Graduação em BiotecnologiaGraduação em BiotecnologiaDisciplina de Técnicas InstrumentaisDisciplina de Técnicas Instrumentais

Técnica assépticaTécnica asséptica

Prof. Fabricio Rochedo ConceiçãoProf. Fabricio Rochedo Conceiçãofabricio.rochedo@ufpel.edu.brfabricio.rochedo@ufpel.edu.br

fabriciorc@pop.com.brfabriciorc@pop.com.br

10 de junho de 2011

A técnica asséptica ...A técnica asséptica ...- Forma de trabalho que visa reduzir o risco de contaminaçãoForma de trabalho que visa reduzir o risco de contaminação

- Deve ser usada em qualquer procedimento de laboratórioDeve ser usada em qualquer procedimento de laboratório

- Apresenta falhas, portanto, não previne completamente todas as Apresenta falhas, portanto, não previne completamente todas as

contaminações; contaminações; entretanto, quanto melhor for a sua técnica, entretanto, quanto melhor for a sua técnica,

menor será o seu índice de contaminação!menor será o seu índice de contaminação!

*** O ar está repleto de *** O ar está repleto de poeira, microrganismos poeira, microrganismos

e esporos e esporos e você não vai querê-los dentro de e você não vai querê-los dentro de

seus frascos, cultivos, reações ... seus frascos, cultivos, reações ...

Os 7 mandamentos...Os 7 mandamentos...

1.1.A área de trabalho deve estar o mais longe possível da porta, ar A área de trabalho deve estar o mais longe possível da porta, ar

condicionado e da área de tráfego das pessoas. condicionado e da área de tráfego das pessoas. Janelas fechadas!Janelas fechadas!

2.2.Área de trabalho livre. Área de trabalho livre. Remova todos os itens desnecessários!Remova todos os itens desnecessários!

3.3.Limpar a área de trabalho, antes e após o uso, com etanol 70%. Limpar a área de trabalho, antes e após o uso, com etanol 70%. Mantenha Mantenha

uma pisseta perto da área de trabalho!uma pisseta perto da área de trabalho!

4.4.Certificar que ponteiras, pipetas, frascos... estejam estéreis. Certificar que ponteiras, pipetas, frascos... estejam estéreis. Fita para Fita para

autoclave!autoclave!

5.5.Organize a área de trabalho. Organize a área de trabalho. Destro x Canhoto!Destro x Canhoto!

6.6.Tenha tudo o que precisa à mão.Tenha tudo o que precisa à mão. Quanto mais você circular, maior será a Quanto mais você circular, maior será a

perturbação do ar!perturbação do ar!

7.7.Lave as mãos antes e após o trabalho. Lave as mãos antes e após o trabalho. Luvas!Luvas!

DicasDicas1.1.PlanejamentoPlanejamento

2.2.MinimizeMinimize

3.3.Abrir frascos inclinando-os Abrir frascos inclinando-os 45° 45°

4.4.Flambe pipetas de vidro e frascos abertos antes da manipulação. Flambe pipetas de vidro e frascos abertos antes da manipulação. Fixação!Fixação!

5.5.Evite distrações e interrupçõesEvite distrações e interrupções

Distâncias Distâncias para evitar movimentos desnecessáriospara evitar movimentos desnecessários

Exposição Exposição

Movimentos, Movimentos, eles criam correntes de ar. Trabalhe gentilmenteeles criam correntes de ar. Trabalhe gentilmente

Despejar líquidos de forma abruptaDespejar líquidos de forma abrupta

CCABINE DE ABINE DE SSEGURANÇA EGURANÇA BBIOLÓGICA IOLÓGICA (CSB)(CSB)““Banco de fluxo laminar”Banco de fluxo laminar”

““Gabinetes de biossegurança”Gabinetes de biossegurança”

As cabines de segurança As cabines de segurança biológica (CSB) são geralmente biológica (CSB) são geralmente usadas como contenção primária usadas como contenção primária no trabalho com agentes de risco no trabalho com agentes de risco biológico, minimizando a biológico, minimizando a exposição do exposição do operadoroperador, do , do produtoproduto e do e do ambienteambiente

CLASSES DE CSBCLASSES DE CSB

II IIIIIIIIII

CABINE DE SEGURANÇA BIOLÓGICA CLASSE II

Filtro HEPAFiltro HEPA

Fluxo de ar laminarFluxo de ar laminar

Fluxo de ar direcionalFluxo de ar direcional

Como usar a cabine?Como usar a cabine?““Os 14 mandamentos”Os 14 mandamentos”

1-1- Fechar o “sash” – vidro frontal Fechar o “sash” – vidro frontal

2-2- Ligar UV por aproximadamente 10 min Ligar UV por aproximadamente 10 min

3-3- Desligar UV, abrir lentamente o “sash” até a altura Desligar UV, abrir lentamente o “sash” até a altura

ideal de trabalho e ligar a luz fluorescenteideal de trabalho e ligar a luz fluorescente

4-4- Ligar a cabine (motor) e deixar operar por 5 min Ligar a cabine (motor) e deixar operar por 5 min

5-5- Lavar as mãos e antebraços com antisséptico, Lavar as mãos e antebraços com antisséptico,

utilização obrigatória de jaleco e se necessário EPIsutilização obrigatória de jaleco e se necessário EPIs

6-6- Desinfetar a superfície interna da cabine com etanol Desinfetar a superfície interna da cabine com etanol

70% e esperar secar70% e esperar secar

7-7- Somente carregue o material necessário para o Somente carregue o material necessário para o

procedimentoprocedimento

8-8- Não obstruir as grades frontais e traseiras de Não obstruir as grades frontais e traseiras de

retorno de arretorno de ar

9-9- Após carregar a cabine, espere 2-3 min para iniciar o Após carregar a cabine, espere 2-3 min para iniciar o

trabalho trabalho

10-10- Não é recomendado o uso de chama (bico de Não é recomendado o uso de chama (bico de

Bunsen)Bunsen)

Como usar a cabine?Como usar a cabine?

11- Após completar o trabalho, a cabine deve operar

durante 2-3 min

12- Desinfecção com álcool 70%

13- Desligar luz fluorescente e o motor da cabine, ligar a

UV se apropriado

14- Antissepsia das mãos e braços

Como usar a cabine?Como usar a cabine?

Dicas de trabalhoDicas de trabalho

PlanejamentoPlanejamento

EvitarEvitar o trânsito durante a utilização, principalmente abrir e fechar o trânsito durante a utilização, principalmente abrir e fechar

portasportas

Manter todos os materiais a pelo menos 10 cm dentro do caixilhoManter todos os materiais a pelo menos 10 cm dentro do caixilho

Separar o material limpo do contaminado na área de trabalhoSeparar o material limpo do contaminado na área de trabalho

EvitarEvitar o movimento de materiais contaminados dentro da área o movimento de materiais contaminados dentro da área

limpalimpa

Realize todas as operações contaminadas na parte traseira da área Realize todas as operações contaminadas na parte traseira da área

de trabalhode trabalho

Dicas de trabalhoDicas de trabalho

O material contaminado para descarte na região traseira da cabineO material contaminado para descarte na região traseira da cabine

Manter caixas de tips, eppendorfs e outros materiais estéreis Manter caixas de tips, eppendorfs e outros materiais estéreis

fechadas, abrir somente quando necessáriofechadas, abrir somente quando necessário

Evite Evite passar as mãos por cima de materiais estéreis, sempre passar as mãos por cima de materiais estéreis, sempre

manipular por trás ou pelas lateraismanipular por trás ou pelas laterais

Evitar Evitar a utilização de chama abertaa utilização de chama aberta

EvitarEvitar a exposição de plásticos a UV a exposição de plásticos a UV (micropipetas)(micropipetas)

NãoNão utilizar desinfetantes com alta [ ] de Cl livre utilizar desinfetantes com alta [ ] de Cl livre

ManutençãoManutenção

Desinfecção com etanol 70%Desinfecção com etanol 70%

Limpar a superfície da lâmpada UVLimpar a superfície da lâmpada UV

SemanalmenteSemanalmente

MensalmenteMensalmente

Com pano úmido, limpe as superfícies externas da cabineCom pano úmido, limpe as superfícies externas da cabine

Remova a superfície de trabalho e desinfete com etanol 70%Remova a superfície de trabalho e desinfete com etanol 70%

AnualmenteAnualmente

Recertificação por um qualificadorRecertificação por um qualificador

Substituir a lâmpada UVSubstituir a lâmpada UV

Dúvidas???Dúvidas???

Manual de Manual de instruçõesinstruções

Obrigado!!!Obrigado!!!