Farmacogenética Farmacogenômica A promessa da medicia personalizada.
Farmacogenética e Farmacocinética - P450
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Relação Entre o Polimorfismo Genético do CYP2D6 e Farmacocinética do
Tramadol Em Voluntários Chineses(Seminário sobre o artigo científico)
CRISTIANO COTA BANDEIRA
Princípios da Farmacodinâmica e FarmacocinéticaProfessor Evanguedes Kalapothakis
Outubro de 2011
Universidade Federal De Minas Gerais - UFMGInstituto de Ciências Biológica - ICBMestrado em Inovação Biofarmacêutica
Artigo Original
Introdução
CYP2D6– Importante enzima da família do citocromo
p450– Responsável pela catálise de mais de 80
drogas (Ex. Antidepresivos tricíclicos, neurolépticos, beta bloqueadores, opióides e antiarítimicos)
Introdução
• Descoberta do polimorfismo da oxidação da debrisoquina(antihipertensivo)/esparteina(antiarrítimico)
(1970)
• Um grande número de estudos famacogenéticos tem sido realizados e variações etnicas entre grupos foram
observadas
Introdução
• 7% Caucasianos
• 1% Asiáticos
CYP2D6 pobres
Metabolizadores
Mutações nos AlelosCYP2D6*1CYP2D6*2CYP2D6*10
Genes CYP2D6(Asiáticos)
Redução na Atividade Catalítica da Enzima
IntroduçãoMutações nos Alelos
CYP2D6*1Formação de Pro34, Arg296 e Ser 486
CYP2D6*2Substituição Arg296Cys e Ser486Thr
CYP2D6*10Mutação em C/T 188 e G/C 4268 causando substituições em Pro34Ser e Ser486Thr
Redução na Atividade Catalítica da Enzima
Introdução
• TRAMADOL– Droga sintética– Agonista dos receptores µ (nociceptivos)– Usado para alivio da dor crônica severa e
aguda– Droga com menor eficáfia do que a morfina– Rapidamente absorvido por via oral– Apresenta picos de concentração plasmática
de 1-3h
Metabolismo do Tramadol
O-demetiltramadol
M1
M2
mono-N-demethyltramadol
Metabolismo do Tramadol
O-demetiltramadol
M1
M2
mono-N-demethyltramadol
O – desmetilação induzida por CYP2D6 (in vitro e in vivo)
Introdução
• Pelo Tramadol ser um analgésico bem tolerado, foi escolhido para realizar uma nova proposta de ensaio de fenotipagem para o CYP2D6.
Introdução
• Para detectar um conhecido polimorfismo nucleotídico (SNPs) do CYP2D6 foi utilizado a técnica de Microarray (Oligonucleotide microarray) para avaliar de forma mais simples a frequencia alélica de CYP2D6 na população Chinesa (Método rápido e confiável)
Objetivos
• Investigar a relação do polimorfismo genético do CYP2D6 e a farmacocinética do tramadol na saúde das pessoas Chinesas
• Se a correlação Genotípica e Fenotípica é importante para determinar se o tramadol é adequado para investigar drogas para medir a atividade de CYP2D6.
Materiais e Métodos
• Voluntários (Pacientes Chineses)– Protocolo aprovado pelo comitê de ética Chinese
People liberation Army General Hospital e conduzidos de acordo com o Guia de Boas Práticas Clínicas.
– Participaram da fase genotípica do estudo 312 voluntários
– 18 - 45 anos (33,8± 5,8)– 55 – 80 Kg (63,6 ± 8,4)– Não podiam ter feito uso de outro medicamento,
fumado e nem ter ingerido álcool, 4 semanas antes do estudo.
Materiais e Métodos
• Voluntários (Pacientes)– Todos os pacientes foram considerados
saudáveis, submetidos a histórico médico, exames físicos, laboratoriais e eletrocardiológicos
– Nenhuma insuficiencia renal ou hepática foi encontrada
– Durante os testes fenotípicos, nenhum uso de drogas, álcool ou bebidas com cafeína foi permitido.
