INTERAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO

Detecção, quantificação e caracterização dos

anticorpos e seu uso como ferramenta para pesquisa e

diagnóstico

INTERAÇÕES Reações reversíveisReações reversíveis.

Ligações não covalentes:Ligações não covalentes:-Pontes de hidrogênio-Interações hidrofóbicas-Interações de Van der Waals-Ligações iônicas

MÉTODOS

1) Reagentes não marcados• Reação de precipitação• Reação de aglutinação

2) Reagentes marcados• RIA• ELISA • Imunofluorescência• Western Blotting

MÉTODOS

PRECIPITAÇÃOPRECIPITAÇÃO- Imunodifusão AGLUTINAÇÃOAGLUTINAÇÃO- Aglutinação direta e indireta- Inibição da aglutinação- Teste de Coombs IMUNOENSAIOSIMUNOENSAIOS- RIA- ELISA - Imunofluorescência e Citometria de Fluxo- Western Blotting

APLICAÇÕESAPLICAÇÕES

- - Pesquisa - Diagnóstico- Soroepidemiologia

PRECIPITAÇÃO X AGLUTINAÇÃO

Precipitação:Precipitação:Formação de complexos Ag/Ac.

Aglutinação:Aglutinação:É o agrupamento de partículas, usualmente por moléculas de Ac que se ligam a Ag na superfície de partículas adjacentes.

As reações de precipitação e de aglutinação decorrem, respectivamente da ligação entre o Ac e Ag solúvel e particulado.

Ac + Ag multivalente particulado Título: maior diluição que ainda causa aglutinação

(semi-quantitativo) Agregação visível de partículas = Eritrócitos, bactérias, fungos e látex

REAÇÕES DE AGLUTINAÇÃO

7

2) Reagente (anticorpo anti A, B):

AGLUTINAÇÃO DIRETA

1) Amostra de sangue na placa teste:

Exemplo: tipagem sanguínea em lâminas (sistema ABO)

Células ou partículas insolúveis + Ac = Aglutinação

8

3) Controle negativo:

4) Mistura-se:

AGLUTINAÇÃO DIRETA

9

5) Leitura do resultado:

Um resultado positivo é indicado por uma aglutinação visível (aglomeração dos eritrócitos na placa teste), como ilustrado acima.

negativo positivo

AGLUTINAÇÃO DIRETA

11

Exemplo: presença de hCG na urina (gravidez)

INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO

+Soro anti - hCGUrina

São incubados e colocados numa placa

Adicionam-se Partículas revestidas com hCG

Resultado positivo: (presença de hCG na urina): não ocorre aglutinação.

Ac se ligaram no hCG da urina, (ficando bloqueados), na incubação inicial

Resultado negativo:(ausência de hCG na urina). Ocorre aglutinação, pois os anticorpos anti-hCG não são bloqueados na incubação inicial, porque não havia o hormônio na urina. Livres, podem aglutinar as partículas revestidas de hCG.

TESTE DE COOMBS Ac antiimunoglobulinas (Robert

Coombs); DHRN – mãe produz IgG anti-Rh; Não aglutinam os eritrócitos; Direto: Ac ligados aos

eritrócitos fetais; Indireto: Ac anti-Rh não

aglutinantes no soro materno. Permite detectar

incompatibilidades Rh, prevenindo contra DHRN.

Reagentes marcados (enzimas, fluorocromos, isótopos)

Tipos:- RIA- ELISA- IFA / CITOMETRIA DE FLUXO- WESTERN BLOTTING

IMUNOENSAIOS

IMAGENS