7/29/2019 Extrao de DNA da Cebola

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Extrao de DNA do IP

Material- Folhas de Ip do Cerrado.-Uma faca de cozinha (muito cuidado, pea a ajuda de um adulto)- Dois copos tipo americano-gua quente (garrafa de caf, 60 C)- gua filtrada-Sal de cozinha-Detergente de louas neutro-lcool etlico 92,8% gelado (-10C, deixe no congelador 1 hora antes derealizar o procedimento)-Basto fino de vidro ou madeira (ou canudo de plstico mais duro)-Filtro de papel (caf)-Gelo modo-Bacia para o gelo-Pilo

Procedimento- Macere as folhas do IP ou de qualquer outro vegetal com o auxlio de um pilo. No copo americano, coloquequatro colheres de sopa de detergente neutro e uma colher de ch de sal e adicione gua at a metade, mexa bemat dissolver completamente. Coloque as folhas agora maceradas no copo com a soluo detergente/sal e leve aobanho-maria por 15 minutos.-Retire o copo do banho-maria e resfrie-o rapidamente, colocando-o na bacia com gelo durante 5 minutos.-Coe a mistura no coador de papel, recolhendo o filtrado em um copo limpo.-Com cuidado adicione meio copo de lcool gelado ao lquido filtrado, deixe-o escorrer vagarosamente pela borda.Formam-se duas fases, a superior, alcolica, e a inferior, aquosa.-Mergulhe o basto do copo e, com movimentos circulares, misture as fases. Formam-se fios esbranquiados, queso os aglomerados de molculas de DNA.

Entenda o que acontece

Depois que o procedimento realizado possvel visualizar facilmente pequenos grumos

esbranquiados que so os filamentos de DNA. Lembre-se que a visualizao aolho nu possvel porque a quantidade de DNA muito grande e os filamentosesto todos agrupados.

7/29/2019 Extrao de DNA da Cebola

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MaceraoA macerao quebra a parede celular, que a estrutura extracelular que envolvee protege a clula vegetal.

DetergenteO detergente ajuda a dissolver a bicamada lipdica que compe amembrana plasmtica, as membranas das organelas e a carioteca que limitao ncleo.

SalO sal ajuda a manter as protenas dissolvidas no lquido extrado,impedindo que elas precipitem com o DNA.

Banho-mariaO aquecimento em banho-maria visa o desarranjo dosfosfolipdios das membranas e a desnaturao parcial das

enzimas do tipo DNAse, evitando que o DNA seja cortado em pequenosfragmentos, o que dificultaria a sua extrao posterior.

lcoolO DNA no solvel em etanol (lcool etlico), por isso promove oagrupamento dos filamentos, tornando-se visveis. Quanto maisgelado estiver o lcool, menos solvel o DNA vai estar.