Influência da quantidade de alimento sobre a produção de ...

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO

FFCLRP - DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ENTOMOLOGIA

Influência da quantidade de alimento sobre a

produção de sexuados e a determinação de

castas em três espécies de abelhas sem ferrão

MAURO PRATO

Tese apresentada à Faculdade de Filosofia, Ciências e

Letras de Ribeirão Preto - USP, como parte das

exigências para obtenção do título de Doutor em

Ciências - Área: Entomologia

RIBEIRÃO PRETO - SP

2015

M. P

rato

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO

FFCLRP - DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ENTOMOLOGIA

Influência da quantidade de alimento sobre a produção de sexuados e a

determinação de castas em três espécies de abelhas sem ferrão

Mauro Prato


Letras de Ribeirão Preto da USP, como parte das

exigências para obtenção do título de Doutor em Ciências -

Área: Entomologia

RIBEIRÃO PRETO - SP

2015

MAURO PRATO

Influência da quantidade de alimento sobre a

produção de sexuados e a determinação de castas

em três espécies de abelhas sem ferrão

Tese apresentada à Faculdade de Filosofia, Ciências

e Letras de Ribeirão Preto da USP, como parte das



Orientador: Prof. Dr. Ademilson Espencer Egea

Soares

RIBEIRÃO PRETO -SP

2015

AUTORIZO A REPRODUÇÃO E DIVULGAÇÃO TOTAL OU PARCIAL DESTE TRABALHO,

POR QUALQUER MEIO CONVENCIONAL OU ELETRÔNICO PARA FINS DE ESTUDO OU

PESQUISA, DESDE QUE CITADA A FONTE

FICHA CATALOGRÁFICA

Prato, Mauro Influência da quantidade de alimento sobre a produção de sexuados e a determinação de castas em três espécies de abelhas sem ferrão. Influence of the amount of food on the production of sexuals and caste determination in three species of stingless bees.

--Ribeirão Preto, 2015. 90 p.: Il.; 30cm.

Tese de Doutorado apresentada à Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de

Ribeirão Preto/USP – Área de Concentração: Entolmologia

Orientador: Prof. Dr. Ademilson Espencer Egea Soares 1. Meliponini 2. Tetragonisca angustula 3. Frieseomelitta varia 4. Nannotrigona testaceicornis 5. Quantidade de alimento 6. Determinação de castas 7. Produção de machos 8. Produção de rainhas

PRATO, Mauro

Influência da quantidade de alimento sobre a produção de sexuados e a determinação de

castas em três espécies de abelhas sem ferrão.


Letras de Ribeirão Preto da USP, como parte das



Aprovado em:___/___/_____

Banca examinadora

Prof. Dr._________________________________Instituição:________________________

Julgamento:____________________ Assinatura:_________________________________









Trabalho realizado no Laboratório de Biologia e Genética de Abelhas, no

Departamento de Genética da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto –

Universidade de São Paulo, com auxílio financeiro do CNPq (processo n°

142229/2011-3).

Dedico este trabalho a Marta e Prínio, meus pais, que

permitiram, apoiaram, incentivaram e admiraram incontestavelmente

minha carreira.

Agradeço,

Ao Professor Espencer por me apresentar o mundo das abelhas, pelo acolhimento

em seu laboratório, pela orientação, pelo apoio incondicional, pela confiança e acima de

tudo pela amizade e exemplo de pessoa e cientista.

A todos os colegas de laboratório: Ivan Castro, Paulo Emílio, Ana Rita, Geusa,

Igor, Omar, Jaito e Raoni pelo companheirismo, alegria do convívio, ajuda mútua e troca

de informações.

Aos Professores Dr. João Maria Franco de Camargo (in memorian), Dr. Fábio

Santos do Nascimento e Dr. Eduardo Andrade Botelho de Almeida que durante a

supervisão do estágio PAE deram o exemplo de dedicação e responsabilidade envolvidas

na docência, e que durante as longas e pacienciosas conversas em suas salas contribuíram

muito para minha formação como biólogo e pesquisador.

Aos amigos não biólogos pelos ótimos momentos juntos e por tornarem a vida fora

da academia tão alegre e boa de ser vivida.

A toda minha família, pelo respeito, admiração e apoio, na consolidação do sonho

de me tornar biólogo, professor e pesquisador.

Ao Thiago Peixoto por estar sempre ao meu lado e incentivar a construção deste

trabalho.

A todos os abelhudos do Bloco A do Departamento de Genética da FMRP – USP

pela contribuição com o conhecimento científico acerca das abelhas e boa convivência.

Ao CNPq pela confiança e apoio financeiro da minha pesquisa.

Ao Departamento de Biologia da FFCLRP – USP e Departamento de Genética da

FMRP – USP pelo apoio e permissão da realização deste trabalho.

“O que vejo na Natureza é uma estrutura magnífica que podemos

compreender apenas imperfeitamente e que nos inspira grande humildade.”

- ALBERT EINSTEIN

______________________________________________________________Lista de figuras

Lista de figuras

Figura 1: Mecanismos naturais de produção de rainhas em ninhos de abelhas sem

ferrão....................................................................................................................................28

Figura 2: Quantidade de potes de alimento (mel e pólen) armazenados no interior das

colônias de Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis;

acompanhados pelas médias mensais de pluviosidade e temperatura de agosto de 2012 a

julho de 2013........................................................................................................................38

Figura 3: Volume de alimento larval depositado nas células de cria de operárias/machos

de Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis;

acompanhados pelas médias mensais de pluviosidade e temperatura de agosto de 2012 a

julho de 2013........................................................................................................................40

Figura 4: Regressão linear do número de potes de alimento (mel e pólen) relacionados ao

volume de alimento contido nas células de cria de Tetragonisca angustula, Frieseomelitta

varia e Nannotrigona testaceicornis no período de agosto de 2012 a julho de

2013......................................................................................................................................42

Figura 5: Freqüência de produção de machos, rainhas e operárias em colônias de

Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis no período de

um ano..................................................................................................................................44

Figura 6: Frequência absoluta de machos, rainhas e operárias em colônias de


ago/12 a jul/13.....................................................................................................................48

Figura 7: Regressão linear da frequência de produção de machos e operárias de


ago/12 a jul/13.....................................................................................................................50

Figura 8: Regressão linear da frequência de produção de machos, operárias e indivíduos

totais com relação ao número de potes de mel e pólen em Tetragonisca angustula,

Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis no período de ago/12 a

jul/13....................................................................................................................................52

______________________________________________________________Lista de figuras

Figura 9: Regressão linear da frequência de produção de machos, operárias e indivíduos

totais com relação ao volume de alimento larval contido em células de cria de

operárias/machos de Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona

testaceicornis no período de ago/12 a jul/13......................................................................53

Figura 10: Peso médio dos indivíduos naturais e criados in vitro recém-emergidos de

Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona

testaceicornis........................................................................................................................56

Figura 11: Análise dos componentes principais entre a largura máxima da cabeça (mm) e

a distância entre as tégulas (mm) realizadas nas fêmeas de Tetragonisca angustula

criadas in vitro com quantidades variadas de alimento e naquelas coletadas nas colônias

(naturais)..............................................................................................................................57


a distância entre as tégulas (mm) realizadas nas fêmeas de Frieseomelitta varia criadas in

vitro com quantidades variadas de alimento e naquelas coletadas nas colônias

(naturais)..............................................................................................................................58


a distância entre as tégulas (mm) realizadas nas fêmeas de Nannotrigona testaceicornis

criadas in vitro com quantidades variadas de alimento e naquelas coletadas nas colônias

(naturais)..............................................................................................................................59

______________________________________________________________Lista de tabelas

Lista de tabelas

Tabela I: Volume (μl) de alimento larval contido nas células de cria de operárias/machos

de Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona

testaceicornis........................................................................................................................41

Tabela II: Volume (μl) de alimento larval contido nas células reais de Tetragonisca

angustula e Nannotrigona testaceicornis, e nas células reais e células acessórias de

Frieseomelitta varia..............................................................................................................43

Tabela III: Médias relativas (%), frequências absolutas, desvios padrões (DP), frequências

mínimas (mín.) e frequências máximas (máx.) de rainhas, operárias e machos produzidos

mensalmente em colônias de Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia e

Nannotrigona testaceicornis entre agosto de 2012 e Julho de

2013......................................................................................................................................45

Tabela IV: Produção de rainhas, operárias e machos em colônias de Tetragonisca

angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis entre ago/12 e

jul/13....................................................................................................................................46

Tabela V: Taxa de emergência de operárias, rainhas e rainhas-miniatura em função da

variação da quantidade de alimento oferecida às larvas de Tetragonisca angustula,

Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis criadas in

vitro......................................................................................................................................55

____________________________________________________________________Resumo

PRATO, M. Influência da quantidade de alimento sobre a produção de sexuados e a determinação de castas em três espécies de abelhas sem ferrão. 2015. 90 pp. Tese de Doutorado (Entomologia). Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo.

A produção sazonal de sexuados nos insetos sociais é um evento dependente de

interações complexas entre fatores intra e extra coloniais, entretanto, a disponibilidade

de alimento dentro das colônias de abelhas sem ferrão, principalmente pólen, foi

apontada por vários estudos como um importante fator para a produção de machos. Nas

abelhas sem ferrão (exceto no gênero Melipona e nas espécies onde ocorrem rainhas-

miniatura) a quantidade de alimento ingerido pelos imaturos é o fator responsável pela

diferenciação das castas, pois as larvas que se tornam rainhas ingerem mais alimento que

as larvas de operárias. Este trabalho fez uma abordagem ampla sobre a importância do

alimento para o ciclo reprodutivo das colônias de abelhas sem ferrão, utilizando

Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis como

espécies modelo. Analisamos a relação entre a variação da temperatura e pluviosidade, a

quantidade de alimento estocado no interior das colônias (potes de mel e pólen), assim

como o alimento larval depositado nas células de cria e a influência destes fatores sobre

a produção de sexuados no período de agosto de 2012 a julho de 2013. Estudamos ainda

os mecanismos de determinação de castas nas três espécies, fornecendo quantidades

controladas e graduais de alimento aos imaturos, induzindo a produção in vitro de

rainhas e operárias. Observamos que a produção de indivíduos esteve intimamente

relacionada com a quantidade de alimento armazenada no interior das colônias, e que

esta por sua vez foi influenciada pelos fatores ambientais como temperatura e

principalmente a pluviosidade. Na localidade onde foram realizados os experimentos,

observaram-se dois períodos diferenciados de produção de indivíduos nas colônias: um

período quente e úmido (novembro a maio) quando houve abundância de alimento e

aumento na produção de indivíduos, e outro período de temperaturas amenas e mais

seco (junho a outubro) quando houve menos alimento armazenado e baixa produção de

indivíduos. Os machos foram produzidos principalmente de novembro a maio, porém

cada espécie apresentou uma peculiaridade. Em T. angustula a ocorrência de machos foi

claramente sazonal, apresentando apenas um período de alta produção (março e abril).

Em N. testaceicornis os machos foram produzidos em dois períodos distintos (de

____________________________________________________________________Resumo

setembro a outubro; e de março a maio), enquanto em F. varia os machos foram

produzidos de maneira regular ao longo do ano. No geral, a produção de machos foi

influenciada pela quantidade de pólen armazenado dentro da colônia. As rainhas foram

produzidas de maneira esparsa e homogênea ao longo do ano pelas colônias, não

apresentando tendência à variação sazonal, mesmo considerando as rainhas-miniatura

que foram produzidas na mesma proporção que as rainhas típicas em N. testaceicornis.

Os resultados dos experimentos de produção in vitro de indivíduos mostraram que as

operárias das três espécies apresentaram maneiras diferentes de oferecer o alimento aos

imaturos, controlando assim a determinação de castas. T. angustula apresentou um

controle mais preciso produzindo rainhas apenas em células reais e com uma quantidade

bem definida de alimento. Em F. varia o mecanismo de produção de células acessórias

não se demonstrou muito preciso, porém pode ser muito prático, econômico e mais

rápido em situações emergenciais de produção de rainhas. Em N. testaceiconis a

produção de rainhas de tamanhos diferentes permite a esta abelha produzir rainhas em

todas as épocas do ano, inclusive em situações adversas sendo, portanto, importante na

garantia da sobrevivência das colônias. Ainda existem muitas questões para serem

estudadas sobre a determinação de castas nas abelhas sem ferrão, porém, de acordo

com os conhecimentos atuais, todos os sistemas de determinação de castas das abelhas

sem ferrão estão de uma forma ou de outra, relacionados à alimentação larval.

Palavras-chave: Meliponini; Tetragonisca angustula; Frieseomelitta varia; Nannotrigona testaceicornis; quantidade de alimento; determinação de castas; produção de machos; produção de rainhas.

___________________________________________________________________Abstract

PRATO, M. Influence of the amount of food on the production of sexuals and caste determination in three species of stingless bees. 2015. 90 pp. Tese de Doutorado (Entomologia). Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo.

The seasonal production of sexuals in social insects depends on complex

interactions between intra and extra colonial features; however, the availability of food

stored within the colonies of stingless bees, especially pollen was reported by several

studies as an important factor for producing males. In stingless bees (except in the genus

Melipona and in species which miniature queens are present) the amount of food

ingested by immature is responsible for caste differentiation, since the larvae that

become queens ingest more food than workers larvae. This study made a comprehensive

approach on the importance of food to the reproductive cycle of stingless bees colonies,

using Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia and Nannotrigona testaceicornis as

model species. We analyzed the relationship between the variation in temperature and

rainfall, the amount of food stored within the colonies (honey and pollen pots), as well as

the larval food thrown into brood cells and the influence of these factors on the

production of sexuals from August 2012 to July 2013. We have also studied the

mechanisms of caste determination in these three species, providing controlled and

gradual amounts of food to the immature, inducing the in vitro production of queens and

workers. We observed that the production of individuals was closely related to the

amount of food stored inside the colonies, which was biased by environmental factors

such as temperature and rainfall mainly. In the region where the experiments were

conducted, there were two distinct periods of individuals production in the colonies: a

hot and wet season (from November to May) when there was plenty of food and

increased production of individuals, and another mild and dry season (from June to

October) when there were fewer stored food and low production of individuals. Males

were produced mainly from November to May, but each species has a peculiarity. In T.

angustula the occurrence of males was clearly seasonal, with a single period of increased

production (March and April). In N. testaceicornis males were produced in two different

periods (September and October, and from March to May), while in F. varia males were

produced on a regular basis throughout the year. Overall, the production of males was

___________________________________________________________________Abstract

influenced by the amount of pollen stored within the colony. The queens were produced

sparse and evenly throughout the year, showing no tendency to seasonal variation, even

considering the miniature queens that were produced in the same proportion that the

typical queens in N. testaceicornis. The results of the in vitro production of individuals

showed that the workers of the three species exhibited different ways of providing food

to the immature, thereby controlling the caste determination. T. angustula presented the

most precise pattern of producing queens, since these queen were produced only in royal

cells and using a well-defined quantity of food. In F. varia the accessory cell production

mechanism has not been shown very accurate, but can be very practical, economical and

faster when queens are needed. In N. testaceicornis the production of different sizes of

queens allows this species to produce queens in all seasons, even in adverse conditions.

This skill is therefore important to ensure the survival of colonies. There are still many

questions to be studied on caste determination in stingless bees, however, according to

current knowledge, all systems of caste determination of the stingless bees are in one

way or another, related to larval feeding.

Key-words: Meliponini; Tetragonisca angustula; Frieseomelitta varia; Nannotrigona

testaceicornis; amount of food; caste determination; production of male; production of

queens.

Sumário

1. Introdução...............................................................................................................19

1.1 Influência da disponibilidade de alimento armazenado na colônia sobre a produção

de sexuados nas abelhas sem ferrão..............................................................................21

1.2 Influência da quantidade de alimento larval sobre a determinação de castas nas

abelhas sem ferrão..........................................................................................................26

1.3 As espécies escolhidas para o estudo.......................................................................30

2. Objetivos.................................................................................................................34

3. Material e métodos.................................................................................................36

3.1 Quantidade de alimento estocado nas colônias e variação sazonal de pluviosidade

e temperatura.................................................................................................................36

3.2 Quantidade de alimento larval depositado nas células de cria................................37

3.3 Ocorrência de rainhas, machos e operárias..............................................................37

3.4 Efeitos da quantidade de alimento sobre a determinação de castas......................38

3.5 Análise estatística......................................................................................................39

4. Resultados...............................................................................................................42

4.1 Quantidade de alimento estocado nas colônias e variação sazonal de pluviosidade

e temperatura.................................................................................................................42

4.2 Quantidade de alimento larval depositado nas células de cria................................44

4.3 Ocorrência de rainhas, machos e operárias..............................................................49


5. Discussão.................................................................................................................66

5.1 Variação sazonal de pluviosidade, temperatura e da quantidade de alimento

estocado nas colônias (potes de mel e pólen e alimento larval)....................................66

5.2 Produção de sexuados...............................................................................................69


6. Considerações finais................................................................................................78

7. Referências bibliográficas........................................................................................81

______________________________________________________Introdução

Introdução Introdução

19 __________________________________________________________________________Introdução

1. INTRODUÇÃO

As abelhas formam um grupo monofilético (Alexander & Michener, 1995; Melo,

1999) possuindo uma estreita relação com um grande conjunto de vespas chamadas de

vespas esfecóides (Silveira et al. 2002). A classificação mais largamente utilizada para as

abelhas é a de Michener (2000), onde o grupo é dividido em 7 famílias, 21 subfamílias e

53 tribos. A família Apidae que contém as abelhas corbiculadas, possui três subfamílias,

dentre elas a subfamília Apinae composta por 19 tribos, como por exemplo, as tribos

Euglossini (polinizadoras das orquídeas), Bombini (mamangavas), Apini (abelhas do

gênero Apis) e Meliponini (abelhas sem ferrão ou meliponíneos). De acordo com esta

classificação tradicional, embora seja inegável a monofilia do grupo, as abelhas não

possuem um nome formal de categoria taxonômica, sendo chamado por alguns autores

de “Apiformes” (Brothers, 1975).

Existem alternativas menos tradicionais para a classificação das abelhas já

adotadas por alguns pesquisadores. Silveira e col. (2002) propuseram a distribuição das

abelhas em nove famílias, a família Apidae é composta por três subfamílias, dentre elas a

subfamília Apinae com 17 tribos, das quais 13 possuem representantes no Brasil. A tribo

Apini deixa de possuir somente as abelhas do gênero Apis e passa a incorporar quatro

subtribos: Euglossina, Bombina, Apina e Meliponina, correspondentes às tribos propostas

por Michener (2000).

Melo e Gonçalves (2005) propuseram um sistema ainda mais ousado em que todo

o grupo das abelhas passa a ter um nome formal de categoria taxonômica, a família

Apidae, então o que eram as famílias do sistema tradicional passam a serem subfamílias

e assim sucessivamente as categorias foram rabaixadas. A antiga família Apidae passa a

ser a subfamília Apinae, o resto permanece igual à classificação de Silveira e col. (2002).

