Fundamentação teórica:

Técnica de Esgotamento por Estriamento:

A técnica de semeadura por esgotamento é utilizada para obtenção de colônias soladas em meio sólido. A técnica visa obter colônias isoladas de bactérias presentes em materiais biológicos, permitindo a diferenciação de diferentes bactérias.

Técnica de Esgotamento por Espalhamento:

Esta tecnica tem a finalidade de espalhar o material na superfície da placa com o auxílio de um swab para a obtenção de colônias isoladas após a diluição, realizando a semeadura por toda a placa de petri. A semeadura com o swab deve ser feita em três direções distintas, com diferença de 30 graus, e com a alça em toda a superfície, girando a placa.

Quando há desenvolvimento de colônias isoladas na superfície do meio, considera-se o isolamento correto. Neste método verificam-se as características de colônias quanto aos seguintes aspectos:

a) tamanho: o tamanho das colônias varia desde dimensões muito pequenas (puntiformes), com apenas uma fração de milímetros de diâmetro, até colônias muito grandes, com 5 a 10 mm de diâmetro. Outras bactérias, como, por exemplo Proteus sp espalham-se sobre toda a superfície do ágar.

b) borda: a periferia das colônias bacterianas pode formar muitos desenhos diferentes, dependendo da espécie. Pode ser inteira, ondulada, lobulada, denticulada ou franjada.

c) elevação: as colônias podem ser achatadas, espraiadas, convexas (baixa e alta), umbilicada, centro saliente.

d) cromogênese ou pigmentação: opaca, translúcida ou com pigmento.

e) forma: as colônias podem ser circulares, irregulares ou rizóides.

f) consistência da massa de crescimento: pode ser butírica ou de consistência semelhante à da manteiga, facilmente removível com a alça de inoculação: viscosa ou mucóide;seca ou quebradiça.

Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos (ANTIBIOGRAMA)

Antibiogramas são bioensaios conduzidos “in vitro” que visam testar a sensibilidade de bactérias aos antimicrobianos. A proposta primária deste teste é guiar o clínico na escolha do agente apropriado para a terapia. Os testes de rotina fornecem dados acumulados, que são informações sobre os agentes para uso empírico. Além disso, estes testes são utilizados para avaliar “in vitro” a atividade de novos agentes, e auxiliar no mapeamento da emergência de bactérias resistentes. A suscetibilidade antimicrobiana pode ser reportada qualitativamente como sensível, intermediário ou resistente; ou quantitativamente em termos de MIC (minimun inhibitory concentration) ou MBC (minimun bactericidal concentration).

1- Teste Quantitativo da sensibilidade aos antimicrobianos: Método de diluição: consiste em preparar sucessivas diluições dos antibióticos em meio sólido ou líquido e em seguida semear a bactéria em estudo. Após incubação determina-se MIC e/ou MBC.

2- Método de difusão de Bawer e Kirk (modificado pela FDA): é um teste qualitativo, no qual discos de papel impregnados com o antibiótico são colocados na superfície do ágar uniformemente semeado com o microrganismo. A droga se difunde no ágar e produz inibição do agente sensível, formando um halo de inibição que deve ser medido e comparado com tabelas padronizadas.

Ao invés de uso de antibióticos, pode ser utilizado produtos químicos que interfiram no crescimento bacteriano, como antissépticos e desinfetantes.No método de disco-difusão, um disco de papel filtro é embebido com uma substância química e colocado em uma placa de agar inoculada; uma zona de inibição indica efetividade.

Tipos de Desinfetantes:

Álcool:

Os álcoois exercem sua ação desnaturando as proteínas e dissolvendo os lipídeos. Em tinturas, eles aumentam a efetividade de outros produtos químicos anti-

microbianos. O etanol aquoso (60 a 95%) e o iso-propanol são usados como desinfetantes.

Halogênios (Iodo e Cloro):

Alguns halogênios (iodo e cloro) são usados isoladamente ou como componentes de soluções inorgânicas ou orgânicas.

O iodo pode ser combinado com certos aminoácidos para inativar enzimas e outras proteínas celulares.

O iodo está disponível como tintura (em solução com álcool) ou como iodofor (combinação a uma molécula orgânica).

A ação germicida do cloro baseia-se na formação de ácido hipo-cloroso quando o cloro é adicionado á água.

O cloro é usado como desinfetante em forma gasosa (Cl2 ou ClO2) ou em um composto, como o hipo-clorito de cálcio, o hipo-clorito de sódio, o di-cloro-iso-cianureto de sódio e as cloraminas.

Fenol e compostos fenólicos

Os compostos fenólicos exercem sua ação lesando as membranas plasmáticas.