Materiais e Métodos
• Genotipagem do CYP2D6– Amostras de DNA– Sintese dos Oligonucleotídeos– Reação em cadeia da Polimerase (PCR) e
eletroforese com gel de agarose– Construção do wild-type e do plasmídeo mutante
recombinante (PGEM T4-vector/Promega)– Preparação do MICROARRAY do DNA– Hibridização e detecção do sinal– Sequenciamento do DNA (DNA Sequencer)
Materiais e Métodos• Protocolo de Estudo
– De todos os voluntários que participaram dos estudos genotípicos 40 foram selecionados para os testes fenotípicos
– De acordo com seus genótipos, foram divididos em 4 grupos (10 em cada grupo)
Materiais e Métodos• Após um descando rápido, todos os
pacientes dos 4 grupos tomaram 100mg de Cloridrato de tramadol com 200mL de água.
• Duas alimentações padronizadas foram padronizadas de 4 e 10 horas após a administração da droga.
Materiais e Métodos
• Amostras de sangue venoso foram coletadas em tubos heparinizados imediatamente após 0,5 -1 – 1,5 – 2 – 3 – 4 – 6 – 8 – 12 – 16 – 24 – 32 horas após administração.
• O plasma foi separado e mantido a -20ºC até o momento da análise.
• A urina foi reservada e coletada nos tempos de 0-8, 8-16, 16-32 horas após a dosagem.
Materiais e Métodos
• Análise quantitativa de Tramadol e Metabólico (M1) usando HPLC – Detector de Fluorescência
• Detecção e quantificação desses componentes no plasma e na urina das amostras
Materiais e Métodos• Parâmetros Farmacocinéticos
– Utilizou-se o software DAS v 1.0 (Anhui Medical University, Wuhu, China)– Taxa de eliminação constante (k) foi estimada utilizando a inclinação da
concentração plasmática terminal– O tempo de meia vida (T1/2) foi calculado dividindo 0,693 por k.– A área total da curva concentração plasmática X tempo (AUC 0-32) foi calculado
seguindo a regra do trapezio simples– A AUC de 0 para infinito (AUCinf) foi calculada como AUC inf=AUC0-32 + Ct/k
(Ct é a última concentração plasmática medida)– Clearance de formação do tramadol e seu M1 foi calculado: CLform = AeM1(0–
32) ⁄AUCinf.– O Clearance oral do tramadol (CL0)foi determinado dividindo a dose do tramadol
pela AUCinf calculada– O Clearance renal (CLR) foi calculado dividindo a quantidade de tramadol
excretado sem mudança pela urina após as 32h [Ae 0-32] pela AUC 0-32 de tramadol no plasma (CLR = Ae 0-32 / AUC 0-32 )
– O Cmáx , concentração máxima da droga no plasma, foi obtido com a medida do valor.
– A taxa do metabolização (MR) do M1 urinário foi calculada (Aet/AeM1), de cada um dos voluntários (0-8, 8-16 e 16-32h)
Resultados
• Genótipos das 312 amostras de DNA
41CYP2D6*10/*10128
26,6CYP2D6*2/*1083
10,6CYP2D6*2/*233
13,5
8,3
%
CYP2D6*1/*242
CYP2D6*1/*126
GenótipoVoluntários
Resultados
• Características dos Voluntários– 40 selecionados (25 machos e 15 femeas) 10
por grupo
Resultados
Resultados
Resultados
Resultados
Resultados
• Parâmetros Farmacocinéticos Avaliados
Resultados
• Parâmetros Farmacocinéticos Avaliados
Resultados
• Parâmetros Farmacocinéticos Avaliados
Resultados• Parâmetros Farmacocinéticos Avaliados
Resultados
Conclusão• A atividade de CYP2D6 é importante para a
avaliação da farmacocinética do tramadol
• Voluntários CYP2D6*10 mostraram baixa redução da atividade mais que em 10* homozigoto do que 10* heterozigoto
• O metabolismo do tramadol foi prejudicado severamente em CYP2D6*10/*10 e em CYP2D6*2/*10 se comparados com CYP2D6*1/*1 e CYP2D6*2/*2
Conclusão• Por esses alelos serem os mais comuns nos voluntários
chineses, genótipos CYP2D6 podem ser um fator determinante fenótipo CYP2D6 dessa população
• Esses dados vem a elevar as prospectivas de estudos futuros que relacionam o polimorfismo genético de CYP2D6 e a farmacocinética do tramadol em pessoas Chinesas na busca de outros tratamentos mais específicos
• No entanto, genotipagem de CYP2D6*10 não é suficiente para predizer a disposição de tramadol no tratamento individual de pacientes
OBRIGADO!