Podemos encontrar graus diferentes de organização social dentro de Apinae, no

entanto, os indivíduos das tribos Apini e Meliponini possuem o comportamento social

mais elaborado entre as abelhas (Michener, 1974, 2000; Sakagami, 1982, Wille, 1983;

Winston, 1991). Insetos eussociais são definidos pelo compartilhamento de três

características: cooperação no cuidado da prole, sobreposição de pelo menos duas

gerações e divisão reprodutiva do trabalho, com a formação de castas em que fêmeas

20 __________________________________________________________________________Introdução

reprodutivas são assistidas por fêmeas parcial ou totalmente estéreis (Wilson, 1971,

Oster & Wilson, 1978).

Nos insetos sociais em geral, o desenvolvimento das castas está relacionado com

um amplo fenômeno de polimorfismo que nas abelhas envolve a população feminina

(rainhas e operárias), apresentando diferenças acentuadas quanto à divisão de trabalho

dentro da colônia (Nijhout & Wheeler, 1982). O desenvolvimento de operárias e rainhas

diverge do ponto de vista morfológico e fisiológico, culminando em adultos que diferem

também em suas características comportamentais (Weaver, 1966; Engels & Imperatriz-

Fonseca, 1990). Dentre as diferenças morfológicas de rainhas e operárias podem-se

observar, por exemplo: sistema reprodutor desenvolvido com ovários com maior número

de ovaríolos em rainhas (Michener, 1974) e a presença de corbícula, estrutura

encontrada na tíbia das pernas posteriores de todos os Apidae (Michener, 1990),

formada por uma cavidade envolvida por várias cerdas (Snodgrass, 1956), que é mais

elaborada nas operárias e está relacionada com a coleta de pólen e resina (Thorp, 1979).

As abelhas da tribo Meliponini são conhecidas popularmente como abelhas sem

ferrão por apresentarem seu acúleo (ferrão) atrofiado, impossibilitando seu uso como

estratégia de defesa (Nogueira-Neto, 1997). Estas abelhas são insetos eussociais que

possuem distribuição nas regiões tropical e subtropical do hemisfério sul (Silveira et al.,

2002), com 412 espécies reconhecidas atualmente (Camargo & Pedro, 2013). Nesse

grupo, dois processos relacionados à reprodução são descritos. A fundação de novas

colônias ocorre por enxameagem, um processo em que um novo ninho é formado por

fissão da colônia mãe. Para isso, um local é escolhido e preparado por operárias, que

levam cerume, resinas e alimento, de forma que há uma dependência da colônia filha

com a colônia parental, cuja duração varia de acordo com a espécie (Michener, 1974).

Diferentemente do que acorre em abelhas do gênero Apis, nas abelhas sem

ferrão, é a rainha virgem que se dirige ao novo ninho e dali parte para o vôo nupcial,

quando ocorre o acasalamento com apenas um macho (Peters et al., 1999). O outro

evento relacionado à reprodução é a substituição da rainha de uma colônia, sem que

ocorra a fundação de um novo ninho. Nesse caso, a rainha fisogástrica é perdida e/ou

morta por operárias, sendo que uma nova rainha produzida na colônia irá substituí-la,

após ser fecundada durante o vôo nupcial (van Veen & Sommeijer, 2000; van Veen et al.,

2004).

21 __________________________________________________________________________Introdução

Sabe-se que as abelhas sem ferrão constituem um grupo ecologicamente

importante, uma vez que, salvo algumas exceções, como Trigona crassipes e Trigona

hypogea, que possuem hábitos necrófagos (Nogueira-Neto, 1997; Velthuis, 1997),

apresentam uma estreita relação de dependência com as plantas, as quais fornecem o

alimento para as abelhas, principalmente pólen e néctar (fontes de proteína e

carboidrato, respectivamente) e em troca recebem os benefícios da transferência de

pólen (Kevan & Baker, 1983; Proctor et al., 1996) atuando, portanto na manutenção da

diversidade das plantas como agentes polinizadores.

1.1 Influência da disponibilidade de alimento armazenado na colônia sobre a

produção de sexuados nas abelhas sem ferrão

Colônias de insetos sociais são formadas por várias fêmeas, entre elas a rainha e

operárias, além de machos, sendo que esses indivíduos possuem papéis distintos.

Enquanto as operárias desempenham tarefas relacionadas à manutenção e ao

crescimento da colônia (cuidado com a cria, construção e proteção do ninho, e

forrageamento), machos e rainhas possuem um papel diretamente relacionado à

reprodução.

A rainha possui função exclusivamente reprodutiva, sendo incapaz de sobreviver

isoladamente por muito tempo e de fundar sozinha uma nova colônia. Ainda assim, a sua

presença na colônia é fundamental, garantindo a integridade e funcionalidade da

sociedade, pois copulam com os machos e passam o resto de seus dias realizando a

postura de ovos, são fêmeas férteis responsáveis pela postura da maioria dos ovos e por

todos aqueles que originarão fêmeas (operárias ou rainhas). As operárias são fêmeas

estéreis ou semi-estéreis que executam as mais variadas funções, elas são responsáveis

pela manutenção da colônia realizando diversas atividades, tais como, cuidado com a

prole, coleta de alimento, construção e defesa do ninho, limpeza e aprovisionamento das

células de cria, dentre outras (Michener, 1974; Laidlaw, 1992; Page & Peng, 2001), e em

algumas espécies, realizam postura de ovos tróficos e reprodutivos (Koedam et al., 2001).

Os machos nascem de ovos não fecundados, são haplóides, e em várias espécies, a

maioria dos machos é produto da postura de operárias (Beig, 1972).

22 __________________________________________________________________________Introdução

De acordo com Zucchi e col. (1999) as operárias de colônias sociais avançadas

geralmente se mantêm estéreis, como pode ser observado em algumas espécies tais

como Duckeola ghilianii (Sakagami & Zucchi, 1968), Tetragonula laeviceps (Sakagami et

al., 1983), Tetragonula minangkabau (Suka & Inoue, 1993), incluindo espécies do gênero

Frieseomelitta (Suka & Inoue, 1993; Zucchi et al., 1999; Boleli et al., 1999; 2000; Cruz-

Landim, 2000). Segundo Koedam (1995), na maioria dos insetos eussociais a seleção

natural favoreceu o surgimento de uma plasticidade comportamental, que permite às

operárias serem capazes de realizar qualquer comportamento inerente às fêmeas

daquela espécie, exceto a postura de ovos fecundados e, a adaptação dos ovários das

rainhas, relacionada às altas taxas de oviposição, é uma especialização que está

acompanhada por uma mudança morfofisiológica, limitando o desempenho de outros

comportamentos. Entretanto, segundo Bourke (1988) esta especialização não transforma

os outros grupos de fêmeas, como as operárias, em uma casta completamente estéril.

As operárias do gênero Apis podem ter seus ovários desenvolvidos durante a

ausência da rainha ou quando a população é muito grande (De Groot & Voogd, 1954),

entretanto nos meliponíneos a situação é mais complexa. Em algumas espécies, por

exemplo, em Leurotrigona muelleri, assim como em Apis mellifera as operárias têm seus

ovários diferenciados apenas na ausência da rainha (Sakagami & Zucchi, 1966; Cruz-

Landim, 2000), entretanto, em algumas espécies as operárias apresentam ovários

desenvolvidos e produzem ovos mesmo na presença da rainha (Sakagami et al., 1963).

Estas operárias podem produzir dois tipos de ovos: reprodutivos, que contribuem com a

produção de machos da colônia (Beig, 1972; Imperatriz-Fonseca & Kleinert, 1998;

Sommeijer et al., 1999; Koedam et al., 2001; Tóth et al., 2002; Chinh et al., 2003; Paxton

et al., 2003; Tóth et al., 2004); 2) e ovos tróficos, que são ingeridos pela rainha antes da

postura de seus ovos (Silva et al., 1972; Contel & Kerr, 1976; Bego, 1982; 1990;

Sommeijer & van Buren, 1992; Koedam et al., 2005). É sabido que as operárias

constituem a base ergonômica da colônia, e seu papel na produção de sexuados é

fundamental (Oster & Wilson, 1978).

Os machos, normalmente são expulsos da colônia pelas operárias alguns dias após

emergirem (Michener, 1948; Kerr et al., 1996) e têm como função principal fecundar a

rainha virgem durante o vôo nupcial. Entretanto, alguns autores observaram machos de

espécies de meliponíneos realizando algumas tarefas dentro da colônia envolvendo

23 __________________________________________________________________________Introdução

atividades de construção, trofaláxis, desidratação de néctar (Imperatriz-Fonseca, 1973;

Cortopassi-Laurino, 1979) e algumas atividades relacionadas à defesa do ninho. Para

alguns autores, estas atividades são meramente acidentais (Nogueira-Neto, 1997). Até o

momento, não há evidências de que a atividade de desidratação do néctar pelos machos

contribua de qualquer forma como uma vantagem para a colônia (Cortopassi-Laurino,

2007). Assim, de acordo com Velthuis e col. (2005), a produção de machos é um

investimento que está em conflito com o investimento no tamanho da colônia, pois ao

contrário das operárias, a maioria dos machos não participa das atividades regulares da

colônia.

Em relação à reprodução, até o momento não foram determinados quais são os

fatores que influenciam a produção de sexuados em Meliponini, porém é esperada uma

complexa interação entre fatores intrínsecos e extrínsecos à colônia (Bego, 1982). Alguns

fatores já foram propostos e sua relação com a produção de sexuados investigada. Entre

esses fatores estão: quantidade de alimento armazenado, produção de cria e tamanho

populacional da colônia, presença de operárias férteis, idade da rainha fisogástrica/fase

do ciclo de vida da colônia, fatores climáticos e sazonalidade.

Tanto para o gênero Melipona, quanto para os demais gêneros, foi encontrado

um efeito positivo da quantidade de alimento armazenado na colônia sobre a produção

de machos e rainhas (Bego, 1990; van Veen et al. , 1992; Grosso & Bego, 2000; Moo-Valle

et al., 2001; van Veen et al., 2004; Chinh & Sommeijer, 2005). van Veen e col. (2004)

encontraram uma correlação positiva especificamente com a quantidade de pólen

armazenado, enquanto nos demais estudos, as relações foram encontradas tanto para

mel ou pólen, ou o tipo de alimento armazenado não foi discriminado pelos autores.

Apenas Morais e col. (2006) descartaram a influência da quantidade de potes de mel e de

pólen das colônias de M. compressipes fasciculata estudadas, embora tenham somente

analisado a produção de rainhas. Apesar desse resultado, os autores discutem que

colônias fortes poderiam ter utilizado mais rapidamente os recursos alimentares no

aprovisionamento de células e na produção de ovos do que no armazenamento. Dessa

forma, haveria uma relação da produção de rainhas com a quantidade de alimento,

porém sem a necessidade de haver grandes quantidades de alimento acumuladas no

ninho.

24 __________________________________________________________________________Introdução

Para Melipona favosa, foi verificada uma relação positiva entre a proporção de

machos e rainhas e a proporção de operárias nos favos de cria, sugerindo uma relação

entre a produção de sexuados e o tamanho populacional (Koedam 1999). Isso poderia

indicar que colônias que possuem grande quantidade de operárias poderiam arcar com

os custos da produção de machos e rainhas, sem prejudicar o desenvolvimento da

colônia, como proposto por Oster & Wilson (1978). O mesmo foi encontrado para

Scaptotrigona postica (S. aff depilis) (Bego, 1990), onde a produção de machos foi

positivamente relacionada ao aumento da população das colônias, e para Melipona

bicolor, em que o número de rainhas produzidas foi correlacionado positivamente com o

número de operárias (Alves, 2004). Porém, van Veen et al. (2004) observaram, para

Melipona beecheii, uma relação negativa entre população de cria e de adultos e a

produção de machos e rainhas, embora não tenham apresentado nenhum teste de

significância.

Nas abelhas sem ferrão, os machos podem ser produzidos em quantidades

variáveis ao longo do ano todo nas colônias, dependendo da espécie, das condições

individuais da colônia e fatores extrínsecos como as condições ambientais (Bego, 1982;

Engels & Engels, 1984; Sommeijer, 1994; van Veen et al., 1992). Em algumas espécies os

machos são produzidos em grande número somente em certas épocas do ano, uma

variação sazonal que pode estar relacionada com a disponibilidade de alimento no

interior das colônias, devido às variações nas condições ambientais, como por exemplo,

temperatura, pluviosidade e abundância dos recursos florais. O primeiro experimento

sobre o tema foi realizado por Moo-Valle e col. (2001), com Melipona beecheii, em que

colônias experimentais foram montadas com quantidades diferentes de potes de

alimento (mel e pólen). O grupo com maior quantidade de potes de alimento apresentou

produção de sexuados significativamente maior, fornecendo uma evidência experimental

da relação entre alimento estocado e produção de machos e rainhas.

Entretanto, em Scaptotrigona postica, fatores extrínsecos como temperatura e

precipitação, que influenciam diretamente na floração e consequentemente na

disponibilidade de pólen e néctar, não influencia diretamente a produção de machos,

pois está espécie possui uma grande capacidade de armazenar alimento. Assim, algumas

colônias fortes produzem machos durante o ano todo, enquanto em outras colônias

25 __________________________________________________________________________Introdução

ocorre variação no período de produção de machos, de acordo com a disponibilidade de

pólen e néctar (Bego, 1977; 1982; 1990).

Em Plebeia droryana muitos fatores estão envolvidos na produção de machos,

pois na maior parte do ano ocorre um aumento na produção de machos, células reais e

favos de cria quando se aumenta a disponibilidade de pólen e néctar. Porém, durante os

meses frios a colônias não produz machos. Então, assim como em S. postica, a produção

de machos está também relacionada com a produtividade geral da colônia, entretanto, a

sazonalidade imposta pelas condições climáticas em P. droryana impõe um ciclo bem

definido de produção de machos (Terada, 1980).

Nas espécies em que ocorre enxameagem, a população adulta deve,

teoricamente, ter um controle preciso com relação à produção de rainhas, resultando

numa baixa ocorrência destas na colônia (Craig, 1980; Pamilo, 1991; Bourke & Ratnieks,

1999; Wenseleers et al., 2003). As abelhas sem ferrão que produzem células reais

possuem um baixo investimento na produção de rainhas, como foi constatado por van

Veen e Sommeijer (2000) para Tetragonisca angustula e por Chinh e Sommeijer (2005)

para Trigona ventralis.

Algumas espécies como Plebeia remota, Nannotrigona testaceicornis e

Schwarziana quadripunctata constroem células reais e suas rainhas são muito maiores do

que as operárias, entretanto, estas espécies podem produzir rainhas-miniatura que

emergem de células do mesmo tamanho de onde emergem operárias e machos (Ribeiro

et al., 2006), o que aumenta a taxa de produção de rainhas com relação às espécies onde

as rainhas emergem apenas de células reais (Santo-Filho et al., 2006). No gênero

Melipona, como não há produção de células reais, as rainhas emergem de células do

mesmo tamanho das células de operárias e machos e são ligeiramente menores do que

as operárias ao emergirem (Wenseleers et al., 2004). Podemos dizer que nas abelhas sem

ferrão, exceto no gênero Melipona onde as rainhas são produzidas com uma frequência

de até 25%, a produção de rainhas é um recurso limitado, pois sua taxa de produção

varia entre 1 e 2% (Kerr, 1946; 1948; 1950).

26 __________________________________________________________________________Introdução

1.2 Influência da quantidade de alimento larval sobre a determinação de castas

nas abelhas sem ferrão

Nos Hymenoptera sociais, e particularmente nas abelhas, a quantidade de

alimento é um importante fator na determinação de castas (Wirtz & Beetsma, 1972), pois

a diferenciação entre rainhas e operárias depende primordialmente de fatores

nutricionais e/ou sociais (Wilde & Beetsma, 1982; Wheeler, 1986). Em Apis mellifera, a

determinação de castas depende da quantidade e da composição do alimento consumido

pelas larvas, pois nos três primeiros dias, as larvas de rainhas, operárias e machos

recebem o mesmo tipo de alimento, produzido pelas operárias nutrizes, uma mistura de

secreções de suas glândulas hipofaringeanas com mel. A partir do quarto dia, as larvas de

operárias e machos passam a receber pólen na sua dieta, enquanto as larvas de rainhas

recebem apenas geléia real, um alimento qualitativamente mais rico que promove sua

diferenciação em rainha (Weaver, 1974).

Nas abelhas sem ferrão, a alimentação dos imaturos não ocorre de forma

progressiva, como em Apis, pois todo o alimento que será ingerido pelo imaturo ao longo

de seu desenvolvimento é regurgitado na célula de cria construída pelas operárias, antes

da rainha ovipor, o que é conhecido como aprovisionamento massivo (Schwarz, 1948;

Nogueira-Neto, 1953; Michener 1974; Sakagami, 1982). Após o aprovisionamento e

oviposição da rainha, as operárias operculam as células de cria, portanto, nestas abelhas

não há contato entre a população adulta e os imaturos em desenvolvimento (Velthuis,

1997). As abelhas sem ferrão diferem das outras abelhas que apresentam alimentação

massiva por possuírem um alimento larval líquido e viscoso, sobre o qual o ovo

permanece na posição vertical (Velthuis & Velthuis, 1998).

Além do pólen como fonte de proteína, as abelhas também coletam néctar (fonte

de carboidrato). O alimento que é trazido para o ninho pode ser usado para a nutrição

das larvas, sustento dos adultos e, indiretamente, na produção de ovos tróficos pelas

operárias e produção de ovos reprodutivos pelas rainhas e operárias. Ainda pode ser

armazenado nos potes de alimentos, dentro da colônia, para uso futuro (Michener,

1974). O pólen não é somente essencial para a produção de alimento da cria, mas

também para o desenvolvimento dos tecidos corporais da abelha nos primeiros dias após

a emergência (Haydak, 1970).

27 __________________________________________________________________________Introdução

O alimento larval dos meliponíneos é constituído em grande parte de pólen, além

de mel e secreções glandulares de operárias (Roubik, 1989; Engels & Imperatriz-Fonseca,

1990). Em sua maioria, estratifica-se por decantação do pólen, ficando a secreção

glandular nas primeiras camadas, variando gradativamente a sua composição nas

camadas seguintes, com proporções crescentes de pólen (Kerr, 1948). Como o pólen é o

principal componente deste alimento, uma disponibilidade excedente de pólen pode ser

um fator chave no desenvolvimento próspero da população das colônias de abelhas sem

ferrão (van Veen & Sommeijer, 2000).

Hartfelder e Engels (1989), analisando sete espécies de abelhas sem ferrão,

constatou que, em geral, o alimento larval é composto por 40-60% de água, 5-12% de

açúcares, 1,1-19,4% de proteínas e 0,2-1,3% de aminoácidos livres. Além desses

componentes solúveis em água, cerca de 30% ou mais do alimento larval é composto por

pólen e lipídios. Segundo Hartfelder e col. (2006), a compreensão de como as colônias

regulam a alimentação larval nas abelhas sem ferrão é de extrema importância para

entender os processos biológicos e evolutivos envolvidos na produção de rainhas,

reprodução das colônias e determinação de castas.

Castilho-Hyodo (2001) observou que em Schwarziana quadripunctata, a

quantidade de alimento depositado nas células de cria varia ao longo do ano, sendo

maior em estações do ano com maior disponibilidade de recursos alimentares, o que

também foi observado por Menezes e col. (2013) em Scaptotrigona aff. depilis, por

Baptistella e col. (2012) em Frieseomelitta varia, por Ribeiro e Manoel (2002) em Plebeia

remota e por Ramalho e col. (1998) em Melipona quadrifasciata.

