��� ��� A� � ��� � ��2������ ��� . ��� �� ����� ��A� ������ ������ ��
������� �� ��� ��#��� ������� ��������� 6�2 �� �������� ������A� .��
5��� ����"6�+ �������������0���������A�26M?�@����6S::�?6�2@���MS�C�?�2@��
122
����� ���2�����3����7��A������9L����93�A� ��0/���� ��2��� � ��� ������
��������3�����/��������2�������#��������������������2�������
�
�
�
��
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
5��� �� ��(6� �� ��2����� �.���0��� ������������ E�*�?#�����3�@A6�2�%�?��@� ����� ��������� ���/���� ��� �2� ������#������ 6�� ���/���� ��� ���#�������� �� � ���� ��� �������� ������ ��� �������������' ���A����TA�� ����������������
5��� �����6��� ��2������.���0��������������� E�(?#�����3�@A� 9L��%� �� ���������������/��������2�������#������6�� ���/���� ��� ���#����� ��� �� � ������� �������� ������ ��� ���� ���������' ���A����TA�� ����������������
5��� �� ��%6� �� ��2����� �.���0��� ������������6��� �?#�����3�@A�1L���*?��@A�93������� ��� ��������� ���/���� ��� �2� ������#������ 6�� ���/���� ��� ���#����� ��� ��� ���� ��� �������� ������ ��� ���� ���������' ���A����TA�� ����������������
5��� �� ��6� �� ��2����� �.���0��� ������������ 6���*�?#�����3�@A� 6�2��?��@� �� ������������ ���/���� ��� �2� ��� ���#������ 6�����/���� ��� ���#����� ��� �� � ���� ����������� ������ ��� ���� ����� ����' ���A� ���TA�� ����������������
123
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
&� ���� �� ���/���� ��� �2� ���� ��;7���� ��������A� �2��� �����
������� ����7�������Y����� ������� ������ �������.�� ��������3�������
���/���� �� ��� ����� ��� ���#������ ����� #���� ���� ��� ������ ���� ��
�� ���� �� � ���� 26P ?�@� ����� ��� ���A� .�� ���� �� � �������� ���� ���
���#������ �6�� �� ��������6��� �A� ��.�������/��������2���� ��
���������� ������������ �Y�����������������K������������������� ������
�� ������� ����26P ?�@����#�������������.�� �Y������#���� ��4 ��������
�������A�1L���*���93������
�6� �� ����� ������A� ����� � #����2��� �� 1:� ��A� �� .�� ��#�� �
��� ��������������������������������� ������� �� ��91�.���������� ����
� �8��� ������ �������� ��0/�� ��#��� ���� �� ��������� ����� � ������� �
���)�������� ������2������������� �����������6�2�%��E�*����6�2��$�
6��*(� � �91�� K� �8�� � �� ��� ��� � 6�2� ��6��� � /� � �������� �� ��� ��
6�2�%��E�*�� �� �91A� ���/�� ���� �� �� ��� �����4 ��� ��� ����� ��
�����������K��������A������������� ���������������������������� �#�
�� ������ � ��8��.���������� �����U��6�2��$�6��*(� ��91��
5��� �� ���6� �� ��2����� �.���0��� ������������ 6����(?#�����3�@A� 6�2�$�?��@� ����� ��������� ���/���� ��� �2� ������#������6�����/����������#�������� ��� ���� ��� �������� ������ ��� ���� ���������' ���A����TA�� ����������������
5��� �� ���6� �� ��2����� �.���0��� ������������6��*(?#�����3�@A�6�2��$?��@� �� ���������������/��������2�������#������6�����/���� ��� ���#����� ��� �� � ���� �������������������� �������������' ���A����TA�� ����������������
124
6.3.2 Conclusões
6� � #����2���� �� ���#����� ��� 7�� ���� �8�� �� �91� ������� .�� ��
������ ������� �� ���0��� ����� ���� ��� � ���#����� ��� .�� � �����
��� ������������� A���.��/����������������������� ��2��0�����Z��A�%[���
6� ���#����� ���� �������� ��� ������' ��� �������� ����� �� �� ������
��������� ��� �����7�� ���A�����FA� � 3�������� ����2 ������#� �
���#����������������� ��������������2���������������8���������������
��� �������� �� ��� � �91� ���� ��������� 6� �7������ ���� ���� �� �� ��� �������
E� � $������ ��� ��91��� �����#���� ���0������#�����������.�� ���3��
�������� �� ��� ��8����
C� ���� ���� ���� /� �� ���� ��J��2���� �� ������ � .�� ����� �� �������
Q����� ��� 1:� ���� �� ��0/�� �� � ��2��� ���� ����#�� ��� ����� 1:� ����� C�
���� ������ ��� /� �� ��2 ��� ���� ������� ���#����� � �� ����� ��� �� �� �
���#����� ��� ������ ������A� ������� .�� �� ���� ��� � ���� /� ����� �������������������
��,,N��������� ���� ���0������� ����� �2�� ��� .�� �� ��� ��A� ��� �0�� ��
7�� ����� C� ���� ��� �����A� ����������� ���� �� ����� ��� ����� 1:� ��A� /�
�����2����������#� ����������� ������������ �����6�������7�������������#� ���
������� ���������������� ���� ���)��������������� ��.�������������
����/���� ������ ���� 0������ &� ��������� � ���� �� 7�� ���� �91� �� �8�A�
�X������ �� ����� .�� �� ���� ���� ���� 0��2� �� ���� ������ ���� ������ ���
� ����������C����� ���� ����0��2�����2�)���K���������� ����6��91������ ��
�� ����� 2�� ��� ��� *� �������� � ��2���� K������ �A� ��� ��������� ���� �
�8�A���.���� ������������������2��������������1:� ��������������B�
#��� 3������0/��� ��������������&�� ��������������#���� ��������.��
�� ���� ���� ���� ������� ����� ��� �� ������ �� H������#I� ��� � �91� ����
������� U� �8�A� �� ��FA� � �91� �� � ����)��� � #����2��� ������ ����� ���� ���
����� Q�������� ���2� �����������#�� ��A�������� ���������������������
�������� ��� ������ ���������� ������V��� ���������� �����������)���
����� ���� ��A� ��������� �7�����A� �������A� ��#�� ���� �������� �� ������#����
��� � ��������0������� �� � ��#����� � �������A� ����� ���� ���� ������
�7������ ���� ���Z��[���
125
�� ����� ��� �� 1:� ���� ���� ����#���� ���� � ��2�� �� ��� .�� �*�,�
N��������A����������#������ ��������%�������������2���A��� ����E�A�6�����6�2A�
.�� ������ ����� ���� � �91� �� �� ���� � �8�A� ���� ��� ���� �� ��������� ���
�������.�� ��#������������������ ��� ���������)��� ��8�������� � ����� ���
�� ������������0���������7�� ��������������&�������%��������A�(�������
���������� ������ ���� ���A���.��/��������������#��4 ����� ������' ���
��� ���� ��� � ���� ��� � ��������0������� ����� ������ ��� � ������ C�
��� ����� ��� ���#����� ������� �������� ��� ��� ���� ������ ���� � �����)���
��0����� ��2������ �������#��� ������������� �������������������U��
���/��������2��6� #��� 3 ��������� �������� ���� ������' ��� � ��� ���
���.�� � ��2��� ������2 ����� ��������d ��� � #��� 3 �� ��� ��������
�������� ��� ���/����� ��� � ���7������ ��� ���/���� ��� �2A� ���� ����
�������� E� �A� E� $A� E�$ A� E��,*A� 6��%�� �� 6�2��(A� �0���#���� .�� ��
���/���� ��� �2� �� ��2��� ��� ���� ��� ���� �� ���� 0�7� � ��4 ��� ���
�������������#��� 3�A��� ��.\� ���� ��A����������������������#�����/�
�0����� d ��� � #��� 3 �� /� ��;7��� �� ������ ��� �� ����� �� �������
����J����2�A� ��� ���� � ���� ��� ���#����� ��� ������� ��� .������ ���
�����.�������/��������2���� �������� ��U�������������#��������
������ ������������������� �?��������� �����������@��K��������A��������������
����� � � ���2��� � ������� ��� #�� ���/��� ��� �2A� ��� ��� ��� �������
������� ��� �� �� ��� ��� � �� 1:� �����A� ��������� ��� ��2����� ����� ��
���0��������
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
126
Referências Z�[�P ��K�� ��A�Q!�����!��� � A��A���,A�?��*�@��
Z�[�6��P �� ��A�+� #���!��!��� � A�(""A��$�A�?�*,�@��
Z [�9��<��"����A�9��+��P � ����A�"!��� �!����A��8�A��$ �A�?�*��@��
Z%[�"��:22� ��A�����!�� �A��7A�% $A�?�*��@��
Z�[�P ��"��1�����A�P ��:��-���0�3A�"!��� �!�����A��"A��%�*A�?�*�,@��
Z$[�P ��:��-����0�3A����!�&�!�����A�(8A�((�A�?�* %@���
Z([� 1�� V�� 2A��� � ��� � ����� � �� ������ #��A� ��� ���� G �#�� V����A� !�3�A� K�M�_��NA�
?�* *@���
Z�[�1��V�� 2A�!��� �!�����A�%�A��$�,A�?�* �@��
Z*[�1��V�� 2A�-��8������LA����!�(���!�����!�����A�(�A�� �A�?�*��@��
Z�,[� �̀�&��P ��� A�+��:���������NA�(��� A����A�( (A�?�*� @��
Z��[�1��V�� 2A�-��8������LA����!�(���!�����!�����A�(�A��$�A�?�*��@��
Z��[�1��V�� 2A�-��8������LA����!�(���!�����!�����A�(�A��(�A�?�*��@��
Z� [�1��V�� 2A�-��8������LA����!�(���!�����!�����A�(�A����A�?�*��@��
Z�%[�1��V�� 2A�-��8������LA����!�(���!�����!�����A�(�A���$A�?�*��@��
Z��[�K��b�0N�A� �̀� �̀�& � 0��2A�"!�����!��� � �A��8�A��, �*A�?�,, @��
Z�$[�E��-��&����F%����!��� �!�� ��A�(%A��$�A�?�,,�@��
Z�([�-��b� ��A�"��9���� 2��A�E��b� �7��A�8��b�i����A�������!��� � �A��(8A�*$�A�?�***@��
Z��[�E��8� ���� �A�"��-��1��� �� �A�1��&�2�c#�A�' �!����!�� �A�%>"?A� �,A�?�,,$@����
Z�*[�P ��+��# �E ������A�<��-��8�������A�6��6������ 2A�V��:��:\ � 0��2��A�V��b�\2��A�6�����
"�NA�P ��-��V��<����A�!��E��9��� �A�� ������� ��������������$��� �'�8�8�?>����������
)� �'��� A�8�����A�E�� � 2� A�?�**$@��
Z�,[� P �� P �� P N��3NA� -�� 1�� ���0���A� P �� 1�� < 2A� �̀� &#����A� "�� _2�3�A� ��� ��
��� � A�(A�%$(A�?�**%@��
Z��[�b��E�0��A�E��b�� ���3�A�"��:L A�6��<�3��3��A�P ��<��� ��A����b��NLA������ �����A�
(�A�� %(�A�?�**�@��
Z�%[�"��9��"�N��A�-��b��6� �A�&��<��R����A�1��&�2�c#�A�-��-����A�-�� �̀�P ��A�&*���+ ��A��
%�7A�$�,�A�?�,,�@��
Z��[�P � 2�1��< 2� ����!%�"��������� ����7L� �����������#���3�����3������LA��N��3������L�
�� �3������0����LA�K��� �� -�����3� �� ���� ��� � �A� V�� �� �0��>� ��$$%,�A�
?�**�@��
�
127
Capítulo 7
Xilanases XBC e XTL na presença do substrato
�
7.1 Di-xilopiranose em solução aquosa �
6� ���7������ ���� ?&!�@A� ���/��� ������ ���� ����� �������� ��� B�&�
7������ ���A� ���� ��� � �������� ������ 7�� ���� ��� � � #����2�������
� ����)��� � �����0������� V��/�A� ���� �� �� ��������� �� ������ ���
������7��� �����0�����A�����Q�����#�����������������������.�������
��� ����������������������������� ��������0�������������������� �������
������ ��� ��������� �� ��� ��������� ��� . ��� ����� ��� � �� ���� ���
���� ��������2��������������� ������
�
7.1.1 Resultados e discussão �
6� ������� � ����� ��&!�� ���� �0���� ���0 ������ ����� ��� ������ �� Z�[�
�;��2�� �8�����0�� C� �;��2�� ��������� �� �/�� � ������� ��� ������7�� 7�� ���
?�� ������8�@=&!������������.��A������#��������������������������
��&!�� �������������� �����������������������C�-"<&A� ��2��(��A� ����
�������� �������������4 ������������������0� ������ /����6���2��(���
������ ����� ��� ��� ��2�)��� ����� ��A� .�� �� ���� ��� �� �����)���
������ ������#�������������������� ������2����Bk�A%�?��2����� ������������
�����������7������ ���@��6����������������2���#������� ��������������� �A�
���/��#��� ���U�������� ��2������ ����A���2��(���A��/�.�A�����#�������
��� �A� � ������� ��� ���0����� � �� ��2����� �� ��2�� (���0�� 6� �������.��
������ ������ ���� ������� ��#�������������������/���% �A���2��(����
K� ��2 �������� �� �������A� � ������� ��� �Q��� ���� ���� � �#�
�� �������� �/� �� �� �A� �� ��� .�� �2��� ����)��� ��� ��������� �����
128
�0���#��� ���������G����.� ����� ����A������������,�,� �A��������
��� 2�����A� ��2�� (� A� /� �0���#��� !���� ��� ��#�� � �� ����������A� ���
���7����� ���*oA����' 2���� ���������0� �������%A���������� ���2��(��A�
������� ��.\4 ��������������#�������2�����
�K� 3�� 1:� ��� ���� �������� �� �� 2�� �� ��������� K� 3�� �����
���0���� ��A� .�� �#����� � �� �������� ���� �������� ���� ��������A�
���##���� ��� � ������� �� ��2���� Bk�A%� ��#�� �� ������ ���������� ��A� #�����
.�� ���� ����� ������ �� ��#���� ���� C� ������ ������� ����� ��� ���� �����
������ ��� ��� �������� ���� ������� �������� �� ��2����� 6� �� ���� 2���
� ������������������%�/�������7����� ����N��������A�������������.���
� ��2���/����A�������� �������������������#��������� ������2����Bk�A%��
�
�
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,000,00
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
RM
SD (
nm )
t ( ns )
��
�
�
�
�
5��� �����>�-"<&��������������������������0� ����&!���
129
��
�
�
�
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00
0,30
0,31
0,32
0,33
0,34
0,35
0,36
Rg
( nm
)
t ( ns )
�
5��� ����">�&����� ������ �����)���2��������������������2����B��A%��
5��� ����(>�-������2��������&!������ ��������������
130
�
7.1.2 Conclusões
6�����������&!������������.���/������� ��� ���� �����������#���
��������������������������. ����������� �� ���� ���0�� ������������
��7�� ����K����������������A�����������#������ �����#�#�����#����U������ ��
���������������2������������A�����������7�����A��������� ������ ���� ��
�������$A�.���������� ������������������1:��������2�����3����7������&!���
9�� ���� ��#�� ���� �� ������� �� �7������� ����� ������ ��� ������� ���������
?7�� ��=&!�@A���.���������� ����������������������������������������� �
������������7��������0������ ������������������
�
�
7.2 Xilanases na presença de substrato
7.2.1 Sistema XBC+DIX � Resultados e discussões
6���2��(�%������ �����#��)���������������������7���8�=&!���
6����0������������������2����� �������)���/�#������0/��
�����-"<&A������������������������������� ������C�-"<&����8�������
-"<&g���������������������� ����� ����2���(�����(�$A���������#�� ����C��
#������ �/����� ���� -"<&g�� �� ���� ��������#��� ���#���� ���)��� ���>�
,����±,�,�% �� ?��D�@A� ,����±,�,�� �� ?%�D�@A� ,��%�±,�,�� �� ?��D�@� ��
,���,±,�,�( ��?$�D�@��������#�����������������������������.������0������
�����8�� ��4 �������0�������0���# ������.��������� �� �� ������
���� ����#��� � ����� �� ��� �0������ ��� .�� . ��� ����� ���#� �� ����
6 ��� ��� ������ ��� ���� ��� ��������A� �� �������.�� �� ��2�)���.��
���� ������������� ��� ��#��A� �� ��� ����� ��#��� ����� � �4 ��� ���
�0�����A� ��0/�� ��� ���� � ����� �� ��� �0�����A� ���/�� ���� �2���
������ ����C����� ������ ��A� ���� ��� ����������#��� ������� ������ � �
�4 �������0��������������#��� ��������������������� ������������
131
6���#��� �������������������� ���� ���A���#�����BA�/������ ������ �����
�0�������C����� ���������/��2��� �����2��������0�������������
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,000,00,10,20,3
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00
0,00,10,20,3
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00
0,00,10,20,3
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00
0,00,10,20,3
RM
