CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA

1. Calcule k, Rs, N e H para as substncias relacionadas no cromatograma, sendo o tempo morto obtido com uma injeo de

NaNO3 (to = 1,423min).

DIURTICOS W1/2 k Rs N H

amiloride 0,417

acetazolamida 0,398

clorotiazida 0,411

hidroclorotiazida 0,360

8-cloroteofilina 0,168

triantereno 0,200

hidroflumetiazida 0,194

diclorfenamida 0,226

clortalidona 0,183

furosemida 0,200

indapamida 0,216

benzotiazida 0,210

ciclotiazida 1 0,212

ciclotiazida 2 0,231

bendroflumetiazida 0,236

bumetanida 0,287

probenecida 0,311

cido etacrnico 0,346

espironolactona 0,415

Substncias (tR): amiloride (3,646), acetazolamida (4,322), clorotiazida (4,831), hidroclorotiazida (5,324), 8-cloroteofilina (PI)

(5,983), triantereno (6,414), hidroflumetiazida (7,364), diclorfenamida (8,766), clortalidona (9,208), furosemida (12,800),

indapamida (13,557), benzotiazida (14,282), ciclotiazida 1 (14,603 e 14,856), bendroflumetiazida (16,020), bumetanida (18,046),

probenecida (18,402), cido etacrnico (18,895), espironolactona (20,587).

2. Defina claramente os seguintes termos:

(a) Cromatografia

(b) Fase mvel

(c) Fase estacionria

3. Como classificar o tipo de cromatografia de acordo com a fase mvel utilizada?

4. Quais as principais caractersticas (vantagens e limitaes) das tcnicas cromatogrficas CLAE e CGAR?

5. Como classificar o tipo de cromatografia lquida de acordo com a fase estacionria utilizada?

6. Quais so as principais diferenas entre a cromatografia lquida clssica e a cromatografia lquida de alta eficincia?

7. Quais as vantagens e as limitaes da CLAE?

8. A separao cromatogrfica em fase reversa entre o cido saliclico e a nicotina deve ser realizada abaixo de pH 5,0 ou

acima de pH 7,0. Dentro desta faixa de pH, dependendo do valor, a ordem de eluio destes compostos sofre inverso.

Explique este comportamento.

cido saliclico Nicotina

9. Em fase reversa, qual a relao existente entre pH e tempo de reteno?

10. Com que objetivo so utilizadas pr-colunas?

11. O que um pico de formato Gaussiano?

O OH

OH

N

NH

12. Como calcular a assimetria de um pico cromatogrfico?

13. O que vem a ser fora e seletividade da fase mvel?

14. O que entende pela expresso atividade relacionada com as colunas utilizadas em CLAE, em fase reversa?

15. Quais os principais componentes de um cromatgrafo a lquido e suas funes?

16. Qual a diferena entre bombeamento isocrtico e por gradiente?

17. A fase estacionria de uma coluna analtica est diretamente relacionada com o mtodo de anlise. Quais so os possveis

mtodos analticos empregados em CLAE?

18. Amostras de origem biolgica (plasma, soro, urina, etc.) e de origem vegetal (extratos concentrados, extratos secos, etc.),

normalmente no devem ser injetados diretamente nas colunas cromatogrficas. Por que?

19. Em cromatografia de fase reversa na anlise de cidos e bases fracas, o pH da fase mvel determinante para o tempo de

reteno dos analitos. Explique o comportamento do naproxeno (pKa 4,2) e da loratadina (pKa 6,8) com relao a variao

deste parmetro (tempo de reteno) quando analisados por CLAE-UV/Vis com fase reversa utilizando coluna C18 e fase

mvel contendo misturas de metanol:tampo fosfato nas trs opes de pH abaixo:

Experimento: a) pH = 3,0, b) pH = 6,8 e c) pH = 7,8

20. Qual das afirmativas a seguir verdadeira ou falsa? Explique as afirmativas falsas.

a. ( ) Molculas polares podem ser facilmente separadas por cromatografia de fase normal.

b. ( ) A reteno de solutos na excluso molecular pode ser alterada pela variao da polaridade da fase mvel.

c. ( ) A cromatografia de Excluso em Gel a mais eficiente para molculas de alto peso molecular.

d. ( ) Na cromatografia em fase normal, a fase mvel mais polar que a fase estacionria.

e. ( ) Na cromatografia em fase reversa, utilizando fase estacionria quimicamente ligada, as cadeias ligadas so apolares.

21. Numa separao cromatogrfica, as condies de anlise so: Coluna ODS, 150 x 4,6 mm, dp = 5 m ; Fluxo 1,0 mL/min ;

Presso de trabalho 1600 psi ; Temperatura 25 oC ; Fase mvel ACN-H2O 35:65 ; Tempo total de anlise 17 minutos.

a) O que acontece com a presso de trabalho se o fluxo de fase mvel for modificado para 0,8 mL/min?

b) O que acontece no k das substncias se for utilizada coluna com mesmas especificaes, mas 300 mm de comprimento?

c) O que acontece com a presso, tempo total de anlise e valores de k, se dp = 4 m?

22. Uma mistura formada pelos compostos a baixo separada em uma coluna de C-18 usando uma mistura de MeOH/H2O

60:40 como fase mvel. Qual a ordem de eluio dos compostos? Quais so as foras intermoleculares que atuam sobre a

separao destes analitos? O que voc faria para aumentar a reteno de todos os compostos? Qual a diferena, com

relao ao tempo de anlise, entre uma separao otimizada no modo isocrtico e no modo gradiente? Que tipo de detector

pode ser utilizado nesta anlise?

1- benzeno, 2- fenantreno, 3- pireno, 4 antraceno, 5- benzo(a)pireno, 6- naftaleno, 7- criseno

H3COC

COOH

N

Cl

N

O O

1 2

5

3

6

4

7

loratadina

naproxeno

23. Explique o mecanismo de interao analito-FM e analito-FE nos cromatogramas A e B.

Anlise de anestsicos locais: 1) benzocana (pKa 2,5) 2) lidocana (pKa 7,9) 3) tetracana (pKa 8,2) 4) etidocana (pKa 7,7). Coluna Radial Pack C18, ACN:H2O (60:40), pH 4,0. 1% trietilamina no cromatograma B.

24. Sabendo que a ordem de polaridades A>B>C, correlacione as colunas abaixo:

a)Fase Estacionria Normal (polar),

fase mvel de baixa polaridade

b)Fase Estacionria Normal (polar),

fase mvel de mdia polaridade

c)Fase Estacionria Reversa (apolar),

fase mvel de alta polaridade

d)Fase Estacionria Reversa (apolar),

fase mvel de mdia polaridade

25. Todos os cromatogramas abaixo contm os mesmos analitos: (1) 9,10-antraquinona; (2) 2-metil-9,10-antraquinona; (3) 2-

etil- 9,10-antraquinona; (4) 1,4-dimetil- 9,10-antraquinona; (5) 2-t-butil- 9,10-antraquinona. O que muda so os solventes

utilizados como fase mvel no modo isocrtico. Faa a correlao entre os solventes e os cromatogramas:

a)70% metanol / 30% gua

b)40% metanol / 60% gua

c)50% metanol / 50 % gua

d)60% metanol / 40% gua

Obs: Estrutura da 9,10-antraquinona

A B

H2N

O

O N

NO

H

N

NO

H

1) 2) 3) 4) H9C4

H O

N

O