As abelhas sem ferrão possuem diferentes estratégias de fornecimento de

alimento às suas larvas (Hartfelder et al., 2006), resultado de uma grande variabilidade

de mecanismos de determinação de castas e surgimento de rainhas (figura 1) (Engels &

Imperatriz-Fonseca, 1990). Como as larvas fêmeas são totipotentes, caso recebam a

quantidade de alimento acima de um determinado limiar, elas se desenvolvem em

rainhas (Camargo, 1972a, b; Campos & Costa, 1989; Campos & Coelho, 1993).

Na maioria das espécies de abelhas sem ferrão, as larvas que originam operárias e

machos são criadas em células de mesmo tamanho, enquanto as larvas que originam

rainhas são criadas em células maiores, chamadas de células reais (figura 1b) (Darchen &

Delage-Darchen, 1971). Geralmente são construídas na periferia do favo de cria,

28 __________________________________________________________________________Introdução

possuem forma diferenciada, esférica ou ovalada, e contém de duas a oito vezes mais

quantidade de alimento que as células de operárias e machos (Darchen & Delage-

Darchen, 1971; Camargo, 1972a, b; Prato, 2007; Menezes et al., 2013). Ao que tudo

indica não há diferença qualitativa entre o alimento oferecido às larvas que originam

rainhas e aquele oferecido às larvas que originam operárias, portanto, o fator

determinante é somente da quantidade de alimento (Kerr et al., 1966; Camargo, 1972a;

Hartfelder & Engels, 1989; Engels & Imperatriz-Fonseca, 1990).

Nos gêneros Frieseomelitta, Leurotrigona e Plebeia, as operárias não constroem

células reais, mas o sistema de determinação de castas também está relacionado com a

quantidade de alimento larval. Nesses dois gêneros, as larvas precisam ingerir o alimento

extra de uma célula vizinha acessória para se tornarem rainhas (figura 1c) (Terada 1974;

Faustino, 2002; Faustino et al. 2002). Uma peculiaridade dessas espécies é que as células

de cria são arranjadas em cachos e quando as colônias estão órfãs, as operárias

constroem células apenas com alimento ao lado de células com larvas para que essas se

alimentem e se tornem rainhas, como também foi observado em Plebeia lucii (Teixeira &

Campos, 2005).

No gênero Melipona, rainhas, operárias e machos são criados em células de

mesmo tamanho, não existindo, portanto as células reais. A taxa de produção de rainhas

e operárias é determinada geneticamente, porém auxiliado pela alimentação larval que

tem um efeito modulador sobre essa decisão, assim até 25 % das abelhas fêmeas que

emergem podem se tornar rainhas (figura 1a) (Kerr, 1948, 1950, 1969b; Kerr & Nielsen,

1966; Kerr et al., 1966; Ratnieks, 2001). Portanto, o sinal primário para determinação de

castas parte da própria larva (Kerr, 1950, 1969b; Bourke & Ratnieks, 1999).

Em outros gêneros (Plebeia, Nannotrigona, Schwarziana) onde normalmente as

rainhas emergem de células reais, rainhas miniatura também podem ser geradas em

células de operárias. O mecanismo como isso ocorre é ainda desconhecido, mas segundo

Ribeiro e col. (2006) seria um mecanismo intermediário entre (a) e (b) apresentados na

figura 1. De modo geral, as rainhas-miniaturas são viáveis, acasalam-se e realizam

postura normalmente (Ribeiro & Alves, 2001; Ribeiro et al., 2003; Wenseleers et al.,

2005; Ribeiro et al., 2006), embora elas possuam menos ovaríolos que as rainhas

produzidas em células reais (Camargo, 1974; Cruz-Landim et al.,1998).

29 __________________________________________________________________________Introdução

Figura 1: Mecanismos de produção de rainhas em ninhos de abelhas sem ferrão. (a) mecanismo

genético-alimentar presente no gênero Melipona onde não há construção de células reais, pois

rainhas e operárias emergem de células de cria de tamanhos semelhantes. (b) mecanismo

trofogênico presente na maioria dos gêneros de abelhas sem ferrão, onde as rainhas emergem

de células reais. (c) mecanismo trofogênico presente em alguns gêneros de abelhas sem ferrão

onde o fator determinante é a quantidade de alimento oferecido às larvas, porém a sobrecarga

de alimento necessária para uma larva se tornar rainha fica armazenada em uma célula

acessória. Linhas espessas = células de rainhas; linhas finas = células de operárias.

Atualmente, têm-se registro de ocorrência de rainhas-miniatura em nove espécies

de abelha sem ferrão, entre elas: Cephalotrigona capitata (Schwarz, 1948); Schwarziana

quadripunctata (Camargo, 1974; Imperatriz-Fonseca & Darakjian, 1993; Nogueira-Ferreira

et al., 2000; Wenseelers et al., 2005), Plebeia julianii (Juliani, 1962), Plebeia remota

(Ribeiro et al. 2003; Ribeiro et al., 2006), Nannotrigona testaceicornis (Imperatriz-Fonseca

et al., 1997); Plebeia lucii (Teixeira & Campos, 2005).

Vislumbrando este panorama, podemos crer que nas abelhas onde a

determinação de castas ocorre exclusivamente por meio de mecanismo alimentar, é

possível induzir a produção de rainhas por meio da manipulação da quantidade de

alimento oferecida às larvas. A possibilidade de obter rainhas manipulando

experimentalmente a alimentação das larvas tem intrigado pesquisadores há bastante

tempo. Camargo (1972a, b) foi pioneira nesses estudos e desenvolveu uma técnica para

criar larvas de abelhas sem ferrão in vitro em condições controladas, baseada nos

métodos existentes para Apis mellifera. A metodologia consiste na transferência de larvas

recém-nascidas de alvéolos naturais para alvéolos artificiais, confeccionados de cera de

A. mellifera, onde a quantidade de alimento oferecida às larvas é equivalente à

a b c

30 __________________________________________________________________________Introdução

quantidade depositada nas células de rainhas. Assim, 100% das larvas fêmeas se

tornaram rainhas, com exceção do gênero Melipona (Camargo, 1972a, b; Campos &

Costa, 1989; Baptistella et al., 2012). Esses alvéolos são fechados com tampas de cera e

mantidos em estufas a 28°C. Ainda, Buschini e Campos (1995) constataram que em

Trigona spinipes a freqüência de rainhas obtidas foi tanto maior quanto maior a

quantidade de alimento ingerido pelas larvas, influenciando o peso, comprimento dos

ovários e número de ovaríolos.

Os primeiros experimentos foram realizados com a espécie Scaptotrigona postica,

mas posteriormente outros pesquisadores utilizaram a técnica em diversas espécies

(Almeida, 1974; Campos & Costa, 1989; Maciel-Silva & Kerr, 1991; Hartfelder & Engels,

1992; Bezerra, 1995; Menezes et al., 2006, 2013; Prato, 2007; Baptistella et al., 2012). No

presente trabalho utilizamos a técnica de produção in vitro de rainhas como uma

ferramenta para investigar a influência da quantidade de alimento larval sobre a

determinação de castas nas abelhas sem ferrão.

1.3 As espécies escolhidas para o estudo

As três espécies de abelhas sem ferrão escolhidas para este estudo ocorrem na

região Neotropical com ampla distribuição, são elas Tetragonisca angustula (Latreille),

Frieseomelitta varia (Lepeletier) e Nannotrigona testaceicornis (Lepeletier). As três

espécies possuem um sistema de determinação de castas trófico, baseado apenas na

quantidade de alimento ingerido pelas larvas fêmeas, porém apresentam peculiaridades

quanto à maneira de construir as células de cria de rainhas e consequentemente na

maneira como o alimento é oferecido às larvas, e no tamanho das rainhas produzidas.

Além disso, seus ninhos possuem arquiteturas distintas, principalmente quando

comparamos a presença de invólucro, formato e agrupamento das células de cria e forma

dos potes de alimento.

Acreditamos que todas essas diferenças podem influenciar a capacidade de

armazenamento de alimento no interior das colônias, a maneira como estas abelhas

produzem os sexuados e a determinação de castas. Estes fatores tornam estas três

espécies candidatas interessantes para as investigações do presente trabalho.

31 __________________________________________________________________________Introdução

A abelha Tetragonisca angustula, popularmente conhecida no Brasil como abelha

jataí, é uma abelha amarelo-dourada de pequeno porte que mede aproximadamente

5mm. A entrada do ninho é caracterizada pela presença de um tubo de cerume

rendilhado com base firme que é fechado durante a noite. As células de cria são envoltas

por um invólucro de cerume abundante, com várias camadas finas. O alimento (mel e

pólen) é armazenado em potes ovais de mesmo tamanho. As células de cria são

construídas em forma de favos discoides sobrepostos. As rainhas são produzidas em

células reais típicas de formato ovóide que se localizam na periferia do favo (Imperatriz-

Fonseca et al., 1984). Sua distribuição geográfica abrange um imenso território de clima

tropical que se estende do sul do Brasil até o México, sendo encontrada em quase todo o

território brasileiro (Camargo & Pedro, 2013), exceto na Cordilheira dos Andes, na

caatinga brasileira e algumas regiões da Amazônia (Oliveira et al, 2004).

Frieseomelitta varia é uma abelha de médio porte, coloração amarelada e

corbículas com coloração escura de fácil visualização. Suas colméias racionais são

cobertas com própolis pelas próprias abelhas, a entrada do ninho é pequena, não

saliente e permite que apenas uma abelha passe por vez. Não produzem invólucro em

torno das células de cria que se encostam levemente ou são ligadas por pequenas

colunas de cerume, formando agrupamentos parecidos com cachos. Não há células reais

típicas, as larvas que se tornam rainhas ingerem uma quantidade extra de alimento

depositado em uma célula acessória adjacente (Faustino et al., 2002). Os potes de pólen

são cilíndricos ou cônicos, com cerca de 3 cm de altura e os potes de mel são ovais, com

cerca de 1,5 cm de altura. Nestas abelhas as operárias nunca desenvolvem ovários

(Nogueira-Neto, 1970). Sua distribuição geográfica abrange a Bolívia e os seguintes

estados brasileiros: Bahia, Goiás, Mato Grosso, Minas Gerais, São Paulo e Tocantins

(Camargo & Pedro, 2013).

Nannotrigona testaceicornis é uma abelha de pequeno porte que mede

aproximadamente 4mm, possui coloração escura e ficou conhecida popularmente como

abelha iraí. A entrada do ninho é um tubo geralmente curto feito com cerume pardo ou

escuro que permanece fechado durante a noite e é reconstruído diariamente. O

invólucro está presente no entorno dos favos de cria que podem ser helicoidais ou

discoides sobrepostos. As rainhas são produzidas tanto em células reais típicas de

formato ovóide quanto em células pequenas, do mesmo tamanho das células de cria de

32 __________________________________________________________________________Introdução

operárias, portanto, as rainhas podem ser grandes (comuns) ou pequenas (rainhas-

miniatura) (Imperatriz-Fonseca et al., 1997). Os potes de alimento (mel e pólen) são ovais

e de mesmo tamanho, podendo atingir 1,5 cm de altura (Nogueira-Neto, 1970). Sua

distribuição geográfica abrange o norte da Argentina, Paraguai e os seguintes estados

brasileiros: Bahia, Espírito Santo, Goiás, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Paraná, Rio

Grande do Sul, Rio de Janeiro, Santa Catarina e São Paulo (Camargo & Pedro, 2013).

________________________________________________________Objetivos

Objetivos Objetivos

34 _____________________________________________________________________________Objetivos

2. OBJETIVOS

Este trabalho analisou a relação existente entre as condições ambientais de

temperatura e pluviosidade e a quantidade de alimento estocado no interior das colônias

(potes de mel e pólen), assim como da quantidade de alimento larval depositado nas

células de cria. Averiguamos ainda a influência da disponibilidade de recursos

alimentares sobre a frequência de produção dos indivíduos, enfatizando os sexuados

(machos e rainhas) em colônias de Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia e

Nannotrigona testaceicornis ao longo do ano.

Buscando compreender a influência da quantidade de alimento larval sobre a

determinação das castas nas três espécies, utilizamos a técnica de produção in vitro de

rainhas com variação gradual da quantidade de alimento oferecido às larvas, testando a

possível produção de intercastas e/ou a quantidade mínima limite de alimento larval

necessário para induzir o desenvolvimento de uma larva fêmea em rainha.

Em linhas gerais, este trabalho procurou fazer uma abordagem ampla sobre a

importância dos recursos alimentares para o ciclo reprodutivo das colônias de abelhas

sem ferrão, principalmente com relação à produção de sexuados e a determinação das

castas.

_________________________________________________Material e métodos

Material e métodos Material e métodos

36 ___________________________________________________________Material e métodos

3. MATERIAL E MÉTODOS

Para investigar a relação existente entre os fatores ambientais (pluviosidade e

temperatura), a quantidade de alimento estocado no interior das colônias, a quantidade

de alimento larval depositado nas células de cria e a frequência de produção de sexuados

nas colônias, utilizamos 4 colônias de Tetragonisca angustula, 4 colônias de

Frieseomelitta varia e 4 colônias de Nannotrigona testaceicornis. Os dados foram

coletados no período de um ano, de agosto/2012 a julho/2013. Para averiguar a

influência da quantidade de alimento larval sobre a determinação das castas utilizamos

outras três colônias (uma de cada espécie). Os experimentos foram realizados de

agosto/2013 a maio/2014.

Todas as colônias utilizadas foram mantidas em caixas para criação racional no

meliponário do Depto. de Genética da FMRP-USP e não receberam alimento artificial

durante a coleta de dados. As análises de conteúdo proteico e de aminoácidos dos

alimentos larvais foram realizadas oportunamente em vários momentos ao longo da

coleta de dados.

3.1 Quantidade de alimento estocado nas colônias e variação sazonal de

pluviosidade e temperatura

Foram utilizadas nove colônias de abelhas sem ferrão, três colônias (C1, C2 e C3)

de T. angustula, três colônias (C4, C5 e C6) de F. varia e três colônias (C7, C8 e C9) de N.

testaceicornis. Os dados foram coletados durante 12 meses consecutivos, de

agosto/2012 a julho/2013. Realizamos mensalmente a contagem do número de potes de alimento

encontrados no interior das colônias. Para isso as caixas de madeira racionais que

continham as colônias foram abertas para visualização dos potes de alimento, que foram

discriminados entre potes de pólen e potes de mel. Os potes foram encontrados em sua

maioria na região superior das caixas (melgueiras), porém em muitas colônias

observamos também a presença de potes de alimento no entorno da área de cria.

Os dados de variáveis ambientais (médias mensais de pluviosidade e temperatura)

para período de agosto/2012 a julho/2013 na localidade de Ribeirão Preto - SP foram


obtidos pela base de dados do CIIAGRO (Centro Integrado de Informações

Agrometeorológicas) por meio do site http://www.ciiagro.sp.gov.br/.

3.2 Quantidade de alimento larval depositado nas células de cria

Para este estudo foram escolhidas três colônias diferentes das utilizadas na

etapa anterior, sendo uma colônia (C10) de T. angustula, uma colônia (C11) de F. varia e

uma colônia (C12) de N. testaceicornis. Mensalmente foi coletado de cada colônia um

favo de cria (T. angustula e N. testaceicornis) e uma porção (F. varia) com células recém-

operculadas, na fase embrionária (contendo ovos) de cada colônia. As coletas foram

realizadas durante 12 meses consecutivos, de agosto/2012 a julho/2013.

De cada favo/porção foram escolhidas ao acaso 20 células de cria para serem

analisadas. As células de cria, incluindo as células reais foram levadas ao laboratório e

desoperculadas individualmente com um estilete de ponta fina. Os ovos foram

removidos para que seu conteúdo proteico não interferisse no experimento.

Posteriormente o conteúdo alimentar de cada célula foi quantificado volumetricamente

utilizando-se capilares de 20 µL graduados de 5µL em 5µL (para células de cria de

operárias/machos) e de 50µL graduados de 10µL em 10µL (para células reais),

conectados a um micropipetador manual.

Todo o alimento retirado das células foi estocado em frascos Eppendorf

devidamente identificados e acondicionados em freezer a –21°C para utilização nas

etapas posteriores. Após a coleta os favos de cria eram devolvidos às colônias de origem.

3.3 Ocorrência de rainhas, machos e operárias

Utilizamos as mesmas nove colônias, citadas no item 3.1, três colônias (C1, C2 e

C3) de T. angustula, três colônias (C4, C5 e C6) de F. varia e três colônias (C7, C8 e C9) de

N. testaceicornis no período de agosto/2012 a julho/2013.

Para T. angustula e N. testaceicornis foram coletados mensalmente seis favos de

cria (um de cada colônia), cujas células de cria continham indivíduos em estágio pupal

pré-emergente, incluindo células reais. Para a avaliação do número de sexuados foi

utilizada uma técnica não invasiva, descrita por Koedam (2003), a qual não afeta o

número demográfico da colônia. Esta técnica consiste em desopercular as células de

favos prontos para emergirem com o auxílio de um alfinete número o 3 ou 4. Depois, um


plástico transparente é sobreposto ao favo onde fica registrado o número e a localização

dos machos, das rainhas e das operárias encontrados.

Para F. varia que constrói células de cria individualizadas em formato de “cacho”,

localizamos regiões contendo indivíduos em estágio pupal pré-emergente, incluindo

casulos reais e células acessórias que foram coletados e levados ao laboratório onde as

células de cria foram desoperculadas com o auxílio de um estilete de ponta fina. Após a

etapa de verificação do sexo, os favos e células de cria foram devolvidos aos seus ninhos

de origem.

A distinção entre os sexos e as castas foi feita por características morfológicas

como largura máxima da cabeça, distância interorbital (tendo como referência a base da

antena) e distância intertegular com auxílio de estereomicroscópio (Leica Wild M3B).

3.4 Efeitos da quantidade de alimento sobre a determinação de castas

Utilizamos as mesmas três colônias citadas no item 3.3, uma colônia (C10) de T.

angustula, uma colônia (C11) de F. varia e uma colônia (C12) de N. testaceicornis. Os

experimentos foram realizados de agosto/2013 a maio/2014.

Nesta etapa foi utilizada a técnica modificada e aprimorada de produção in vitro

de rainhas, que será brevemente descrita a seguir (para maiores detalhes ver Prato,

2011; Baptistella et al., 2012; Menezes et al., 2013). Os procedimentos descritos a seguir

foram realizados separadamente para as três espécies aqui estudadas.

Células de cria de operárias/machos recém-operculados foram coletadas, levadas

ao laboratório, desoperculadas com um estilete de ponta fina e seus ovos foram

removidos. Posteriormente, com o auxílio de uma bomba de sucção a vácuo, o alimento

foi retirado célula por célula de todos os favos, estocado em tubos Falcon identificados

para as três espécies e acondicionados em freezer a -21°C até o momento de sua

aplicação nas placas de acrílico.

Para reproduzir células de cria utilizamos três placas de acrílico (uma para cada

espécie) retangulares com 1,5 cm de espessura e lados com 8,4 cm e 7,6 cm contendo

100 pocinhos cada uma. Cada pocinho possuía 4 mm de diâmetro, 8 mm de

profundidade e volume total de 100 µL.

O alimento que estava acondicionado em freezer a -21°C foi mantido em

temperatura ambiente por cerca de meia hora para descongelamento, agitado e


posteriormente transferido com micropipetas para os 300 pocinhos das três placas de

acrílico separados por espécie e em quantidades graduais. Para as três espécies

aplicamos o alimento de 10 em 10 pocinhos com as seguintes quantidades: 15 µL, 20 µL,

25 µL, 30 µL, 35 µL, 40 µL, 45 µL, 50 µL, 55 µL e 60 µL.

Células de cria contendo larvas em estágio primário foram coletadas, levadas ao

laboratório, onde suas células de cria foram desoperculadas, em seguida, as larvas foram

transferidas com estilete de ponta fina para os pocinhos das placas de acrílico contendo

alimento. Após transferência, as placas de acrílico foram acondicionadas em estufa BOD a

28°C e umidade controlada onde foram mantidas até o início da emergência dos

indivíduos. Realizamos 300 transferências (100 de cada espécie) de larvas para pocinhos

contendo quantidades variáveis de alimento larval.

Após a emergência, os poucos machos obtidos foram desconsiderados e as

fêmeas foram analisadas quanto ao peso e medidas morfométricas (largura máxima da

cabeça, distância entre os olhos e distância entre as tégulas). Os mesmos parâmetros

foram avaliados para rainhas (n= 4, por espécie) e operárias (n= 10, por espécie) e

rainhas-miniatura (n= 5, somente para N. testaceicornis) recém-emergidas em condições

naturais a título de comparação.

3.5 Análise estatística

Para a análise dos dados relativos à produção de indivíduos pelas colônias e

quantidade de alimento depositado nas colônias ao longo do ano, utilizamos os testes de

Kruskal-Wallis (ANOVA) para múltiplas amostras independentes e de Mann-Whitney para

comparação para par a par de amostras independentes, considerando significativos os

valores de probabilidade menores que 5% (p<0,05). Utilizamos também os coeficientes

de correlação de Spearman e Pearson.

Para testar se a quantidade de alimento depositado nas células de cria de

operárias/machos em T. angustula foi influenciada pelas diferentes épocas do ano foi

realizado o teste One-Way ANOVA. O mesmo foi feito para avaliar se a quantidade de

alimento nas células de cria foi diferente em cada colônia amostrada. Para comparar as

épocas do ano entre si utilizamos o teste de Friedman para comparações múltiplas par a

par.


Para comparação das quantidades de aminoácidos livres e totais presentes nos

alimentos provenientes de células reais e células de operárias/machos utilizamos o teste

ANOVA e o coeficiente de correlação de Spearman, para duas amostras pareadas e

relacionadas.

Para comparação entre os tempos de desenvolvimento e pesos dos diversos

grupos de indivíduos naturais e produzidos in vitro, utilizamos o teste de Mann-Whitney

para amostras independentes e a distância de Mahalanobis a fim de comparar as

medidas morfométricas. O programa BioEstat 5.0 foi utilizado para realizar tais testes

estatísticos.

_______________________________________________________Resultados

Resultados Resultados

42 ________________________________________________________________Resultados

4. RESULTADOS

4.1 Quantidade de alimento estocado nas colônias e variação sazonal de

pluviosidade e temperatura.

Analisando as médias mensais de temperatura e pluviosidade no período de

agosto/2012 a julho/2013, notamos que houve uma variação sazonal bem pronunciada

com duas estações bem definidas: um verão quente e chuvoso de novembro a março, e

um inverno com temperaturas amenas e muito seco de agosto a outubro e de abril a

julho.

Nas três espécies estudadas houve correlação significativamente positiva entre a

quantidade de alimento (potes de mel + potes de pólen) armazenados no interior das

colônias e os dados de pluviosidade e temperatura, sendo que a pluviosidade apresentou

uma correlação significativamente maior (índice de correlação de Pearson igual a

0,52017). Houve também um alto índice de correlação positiva entre as quantidades de

potes de pólen e potes de mel armazenados no interior das colônias, entretanto temos

que destacar que a maior correlação foi encontrada nas colônias de F. varia (índice de

correlação de Pearson igual a 0,94096; teste-F p = 0,71832).

Estes dados indicam que a variação da temperatura, e mais fortemente da

pluviosidade, influenciou a quantidade de alimento armazenado no interior das colônias

ao longo do ano. Observamos também que o armazenamento de pólen e mel no interior

das colônias das diferentes espécies exibiu um perfil muito semelhante entre os meses

amostrados, demonstrando que as três espécies responderam de maneira semelhante às

variações ambientais. Além disso, quando analisamos as espécies separadamente

notamos que as quantidades de potes de pólen e de potes de mel responderam de

maneira semelhante às variações sazonais ao longo do ano, sendo o período de fevereiro

a maio de 2013, o de maior abundância de alimento armazenado no interior das colônias.

Observamos ainda que o número de potes de mel se manteve superior ao número de

potes de pólen nas colônias das três espécies ao longo do ano (figura 2).

43 ________________________________________________________________Resultados

Figura 2: Quantidade de potes de alimento (mel e pólen) armazenados no interior das colônias

de Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis; acompanhados

pelas médias mensais de pluviosidade e temperatura de agosto de 2012 a julho de 2013.

44 ________________________________________________________________Resultados

4.2 Quantidade de alimento larval depositado nas células de cria

As variações sazonais apresentaram efeito significativo sobre a quantidade de

alimento depositado nas células de cria de operárias/machos nas três espécies estudadas

(figura 3), (ANOVA, p<0,0001). Foi utilizada uma colônia por espécie.

Nas três espécies houve correlação significativamente positiva entre a quantidade

de alimento larval depositado nas células de cria e os dados de pluviosidade e

temperatura, sendo que a pluviosidade apresentou uma correlação significativamente

maior (índice de correlação de Pearson igual a 0,64012).

Encontramos ainda um alto índice de correlação positiva entre as quantidades de

potes de pólen e potes de mel armazenados no interior das colônias e o volume de

alimento depositado nas células de cria, entretanto temos que destacar que a maior

correlação foi encontrada nas colônias de T. angustula (índice de correlação de Pearson

igual a 0,84194; teste-F p = 0,61742).

Os dados anteriores indicaram que a variação da temperatura, e mais fortemente

da pluviosidade, influenciou tanto a quantidade de alimento armazenado no interior das

colônias ao longo do ano (potes de pólen e potes de mel) quanto o volume de alimento

depositado nas células de cria. Observamos também que o volume de alimento

depositado nas células de cria das diferentes espécies exibiu um perfil muito semelhante

entre os meses amostrados, demonstrando que as três espécies responderam de

maneira semelhante às variações ambientais. O período de janeiro a maio de 2013

apresentou a maior abundância de alimento depositado nas células de cria (figura 3).

Os meses de coleta foram comparados entre si para identificar as diferenças mais

acentuadas em relação ao volume do alimento. Fevereiro, março e abril foram os meses

com maior volume de alimento depositado nas células de cria de operárias/machos,

diferindo estatisticamente de todos os outros meses analisados nas três espécies

estudadas (p= 0,0001, p< 0,05). Junho, julho, agosto e setembro foram os meses com

menor volume de alimento, diferindo estatisticamente de todos os outros meses

analisados nas três espécies (p= 0,0001, p< 0,05). Nos demais meses, a variação na

quantidade de alimento das células de cria de operárias/machos não se demonstraram

significativas (p= 0,09, p > 0,05) (tabela I).

45 ________________________________________________________________Resultados

Figura 3: Volume de alimento larval depositado nas células de cria de operárias/machos de

Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis; acompanhados

pelas médias mensais de pluviosidade e temperatura de agosto de 2012 a julho de 2013.

46 ________________________________________________________________Resultados

Analisando as colônias individualmente, notamos que não existiu influência do

estado das colônias sobre a quantidade de alimento depositado nas células de cria de

operárias/machos (ANOVA; Volume: F = 1,2421; p= 0,2931, p>0,05). Constatamos ainda

uma característica intrínseca de cada espécie, a diferença na média de volume do

alimento larval: T. angustula foi a espécie com menor volume de alimento por célula de

cria, enquanto F. varia apresentou o maior volume (tabela I).

Tabela I: Volume (μl) de alimento larval contido nas células de cria de operárias/machos de

Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis. Foi utilizada uma

colônia por espécie. Med= média; DP = desvio padrão; Min = mínimo; Max = máximo.

Meses

de

coleta

T. angustula F. varia N. testaceicornis

Med DP Max Min Med DP Max Min Med DP Max Min

ago/12 6,7 0,5 9,0 6,5 24,9 0,3 27,1 19,8 20,0 0,5 24,3 18,3

set/12 6,9 0,9 10,5 6,5 25,2 0,4 27,2 20,2 21,9 0,7 25,6 18,2

out/12 7,3 0,6 9,0 5,5 26,0 0,4 27,9 19,9 22,4 0,6 26,0 19,0

nov/12 7,4 0,7 10,0 6,0 26,4 0,5 28,0 21,6 23,3 0,6 28,1 20,4

dez/12 7,8 0,7 10,0 7,0 27,3 0,5 28,2 22,9 23,6 0,7 28,4 20,6

jan/13 8,0 0,9 10,5 7,0 28,0 0,6 30,7 23,6 24,8 0,9 28,0 20,7

fev/13 8,8 0,8 10,5 7,5 30,2 0,4 34,8 26,1 26,0 0,8 29,3 21,1

mar/13 9,2 1,1 11,0 7,5 31,3 0,6 37,1 26,0 25,8 1,0 30,1 21,2

abr/13 8,6 1,0 10,0 7,0 29,2 1,0 38,0 24,3 24,7 1,0 32,0 19,0

mai/13 7,7 1,2 10,5 7,5 25,0 1,1 35,8 20,3 23,6 1,1 29,0 19,3

jun/13 7,2 0,7 9,5 6,5 23,6 0,9 26,2 19,5 22,0 0,6 27,2 18,8

jul/13 6,5 0,6 8,5 6,0 23,1 0,4 25,8 18,0 19,8 0,5 23,9 17,9

Total 7,6 0,8 9,9 6,7 26,7 0,6 30,5 21,8 23,2 0,7 27,7 19,5

Observamos que a produção de rainhas se correlacionou muito fracamente com o

volume de alimento depositado nas células de cria das três espécies. Entretanto a

produção de machos e operárias encontrou-se fortemente correlacionada positivamente

com o volume de alimento larval contido nas células de cria das três espécies: coeficiente

de correlação de Spearman para T. angustula (p= 0,9371), F. varia (p= 0,9729) e N.

testaceicornis (p= 0,9035) (figura 4).

47 ________________________________________________________________Resultados

Figura 4: Regressão linear do número de potes de alimento (mel e pólen) relacionados ao

volume de alimento contido nas células de cria de Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia

e Nannotrigona testaceicornis no período de agosto de 2012 a julho de 2013.

48 ________________________________________________________________Resultados

As células reais foram encontradas em sete meses diferentes no período de

agosto/12 a julho/13, com destaque para o mês de maio/13 quando foram encontradas

células reais nas colônias das três espécies (célula real + célula acessória, em F. varia). Os

meses de março, abril e maio de 2013 merecem destaque, pois neste período foram

encontradas 57 % (n = 4) das células reais das três espécies estudadas. Entretanto,

analisando as espécies separadamente observamos que todas as colônias produziram

células reais em meses diferentes (tabela II).

Segundo teste-t com valores significativos de p < 0,05, não houve diferença

significativa para os volumes de alimento larval das células reais e/ou células acessórias

das três espécies (T. angustula, p = 0,0879; F. varia, p = 0,0708 e N. testaceicornis, p =

0,09307).

Tabela II: Volume (μl) de alimento larval contido nas células reais de Tetragonisca angustula e

Nannotrigona testaceicornis, e nas células reais e células acessórias de Frieseomelitta varia. Foi

utilizada uma colônia por espécie. DP: desvio padrão.

Meses de

coleta

T. angustula N. testaceicornis Frieseomelitta varia

Células reais Células reais Células reais Céls acessórias Total

ago/12 - - - - -

set/12 50 - - - -

out/12 - - - - -

nov/12 - - 34 25 59

dez/12 - 49 - - -

jan/13 53 - - - -

fev/13 - - - - -

mar/13 - 51 - - -

abr/13 55 - - - -

mai/13 52 50 37 26 63

jun/13 - - - - -

jul/13 - - - - -

Média + DP 52,5 ± 2,0 50 ± 1,0 35,5 ± 2,1 25,5 ± 0,7 61,0 ± 2,8

Quando comparamos os volumes de alimento depositados nas células de cria de

operárias/machos e nas células reais e/ou acessórias, através do teste de Mann-Whitney

49 ________________________________________________________________Resultados

para duas amostras independentes com valores significativos de p< 0,05, notamos que

houve diferença significativa para as três espécies (T. angustula, p = 0,0001; F. varia, p =

0,0001 e N. testaceicornis, p = 0,0001). As larvas que se tornaram rainhas nas colônias de

T. angustula, F. varia e N. testaceicornis ingeriram em média, respectivamente 44,9 µL,

34,3 µL e 26,8 µL mais alimento do que as larvas que se tornaram operárias e/ou machos.

4.3 Ocorrência de rainhas, machos e operárias

Foram examinados 18829 indivíduos coletados a partir de nove colônias

diferentes. Em 3 colônias de T. angustula foram analisados 7578 indivíduos dos quais 933

eram machos, sendo encontradas apenas 5 células reais. Em 3 colônias de F. varia foram

analisados 6976 indivíduos dos quais 1010 eram machos e apenas 5 rainhas. Em 3

colônias de N. testaceicornis foram analisados 4275 indivíduos dos quais 610 eram

machos e 11 rainhas, das quais 6 foram rainhas-miniatura.

Analisando as frequências totais de produção dos indivíduos ao longo do ano nas

três espécies, observamos que todas exibiram um perfil semelhante. As operárias

variaram aproximadamente entre 85% e 88%, enquanto os machos se mantiveram

aproximadamente entre 12% e 15%. As rainhas tiveram uma produção

proporcionalmente muito baixa, especialmente em T. angustula e F. varia cuja frequência

não ultrapassou 0,1% (figura 5).

Figura 5: Freqüência de produção de machos, rainhas e operárias em colônias de Tetragonisca

angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis no período de um ano.

50 ________________________________________________________________Resultados

Analisando as frequências médias de produção de indivíduos nas colônias das três

espécies percebemos que a colônia C3 de T. angustula foi a mais populosa, enquanto a

colônia C7 de N. testaceicornis foi a menos populosa. Todas as colônias produziram

operárias a uma taxa superior a 82%, variando de 82,10% (C8) a 90,26% (C9), enquanto a

produção de machos variou de 9,55% (C9) a 17,48% (C8), sendo também produzidos por

todas as colônias. A produção de rainhas foi baixa em todas as colônias. Somente a

colônia C2 de T. angustula não produziu rainhas, enquanto a maior quantidade de

rainhas foi produzida na colônia C8 de N. testaceicornis (6 rainhas; 0,72%) (tabela III).

Tabela III: Médias relativas (%), frequências absolutas, desvios padrões (DP), frequências

mínimas (mín.) e frequências máximas (máx.) de rainhas, operárias e machos produzidos

mensalmente em colônias de Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona

testaceicornis entre agosto de 2012 e Julho de 2013.

T. angustula F. varia N. testaceicornis

C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 Freq. relativa (%) Rainhas média DP min. máx.

0,09 0,00 0,10 0,04 0,07 0,08 0,17 0,42 0,19 0,31 0,00 0,25 0,23 0,20 0,30 0,22 0,37 0,32 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,10 0,00 0,69 0,71 0,39 0,68 0,74 0,72 0,54

Operárias média 88,56 87,95 86,62 84,13 85,25 86,89 83,09 82,10 90,26 DP 22,34 25,34 16,50 13,31 16,50 11,31 14,31 16,51 11,33 mín. 28,18 22,16 47,75 57,19 47,75 46,19 56,17 45,75 51,14 máx. 100,00 100,00 100,00 98,94 88,11 99,00 100,00 100,00 99,84 Machos média 11,35 12,05 13,28 15,83 14,68 13,03 16,74 17,48 9,55 DP 22,37 18,36 16,48 13,34 16,48 12,42 14,34 18,43 12,32 mín. 0,00 0,00 0,00 1,06 11,89 1,00 0,00 0,00 0,16 máx. 71,82 67,82 52,24 42,81 52,24 52,83 38,81 51,24 43,81 Freq. absoluta Céls. de cria média 182,15 229,25 222,08 134,91 232,08 124,91 145,63 143,28 224,83 DP 52,24 60,42 76,25 42,94 71,23 62,42 63,23 38,25 68,43 mín. 97 116 103 96 103 82 78 92 96 máx. 231 282 307 202 274 163 180 178 265 total 2238 2440 2900 2098 2560 2318 1213 1448 1614 Rainhas 2 0 3 1 2 2 2 6 3 Operárias 1982 2146 2512 1765 2182 2014 1008 1189 1457 Machos 254 294 385 332 376 302 203 253 154

51 ________________________________________________________________Resultados

A produção dos indivíduos entre as colônias de cada espécie foi semelhante,

notamos ainda que as operárias foram produzidas em todos os meses por todas as

colônias. Todas as colônias de N. testaceicornis produziram rainhas normais e rainhas-

miniatura, com destaque para a colônia C8 que produziu 3 rainhas-miniatura (tabela IV).

Tabela IV. Produção de rainhas, operárias e machos em colônias de Tetragonisca angustula,

Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis entre ago/12 e jul/13. *Rainhas-miniatura.

Ago Set Out Nov Dez Jan Fev Mar Abr Mai Jun Jul T. angustula C1 Rainhas 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 Operárias 163 161 143 155 215 191 204 166 119 148 155 162 Machos 0 7 20 5 4 6 36 52 70 38 16 0 C2 Rainhas 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Operárias 136 165 216 224 206 218 198 172 162 153 137 159 Machos 1 9 16 7 6 10 43 63 76 43 18 2 C3 Rainhas 0 0 0 0 0 0 1 0 1 1 0 0 Operárias 196 199 210 220 231 252 226 223 125 212 243 175 Machos 3 12 43 6 19 21 53 79 118 31 0 0 Rainhas 0 0 1 0 0 0 1 0 2 1 0 0 Operárias 495 525 569 599 652 661 628 561 406 513 535 496 Machos 4 28 79 18 29 37 132 194 264 112 34 2 F. varia C4 Rainhas 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 Operárias 150 143 146 145 130 127 142 152 157 168 162 143 Machos 21 20 20 22 20 27 36 40 43 44 19 20 C5 Rainhas 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 Operárias 169 209 193 168 180 164 153 211 180 184 201 170 Machos 24 32 34 35 19 31 40 46 49 29 18 19 C6 Rainhas 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 0 0 Operárias 176 173 164 156 137 123 136 205 204 180 186 174 Machos 18 17 22 21 16 21 36 39 40 39 15 18 Rainhas 0 1 0 0 0 1 0 2 1 0 0 0 Operárias 495 525 503 469 447 414 431 568 541 532 549 487 Machos 63 69 76 78 55 79 112 125 132 112 52 57 N. testaceicornis C7 Rainhas 0 1* 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 Operárias 73 84 89 83 82 69 54 102 91 99 103 79 Machos 8 22 21 14 6 10 18 29 32 39 3 1 C8 Rainhas 0 0 1 0 1* 1* 1 0 1* 1 0 0 Operárias 87 99 83 123 84 123 80 116 107 106 107 74 Machos 12 26 32 18 8 13 13 33 41 53 3 1 C9 Rainhas 1* 0 0 0 0 1 0 1* 0 0 0 0 Operárias 135 142 131 73 109 57 117 150 143 127 139 134 Machos 6 17 16 11 7 8 11 16 26 34 2 0 Rainhas 1 1 1 0 1 2 1 2 1 1 0 0 Operárias 295 325 303 279 275 249 251 368 341 332 349 287 Machos 26 65 69 43 21 31 42 78 99 126 8 2

52 ________________________________________________________________Resultados

Em F. varia e N. testaceicornis os machos foram produzidos praticamente o ano

todo, mesmo em quantidades muito baixas em certas épocas do ano, entre as colônias

dessas duas espécies apenas C9 deixou de produzir machos em julho/13. Em T. angustula

a produção de machos foi sazonal, pois abril foi o mês de maior produção, enquanto os

períodos de ago-set/12 e jun-jul/13 foram os de menor produção, sendo que C1 deixou

de produzir machos em ago/12 e jul/13 e C3 não produziu machos em jun-jul/13. A

ocorrência de rainhas também foi muito semelhante em todas as colônias, embora N.

testaceicornis tenha produzido mais rainhas do que as outras espécies. Nov/12 e jun-

jul/13 foram os únicos meses em que não houve produção de rainhas, enquanto em

abr/13 ocorreu produção de rainhas em todas as espécies (tabela IV).

Quando analisamos as três colônias de T. angustula percebemos que embora a

colônia C3 tenha sido mais populosa, todas tiveram um perfil muito semelhante para a

frequência absoluta de indivíduos. Considerando as três colônias conjuntamente, a

produção de operárias se manteve alta durante a maior parte do ano (n= 495 min., n=

661 max.) e diminuiu abruptamente no mês de abr/13 quando caiu para 406 operárias

(figura 6).

A produção de machos em T. angustula exibiu grande amplitude ao longo do ano,

pois a porcentagem média de células com machos em estágio pupal variou de 0,2% (n=2)

em jul/13 até 28,3 % (n=264) em abr/13 (tabela IV). Embora tenha se mantido baixa na

maior parte do ano, a produção de machos começou a aumentar a partir de fev/13

mantendo-se alta até mai/13, com destaque para o mês de abr/13 que registrou a maior

frequência de produção (n=264 machos), caracterizando uma produção fortemente

sazonal. Embora tenha havido um pequeno aumento em out/12, este não foi significativo

(figura 6).

Em F. varia as três colônias apresentaram perfis muito semelhantes quanto à

frequência absoluta de produção de indivíduos. A produção de operárias se manteve

relativamente constante ao longo do ano, variando de 414 em jan/13 a 568 em mar/13,

notou-se ainda que a produção de operárias acompanhou a produção total de indivíduos.

Embora a produção de machos tenha sido maior no período de fevereiro a maio de 2013,

estes também apresentaram frequência constante ao longo do ano sem diferenças

significativas (figura 6).

53 ________________________________________________________________Resultados

Figura 6: Frequência absoluta de machos, rainhas e operárias em colônias de Tetragonisca

angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis no período de ago/12 a jul/13.

54 ________________________________________________________________Resultados

Analisando as três colônias de N. testaceicornis notamos dois períodos de grande

produção de indivíduos significativamente diferentes (set-out/12 e mar-mai/13), que

foram acompanhados pelas frequências de operárias e machos. Os machos foram

produzidos sazonalmente em dois períodos com picos significativamente diferentes em

out/12 e mai/13 (figura 6). Embora N. testaceicornis tenha produzido uma quantidade

maior de rainhas, considerando as rainhas miniatura, não observamos nenhuma época

de produção diferenciada de rainhas (figura 6).

Os dados médios da frequência de operárias, machos e rainhas produzidas ao

longo do ano por cada espécie foram submetidos à análise de variância (ANOVA)

utilizando o teste de Kruskal-Wallis (p<0,05), para as operárias encontramos: T. angustula

(p=0,0019), F. varia (p=0,0025) e N. testaceicornis (p=0,0021). Enquanto para os machos

encontramos: T. angustula (p=0,0031), F. varia (p=0,0038) e N. testaceicornis (p=0,0029).

Os dados indicam que existiu diferença significativa tanto na frequência de machos

quanto na frequência de operárias produzidas entre os meses analisados. Entretanto,

para as rainhas encontramos: T. angustula (p=0,6234), F. varia (p=0,6875) e N.

testaceicornis (p=0,7212) indicando a não existência de diferença significativa.

Quando analisamos as colônias de cada espécie entre si não encontramos

diferença significativa para nenhuma das classes de indivíduos avaliados: T. angustula

(operárias, p= 0,6284; machos, p= 0,3589 e rainhas, p= 0,7247), F. varia (operárias, p=

0,9234; machos, p= 0,6549 e rainhas, p= 0,8246) e N. testaceicornis (operárias, p=

0,9845; machos, p= 0,4796 e rainhas, p= 0,6935) demonstrando uma sincronia na

produção dos indivíduos entre as colônias da mesma espécie.

Utilizando o coeficiente de Spearman para análise de correlação das amostras das

classes de indivíduos par a par, percebemos que a produção de rainhas se correlacionou

fracamente com as outras classes para as três espécies: T. angustula (Rainhas x Machos,

p= 0,0134; Rainhas x Operárias, p= 0,0365), F. varia (Rainhas x Machos, p= 0,0121;

Rainhas x Operárias, p= 0,0476) e N. testaceicornis (Rainhas x Machos, p= 0,0115; Rainhas

x Operárias, p= 0,0398). Entretanto, as produções de machos e operárias encontraram-se

correlacionadas positivamente nas três espécies: T. angustula (p= 0,8350), F. varia (p=

0,9867) e N. testaceicornis (p= 0,9142) (figura 7).

55 ________________________________________________________________Resultados

Figura 7: Regressão linear da frequência de produção de machos e operárias de Tetragonisca

angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis no período de ago/12 a jul/13.

56 ________________________________________________________________Resultados

Ao recuperarmos e relacionarmos os dados de número de potes de alimento

presentes no interior das colônias (mel e pólen) com as frequências de produção de

indivíduos para as três espécies por meio do coeficiente de correlação de Spearman no

período de agosto de 2012 a julho de 2013, observamos que a produção de rainhas se

correlacionou muito fracamente com o número de potes de alimento das três espécies.

Os números de potes de mel e pólen se correlacionaram positivamente com as

frequências de produção de operárias, machos e com o número total de indivíduos

produzidos nas colônias das três espécies: T. angustula (potes de mel x operárias, p=

0,5320; potes de mel x machos, p= 0,6032; potes de mel x total, p= 0,6932; potes de

pólen x operárias, p= -0,2034; potes de pólen x machos, p= 0,8907; potes de pólen x

total, p= 0,9021), F. varia (potes de mel x operárias, p= 0,1867; potes de mel x machos,

p= 0,4036; potes de mel x total, p= 0,7903; potes de pólen x operárias, p= 0,0; potes de

pólen x machos, p= 0,8903; potes de pólen x total, p= 0,06098) e N. testaceicornis (potes

de mel x operárias, p= 0,4142; potes de mel x machos, p= 0,6092; potes de mel x total, p=

0,7034; potes de pólen x operárias, p= 0,4960; potes de pólen x machos, p= 0,8905;

potes de pólen x total, p= 0,5043). As únicas exceções foram a correlação negativa entre

o número de potes de pólen e a produção de operárias em T. angustula, e ausência de

correlação entre o número de potes de pólen e a produção de operárias em F. varia

(figura 8).

Analogamente, recuperamos e correlacionamos os dados de volume de alimento

larval depositado nas células de cria de operárias/machos com as frequências de

produção de operárias, machos e total de indivíduos, obtendo resultados positivos para

as três espécies: T. angustula (vol. de alimento x operárias, p= 0,3210; vol. de alimento x

machos, p= 0,8039; vol. de alimento x total), F. varia (vol. de alimento x operárias, p= -

0,1603; vol. de alimento x machos, p= 0,4138; vol. de alimento x total, p= 0,5902) e N.

testaceicornis (vol. de alimento x operárias, p= 0,0; vol. de alimento x machos, p= 0,7092;

vol. de alimento x total, p= 0,7034). As únicas exceções foram a correlação negativa entre

o volume de alimento larval e a produção de operárias em F. varia, e ausência de

correlação entre o volume de alimento larval e a produção de operárias em N.

testaceicornis (figura 9).

57 ________________________________________________________________Resultados

Figura 8: Regressão linear da frequência de produção de machos, operárias e indivíduos totais

com relação ao número de potes de mel e pólen em Tetragonisca angustula, Frieseomelitta

varia e Nannotrigona testaceicornis no período de ago/12 a jul/13.

Tetragonisca angustula

Frieseomelitta varia

Nannotrigona testaceicornis

58 ________________________________________________________________Resultados

Figura 9: Regressão linear da frequência de produção de machos, operárias e indivíduos totais

com relação ao volume de alimento larval contido em células de cria de operárias/machos de


ago/12 a jul/13.

59 ________________________________________________________________Resultados


Com a realização de 300 transferências de larvas conseguimos uma taxa de 75,7%

(n= 227) de natalidade de fêmeas (rainhas e operárias) produzidas in vitro. Os poucos

machos obtidos não foram considerados para esta parte do trabalho.

Em T. angustula obtivemos uma produção de 60, 6% de rainhas, sendo que estas

foram obtidas na a faixa de 35 a 60 µL de alimento larval, não havendo sobreposição com

a produção de operárias que foram produzidas apenas na faixa de 15 a 30 µL de alimento

larval (tabela V).

Em F. varia obtivemos 58% de rainhas que foram produzidas na faixa de 30 a 60

µL de alimento larval, enquanto as operárias foram produzidas apenas na faixa de 15 a 35

µL de alimento larval, portanto, nesta espécie houve uma sobreposição nas quantidades

de 30 e 35 µL de alimento larval, quando houve a produção mútua de operárias e rainhas

(tabela V).

Em N. testaceicornis obtivemos 35,7% de rainhas comuns e 6,7% de rainhas-

miniatura. As operárias foram produzidas na faixa de 15 a 40 µL de alimento larval, as

rainhas comuns foram produzidas na faixa de 40 a 60 µL de alimento larval, e as rainhas-

miniatura foram produzidas apenas nas quantidades de 25, 30 e 35 µL de alimento larval.

Portanto, nesta espécie houve sobreposição nas quantidades de 25, 30 e 35 µL de

alimento larval, quando houve a produção de operárias e rainhas-miniatura, e também

na quantidade de 40 µL de alimento larval, quando houve a produção de operárias e

rainhas comuns (tabela V).

Constatamos que apenas em T. angustula não houve a produção de indivíduos

pertencentes a duas castas diferentes para uma mesma quantidade de alimento larval.

Salientamos que somente em N. testaceicornis houve a produção de rainhas-miniatura.

Ainda observamos que em nenhuma das três espécies houve a produção de indivíduos

intermediários (intercastas).

60 ________________________________________________________________Resultados

Tabela V: Taxa de emergência de operárias, rainhas e rainhas-miniatura em função da variação

da quantidade de alimento oferecida às larvas de Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia

e Nannotrigona testaceicornis criadas in vitro.

VA

(µL)

Tetragonisca angustula Frieseomelitta varia Nannotrigona testaceicornis

NT Operárias Rainhas



Rainhas-

miniatura

Nº % Nº % Nº % Nº % Nº % Nº % Nº %

15 10 8 100 0 0,0 10 10 100 0 0,0 10 5 100 0 0,0 0 0

20 10 7 100 0 0,0 10 9 100 0 0,0 10 9 100 0 0,0 0 0

25 10 9 100 0 0,0 10 8 100 0 0,0 10 7 87,5 0 0,0 1 12,5

30 10 6 100 0 0,0 10 4 57,2 3 42,8 10 6 66,7 0 0,0 3 33,3

35 10 0 0,0 7 100 10 3 37,5 5 62,5 10 8 80,0 0 0,0 2 20,0

40 10 0 0,0 7 100 10 0 0,0 6 100 10 4 66,7 2 33,3 0 0,0

45 10 0 0,0 8 100 10 0 0,0 8 100 10 0 0,0 5 100 0 0,0

50 10 0 0,0 10 100 10 0 0,0 7 100 10 0 0,0 3 100 0 0,0

55 10 0 0,0 9 100 10 0 0,0 10 100 10 0 0,0 8 100 0 0,0

60 10 0 0,0 5 100 10 0 0,0 8 100 10 0 0,0 7 100 0 0,0

Total 100 30 39,4 46 60,6 100 34 42,0 47 58,0 100 39 55,7 25 35,7 6 8,6

Ao compararmos o peso dos indivíduos recém-emergidos produzidos in vitro e de

exemplares produzidos naturalmente nas colônias das três espécies, notamos que de

maneira geral as rainhas produzidas in vitro possuíram peso inferior àquelas produzidas

naturalmente. Ao realizarmos o teste de Mann-Whitney para o peso de rainhas (rainhas

naturais e rainhas produzidas in vitro, exceto rainhas miniatura) e operárias (operárias

naturais e operárias produzidas in vitro), notamos que existe diferença significativa entre

os dois grupos para as três espécies (p< 0,0001).

Quando analisamos os indivíduos produzidos in vitro entre si, notamos que as

rainhas possuíram um peso bastante superior ao obtido pelas operárias e pelas rainhas-

miniatura. Foi possível notar que o peso dos indivíduos recém-emergidos exibiu variação

diretamente proporcional à quantidade de alimento oferecido às larvas (figura 10).

Utilizando o coeficiente de Spearman para análise de correlação das amostras par a par,

percebemos que o peso dos indivíduos produzidos in vitro se correlacionou

positivamente com a quantidade de alimento oferecido às larvas para as três espécies: T.

angustula (p= 0,9024), F. varia (p= 0,9120) e N. testaceicornis (p= 0,9123).

61 ________________________________________________________________Resultados

Figura 10: Peso médio dos indivíduos naturais e criados in vitro recém-emergidos de

Tetragonisca angustula, Frieseomelitta varia e Nannotrigona testaceicornis.

Operárias in vitro Rainhas in vitro

Rainhas in vitro Operárias in vitro

Rainhas-miniatura Operárias in vitro

Rainhas in vitro

62 ________________________________________________________________Resultados

Realizamos análise dos componentes principais das três medidas morfométricas

realizadas tanto nas fêmeas naturais (Rainhas e operárias naturais) quanto nas fêmeas

criadas in vitro para as três espécies. Verificamos que a largura máxima da cabeça e a

distância entre as tégulas foram as duas variáveis que mais contribuíram para explicar

nossos dados, e por isso, foram utilizadas nas análises dos componentes principais.

Analisando as medidas morfométricas para T. angustula observamos a existência

de dois grupos distintos de fêmeas, o primeiro grupo foi formado pelas rainhas e

compreendeu as rainhas naturais e aquelas criadas in vitro com as quantidades de 35, 40,

45, 50, 55 e 60 µL de alimento larval; o segundo grupo foi formado pelas operárias e

compreendeu as operárias naturais e aquelas criadas in vitro com as quantidades de 15,

20, 25 e 30 µL de alimento larval. Notamos claramente que as rainhas exibiram ambas as

medidas (largura máxima da cabeça e distância entre as tégulas) maiores que as

operárias (figura 11).

Figura 11: Análise dos componentes principais entre a largura máxima da cabeça (mm) e a

distância entre as tégulas (mm) realizadas nas fêmeas de Tetragonisca angustula criadas in

vitro com quantidades variadas de alimento e naquelas coletadas nas colônias (naturais).

Analisando as medidas morfométricas para F. varia observamos a existência de

dois grupos distintos de fêmeas, o primeiro grupo foi formado pelas rainhas e

63 ________________________________________________________________Resultados

compreendeu as rainhas naturais e aquelas criadas in vitro com as quantidades de 30, 35,

40, 45, 50, 55 e 60 µL de alimento larval; o segundo grupo foi formado pelas operárias e


20, 25 e 30 µL de alimento larval. Notamos que houve uma sobreposição de ambos os

grupos devido aos indivíduos produzidos com a quantidade de 30 µL de alimento larval

que originaram tanto rainhas quanto operárias. As rainhas exibiram ambas as medidas

(largura máxima da cabeça e distância entre as tégulas) maiores que as operárias (figura

12).


distância entre as tégulas (mm) realizadas nas fêmeas de Frieseomelitta varia criadas in vitro

com quantidades variadas de alimento e naquelas coletadas nas colônias (naturais).

Analisando as medidas morfométricas para N. testaceicornis observamos a

existência de três grupos distintos de fêmeas, o primeiro grupo foi formado pelas rainhas

e compreendeu as rainhas naturais e aquelas criadas in vitro com as quantidades de 40,

45, 50, 55 e 60 µL de alimento larval; o segundo grupo foi formado pelas operárias e


64 ________________________________________________________________Resultados

20, 25 e 30, 35 e 40 µL de alimento larval; e o terceiro grupo foi formado pelas rainhas-

miniatura naturais e aquelas criadas in vitro com as quantidades de 25 e 30, 35 µL de

alimento larval. Notamos que houve uma sobreposição dos dois primeiros grupos devido

aos indivíduos produzidos com a quantidade de 40 µL de alimento larval que originaram

tanto rainhas quanto operárias, porém o terceiro grupo, das rainhas-miniatura, ficou

claramente segregado dos dois primeiros grupos. As rainhas comuns exibiram ambas as

medidas (largura máxima da cabeça e distância entre as tégulas) maiores que as

operárias, enquanto as rainhas-miniatura possuem a largura máxima da cabeça menor do

que rainhas comuns e operárias, e a distância entre as tégulas intermediária (figura 13).


distância entre as tégulas (mm) realizadas nas fêmeas de Nannotrigona testaceicornis criadas in

vitro com quantidades variadas de alimento e naquelas coletadas nas colônias (naturais).

_______________________________________________________Discussão

Discussão Discussão

66 ______________________________________________________________________________Discussão

5. DISCUSSÃO

5.1 Variação sazonal de pluviosidade, temperatura e da quantidade de alimento

estocado nas colônias (potes de mel e pólen e alimento larval).

As abelhas coletam pólen como fonte de proteína e também coletam néctar

(fonte de carboidrato). O alimento que é trazido para o ninho pode ser usado para a

nutrição das larvas, sustento dos adultos e, indiretamente, na produção de ovos tróficos

pelas operárias e produção de ovos reprodutivos pelas rainhas e operárias. Ainda pode

ser armazenado nos potes de alimentos, dentro da colônia, para uso futuro (Michener,

1974). O pólen não é somente essencial para a produção de alimento da cria, mas

também para o desenvolvimento dos tecidos corporais da abelha nos primeiros dias após

a emergência (Haydak, 1970).

Nossos resultados mostraram que nas três espécies estudadas, a quantidade de

alimento estocada nos potes de mel e pólen no interior das colônias sofreu variação

semelhante ao longo do ano, estando claramente relacionada aos fatores extrínsecos à

colônia, como a temperatura e, principalmente, a precipitação. As colônias das três

espécies responderam de maneira semelhante à variação sazonal de temperatura e

precipitação que exibiram duas estações bem definidas: uma quente e chuvosa de

novembro a março, e outra com temperatura amena e muito seca, de agosto a outubro e

de abril a julho.

Observamos que a precipitação atingiu valores máximos nos meses de janeiro e

fevereiro, enquanto o número de potes de mel e pólen exibiu aumento gradual até

atingir os valores máximos nos meses de março, abril e maio. Estes dados sugerem que a

quantidade de alimento depositado no interior das colônias variou conforme a

disponibilidade de fontes florais que provavelmente foram mais abundantes durante a

estação mais úmida e quente. Frieseomelitta varia foi a espécie que exibiu maior

constância nas quantidades de mel e pólen estocados.

O alimento larval dos meliponíneos é constituído em grande parte de pólen, além

de mel e secreções glandulares de operárias (Roubik, 1989; Engels & Imperatriz-Fonseca,

1990). Em sua maioria, estratifica-se por decantação do pólen, ficando a secreção

glandular nas primeiras camadas, variando gradativamente a sua composição nas

camadas seguintes, com proporções crescentes de pólen (Kerr, 1948). Como o pólen é o

67 ______________________________________________________________________________Discussão

principal componente deste alimento, uma disponibilidade excedente de pólen pode ser

um fator chave no desenvolvimento próspero da população das colônias de abelhas sem

ferrão (van Veen & Sommeijer, 2000).

Nossos resultados mostraram que a variação da temperatura, e mais fortemente

da pluviosidade, influenciou tanto a quantidade de alimento armazenado no interior das

colônias ao longo do ano (potes de pólen e potes de mel) quanto o volume de alimento

larval depositado nas células de cria. Observamos que o volume de alimento depositado

nas células de cria das diferentes espécies exibiu um perfil muito semelhante entre os

meses amostrados, demonstrando que as três espécies responderam de maneira

semelhante às variações ambientais. Nossas análises estatísticas mostraram ainda que a

quantidade de alimento larval depositada nas células de cria está estreitamente

relacionada à quantidade de potes de mel e pólen estocados no interior das colônias das

três espécies.

Segundo Castilho-Hyodo (2001), em Schwarziana quadripunctata, a quantidade de

alimento depositado nas células de cria variou ao longo do ano, sendo maior em estações

do ano com maior disponibilidade de recursos alimentares. Em contraposição, a condição

da colônia, em relação ao tamanho populacional e quantidade de potes de alimento,

pareceu não influenciar na quantidade de alimento larval nas células de cria. Já em

Melipona quadrifasciata e Plebeia remota, as operárias provenientes de colônias fracas

foram menores que operárias de colônia fortes, provavelmente por causa da diminuição

na quantidade de alimento depositado nas células de cria nas colônias fracas (Ramalho et

al., 1998; Ribeiro & Manoel, 2002).

Corroborando nossos dados, Baptistella et al. (2012) observou variação sazonal do

volume de alimento contido nas células de cria de operárias/machos de Frieseomelitta

varia entre duas épocas do ano, que a autora intitulou de estação seca (maio, junho e

agosto), quando a quantidade de alimento depositado nas células foi menor e estação

chuvosa (novembro, fevereiro e abril), quando a quantidade de alimento depositado nas

células foi maior. Menezes (2013) encontrou variação sazonal na quantidade de alimento

depositado nas células de cria de operárias/machos de Scaptotrigona aff. depilis; a

primavera (outubro) foi a estação com maior quantidade de alimento depositado nas

células de cria, enquanto o outono (abril) e inverno (julho) apresentaram menores

68 ______________________________________________________________________________Discussão

quantidades de alimento. Prato e Soares (2013) também encontraram variação sazonal

na quantidade de alimento depositado nas células de cria de T. angustula.

Em consonância com os três trabalhos citados anteriormente, que foram

realizados na mesma região (Ribeirão Preto) que o presente trabalho, verificou-se para as

três espécies aqui estudadas a ocorrência de uma variação do volume de alimento larval

contido nas células de cria de operárias/machos entre os meses de coleta, sendo os

meses de fevereiro, março e abril os meses com maior quantidade, enquanto julho e

agosto foram os meses com menor quantidade de alimento. Os resultados reforçaram a

ideia de que as variações nas condições climáticas influenciaram a quantidade de

alimento depositado nas células de cria de operárias/machos.

A variação na quantidade de alimento aprovisionado nas células de cria esteve

diretamente relacionada à disponibilidade de alimento estocado nos potes de mel e

pólen e à densidade populacional da colônia, e indiretamente à disponibilidade de

recursos florais, que provavelmente dependeu dos fatores ambientais, uma vez que as

abelhas coletam quantidades maiores ou menores de recursos alimentares (néctar e

pólen) de acordo com a sua disponibilidade. A quantidade de alimento e a densidade

populacional da colônia são interdependentes.

A hipótese é que no período mais frio e seco e, portanto, com menor oferta de

recursos alimentares, ocorreu diminuição na quantidade de alimento larval fornecido à

cria, em comparação com período mais quente e com maior disponibilidade de recursos

alimentares. Conforme o alimento foi se tornando escasso, as operárias investiram

menos na alimentação dos imaturos, depositando menores quantidades de alimento por

célula para continuar atendendo as necessidades da colônia e produzindo um mínimo

aceitável de indivíduos. Assim, elas produziram operárias menores com menor gasto de

recursos nos períodos de estresse.

Nossos resultados mostraram que nas células reais de T. angustula e N.

testaceicornis, e nas células acessórias de F. varia a quantidade de alimento larval

depositado não sofreu variação sazonal. Embora a quantidade de alimento das células de

operárias/machos tenha variado sazonalmente, resultando em operárias de tamanhos

diferentes, a quantidade de alimento nas células reais e acessórias não sofreu grande

variação, resultando em rainhas com tamanhos aproximados dentro de cada espécie.

Podemos inferir que apesar da variação sazonal dos recursos alimentares, as operárias

69 ______________________________________________________________________________Discussão

priorizaram o aprovisionamento das células reais, quando são construídas, através de um

mecanismo fino de controle do aprovisionamento que garantiu a produção de rainhas

com o mesmo porte em qualquer época do ano. Embora os testes estatísticos não

tenham demonstrado nenhuma sazonalidade quanto à produção de células reais e

acessórias entre as colônias das três espécies, quando analisamos todas as colônias em

conjunto, nos meses de março abril e maio foram encontradas mais da metade de todas

as células reais e acessórias, demonstrando que provavelmente a maior disponibilidade

de alimentos nesta época permitiu uma maior produção destas células nas colônias.

Para T. angustula encontramos um volume total médio de alimento larval em

células de operárias/machos, igual a 7,6 ± 0,8 μl; e para as células reais igual a 52,5 ± 2,0

μl, ou seja, as larvas que se tornaram rainhas ingeriram cerca de 44,9 μl a mais de

alimento do que as larvas de operárias e machos. Em N. testaceicornis o volume médio

de alimento larval em células de operárias/machos foi igual a 23,2 ± 0,7 μl e nas células

reais igual a 50,0 ± 1,0 μl, portanto as larvas que se tornaram rainhas ingeriram cerca de

26 μl a mais de alimento do que as larvas de operárias e machos. Em F. varia o volume

médio de alimento larval em células de operárias/machos foi igual a 26,7 ± 0,6 μl e nas

células reais + células acessórias igual a 61,0 ± 2,8 μl, portanto as larvas que se tornaram

rainhas ingeriram cerca de 34,3 μl a mais de alimento do que as larvas de operárias e

machos. Notamos que em T. angustula a diferença na quantidade de alimento oferecido

às larvas foi muito grande e se refletiu no peso e tamanho dos indivíduos adultos, por

isso as rainhas de T. angustula apresentaram a maior diferença de peso e tamanho com

relação às operárias, quando comparado às outras duas espécies.

5.2 Produção de sexuados

De acordo com Roubik (1989), para as abelhas altamente sociais, o grau de

independência da disponibilidade de recurso presente no ambiente é subentendido pela

mera existência de alimento estocado no ninho; entretanto, atividades como construção

de potes para estoque alimentar são reguladas pela quantidade de pólen que entra na

colônia. Os ciclos reprodutivos e a criação da prole também são determinados pela

abundância de pólen e disponibilidade geral de flor no ambiente.

Uma colônia com condições para enxamear apresenta mais que o dobro da

quantidade de estoque de pólen, o que mostra que um maior estoque de pólen pode ser

70 ______________________________________________________________________________Discussão

um fator imprescindível para o desenvolvimento de sua população (van Veen &

Sommeijer, 2000). Portanto, a quantidade de pólen coletada pode influenciar

diretamente a criação da prole e a postura de ovos pela rainha, podendo ser um fator

limitante para colônias com pouco estoque polínico. Contudo, a presença de cria, por sua

vez, estimula o forrageamento, especialmente a coleta de pólen (Free, 1987). A produção

de cria e a aquisição de alimento seguem as tendências sazonais na abundância floral

(Roubik, 1983; van Veen et al., 2004).

Uma insuficiência de alimento coletado pode ser devido a influências externas,

tais como condições climáticas desfavoráveis ou forrageamento insuficiente, ou pode

resultar de uma influência das condições da colônia, como um número inadequado de

operárias ou estrutura etária desbalanceada da população de operárias (Michener,

1974). Além disto, o potencial de postura de ovos pela rainha (e operárias) pode não ser

alcançado também por outras razões, como por exemplo, a construção de um número

insuficiente de células de cria pelas operárias (Michener, 1974).

A produção sazonal de sexuados nos insetos sociais é um evento dependente de

interações complexas entre fatores intra e extra coloniais (van Veen et al., 1999). De

acordo com Bego (1977, 1982, 1990) e van Veen e Sommeijer (1990), a produção natural

de machos ocorre em condições específicas relacionadas à fecundidade da rainha, à

densidade populacional e quantidade de pólen armazenado nas colônias de

meliponíneos.

A ocorrência de machos ao longo de todo o ano foi relatada em Scaptotrigona

postica (Kerr et al., 1962; Bego, 1977, 1982, 1990), em Melipona subnitida (Contel & Kerr,

1976), Scaptotrigona depilis (Lacerda, 2000); Plebeia remota (Alves et al., 2009) e Trigona

(Lepidotrigona) ventralis (Chinh & Sommeijer, 2005). Em algumas espécies, entretanto, a

produção de machos se mostrou sazonal como, por exemplo: Melipona favosa

(Sommeijer et al., 1999); Trigona nigra (Sommeijer et al., 1984); Melipona beecheii (van

Veen et al., 1992), Leurotrigona muelleri (Terada, 1974); Melipona quadrifasciata

(Camargo, 1976; Bezerra, 1995), Plebeia (Friesella) schrotkyii (Camillo-Atique, 1977),

Schwarziana quadripunctata (Alves & Imperatriz-Fonseca, 2005) e Tetragonisca angustula

(Prato & Soares, 2013). Velthuis et al. (2005) reviram os padrões de produção de machos

em algumas espécies de abelha sem ferrão e verificaram que os períodos cíclicos de

produção de machos ocorrem em colônias individuais, também observado em Melipona

71 ______________________________________________________________________________Discussão

favosa (Chinh et al., 2003) e Melipona bicolor (Alves, 2004), embora isto não reflita o

contexto populacional, ou seja, geralmente a produção de machos ocorre continuamente

ao longo do ano na população.

Nossos resultados mostraram que a produção de indivíduos, principalmente de

machos, durante os doze meses de estudo variou sazonalmente, tanto nas colônias

(individualmente) quanto na população (colônias agrupadas), apresentando apenas um

período de alta produção durante o ano que abrangeu os meses de março, abril e maio.

Este período foi o de maior abundância de alimento nas colônias, tanto de mel e pólen

armazenados nos potes, quanto de alimento larval depositado nas células de cria.

Portanto, podemos dizer que a maior disponibilidade de alimento influenciou

positivamente no crescimento populacional das colônias.

Em seu estudo com Melipona beecheii, Moo Valle et al. (2001) testou o efeito da

nutrição na produção de sexuados, observaram que as colônias pouco alimentadas

produziram 0,7% de machos na população, enquanto as colônias superalimentadas

produziram 23,4%, concluindo que as reservas de alimento tiveram forte influência na

produção dos machos.

Corroborando os resultados do presente estudo, Grosso e Bego (2000)

observaram que a produção de machos ao longo do ano em T. angustula se

correlacionou positivamente com o número de potes de mel, potes de pólen e o número

de favos de cria encontrados no interior das colônias, reforçando a hipótese de que a

quantidade de alimento disponível dentro das colônias é um fator determinante na

produção de machos.

No presente estudo, a maior produção de machos coincidiu com o período de

maior produção de indivíduos nas colônias, já a produção de rainhas, que foi baixa, não

se correlacionou com nenhuma das outras classes de indivíduos, tendo uma distribuição

homogênea ao longo do ano. Até mesmo em N. testaceicornis, onde houve a produção

de rainhas-miniatura, não encontramos nenhuma tendência sazonal na produção de

rainhas.

Em estudo realizado com Plebeia remota e Schwarziana quadripunctata, Santos-

Filho et al. (2006) encontrou que a produção de rainhas foi extremamente baixa, sendo

que estas perfizeram apenas 0,08% entre os indivíduos e 0,1% entre as fêmeas,

possuindo baixa correlação com as produções de machos e operárias.

72 ______________________________________________________________________________Discussão

Em T. angustula encontramos uma correlação positiva entre a produção de

machos e operárias, porém houve uma correlação negativa entre operárias e número

total de indivíduos, o que também foi encontrado por Santos-Filho et al. (2006) para P.

remota e S. quadripunctata, por Moo-Valle et al. (2001) em Melipona beecheii e por Prato

e Soares (2013). Nossos dados mostraram que nos períodos onde houve menor produção

de indivíduos na colônia, a produção de machos e operárias variou de maneira

semelhante, enquanto nos períodos onde houve maior produção de indivíduos na

colônia, a produção de machos a operárias foi inversamente proporcional. Portanto, nos

meses de maior produção de indivíduos as colônias de T. angustula diminuíram a

produção de operárias e investiram na produção de machos. Em N. testaceicornis encontramos uma correlação fortemente positiva entre a

produção de machos, operárias e o número total de indivíduos. As colônias desta espécie

foram as únicas que apresentaram dois períodos diferentes de alta produção de machos,

pois além do período de março a maio, que coincidiu com o período de alta produção de

machos das outras duas espécies, N. testaceicornis apresentou uma elevação na

produção de machos nos meses de setembro e outubro, embora esta tenha sido menor.

Este segundo período de produção de machos esteve relacionado com um pequeno

aumento na quantidade de potes de pólen e mel armazenados no interior das colônias.

Provavelmente as colônias de N. testaceicornis tiveram acesso a novas fontes de

alimento nos meses de setembro e outubro o que as permitiram coletar e armazenar

mais mel e pólen.

Embora as colônias de F. varia também tenham produzido maior quantidade de

machos nos meses de março, abril e maio, não observamos uma tendência

marcadamente sazonal na produção de machos, pois estes foram produzidos de maneira

constante durante todos os meses de coleta. Diferente das duas outras espécies aqui

abordadas, embora a quantidade de potes de alimento armazenados nas colônias de F.

varia tenham variado sazonalmente, notamos que estas foram capazes de manter um

estoque de mel e pólen mais regular ao longo do ano. Provavelmente a capacidade de

armazenar alimento, principalmente pólen no interior da colônia ao longo de todo o ano,

permitiu com que as colônias de F. varia produzissem machos de maneira constante em

todos os meses amostrados.

73 ______________________________________________________________________________Discussão

Ao observar os resultados para as três espécies, percebemos que nas colônias

analisadas ocorreu uma enorme assimetria no investimento numérico tanto com relação

às castas quanto aos sexos, pois as colônias investiram maciçamente na produção de

operárias em detrimento à produção de rainhas e os machos foram produzidos em

pequena quantidade se comparado com as fêmeas, porém entre os sexuados houve

maior produção de machos em detrimento às rainhas. Segundo Wenseelers et al. (2003),

a presença de células reais ou células acessórias, as quais estão ligadas funcionalmente à

determinação trofogênica de castas, permitem um alto grau de exatidão e precisão

quanto ao número e a época de produção de rainhas, favorecendo uma ocorrência

extremamente baixa destas. Com isso, é esperado que a taxa de produção dos sexuados

apresente tendência à maior produção de machos.

A produção de sexuados nas colônias está diretamente relacionada ao tamanho

da população. Isso sugere que colônias maiores e provavelmente já estabelecidas

poderiam arcar com os custos de uma quantidade maior de machos, sem prejudicar o

desenvolvimento da colônia, como previam Oster & Wilson (1978). Uma maior

quantidade de operárias também resultaria em um maior número de forrageiras, o que

por sua vez, levaria a um aumento na quantidade de recursos alimentares coletados e

trazidos ao ninho. Além disso, a correlação entre tamanho da população da colônia e

número de células reais poderia indicar a possibilidade de enxameagem pela colônia,

processo que requer um grande número de operárias (Michener, 1974).


As abelhas sem ferrão seguem a estratégia de aprovisionamento massal de

alimento em suas células de cria (Kerr, 1948; Michener, 1974; Nogueira-Neto, 1997),

entretanto, o mecanismo de determinação das castas difere entre as abelhas do gênero

Melipona e as abelhas dos demais gêneros. Nos meliponíneos, exceto os do gênero

Melipona e nos casos de ocorrência de rainhas-miniatura, a indução da casta parece ser

determinada apenas pela quantidade de alimento ingerido pela larva durante seu

desenvolvimento (Hartfelder et al, 2006). Camargo (1972a) demonstrou em prática esta

teoria, produzindo rainhas de Scaptotrigona postica a partir de quantidades excessivas de

alimento larval.

74 ______________________________________________________________________________Discussão

Os resultados dos experimentos com variação na quantidade de alimento

oferecido aos imaturos mostraram que todos os parâmetros de morfometria utilizados

para realizar o enquadramento dos indivíduos produzidos in vitro em uma das castas,

utilizando como referências operárias e rainhas recém-emergidas naturalmente nas

colônias, corroboraram a divisão em apenas dois grupos em T. angustula e F. varia

(operárias e rainhas), enquanto em N. testaceicornis obtivemos a formação de três

grupos distintos (operárias, rainhas e rainhas-miniatura). Não houve ocorrência de

indivíduos intermediários (intercastas), ou seja, aqueles que conservam características

tanto de rainhas quanto de operárias. As rainhas típicas apresentaram medidas

morfométricas superiores às operárias, enquanto as rainhas-miniatura apresentaram

cabeça de tamanho reduzido com relação às operárias e rainhas típicas.

Em T. angustula não houve sobreposição dos grupos, pois todas as operárias

foram alimentadas com 30 µL ou menos de alimento larval, enquanto todas as rainhas

receberam 35 µL ou mais de alimento larval. Portanto, deve existir uma quantidade

limite de alimento, que se situa entre 30 µL e 35 µL acima da qual todos os indivíduos se

tornam rainhas e abaixo da qual todos se tornam operárias. Não houve a produção de

rainhas-miniatura.

Em F. varia houve sobreposição dos grupos, pois entre os indivíduos que foram

alimentados com 30 e 35 µL de alimento larval, houve a produção de operárias e rainhas.