SD
( nm
)
t ( ns )
25ºC
45ºC
55ºC
65ºC
� 5��� ����%>�-"<&����8�A� ������ �����&!�A����� ��������������
5��� �����>�&����� ����#��)�����7�� ����8�� ������ ������0������&!���
132
6� ������� �� ��#��� ����� ��� ���� ��� ��� ��� ����� ���� #�������
����� ���������� ������ ���������' ���H0������3I��������� ���������%A�
� ��� ��� ���� �� � ��#��� ����� H0������3I� ����� �� ��� � ��#��� ����� ���
������������� ������� ������ ���A� ��� ���������������' ���� ��������� �����
��� ����� ������� ���� ����� "��������� .�� � ��D�A� ��������� ;���A� �
������� �� �#� �� ����� 0������ 6� ��2�� (�(� ����� �� � fechaabreD − � U�
��D�� ��� � 7�� ��� �8�� � ����� �� �� � �4 ��� ��� �0������� V�������
�0���#������2��(�(�.�������� ������0������&!��/��������.�������� 2��
�� �����#���� ������#��� �����H0������3I��������� ����
�
�
0 20 40 60 80 100 120 140 160 1800,00,10,20,30,4
0 50 100 150
0,00,10,20,30,4
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
0,00,10,20,30,4
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
0,00,10,20,30,4
Resíduos
25ºC
45ºC
RM
SD
( nm
)
55ºC
65ºC
5��� ����>�-"<&���������������8�A� ������ �����&!���
133
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,000,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
55ºC XBC XBC+DIX
Dab
re-f
echa
( nm
)
t ( ns )
6��1:� ���������� �&!��������������>���������������� ��0���(����
C�������������7�24 �����������������3����24 ��A�� #��#��������1:� ���������� �
&!�A�������� ��������� ���2��(�����
9���� ��3����7���� ��� �0������&!������ � #��#���� ���1:� ���� ������ �
&!��� C�� ������� ��� �7�24 ��� C��� �� C�� ��� ��������� ��� � 3�� 1:�� &���
���������������� ��0���(��A��� ����E� (A�6� ����V����$� �������������
�������������� ������������������� ������������� ���������������Z�[��C�
����������V����$��������������� ��� ��������� ������ ��A�� . ���.�����
��������E� (���6� �������� ������ ���� ���A���2��(�*��V��������������������
����������������������4 ������1:� ���������� �&!������������ ������ ���
���� 6� �� �� V����$A� �������� ������ .�� ������ �������� � ��� ���� �
� �� �����������������������3�� ������ ������0��������
5��� �����>�&0������3?�@�����7�� ����8��U���D�� ������ �����4 ������&!���
134
4���������6�+�A����O A����1:�� ������8�������0������&!���C�������������7�24 �����3����24 �������0������&!�A�� ������4 �����A���������� ��������� ���2��(����C������������� ���������q�����.������� ���������������� ��������� �����������������
�0� "%D�>G ?� �%D�>G ?� %%D�>G ?� %D�>G ?�
'�B�/.R,8A-�
'�B�/.R,83-�
��3=�/.R,8:A-�
��B:�/.R,86A-S�
��::A�/.R,8AA-S�
��::A�/.R,8:A-S�
��>?�/.R,0A-S�
��:>>�/.R,03-S�
'��B@�/.R,0AA-S�
'��:BA�/.R,0:A-S�
��::>�/.R,86-�
�����
�����
( � �
( �,�
(����
�%���
**�,�
**�,�
**�,�
$��,�
**�,�
�*� �
(��(�
(����
$�� �
(��*�
�����
**� �
� �,�
**� �
���%�
*����
�����
����
(��*�
%,�,�
(��,�
���*�
**�,�
���*�
**�,�
�,�,�
*��,�
��
���*�
((���
��
(,�,�
�,�%�
**� �
�,� �
*(�,�
(���
(*� �
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
H32O32
H22
O22
O12H12
O52
O42
O2
O3
O4
O5
H2
H3
H4
H32O32
H22
O22
O12H12
O52
O42
O2
O3
O4
O5
H2
H3
H4
5��� �� ���>� !�� ��������� ���� ������� ��� 3����24 ��� �� �7�24 ��� ����0������&!���
135
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
C�� �������� ��� ������' ��� �������� .�� ������� 1:� ���� ������ �&!��
���������4 �������/�**O ����>�6�2���A�9L�$*A�9L��$$A�E�(����E��(����
6� 6�2���� ����� �������� ����� ��;7��� �� ������� V����$A� �� ����� ���
���� ������ ��������� ����#����� ���������$A��6�2���� ��� �����1:�<<� ���
�� ��� ��� � ���� � 3�� ����� ������� #��� 3�A� ���� ��� � �� ������' ���
����� ������� ��������� ��� ��#�� U�� 1:� ���� ������ �&!�� ����#���� .�� ������� /�
���� ��� ������� &�#���� U� ����� �� ��� �� ��2� ��.��� ������#� � �����
������ �� 6�2A� ��� ������� ���� �� ����� �������� ��� � ������� ���� ��
�0������ ��� .�� ��� �������� E� (A� 6� �� �� V����$�� 6����� �� ��A� �� �������
6�2���� ��#�� ���� �� ����� ������ ��� ��0/�� � � �� ���� �� �������
���3����� ������ ��������������� ������������3���;�������7�� ��
C����������E�(�����(�A���9L�$*����$$A�������1:� ���������� �&!������
������7���������������/�������0������ ��������A�����������������
������7�����7�� �������������3������� ���������������7������ ���?&!�@��
6��1:� ���������� �&!��������������������������� ���������������A������ ����
������������4 ������������������������6��9L�g�������2��������� ������
3����24 ����:����: �� . ���.�����E�g�������2������������� �� ������
5��� ����7>�-�������6� ����E� (���������V����$����#�����3���
136
���3����24 ����:�����:����������1:�� �4�������������&!������#����������
���0�� ��������������#���
"��������� .�A� .�A� ��� 9L�g�� �� ���� ���� �������� Z�[� �����
������ ���� ��������� ��A� ���� ��� �� 9L�$*� �� 9L��$$� ������ ������� ���
� #��#�����������0�������6�������������� ��������1:�88���<<������� ����
���� �� ���������������� �������������� ��� �������������#����
! #����2 ��� �� ���/���� ��� �2� � ��2���� ��� �����A� � ���������
;���A� ����������� .�� ��� ������� ��� �7�24 ��� ��� 2���� ��0�7����� �� E�(��
������ ������� ������� ��� ���#����� ���� ���/���� ��� �2>� ��� ������� ���
�����4 ��� #��� ��� �� � �%O � ��� ������ ����� � . ��� .�� �� � ��2��� ��� 1:�
�������� �� ���� ����� ��� � ��2��� �/���� ��� ��,� � �/� ����N���������� <���
��4�� �� �2�� ��� ���#����>� � �������� ���#�� �� ���� ������� ��� �7�24 ���
�� ����%O ����������?� ��2���*�,N��������@�������������������� �O �?��,� �
N��������@A� ��� � ��2 �� �2� ������� ��O � ?��,�(N��������@� �� �O� ?�������������������
����N��������@� � . ��� .�� � �������� ���/��� ��� �2� ���#�� ���� ��� ��
��2 ����7�24 ������� (O �?�$� �N��J���@���
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
5��� �����8>�C����������E�(����E��(��������������� ��������#�����3�A��6�2�������������9L�$*����#�������
H�����
H����"�
137
&�� ���A��������������������7�24 ������2������0�7�������E�(��������
���#��������� � ���� ����������/��������2��������2��������#�����
������������3�������������������#�����������������E��(�A�6�2������
9L�$*A���2��(��,��K� 3���������/�������2������������� ���2�������
������������������������4 �������������O ��
��������� ���� �������� ��A� ��� ��������E�(�����(����9L�$*� ���$$�
������1:� ���������� �&!������������7���������������/�������0�������
&���������������� ���9L��$$� ��������������1:�������������/�������
�2���������A�����FA������������E�(�A�E��(����9L�$*��������� ��� ���
������' ��� ��� � �������� � �������A� ����� ���� ������� ��� � #��#����� �
��7��������0��������������/��������2�.����#������� ��������������
3���;�������
&������� ����������3���;������ #��#� ���7�� ���������������������
���� ��� ���������� Z*[�� ��� �0��� ��� ����A� 3�� ���������� �� ����� �� ���
�� ���/��� ��� �2� �� ���7�������� ��� ������� E�(�� � �8��� C�
������� �� ��� ����� ���/��� ��� �2A� ����� �0����� ���� �������A� �����
����� ��� � ��� ������� � ������ ��� ������� V��/�� � �����)��� ����
��������� ��0��� �� ��� ����� ��� ���� �� 7�� ��� �8�� ��� ����� �����������
����� � �����)��� ������ ���� �0����� #�� �/� ���� ��� ���' ��� .' ���A�
d"J""���
C� -"<&� �� &!�� ����� ����� ���� � ��2�� (����� V������� �� ����� ��
��2��(����.�� ���3��������������� ������2����Bk�A%A������������������
&!�� ��#��� ��� ������� .���� ����� ��������� ��� /� �0���#��� ��� ����� ��
����������������� ��.\4 ���������.\� ����1:� ���������� �&!����� . ���
.�� � ���/��� ��� &!�� ��#��� ��� ������� .��� �� ��� �� -"<&� ���
���7����� ��� ,��% �A� �� �0�� ��� ��������� � ���/��� ��� ���0����� ����
#�������,�,� ���
�
138
0,00 1,00 2,00 3,00 4,000,00
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
0,24
RM
SD
( nm
)
t ( ns )
�
�
�
�
7.2.2 Sistema XTL+ DIX � Resultados e discussão
C��-"<&g������91A����� ��������������������������A���������������
��� ������ ���� ����������� ����� ���� ����� ����� �� ��2��� (���� �� (�� A�
��������#�� ����C������#�������/���������,��,±,�,� ��?��D�@A�,���±,�,�� ��
?%�D�@A� ,��(±,�, �� ?��D�@� �� ,��$±,�,� �� ?(,D�@�� ����� ��� ������ #������
��������0������ ��4 �������0������ ?,�� ±,�,� �����D�A�,��(±,�, ���
%�D�A�,��*±,�,% �����D����,��(±,�, ���(,D�@A��0���#����.�� ������ ��
������������#�������/��������-"<&������� ������ ��� ���.������������
� ����/��������0������� ������ ������0�������C�������������� ������
�� �8��� 6� ��D�A� �� ������ ��� �������� /� ���� �� 2�A� ��#���� U� �����
��#��� ���������2����K������ ���K������� �� ����� ���7����������������
��������� ��� ������������&�#��������0���.����������������������
5��� ������>�-"<&���&!�A� ���0�� ��������������#�A����� ��������������
139
�����������/��Q�������������0���� ���������� ��������K��������
�����������D�A�������������������������������7������ ���Z�[���
&���2��(�� ��0���#����.�������� ������ ������������� �� ���� ���
������� �����������7�#��������2����A���������#�� ��A��������� ��C����� ������
�� ����������7�0��������������� ���� ���������#�����������������E�L������ ����
�� ��2�)��� .�� �� ����� �� �����B�� K� �91A� ������ ���� ��� ��� �0���#��� �
�4 �������0�����A������� ������0������2��������0������������� ���
��� ��� ������������� ���������U����������;���A�(,D���K����������
;���A� ������ ������ ��� ����� ���������������#�����&����� ���� 2���A�
� ��� � �8�� . ��� � �91A� � ����� �� ��� �0������ ��� ����� ��
������������� ��� ��� ���� ��J��2���A� ��� �� ����� ����� ���0������� ��� ��
���� ��� ��� ��A� �� .�� ����� ���� #����� ����� ��� ����� ����' ���� fechaabreD − �
�� ������� ��� ������� �������0���#�������0�������������A������/��
%�D����
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 10,000,00,10,20,30,4 0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 10,00
0,00,10,20,30,4 0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 10,00
0,00,10,20,30,4 0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 8,00 9,00 10,00
0,00,10,20,30,4
t ( ns )
25ºC
RM
SD
( nm
)
45ºC
55ºC
70ºC
�5��� �����">�-"<&����91A� ������ �����&!�A����� ��������������
140
0 20 40 60 80 100 120 140 160 1800,00,10,20,30,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
0,00,10,20,30,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
0,00,10,20,30,4 0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
0,00,10,20,30,4
Resíduos
25ºC
45ºC
RM
SD
( nm
)55ºC
70ºC
��
0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,001,2
1,4
1,6
1,8
2,0
2,2
2,4
2,6
2,8
3,0
Dab
re-f
echa
( nm
)
t ( ns )
45ºC XTL+DIX XTL
5��� �����(>�-"<&���������������91A� ������ �����&!���
5��� ������>�&0������3?�@�����7�� ����91�U�%�D�� ������ �����4 ������&!���
141
6���2��(��%������ ��� fechaabreD − �U�%�D������7�� ����91� ������ ��
�� � �4 ��� ��� �0������� V������� �0���#��.�A� ����� ����� ������� ��� �
�8�A������� ������0������&!��/��������.�������� 2���� �����#���� ����
��#��� �����H0������3I��������� ��
6� ���0������� ����� �� �� ��� ���� � ����� � ����� �� ��� ���
�0������ ���� ����� �������� ��� ������ ��0�3��� Z%��[A� ��� ������ ��� ���
������� U� ������������ ��� ������ �A� � ��� � ����� �� ��� �0�����A� ��� �2 ��
����A�/��� �������� ��� �������������������������������������� ����
���������������� ��� ��Z%��[��
6�� � ��2��� ��� � ������� � ����������� ������ �&!�� ������� ��� ���
�������� �8�=&!�� �� �91=&!�� ��� ��� ��������� ���� �0��� �2��� �1.8.40.85 −±−≅ molkcal � ��� �0�� 7�� ����� ����� ���� ���� ���� .�� �
�� �����������0������/���������������7�� ���A�#�����.���������)���
�� ������ ���� �������� ��� ������' ��� �������� ���� �� ���#��� ����� ���
����������������������� ��� 7�� ���� Z�� [�� ��� �� ���)��� �2��A� 0�7�� ���
���������� ;����A� �� ��#������ ��� �0�� �� � ����� ���� ��4 ����� �� .��
���������0/��.����� ��2��������#���������2������ #/�����0���.����
��.\4 ���� ��������� ���� �� ����� ��#��� ���� ������ ���� ��� � ������ ����
����������
6��1:� ���������� �&!��������������������� ��0���(����C���������
����7�24 �����3����24 ���� #��#��������1:� ���������� �&!������ ��� ��������� �
��2��(�����
C�� ��������.�� ������1:� ���� ������ �&!�� �������#���+�� ���>�E�(A�
6�2���A� 9L�((A� 9L��(�A� E��$� �� E��(��� ����� ��� ���� � �8�A� �0���#����
.�� ������ �������� ������ ���������� �� ������ �����)��� ���� �������� E� (A�
6�2���A� 9L�$*A� 9L��$$A� E�(�� �� E��(�� �� �8��� -�2������ ��A� ��� ��������
E�(?�91@���E� (?�8�@� ������� �� �����7��� ��� ����������������#����
�� ���� �� �91� ����� ��� �� ��2���� K������ �� ������ ��� � ��� ��� �����
. �������7�� ���A����/���0��������� �������������B�������� ���� �����6�
����� ������ ��� ������� E�(� /� ����2�� �2��#�� ��� ��� ����� .�� ��
� ����)��� � ������������� ������ �&!�� �������� ����#��.�� �� ���E� (���
�8��� K�� ������� $A� ����������� �%� �������� �� �91� .�� ����� �#��
� ��2����/�������1:� ����?�������2�@���������#��.����*�,N��������������
142
�������� �� ���� ��8���� �����������%��������A�� �� ��������E�(��&��0���
(��A� �������� #��� .�A� ��� � ���� �� ��������A� �� ������� E�(� ����� 1:� ����
������ �&!������+����� ���� �����%O A�����FA� ������������ ������������
1:� �����������2�����������1:�����#�����������0�������
�
4��������"6�+�A����O A����1:�� ������91������0������&!���C�������������7�24 �����3����24 �������0������ &!�A� � ���� ��4 �����A� ���� ��� ��������� � ��2�� (���� 6� ��� ����� C��� �� C��� /������������� �������������7�24 �������2������0�7���������������E�(����$��
�0� "%D�>G ?� �%D�>G ?� %%D�>G ?� �8D�>G ?�
'��B,8*:-�/.R,06-�
'��B,8*A-�/.R,03-�
��66�/.R,8:A-�
��:AA�/.R,8AA-�
��:AA�/.R,8:A-�
��BB�/.R,0A-�
��:BA�/.R,03-�
'��@>,8*:-�/.R,03A-�
'��@>,8*A-�/.R,03A-�
'��:B@�/.R,0AA-�
*�� �
**�,�
��(�
$*���
,�,�
**���
**�,�
���,�
� � �
���,�
**���
*(���
�(�,�
$,�,�
���%�
**���
**���
���,�
���,�
$,� �
*,�$�
*(�,�
��
��� �
�%���
**�,�
���(�
(��*�
�,�$�
�����
�%���
*(���
��
%��$�
��
**� �
$ �,�
�����
�,�,�
%(� �
�
�
C�������� ��������6�2���A�9L�((A� 9L��(�A�E��$���E��(������� ���
+�����1:� �����������0�����������3 ��������������� ���2������8��������
� �����)��� �7������ 2� ��� ����� �� �����3 �� ��� � ��2��� ������ ���
� ����)���� ��������������8�k&!�����91k&!���
V���������������������� �����)����������� ���������������/�������
�2� .�� ��� � �� ���� � ��2���� ��� �����A� ����� ����� ���� ������ ��� � �8���
&��������� �� �� ��2���������� �����3 ��� U.��� �0���� ��� � �8�A� #���
��2��(�����K���������91A���������������2��(���A���0/������� �� �����
���/��������2������� ������#�������������������4 ����<���������/����
�� ���.��������������#���������7�24 �������2������0�7������� ���% O�
��� ������ ?� ��2�� �/��� ���*N��������@� �� �� ��2 ��� �7�24 ��� �� ��� (O� ���
������ ?��,� N��������@�� V�� � ��2 �� �2� ������ Q������ ���� ��� $O��������������
143
?�$� N��������@����%�O �?��,��N��������@��V��/�� � 3��������������/����
��� �2� ����� ��;7��� ��� ������� E��(�A� ��� ���� ������ �� ���7�������� ����
��������E��$���6�2�����C�������/��������2������������ ���� ����������
�91A����������� ��8�A�����������������������4 ����� �����.���O ���
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
6� ����� ����������/��� ��� �2� ���0������ �� ���7�������� ����
�������� E�(�?�8�@� �� E��$?�91@� /� ���� �� 2� ��� �����3 �� � ���� ��
7�� �����8�����91��K������ ��������������������3���;���������2�����A%�
�� &!�A� ������ �������� ��� ����� ���;������ Z [A� �� #��� .�� ������ ���
��� ������������������.�����.�������������E�(�?�8�@���E��$?�91@� ���
��F������� �����K���������7�� ��������������A������ ���������������
/�.���������.������������������ ���;�����������#�������������������
���/�������2� ��������� ��C:����:=��6���2��(��$������ ������.���
��������� ����� ���3���;����� ����� 7�� �����8�� ���91�� 6����/��� ��� �2�
���0������ �� ���7�������� ���� �������� E�(�� �� �8�� �� E��$� �� �91� /�
�� ������������� ��� ��� �
�
5��� �� ���%>� -������� E��$� �� E��(�A� ���#�����3�A� 6�2���� ��� ��� �� 9L�((� ��� #����A� ���0������ ��� �� F� �� �� ����' ����� ����X����� ��� Y�� 6�� ���/���� ��� �2��������� ����� ��� ������ ��� �����4 ��� ������7����� ��� %,O � ��� ������ ����� ��������������91��(,D�A� ������ ��2������
H����
H������
144
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
K�� ��� ����� ����� � ��� � ��2�� (��$A� �� �.�� ����������� /�
��������������������E�(�� ��8����E��$� ��91A����/���������� �����
���������������������������� ����A� ������������.�� �����������/���������
�������/�������2�.�� ��� ������������������������C:����:=A������������
��/��� �� ��#���� ��� �7�24 ��� ����/��� ��� �2� �� ������ U����/��� ��� �2�
���������� ���;����Z*A�,[A���2��(��(���
&�� �� ����� 2���A� ��� ������ ���� � �������� Z*���[A� �� 7�� ���� ��
������ ��� �7�0��� ��� ������ ��� �� ��� ����� ��� ���� � ��� �� �.��
����������� ������� ����� ������� E�� �� 6��� �������� ��A� ���� �0��.\� ���
���0�������� ��� �� � �7���0� ��A� ����� ������ ��� �� �����A� ���� � ����)���
�������������� ���� �������� ������� ���E�� �� 6��� �������� ���� C�� ��������
5��� �����>�"�� ��������3���;����� ���.��� ��� ��������E�(�JE��$� ���� ����� ��#����������.�� ���;��������
I H����>23�?�E�H���>24�?
I H����">23�?�E�H�����>24�?
I H����>23�?�E�H���>24�?
I H����">23�?�E�H�����>24�?
•
•
•
•
•
•
145
E����6�������� �������������������� ��#��������� �������������������
0�������0�������������
�����������������������.������� ����A� ���/������#���� �������
��� ������������ ������������7�� ���A��������������������� ��U�����
� ����������� ����A�.��/����� ���������������/��������2� ����������#���
V������� ������ .�� �� 1:� ���� ������ �&!�� F ��� ��� ���� � ��� ��������� ���
���/��������2������ ���� ����������#�� �����7��������������������E�(��
� �8�� �� E��$� � �91� �� ���� �� �� ��2����� ������������ ��� ��
�0�� ��� ���������� 9������ ���0������� � �������� ����� ?��2����� �� ��2���� ���
�����@A����0��������������������������0������?� ����)���� ������������A�1:@�
�������� ��������/��������2���������2��������0������� ���2�����
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
�
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
I H����>23�?�E�H���>24�?
I H����">23�?�E�H�����>24�?
I H����>23�?�E�H���>24�?
I H����">23�?�E�H�����>24�?
