Gustavo Silveira e Silva

Orientador: Humberto Corrêa da Silva Filho

Laboratório de Farmacologia Bioquímica e MolecularInstituto de Ciências Biológicas

Universidade Federal de Minas Gerais

PAD Morfologia 2004

Belo Horizonte, 20 de Dezembro de 2004

Análise molecular do polimorfismo

5-HTTLPR em suicidas de Belo Horizonte

Dados Epidemiológicos• Maiores taxas: países da Europa Oriental e países asiáticos.

• Taxas intermediárias: Europa Central e Nórdica, América do Norte, Sudeste

Asiático.

• Menores taxas: América Latina, países árabes e alguns países asiáticos.

• Ausência de dados referentes a países africanos e outros

Dados Epidemiológicos

• 1 milhão de mortes no ano 2000 → 1 morte a cada 40s;

1,5 milhão de mortes em 2020

• Entre as 10 principais causas de morte, e uma das três maiores causas na faixa

de 15 a 35 anos

• Índia e China: concentram aproximadamente 30% dos casos

• As taxas de suicídio são cerca de 3x maiores entre os homens (exceto China)

• Em 1998, foi responsável por 1,8% do custo total de doenças em todo o mundo

→ Um grande problema de saúde pública

Fatores• Transtorno multidimensional: interação entre fatores ambientais, sociais, genéticos e

biológicos.

• Relacionam-se a componentes culturais, políticos e sócio-econômicos

• Prevalência de transtornos mentais em quase 100% dos casos (transtorno bipolar,

alcoolismo, esquizofrenia, etc.)

Porém, a transmissão do comportamento suicida faz-se de forma independente da

transmissão da doença psiquiátrica

• Influência de doenças físicas (doenças neurológicas, neoplasias, AIDS, etc.)

• Fatores sócio-demográficos (sexo, idade, situação financeira, ocupação social, estado

matrimonial, etc.)

• Fatores Genéticos

Fatores Genéticos

Diversos estudos apontam uma possível contribuição genética:

• Estudo familiar

• Estudo em uma população de suicidas

• Estudo com gêmeos

• Estudo de adoção

Fatores Genéticos (?)

Disfunção Serotoninérgica

Comportamento Suicida(Correa e col., 2001; Correa e col., 2002)

Polimorfismos nos genes responsáveis pelo sistema serotoninérgico

Princípios da Transmissão Serotoninérgica

BIOSSÍNTESE (hidroxilação/descarboxilação)

ARMAZENAMENTO

LIBERAÇÃO

RECAPTURAÇÃO

DEGRADAÇÃO

RECEPTORES

O Transportador de Serotonina

(5-HTT)- Localização: membrana pré-sináptica

- 12 domínios transmembrana

- Recaptura a serotonina da fenda

O Gene do Transportador (5-HTT)

– Localização: cromossomo 17

– 1 sítio promotor

– 14 éxons; 31kb

• Polimorfismo na região promotora reguladora da transcrição:

5-HTTLPR (5-HTT gene-linked polymorphic region)

- 2 alelos : inserção (L, long) ou deleção (S, short) de 44 pares de

base (Heils et al 1996)

- Alelo curto (S): Transcrição reduzida do gene → menor expressão

→ menor recapturação de serotonina (Lesch et al, 1996)

O Gene do Transportador (5-HTT)

Resultados conflitantes:

- Sem evidência estatística significante (Chong et al 2000; Courtet et al 2003; Fitch et al 2001; Geijer et al 2000; Ho et al 2000; Hranilovic et al 2003; Mann et al 2000; Ohara et al 1998; Pooley et al 2003; Preuss et al 2001; Roy et al 2001; Rujescu et al 2001; Russ et al 2000; Zalsman et al 2001)

- Maior freqüência do alelo L em suicidas depressivos (Du et al 1999, 2001; Faludi et al 2000)

- Associações entre o alelo S e tentativas violentas (Bayle et al 2003; Bellivier et al 2000; Bondy et al 2000; Courtet et al 2001; Gorwood et al 2000)

- Associação do genótipo SS com histórico familiar de suicídio (Joiner et al 2002)

Materiais e Métodos

Objetivo

→ Estudar polimorfismos funcionais de genes potencialmente associados ao

comportamento suicida em pessoas falecidas por suicídio em Belo Horizonte.

→ Inicialmente investiga-se o polimorfismo 5-HTTLPR.

Extração do DNA

→ Amostras obtidas de tecidos humanos diversos, fornecidos pelo IML.

Materiais e Métodos

Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para o 5-HTTLPR→ Quantidades de reagentes para 1 tubo de reação:

→ Primers utilizados:

Materiais e Métodos

→ Programa utilizado para amplificação do 5-HTTLPR:

Materiais e Métodos

Eletroforese em Gel de Poliacrilamida (PAGE)

→ Gel de poliacrilamida (6,5%); padrão 100pb; 5 µL amostra; 70 mV

→ Coloração pela prata

PAGE das amostras SU5, SU6, SU7, SU8, SU39

Bandas visualizadas:

Alelo Longo (L) → 528 pb

Alelo Curto (S) → 484 pb

500 pb

Resultados

Genótipos encontrados:

Genótipo LL → 10 amostras

Genótipo SS → 3 amostras

Genótipo LS → 7 amostras

Resultados

Considerações FinaisConsiderações Finais

→ Pequeno número de amostras

→ Estabelecimento de grupo controle

→ Possivelmente, vários genes interagem na determinação do fenótipo;

A função serotoninérgica envolve enzimas (triptofano hidroxilase, L-aminoacido

decarboxilase, monoamino oxidases A e B), transportadores e receptores. Assim,

variações funcionais em cada uma destas etapas, secundárias a variações

genéticas, podem estar na origem de variações na expressão do fenótipo

Obrigado pela atenção!