Portanto, não foi possível delimitar precisamente uma quantidade limite de alimento que

separa a produção de operárias e rainhas. Não houve a produção de rainhas-miniatura.

Em N. testaceicornis além de haver a produção de três grupos distintos, houve

sobreposição dos grupos, pois entre os indivíduos que foram alimentados com 40 µL de

alimento larval, houve a produção de operárias e rainhas, e nos grupos alimentados com

25, 30 e 35 µL de alimento larval, houve a produção de operárias e rainhas-miniatura.

Não foi possível delimitar precisamente uma quantidade limite de alimento que separou

a produção de operárias e rainhas, mas pudemos estabelecer uma faixa bem delimitada

de produção de rainhas-miniatura que não se sobrepôs à produção de rainhas típicas.

Segundo Cabral (2009) as rainhas-miniatura de Scaptotrigona aff. depilis produzidas em

experimento in vitro possuíram tamanho inferior, porém a proporcionalidade foi mantida

com as rainhas típicas, diferindo das operárias típicas, concordando com os resultados

observados em N. testaceicornis no presente trabalho.

75 ______________________________________________________________________________Discussão

Nas três espécies obtivemos indivíduos produzidos in vitro com tamanho e peso

inferiores aos emergidos naturalmente nas colônias. Um problema da técnica de criação

in vitro comumente relatado nos trabalhos é a dificuldade de se obter rainhas de

tamanho normal. Hartfelder & Engels (1992) produziram um grande número de rainhas

in vitro de Scaptotrigona postica e além das medidas morfométricas das estruturas

corpóreas externas das rainhas, eles avaliaram os ovários e mostraram que também

havia diferenças de tamanho e forma desse órgão, também menores que nas naturais.

Essa dificuldade de produzir rainhas de tamanho próximo ao tamanho de rainhas criadas

em células reais pode estar relacionada a dois fatores. Primeiro, porque na maioria dos

testes realizados foi observado que as larvas sempre deixam um pouco de alimento no

fundo da célula, provavelmente por causa do ressecamento do alimento e dificuldades

de simular o microambiente das células de cria naturais e segundo devido a algum tipo

de estresse causado pelo ambiente artificial, talvez a manipulação excessiva das placas

de criação, variações na luminosidade ou até mesmo a falta do contexto social da

colônia. O contexto social é um importante fator que varia de colônia para colônia e tem

grande influência nas atividades sociais, inclusive na produção de machos, rainhas e

operárias, como já visto por Bego (1982) em Nannotrigona (Scaptotrigona) postica.

Nossos resultados demonstraram que nas três espécies estudadas as operárias

apresentaram maneiras diferentes de oferecer o alimento aos imaturos, controlando

assim a determinação de castas. Entretanto, exceto no caso das rainhas-miniatura, em

que o mecanismo de determinação de castas não está bem elucidado, o principal fator

na diferenciação das castas foi a quantidade de alimento ingerida pelos imaturos.

Estes dados demostraram que T. angustula exibiu um mecanismo muito preciso e

refinado de produção de rainhas, uma vez que produziu rainhas exclusivamente em

células reais com uma divisão muito precisa e clara na quantidade de alimento capaz de

produzir rainhas. Além disso, segundo Koedam et. al (2005) as operárias de T. angustula

são completamente estéreis, portanto, todos os machos desta espécie são produzidos

pelas rainhas. F. varia exibiu um mecanismo menos preciso quanto à quantidade de

alimento necessária para a produção de rainhas, porém de grande eficiência quanto à

época de produção destas, uma vez que a adição de células acessórias basta para a

produção de uma nova rainha. N. testaceicornis apresentou mecanismos mais

abrangentes de produção de rainhas, pois além de produzir rainhas e operárias com a

76 ______________________________________________________________________________Discussão

mesma quantidade de alimento, ainda produziu rainhas-miniatura. Estes mecanismos se

demonstraram menos precisos, porém de grande valia em casos emergenciais de

substituição de rainhas, já que nesta espécie as rainhas são produzidas em maior

quantidade e de maneira homogênea ao longo do ano.

A hipótese de que rainhas-miniatura seriam originadas de ovos destinados à

produção de operárias que conseguem escapar desse destino, explicaria a produção

dessas rainhas (para revisão, ver Ribeiro et al., 2006). Com isso, a produção de rainhas

miniaturas pode ser interpretada como um investimento em reprodução em abelhas sem

ferrão. Como a presença de uma rainha é essencial à sobrevivência da colônia, o

investimento constante e independente da presença de recursos, ou da época do ano, na

produção de rainhas-miniatura pode ser justificado, significando uma garantia que a

rainha atual possa ser substituída, caso haja necessidade (morte ou diminuição da

qualidade da rainha).

Assim, podemos concluir que T. angustula apresenta um mecanismo bem definido

e rigoroso de produção de rainhas, não possuindo muitas variações. Este mecanismo

oferece muita precisão e economia com relação à produção das rainhas nas colônias,

porém pode ser um fator limitante para a sobrevivência da colônia em situações de risco,

quando se faz necessária uma substituição emergencial da rainha. As operárias de T.

angustula parecem não produzir novas células de cria em situação de orfandade, o que

pode levar à morte da colônia caso a rainha desapareça repentinamente (Prato, inf.

pessoal). Em F. varia o mecanismo de produção de células acessórias não se demonstrou

muito preciso, porém em colônias órfãs as operárias são capazes de produzir células

acessórias induzindo assim a produção de novas rainhas (Terada, 1974; Faustino, 2002), o

que torna este mecanismo muito prático, econômico e mais rápido em situações

emergenciais de produção de rainhas. N. testaceicornis teve um investimento maior em

rainhas do que as outras duas espécies, pois exibiu o mecanismo preciso de produção de

rainhas em células reais, mas também produziu rainhas-miniatura. A mistura destes

mecanismos, embora pouco preciso, permite a esta abelha produzir rainhas em todas as

épocas do ano, inclusive em situações adversas, sendo portanto, importante na garantia

da sobrevivência das colônias.

________________________________________________Considerações finais

Considerações finais Considerações finais

_____________________________________________________________________Considerações finais 78

6. CONSIDERAÇÕES FINAIS

Os fatores ambientais de temperatura e, principalmente pluviosidade,

influenciaram diretamente na quantidade dos recursos alimentares estocados no interior

das colônias das abelhas sem ferrão aqui estudadas, seja nos potes de mel e pólen, seja

depositado no interior das células de cria. A quantidade de alimento foi fundamental

para a manutenção das populações coloniais, na produção de sexuados e na

determinação de castas. A quantidade e a capacidade das colônias de armazenarem

pólen foi o fator determinante na produção dos machos ao longo do ano, assim podemos

dizer que a variação na produção de machos foi um reflexo da variação na quantidade de

pólen armazenado nas colônias.

A produção de rainhas nas colônias pareceu não ter sido influenciada pela

variação sazonal da disponibilidade de alimento, provavelmente devido aos mecanismos

precisos e econômicos que as operárias utilizaram para induzir a produção de novas

rainhas, através da construção de células reais em T. angustula e N. testaceicornis ou de

células acessórias em F. varia. De qualquer maneira, a quantidade de alimento foi o fator

determinante na diferenciação das castas nestas espécies. A exceção se fez com a

produção de rainhas-miniatura em N. testaceicornis que aparentemente não dependeu

da quantidade de alimento, mas sim de outros fatores que ainda não foram elucidados

completamente.

Das três espécies, T. angustula foi a que apresentou produção de sexuados e

determinação de castas mais precisa, pois produziu machos em apenas um período bem

definido com sincronia entre as colônias, e produziu rainhas apenas em células reais

utilizando quantidades bem delimitadas de alimento. Em F. varia o mecanismo de

produção de células acessórias não se demonstrou muito preciso quanto à quantidade de

alimento necessária para induzir a formação de rainhas, porém pode ser muito prático,

econômico e mais rápido em situações emergenciais de produção de rainhas. N.

testaceicornis teve um investimento maior em rainhas do que as outras duas espécies,

pois exibiu o mecanismo preciso de produção de rainhas em células reais, mas também

produziu rainhas-miniatura. Este último mecanismo, embora pouco preciso, permite a

produção de rainhas em todas as épocas do ano, inclusive em situações adversas, sendo

importante na garantia da sobrevivência das colônias.

79 _____________________________________________________________________Considerações finais

Ainda existem muitas questões para serem estudadas sobre a determinação de

castas nas abelhas sem ferrão, porém, de acordo com os conhecimentos atuais, todos os

sistemas de determinação de castas das abelhas sem ferrão estão de uma forma ou de

outra, relacionados à alimentação larval. O próximo passo para esta linha de estudo seria

realizar análises precisas da composição química do alimento larval contido nas células

de cria de operárias/machos, células reais e células acessórias na busca de diferenças

significativas. Outro viés que poderá contribuir muito na elucidação dos mecanismos de

determinação de castas nas abelhas sem ferrão, especialmente na produção de rainhas-

miniatura, é a analise de expressão gênica na busca de novos genes que se expressam

diferentemente em rainhas e operárias, além da melhor investigação das vias

bioquímicas de sinalização que levam uma larva fêmea a se tornar rainha ou operária, a

partir da alimentação diferencial.

____________________________________________Referências bibliográficas

Referências bibliográficas Referências bibliográficas

81 ________________________________________________________Referências bibliográficas

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

ALEXANDER, B. A.; C. D. MICHENER. 1995. Phylogenetic studies of the families of short-tongued bees

(Hymenoptera: Apoidea). The University of Kansas Sci. Bull., 55: 377-424.

ALMEIDA, M. G. 1974. Aspectos bionômicos, ecológicos e genéticos da abelha Melipona scutellaris, Latreille

(1811). Tese de Doutorado, USP, Ribeirão Preto, 128pp.

ALVES, D. A. 2004. Produção de operárias, rainhas e machos em Melipona bicolor Lepeletier, 1836 (Apidae,

Meliponini). Trabalho de conclusão de curso, Universidade Presbiteriana Mackenzie, São Paulo.

ALVES, D. A.; IMPERATRIZ-FONSECA, V. L.; SANTOS-FILHO, P. S. 2009. Production of workers, queens and

males in Plebeia remota colonies (Hymenoptera, Apidae, Meliponini), a stingless bee with

reproductive diapause. Genet. Mol. Res., 8 (2): 672-683.

ALVES, D. A.; IMPERATRIZ-FONSECA, V. L. 2005. One year-study on the production of sexuals in a stingless

bee species, Schwarziana quadripunctata (Lepeletier, 1836) (Hymenoptera: Apidae: Meliponini). In:

Abstracts handbook of association for tropical biology and conservation, p. 103.

BAPTISTELLA, A. R. T. O.; et al. 2012. Techniques for the in vitro production of queens in stingless bees

(Apidae, Meliponini). Sociobiology. 59 (1): 297-310.

BEGO, L. R. 1977. Aspectos da regulação social em Nannotrigona (Scaptotrigona) postica Latreille

(Hymenoptera, Apidae, Meliponinae). Tese de Doutorado, Universidade de São Paulo, Ribeirão

Preto, 180pp.

BEGO, L. R. 1982. On social regulation in Nannotrigona (Scaptotrigona) postica Latreille, with special

reference to male production cycles (Hym., Apidae, Meliponinae). Bol. Zool., São Paulo 7: 181–196.

BEGO, L. R. 1990. On social regulation in Nannotrigona (Scaptotrigona) postica Latreille, with special

reference to productivity of colonies (Hymenoptera, Apidae, Meliponinae). Rev. Bras. Entomol. 34:

721-738.

BEIG, D. 1972. The production of male in queenright colonies of Trigona (Scaptotrigona) postica. Jour. Apic.

Res., 11 (1): 33-39.

BEZERRA, J. M. D. 1995. Aspectos da reprodução de Melipona quadrifasciata (Hymenoptera, Apidae).

Dissertação de Mestrado, UFV, Viçosa, 65pp.

BOLELI, I. C.; PAULINO-SIMÕES, Z. L; BITONDI, M. M. G. 1999. Cell death in ovarioles causes permanent

sterility in Frieseomelitta varia worker bees. J. Morphol., 242 (3): 271-82.

BOLELI, I. C.; PAULINO-SIMÕES, Z. L; BITONDI, M. M. G. 2000. Regression of the lateral oviducts during the

larval adult transformation of the reproductive system on Melipona quadrifasciata and

Frieseomelitta varia. J. Morphol., 243: 141 – 151.


BOURKE, A. F. G. 1988. Worker reproduction in the highly eusocial Hymenoptera. Quart. Rev. Biol., 63: 291-

311.

BOURKE, A. F. G.; RATNIEKS, F. L. W. 1999. Kin conflict over caste determination in social Hymenoptera,

Behav. Ecol. Sociobiol., 46: 287–297.

BROTHERS, D. J. 1975. Phylogeny and classification of the aculeate Hymenoptera, with special reference to

Mutillidae. University of Kansas Sci. Bull., 50: 483-648.

BUSCHINI, M. L. T.; CAMPOS, L. A. O. 1995. Caste determination in Trigona spinipes (Hymenoptera, Apidae):

influence of the available food and the juvenile hormone. Rev. Brasil. Biol., 55: 121 -129.

CABRAL, G. C. P. 2009. Efeitos da quantidade de alimento larval sobre a determinação de castas da abelha

sem ferrão Scaptotrigona aff. depilis (Moure, 1942) (Hymenoptera, Apidae, Meliponini) – uma

análise morfométrica, de expressão gênica e de títulos de hormônio juvenil. Dissertação de

Mestrado, USP, Ribeirão Preto, 84pp.

CAMARGO, C. A. 1972a. Determinação de castas em Scaptotrigona postica Latr. (Hymenoptera, Apidae).

Rev. Brasil. Biol., 32 (1): 133-141.

CAMARGO, C. A. 1972b. Produção “in vitro” de intercastas em Scaptotrigona postica Latreille

(Hymenoptera, Apidae). In: Homenagem a W. E. Kerr, Rio Claro-SP, Brasil, p. 37-45.

CAMARGO, C. A. 1976. Determinação de sexo e controle de reprodução em Melipona quadrifasciata Lep.

(Hymenoptera, Apidae). Tese Doutorado, USP, Ribeirão Preto, SP, 76p.

CAMARGO, J. M. F. 1974. Notas sobre a morfologia e biologia de Plebeia (Schwarziana) quadripunctata

(Hymenoptera, Apidae: Meliponinae). Studia Ent., 17 (1): 433-470.

CAMARGO, J. M. F.; PEDRO, S. R. M. 2013. Meliponini Lepeletier, 1836. In Moure, J. S., Urban, D. & Melo, G.

A. R. (Orgs). Catalogue of Bees (Hymenoptera, Apoidea) in the Neotropical Region - online

version. Available at http://www.moure.cria.org.br/catalogue. Accessed Jan/19/2015.

CAMILLO-ATIQUE, C. 1977. Estudo da variabilidade etológica de Friesella incluindo a caracterização de

espécies crípticas (Hymenoptera, Meliponinae). Tese de Doutorado, Universidade de São Paulo,

Ribeirão Preto. 203 pp.

CAMPOS, L. A. O.; COSTA, M. A. 1989. Determinação do sexo em abelhas XXVIII. Determinação das castas

em Schwarziana quadripunctata (Hymenoptera, Apidae). Ver. Bras. Biol., 49 (4): 999-1001.

CAMPOS, L. A. O.; COELHO, C. D. P. 1993. Determinação de sexo em abelhas. XXX. Influência da quantidade

de alimento e do hormônio juvenil na determinação das castas em Partamona cupira helleri

(Hymenoptera, Apidae, Meliponinae). Rev. Bras. Zool., 10 (3): 449-452.

CASTILHO-HYODO, V. C. C. 2001. Rainha ou operária? Um ensaio sobre a determinação de castas em

Schwarziana quadripunctata (Lepeletier, 1836) (Hymenoptera, Apidae, Meliponini). Tese de

Doutorado, USP, São Paulo, 133pp.


CHINH, T. X.; et al. 2003. Patterns of male production in the stingless bee Melipona favosa (Apidae,

Meliponini). Apidol., 34: 161–170.

CHINH, T. X.; SOMMEIJER, M. J. 2005. Production of sexuals in the stingless bee Trigona (Lepidotrigona)

ventralis flavibasis Cockerell (Apidae, Meliponini) in northern Vietnam. Apidol., 36: 493-503.

CONTEL, E. P. B.; KERR, W. E. 1976. Origin of males in Melipona subnitida estimated from data of an

isozymic polymorphic system. Genetics, 46: 271-277.

CORTOPASSI-LAURINO, M. 1979. Observações sobre atividades de machos de Plebeia droryana Friese

(Apidae, Meliponinae). Rev. Bras. Entomol., 24: 177-191.

CORTOPASSI-LAURINO, M. 2007. Drone congregations in Meliponini: what do they tell us. Biosci. Jour.,

Uberlândia, 23 (Supplement 1): 153-160.

CRAIG, R., 1980. Sex investment ratios in social Hymenoptera. Am. Nat., 116: 311–323.

CRUZ-LANDIM, C.; REGINATO, R. D.; IMPERATRIZ-FONSECA, V. L. 1998. Variation on ovariole number in

Meliponinae (Hymenoptera, Apidae) queen’s ovaries, with comments on ovary development and

caste differentiation. Pap. Avul. Zool. (S. Paulo), 40: 289-296.

CRUZ–LANDIM, C. 2000. Ovarian development in Meliponinae bees (Hymenoptera: Apidae) the effect of

queen presence and food on worker ovary development and egg production. Genet. and Mol.

Biol., 23 (1): 83-88.

DARCHEN, R.; DELAGE-DARCHEN, B. 1971. Le déterminisme des castes chez les Trigones (Hyménoptères,

Apidés). Insect. Soc., 18: 121-134.

DE GROOT, A. P.; VOOGD, S. 1954. On the ovary development in queenless worker bees (Apis mellificae L.).

Exper., 10: 384–385.

ENGELS, E.; ENGELS, W. 1984. Drohnen-ansammungen bei nestern der stachellosen biene Scaptotrigona

postica. Apidol., 15(3):315-328.

ENGELS, W.; IMPERATRIZ-FONSECA, V. L. 1990. Caste development, reproductive strategies, and control of

fertility in honey bees and stingless bees. In: ENGELS, W. (ed.), Social insects, Springer-Verlag,

Berlin. p. 167-230.

FAUSTINO, C. D.; et al. 2002. First record of emergency queen rearing in stingless bees. Insect. Soc., 49:

111-113.

FAUSTINO, C. F. 2002. Mini-colônias de Frieseomelitta varia (Hymenoptera, Apinae, Meliponini) e sua

utilização na solução de problemas bionômicos. Dissertação de Mestrado, Universidade de São

Paulo, Ribeirão Preto. 67 p.

FREE, J. B. 1987. Pheromones of Social Bees. London: Chapman & Hall


GROSSO, A. F.; BEGO, L. R. 2000. The production of males in queenright colonies of Tetragonisca angustula

angustula (Hymenoptera, Meliponinae). Sociobiol., 35: 475-485.

HARTFELDER, K.; ENGELS, W. 1989. The composition of larval food in stingless bees: evaluating nutritional

balance by chemosystematic methods. Insect. Soc., 36 (1): 1-14.

HARTFELDER, K.; ENGELS, W. 1992. Allometric and multivariate analysis of sex and caste polymorphism in

the neotropical stingless bee, Scaptotrigona postica. Insect. Soc., 39: 251-266.

HARTFELDER, K. et al. 2006. Physiological and genetic mechanisms underlying caste development,

reproduction and division of labor in stingless bees. Apidol., 37 (2): 144-163.

HAYDAK M. H. 1970. Honeybee nutrition. Ann. Rev. Ent., 15: 143-156.

IMPERATRIZ-FONSECA, V. L. 1973. Miscellaneous observations on the behaviour of Schwarziana

quadripunctata (Hym. Apidae, Meliponinae). Bol. Zool. Biol. Mar., 30: 633-640.

IMPERATRIZ-FONSECA, V. L.; DARAKJIAN, P. 1993. Notas sobre o comportamento das rainhas virgens de

Schwarziana quadripunctata (Apidae, Meliponinae). Cienc. Cult., 45: 912.

IMPERATRIZ-FONSECA, V. L.; CRUZ-LANDIM, C.; MORAES, R. L. M. S. 1997. Dwarf gynes in Nannotrigona

testaceicornis (Apidae, Meliponinae, Trigonini), behaviour, exocrine gland morphology and

reproductive status. Apidol., 28: 113-122.

IMPERATRIZ-FONSECA, V. L.; KLEINERT, A. M. P. 1998. Worker reproduction in the stingless bee Friesella

schrottkyi (Apidae, Meliponinae). Entomol. General., 23 (3): 169-175.

JULIANI, L. O. 1962. Aprisionamento de rainhas virgens em colônias de Trigonini (Hymenoptera, Apoidea).

Bolm. Univ. Paraná, 20 (6): 1-11.

KERR, W. E. 1946. Formação de castas no gênero Melipona (Illiger 1806). An. Esc. Sup. Agr. “Luiz de

Queiroz”, 3: 299-312.

KERR, W. E. 1948. Estudos sobre o gênero Melipona. An. Esc. Sup. Agr. “Luiz de Queiroz”, 5 (2): 181-276.

KERR, W. E. 1950. Genetic determination of castes in the genus Melipona. Genetics, 35: 143-152.

KERR, W. E.; et al. 1962. Reproduction in the social bees. J. N. Y. Entomol. Soc., 70: 265-276.

KERR, W. E.; NIELSEN, R. A. 1966. Evidence that genetically determined Melipona queens can become

workers. Genetics, 54: 859-865.

KERR, W. E.; STORT, A. C.; MONTENEGRO, M. J. 1966. Importância de alguns fatores ambientais na

determinação das castas do gênero Melipona. An. Acad. Bras. Ciênc., 38: 149-168.

KERR, W. E. 1969. Genética e melhoramento de abelhas. In: KERR, W. E. (org.) Melhoramento e genética.

São Paulo: Edusp. p. 263-297.

KERR, W. E. 1996. Biologia e manejo da tiúba: a abelha do Maranhão. EDUFMA. São Luis, MA. 156pp.


KERR, W. E.; CARVALHO, G. A.; NASCIMENTO, V. A. 1996. Abelha uruçu: biologia, manejo e conservação. Ed.

Fundação Acangau, Paracatu – MG. 144 p.

KEVAN, P. G.; BAKER, H. G. 1983. Insects as flower visitors and pollinators. Ann. Rev. Ent., 28: 407-53.

KOEDAM, D. 1995. Behavioural and physiological implications of queen dominance in stingless bees.

Utrecht: Universiteit Utrecht. 109 p.

KOEDAM, D. 1999. Production of queens, workers and males in the stingless bee Melipona favosa (Apidae:

Meliponinae): patterns in time and space. Netherlands Journal of Zoology, 49(4):289-302.

KOEDAM, D. et al. 2001. The behaviour of laying workers and the morphology and viability of their eggs in

Melipona bicolor bicolor. Physiol. Entomol., 26 (3): 254-259.

KOEDAM, D. 2003. A non-invasive method for sampling Melipona brood combs and determining caste and

sex ratios. In: Melo, G.A.R. & Alves-dos-Santos, I. (eds.), Apoidea Neotropica: Homenagem aos 90

Anos de Jesus Santiago Moure, UNESC, Criciúma, p.153-156.

KOEDAM, D.; et al. 2005. How queens and workers share in male production in the stingless bee Melipona

subnitida Ducke (Apidae, Meliponini). Insect. Soc., 52: 114-121.

LACERDA, L. M. 2000. Morfometria e morfologia de ovos e aspectos relacionados à reprodução de

Scaptotrigona aff. depilis (Moure, 1942) (Hymenoptera, Apidae, Meliponinae). Tese de Doutorado,

Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. 73 p.

LAIDLAW H. H. 1992. Production of queen and package bees, In: The hive and the honey bee (GRAHAM J.,

Ed.), Dadant & Sons, Hamilton, IL, USA. pp. 989-1041.

MACIEL-SILVA, V. L.; KERR, W. E. 1991. Sex determination in bees. XXVII. Castes obtained from larvae fed

homogenized food in Melipona compressipes (Hymenoptera, Apidae). Apidol., 22 (1): 15-19.

MELO, G. A. R. 1999. Philogenetic relationships and classification of the major lineages of Apoidea

(Hymenoptera), with emphasis on the crabronid wasps. Sci. Pap. Nat. Hist. Mus. University of

Kansas, 14: 1-55.

MELO, G. A. R.; GOLÇALVES, R. B. 2005. Higher-level bee classifications (Hymenoptera, Apoidea, Apidae

sensu lato). Rev. Bras. Zool., 22 (1): 153-159.

MENEZES, C. 2006. Determinação de castas no gênero Melipona (Hymenoptera, Apidae): Influência do

alimento larval. Monografia. UFU, Uberlândia-MG, 36p.

MENEZES, C.; VOLLET-NETO, A.; IMPERATRIZ-FONSECA, V. L. 2013. An advance in the in vitro rearing of

stingless bee queens. Apidol., 44 (5): 491-500.

MICHENER, C. D. 1948. The generic classification of the Anthidiine bees (Hymenoptera, Megachilidae).

Amer. Mus. Novitates, 1381: 1-29.

MICHENER, C. D. 1974. The social behavior of the bees. Cambridge, Mass., Harvard Univ. Press. 404 p.


MICHENER, C. D. 1990. Classification of the Apidae (Hymenoptera). The University of Kansas Sci. Bull., 54

(4): 75-164.

MICHENER, C. D. 2000. The bees of the world. Baltimore: The Johns Hopkins University Press, 913 p.

MOO-VALLE, H.; QUEZADA-EUÁN, J. J. G.; WENSELEERS, T. 2001. The effect of food reserves on the

production of sexual offspring in the stingless bee Melipona beecheii (Apidae, Meliponini). Insect.

Soc., 48: 398-403.

MORAIS, M.M.; et al. 2006. Colony internal conditions related to caste production in Melípona

compressipes fasciculata (Apidae, Meliponini). Insect. Soc., 53: 65-268.

NIJHOUT, H. F.; WHEELER, D. E. 1982. Juvenile Hormone and the Physiological Basis of Insect

Polymorphisms. The Quart. Rev. Biol., 57 (2): 109-133.

NOGUEIRA-FERREIRA, et al. 2000. Morphometric study in Schwarziana quadripunctata with emphasis on

virgin queens (Hymenoptera, Apidae, Meliponinae). Sociobiol., 35: 99-108.

NOGUEIRA-NETO, P. 1953. A criação de abelhas indígenas sem ferrão. Editora Tecnapis, São Paulo.

NOGUEIRA-NETO, P. 1997. Vida e criação de abelhas indígenas sem ferrão. São Paulo: Nogueirapis. 446 p.

OLIVEIRA, R. C. et al. 2004. Genetic divergence in Tetragonisca angustula Latreille, 1811 (Hymenoptera,

Meliponinae, Trigonini) based on RAPD markers. Genet. Mol. Biol., 27 (2): 181-186.

OSTER, G. F.; WILSON, E. O. 1978. Caste and Ecology in the Social Insects. Princeton, Princeton University

Press, 352 p.

PAGE, R. E.; PENG, C. Y. S. 2001. Aging and development in social insects with emphasis on the honey bee,

Apis mellifera L. Exp. Gerontol., 36: 695–711.

PAMILO, P. 1991. Evolution of colony characteristics in social insects. II. Number of reproductive individuals,

Am. Nat., 138 – 412p.

PAXTON, R. J.; et al. 2003. Low mating frequency of queens in the stingless bee Scaptotrigona postica and

worker maternity of males. Behav. Ecol. Sociobiol., 53: 174-181.

PETERS, J.M.; et al. 1999. Mate number, kin selection and social conflicts in the stingless bees and

honeybees. Proceedings of the Royal Society of London - B (Biological Sciences), 266:379-384.

PRATO, M. 2007. Produção artificial de rainhas em Tetragonisca angustula Latreille 1811 (Hymenoptera,

Apidae). Monografia, USP, Ribeirão Preto, 57pp.

PRATO, M. 2011. Ocorrência natural de sexuados, produção in vitro de rainhas e multiplicação de colônias

em Tetragonisca angustula (Hymenoptera, Apidae, Meliponini). Dissertação de mestrado, USP,

Ribeirão Preto, 114pp.

PRATO, M.; SOARES, A. E. E. 2013. Production of sexuals and mating frequency in the stingless bee

Tetragonisca angustula (Latreille) (Hymenoptera, Apidae). Neotrop. Entomol., 42(4): 474-482.


PROCTOR, M.; YEAO, P.; LACK, A. 1996. The natural history of pollination. London, Harper Collins

Publishers, 479p.

RAMALHO, M.; IMPERATRIZ- FONSECA, V. L.; GIANNINI, T. C. 1998. Within-colony size variation of foragers

and pollen load capacity in the stingless bee Melipona quadrifasciata anthidioides Lepeletier

(Apidae, Hymenoptera). Apidol., 29: 221-228.

RATNIEKS, F. L. W. 2001. Heirs and spares: caste conflict and excess queen production in Melipona bees.

Behav. Ecol. Sociobiol., 50: 467-473.

RIBEIRO, M. F.; ALVES, D. A. 2001. Size variation in Schwarziana quadripunctata queens (Hymenoptera,

Apidae, Meliponinae). Rev. Etol., 3 (1): 59-65.

RIBEIRO, M. F.; MANOEL, D. J. A. 2002. Workers' body mass and colony condition in Plebeia remota

(Hymenoptera, Apidae, Meliponini). In: Anais do V Encontro sobre Abelhas. Ribeirão Preto, 327p.

RIBEIRO, M. F.; SANTOS-FILHO, P. S.; IMPERATRIZ-FONSECA, V. L. 2003. Exceptional high queen production

in the Brazilian stingless bee Plebeia remota. Stud. Neotrop. Fauna & Environment, 38 (2): 111-

114.

RIBEIRO, M. F.; et al. 2006. Miniature queens in stingless bees: basic facts and evolutionary hypotheses.

Apidol., 37: 191-206.

ROUBIK, D. W. 1989. Ecology and natural history of tropical bees. Cambridge Univ. Press, Cambridge,

Massachusetts. 248 p.

SAKAGAMI, S. F.; et al. 1963. Occurrence of ovary-developed workers in queenright colonies of stingless

bees. Rev. Bras. Biol., 23 (2): 115-129.

SAKAGAMI, S. F.; ZUCCHI, R. 1966. Estudo comparativo do comportamento de várias espécies de abelhas

sem ferrão, com especial referência ao processo de aprovisionamento e postura das células. Ciênc.

e Cult., 18: 283-296.

SAKAGAMI S. F.; ZUCCHI, R. 1968. Oviposition behavior of an Amazonic stingless bee Trigona (Duckeola)

ghilianii. Jour. Fac. Scienc. Hokkaido University Series VI, Zool., 16: 564-581.

SAKAGAMI, S. F. 1982. Stingless bees. In: Social Insects (Hermann H.R., ed.). Academic Press, New York,

361-423.

SAKAGAMI, S. F.; et al. 1983. Nest architecture and colony compositon of the Sumatran singles bee Trigona

(Tetragonula) laeviceps. Kont., 51 (1): 100-111.

SANTOS-FILHO, P. S.; et al. 2006. Numerical investment in sex and caste by stingless bees (Apidae:

Meliponini): a comparative analysis. Apidol., 37: 1-15.

SCHWARZ, H. F. 1948. Stingless bees of the western Hemisphere. Bull. Amer. Mus. Natur. Hist., 90: 1-18.


SILVA, D. L. N.; ZUCCHI, R.; KERR, W. E. 1972. Biological and behavioral aspects of the reproduction in some

species of Melipona (Hymenoptera, Apidae, Meliponinae). Anim. Behav., 20: 123-132.

SILVEIRA, F. A.; MELO, G. A. R.; ALMEIDA, E. A. B. 2002. Abelhas brasileiras: Sistemática e Identificação.

Fundação Araucária, Belo Horizonte. 253pp.

SNODGRASS, R. E. 1956. Anatomy of the honey bee. Comstock publishing associates, New York, 334 p.

SOMMEIJER, M. J.; VAN ZEIL, M.; DOHMEN, M. R. 1984. Morphological differences between worker – laid

eggs from a queenright colony and queenless colony of Melipona rufiventris paraensis

(Hymenoptera: Apidae). Entomol. Berich., 44 (1): 91-95.

SOMMEIJER, M. J.; BUREN, N. J. M. VAN. 1992. Male production by laying workers in queenright colonies of

Melipona favosa (Apidae, Meliponinae), In: Billen J. (Ed.), Biology and Evolution of Social Insects,

Leuven Univ. Press, p. 89-97.

SOMMEIJER, M. J. 1994. Reproduction strategies and feeding ecology of stingless bees in relation to

environmental problems. In: Lenoir, A.; G. Arnold & M. Lepage, Eds., Les Insectes Sociaux, Publ.

Univ. Paris: 19.

SOMMEIJER, M. J.; CHINH, T. X.; MEEUWSEN, F. J. A. J. 1999. Behavioural data on the production of males

by workers in the stingless bee Melipona favosa (Apidae, Meliponinae). Insect. Soc., 46: 92-93.

SUKA, T.; INOUE, T. 1993. Nestmates recognition of the stingless bee Trigona (Tetragonula) minangkabau

(Apidae: Meliponinae). Jour. Ethol., 11: 141-147.

TEIXEIRA, L. V.; CAMPOS, L. A. O. 2005. Produção de rainha de emergência em Plebeia lucii (Hymenoptera,

Apidae, Meliponina). Simpósio Brasileiro de Insetos Sociais, CD-ROM.

TERADA, Y. 1974. Contribuição ao estudo da regulação social em Leurotrigona mulleri e Frieseomelitta varia

(Hymenoptera, Apidae). Dissertação de Mestrado, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. 96

pp.

TERADA, Y. 1980. Estudos bionômicos em colônias de Plebeia (Plebeia) droryana Friese 1900 (Hymenoptera,

Meliponinae) na região de Ribeirão Preto, Estado de São Paulo. Tese de Doutorado. Universidade

de São Paulo, Ribeirão Preto, 185pp.

THORP, R. W. 1979. Structural, behavioral, and physiological adaptations of bees (Apoidea) for collecting

pollen. Ann. Missouri Bot. Gard., 66: 788-812.

TÓTH, E.; et al. 2002. Genetic and behavioral conflict over male production between workers and queens in

the stingless bee Paratrigona subnuda. Behav. Ecol. Sociobiol., 53: 1-8.

TÓTH, E.; et al. 2004. Conflict over male parentage in stingless bees. Insect. Soc., 51: 1-11.

van VEEN, J. W.; SOMMEIJER, M. J. 1990. Tropical beekeeping: the production of males in stingless bees

(Melipona). Amsterdam: NEV, Proc. Exper. & Appl. Entomol., 1: 171-176.


VAN VEEN, J. W.; ARCE, H. G.; SOMMEIJER, M. J. 1992. Brood production in Melipona beecheii in relation to

dry season foraging. In: Biology and Evolution of Social Insects, J. Billen Editor, Leuven University

Press, p. 81-88.

VAN VEEN, J. W.; SOMMEIJER, M. J.; MONGE, L. A. 1999. Behavioural development and abdomen inflation

of gynes and newly mated queens of Melipona beecheii (Apidae, Meliponinae). Insect. Soc.,

46:361-365.

VAN VEEN, J. W.; SOMMEIJER, M. J. 2000. Observations on gynes and drones around nuptial flights in the

stingless bees Tetragonisca angustula and Melipona beecheeii (Hymenoptera, Apidae,

Meliponinae). Apidol., 31: 47 - 54.

VAN VEEN, J.W.; ARCE ARCE, H.G.; SOMMEIJER, M.J. 2004. Production of queens and drones in Melipona

beecheii (Meliponini) in relation to colony development and resource availability. Proceedings of

the Netherlands Entomological Society, 15: 35-39.

VELTHUIS, H. H. W. 1997. Biologia das abelhas sem ferrão. São Paulo: Edusp. 33 p.

VELTHUIS, B. J.; VELTHUIS, H. H. W. 1998. Columbus surpassed. Biophysical aspects of how stingless bees

place an egg upright on their liquid food. Naturwiss., 85: 330-333.

VELTHUIS, H. H. W.; KOEDAM, D.; IMPERATRIZ-FONSECA, V. L. 2005. Males of Melipona and other stingless

bees, and their mothers. Apidol., 36: 169-185.

WEAVER, N. 1966. Physiology of caste determination. Ann. Rec. Entomol., 11: 79-102.

WEAVER, N. 1974. Control of dimorphism in the female honeybee: The balance of nutrients. Jour. Apicult.

Research, 13: 93-101.

WENSELEERS, T.; RATNIEKS, F. L.; BILLEN, J. 2003. Caste fate conflict in swarm-founding social hymenoptera:

an inclusive fitness analysis. Jour. Evolution. Biol., 16 (4): 647-658.

WENSELEERS, T.; et al. 2004. Queen execution and caste conflict in the stingless bee Melipona beecheii.

Ethol., 110 (9): 725-736.

WENSELEERS, T.; et al. 2005. Working-class royalty: bees beat the caste system. Biol. Letters 1: 125-128.

WHEELER, D. E. 1986. Developmental and physiological determinants of caste in social Hymenoptera:

evolutionary implications. The Am. Nat., 128 (1):13-34.

WILDE, J.; BEETSMA, J. 1982. The physiology of caste development in social insects. Advanc. Insect Physiol.,

16: 167-246.

WILLE, A. 1983. Biology of stingless bees. Ann. Rev. Entomol., 28: 41-64.

WILSON, E. O. 1971. The insect societies. Cambridge: Belknap Press Harvard University. 548 p.

WINSTON, M. L. 1991. The Biology of the Honey Bee. Harvard: Harvard University Press, 281p.


WIRTZ, P.; BEETSMA, J. 1972. Introduction of caste differentiation in the honey bee (Apis mellifera) by

juvenile hormone. Entomol. Experiment Appl., 15: 517-520.

ZUCCHI, R.; et al. 1999. On the cell provisioning and oviposition process (POP) of the stingless bees,

nomenclature reappraisal and evolutionary considerations (Hymenoptera, Apidae, Meliponinae).

Sociobiol., 34: 65-86.

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