5��� �� ����>� "�� ����� ��� 3���;����� � .�� � ���/��� ��� �2� �����#�� �� �.�� ����������������������������
146
7.2.3 Conclusões
&�� �� � ���� 2���A� � ��� � �8�� . ��� � �91A� � ����� �� ���
�0������ ��� ����� �� ������������� ���� ���� ���� �� ��2�)��A� ��� �� �����
���0������� �� ���� ��� ��� ���� V��� � #����2���� ��� � ����)���
� ������������� ������ ��0�����A� �� �������� .�� 3�� �� 2� ���
����������� � ���� �� ��� ����������������������� ��� 7�� ����� 6�2 �� ��������
�� ����A��������������������������������A������������ ������������� ���
��� ������� 1:� ���� ������ �&!��� C�� �������� ���������� ����� ������ ����
��������������1:� ���������� �&!�������� ���#����������������� �����
�����7�� ���A���������>�E�(A�6�2���A�9L�((A�9L��(�A�E��$���E��(�� �
�91� �� E� (A� 6�2���A� 9L�$*A� 9L��$$A� E�(�� �� E��(�� � �8��� &�#���� U��
���.\� ����1:�.�����������������������������0�����A���������������.��
����� ���� ��� 2� ���� ����� ��#���� ���� ��7���� ��� �0������ �� ������ ��#�� ��
�� ��.� ���� ������� ������ �0������ ���������� �#���#������.���
3���;����� ������� "��/���� ��� �2� ���� ���#��� ������ ��� �����4 ��� �����
��������� ���2��������������&�����������/��������2�������������� ��
���7�������� ���� 2����� ��0�7������ ���� �������� ����������E�(�� ��8����
E��$� � �91� ���� 1:� ���� � ��2�� �� ������ ��� ��,b���������� ����� ���
���/���� ��� �2� ���#��� ���� ��� ��� ��� ����� ������� ��� �7�24 ��� ����
��0�7������� 9��� ���/���� ��� �2� ���� ���##���� ��� ������� ����� ���
����������� �� 3���;����A� #����� .�� ��� ��� �����A� ����������
�7������ ���� ��A��� �����������������������.�0�������/�������2�
������� ��.\4 �������.����� �����������������/�������2������#� ���
�.�� ����������� ���� .�� ������ � ������������ 6� ����� �� ��� �2�� ����
������� ��� ��2��� ��� �������� ���������� ��� ���� ���������� ��� ���� �������
������ ���������3���;������ ����������������������������������� ������
�
�
�
�
�
147
Referências �
Z�[�MMM����0���2J��0�
Z�[� P �� P �� P N��3NA� -�� 1�� ���0���A� P �� 1�� < 2A� �̀� &#����A� "�� _2�3�A� ��� ��
��� � A�(A�%$(A�?�**%@��
Z [�b��E�0��A�E��b�� ���3�A�"��:L A�6��<�3��3��A�P ��<��� ��A����b��NLA������ �����A�
(�A�� %(�A�?�**�@��
Z%[����:��� 2�"�A�6��:�� �̀�P 2A���� ��A�A�**$A�?�,,(@��
Z�[� �̀�a�22A�b��E�0��A�"��E22 �2A�G�E��P 2 ��A����b��NLA���� ����� � A��A��**,A�
?�**,@��
Z$[�"��6��C1!R�!-6A�8��E��EG!"6-6�<A� �̀�-��-���G<<!C1A�+�� �̀�"�&-6KCA�+�����ECaaCA�
1�����<��K�99CA�"!����!�����A�(%7>"?A�% A�?�,,$@��
Z([� �̀�+��<��� �� A�C��<�00��� A��*/�A��7>%?A��,�A�?�,,$@��
Z�[�1��1��1�22��A�<��b��2� ��A�b����N���A�<����� 9��7���A�"��b��83�A���� 6 ����A� -��P ��
V��N���2���A�<��1��� A�+�8<�1���A�%87>"?A� , A�?�,,�@��
Z*[�K��b�N� �A�6��<3� �L�A�"��-�A�&*�������#���!�� � 1�A�"(A�%��A�?�***@��
Z�,[�"��1��<� ��A��� �!�� !%�78A���(�A�?�**,@��
Z��[� &�� 9��A� <�� E�� P ��3���A� K�� -�� E��N��A� &�� E�� b��0� A� -�� 6 �� LA� �̀� P ��� A� -��
6��0������A�"!�����!��� � �A�"A���$�A�?�**�@���
�
�
�
�
�
�
�
�
�
148
Conclusões gerais
6� ��������0������� ��� 7�� ���� ������� ���� �� 0��� ��������
� ��� ������������� ���>�
,�-� ���2��������2� ���������������������/������������������� ������#�W�
,��-� �������#����������������W�
6� ��2����� /� �� �� ��.\4 ��� ��� ������ ��� � ����)��� � ��� ��
� ������������� ����#��� 6�� � ����)��� � ������������ �������� ��� �����
Q�������������������.\4 ��� ��91�.�� ��8���d ���U����#����A���91�
����� ���%� �������� ����2���A� ������������ �� ���� ��8�A� �F�� ������
�������������1:�� ������������������ ��2������� �������#����
C� ���� ��� � ���� 0��2� �� ���� ������ ���� ������ ��� � ���� �����
7�� ���A� ������ ��� .�� �� ���0��� ��� �7������ �� ������ ����
��������0���������6������� ��A���������������.�������� ���� ���A� ����������
��� � ����A� /� � ��2���� .�� ��#�� ���� � ��������� ����� �#�� ��� ���)��� ��
�� ���#������������������� �������������0������������������� ���
6�� ������������� ���� �������� ��� ��2�)��� ��������� ���� �����3 ���A�
��������� ��� ��� ������� ��#��� �������� �����3 ���� �� �� ��.� ���� ���
� ����)��� ���� �� �0������ ��0/�� ����� �����3 ����� !���� ������ ���
��#������ �� � ��2��� ��� ��#���� ���������� C��� �� ��.\4 ��A� /� .�� ��
���/���� ��� �2� ����� ���� �� ������ ��#�� ��� ������� �� ��0/�� ���
�� ��2��)��� �����3 ���� ��� �����)��� ��;7���� ��� �������� ��� ����
���������� .�� ���� ��#��� � 3���;����� �� ��2���� �A%�� ������ ���������
�����0���������� �������������������������������� ������
�
�
