IDENTIFICAÇÃO BACTERIANA

Cultivo de microorganismo

Meios de cultura - Associação qualitativa e quantitativa de substâncias que fornecem os nutrientes necessários ao desenvolvimento de microrganismos fora do seu meio natural.

Condições ambientaispHPressão osmóticaUmidadeTemperaturaAtmosfera (aeróbia e anaeróbia)

Classificação dos meios

Cultivo de microorganismoTipos de meios

Líquidos - sem agentes solidificantes, apresentando-se como um caldo, utilizados para ativação das culturas, repiques de microrganismos, provas bioquímicas, dentre outros;

semi-sólidos, quando a quantidade de ágar é de 0,075 a 0,5 %;

Sólidos - contém agentes solidificantes, principalmente ágar (cerca de 1 a 2,0 %);

Classificação dos meios

Cultivo de microorganismo

Classificação dos meios Seletivo – Contém substâncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros. Exemplo: ágar Salmonella-Shigella (SS) e ágar MacConkey, meios com sais biliares e verde brilhante para isolamento seletivo de Salmonella, meios com 7,5% de cloreto de sódio. A maioria deles é também diferencial, permitindo diferenciar as colônias (sólidos) dos microrganismos.

Classificação dos meios

Cultivo de microorganismo

Classificação dos meiosDiferencial - quando contém substâncias que

permitem estabelecer diferenças entre microrganismos muito parecidos, tais como meio de Teague ou Eosina Azul de Metileno (diferencial para coliformes), Ágar MacConkey para a diferenciação de enterobactérias, Ágar sangue, agar Baird-Parker para isolamento e diferenciação de cocos Gram positivos (sólidos).

Classificação dos meios

Cultivo de microorganismo

Classificação dos meiosEnriquecimento - proporcionam nutrientes adequados

ao crescimento de microrganismos presentes usualmente em baixos números ou de crescimento lento, bem como microrganismos exigentes e fastidiosos. Ex. Caldo Tetrationato e Selenito-Cistina para cultivo de Salmonelas (líquidos), Caldo Tioglicolato para Clostridium perfringens.

1º Cultura

Observação das características das colônias em relação:• Tamanho• Forma• Textura• Cor• Hemólise (Ágar sangue)

IDENTIFICAÇÃO BACTERIANA

Lactobacillus plantarum

Staphylococcus aureusStreptomyces albus

Mycobacterium Tuberculosis

Mycobacterium smegmatis Mycobacterium marinum

Bacillus thuringiensis

Bacillus anthracis em placas de ágar bicarbonato e ágar sangue

2º Observação das células

As colônias isoladas são coradas pelo método de Gram

IDENTIFICAÇÃO BACTERIANA

Bacillus anthracis

3º Identificação bioquímica/metabólica

Geralmente necessita de 24 horas de incubação.

IDENTIFICAÇÃO BACTERIANA

Identificação convencional

Pesquisa de enzimas•Pesquisa de enzimas a partir das colónias: catalase

Metabolismo glicídico•Estudo da utilização de vários substratos como fonte de carbono•Pesquisa de enzimas

Metabolismo proteico•Utilização do triptofano•Hidrólise da ureia

Os testes mais importantes identifica o metabolismo bacteriano

Identificação de enzimasPesquisa da Catalase: é indispensável na identificação de cocos gram positivos.Os estafilococos são catalase +, enquanto que os estreptococos são catalase –Enzimas hemolíticas – Hemólise alfa ou beta

Metabolismo glicídicoA maioria das bactérias utiliza os hidratos de carbono hidrolizando-os até à formação de ácidos com consequente alteração do pH do meio.Em alguns casos essa hidrólise conduz à formação de gases.

Metabolismo proteico e enzimas Produção de gás sulfídrico: a degradação de aminoácidos sulfurados ou peptonas origina este composto, que ao reagir com o citrato de ferro ou acetato de chumbo vai formar manchas de cor negra no meio ágar.

Produção de indolA degradação do triptofano dá origem ao indol, que após um período de 24h, reagindo com um composto específico (reagente de Kovacs), vai originar um composto de cor amarelo-avermelhado.

Pesquisa de ureaseAs bactérias com urease vão hidrolisar a ureia, com produção de compostos de amónia que vão alcalinizar o meio.

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