# YP

LAQ

EXPR

OBI

O R

V02

Docu

men

t exc

lusi

vem

ent r

éser

vé a

ux p

rofe

ssio

nnel

s de

la sa

nté.

Dis

trib

utio

n in

terd

ite. ©

Cré

dit p

hoto

: sc

hutt

erst

ock

- Fot

olia

.M

ai 2

016

- PIL

EJE

BEN

ELU

X SA

, Ze

nith

Bus

ines

s Par

k, Z

andv

oort

stra

at 4

7 B,

280

0 M

ALIN

ES -

RPM

TO

URN

AI T

VA B

E 08

23.0

58.16

3.

Sites du Groupe[ Les sites PiLeJe et Lactibiane sont certifiés HONCode,certification officielle des sites Internet de santé,reconnue par la Haute Autorité de Santé (HAS) ]

www.pileje-micronutrition.fr(la recherche et les produits en micronutrition)www.fondation-pileje.com( l’information alimentation santé pour les patients)

Sites partenaires

www.iedm.asso.fr ( Institut Européen de Diététique et Micronutrition)www.iesv.org( Institut Européen des Substances Végétales)www.afa.asso.fr( Association François Aupetit)

Liens utiles

www.hon.ch/HONcode/French(Code de déontologie pour l’information médicale et relative à la santédisponible sur Internet)

l a m i c r o n u t r i t i o n

Expertise probiotiqueDes souches probiotiques uniques

pour des actions spécifiques

couv_YPLAQEXPROBIO-RV02.indd 1 15/04/2016 16:36

L’expertise probiotique, de la recherche au patient

Au cours de ces 25 dernières années, de nombreuses études mécanis-tiques et cliniques ont mis en évidence toute l’étendue des effets poten-tiels des probiotiques dans la prise en charge des effets délétères liés aux perturbations de la microflore intestinale.Tous les probiotiques ne sont pas identiques, leurs effets sont spécifiques de la souche sélectionnée et de la cible à atteindre.

Les critères d’expertise reconnus dans la sélection des meilleures souches probiotiques sont :

> Excellente tolérance par l’organisme > Capacité à résister à l’environnement du tractus digestif > Capacité à adhérer à la muqueuse intestinale> Propriétés anti-microbiennes et immunostimulantes > Tests de compatibilité entre les souches probiotiques

(pour les mélanges de 2 à plusieurs souches)> Études observationnelles avec des praticiens > Études cliniques en double aveugle versus placebo

1Document destiné uniquement aux professionnels de la santé. Distribution interdite.

YPLAQEXPROBIO.indd 1 15/04/2016 12:13

4

1- Origine et innocuité des souchesLe mot « probiotique » vient des mots grecs « pro » qui signifie « en faveur » et « biotikos » qui signifie « la vie ». Les probiotiques favorisent le développement des micro-organismes vivants par opposition aux antibiotiques.Les probiotiques sont des micro-organismes vivants qui, lorsqu’ils sont ingérés en quantité suffisante, procurent un bénéfice pour la santé de l’hôte. (Organisation Mondiale de la Santé (OMS/WHO), 2001)

Peu de micro-organismes sont donc éligibles au titre de probiotique. Parmi ces élus, on dénombre essentiellement des bactéries lactiques réparties dans 4 genres différents (Lactobacilles, Bifidobactéries, Strep-tocoques, Lactocoques), des milliers d’espèces et des centaines de mil-liers, voire plus, de souches différentes.

Chaque souche probiotique est donc unique et non substituable.

Lactobacillus acidophilus LA 201      Genre espèce souche

Les critères d’expertise dans la sélection des probiotiquesI

Document destiné uniquement aux professionnels de la santé. Distribution interdite.

YPLAQEXPROBIO.indd 4 15/04/2016 12:13

5

Les critères suivants permettent de garantir l’origine et la sécurité des souches :

> certifiées GRAS (Generally Recognized As Safe) par la FDA (Food and Drug Administration) ou QPS (Qualified Presomption of Safety) par l’EFSA (European Food Safety Authority)

> inscrites à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM).

> identifiées par des critères phénotypiques (morphologie, tests biochimiques, conditions de croissance) et génotypiques (séquence 16S rDNA)

Cartographie génétique d’une souche.

Les critères d’expertise dans la sélection des probiotiques

Document destiné uniquement aux professionnels de la santé. Distribution interdite.

YPLAQEXPROBIO.indd 5 15/04/2016 12:13

6

Études de survie à l’acidité du milieu gastrique

> Mesure de la quantité restante de probiotiques après 60 minutes d’incubation à 37°C dans une solution ajustée à pH 3,5 et additionnée de pepsine.

Graphique 1 : Exemple de résultats d’études de survie de souches probiotiques à l’acidité gastrique

2- Capacité de résistance des probiotiques dans l’organisme

Pour exercer leurs propriétés bénéfiques sur l’hôte, les probiotiques doivent être capables de résister aux conditions rencontrées au cours du transit digestif et d’atteindre l’intestin grêle et le côlon sous forme viable. Des études spécifiques reproduisant les conditions de l’organisme et les différents obstacles que les probiotiques sont amenés à franchir au cours de leur transit, permettent de sélectionner les souches les plus résistantes.

Études de résistance à la bile

> Mesure de la croissance des probiotiques en présence d’un milieu contenant de la bile à concentration physiologique (0,3%) ou non.

Graphique 2 : Exemple de résultats d’études de résistance à la bile

Résistance à la bile de la soucheS. thermophilus LA104

Temps (heures)

Tirb

idité

1/10

(640

mm

)

Survie à l’acidité gastrique de différentes souches probiotiques

Les critères d’expertise dans la sélection des probiotiques

Document destiné uniquement aux professionnels de la santé. Distribution interdite.

YPLAQEXPROBIO.indd 6 15/04/2016 12:13

7

Études de survie dans un modèle gastroduodénal

> Mesure du passage des probiotiques dans le système gastro-duodénal : système gastrique (pH acide + pepsine) pendant 10 minutes + système duodénal (sels biliaires + pH 6,9 + pancréatine + trypsine).

Études de survie dans un système digestif artificiel

> Le système digestif artificiel TIM-1, développé par le TNO Nutrition and Food Research (Zeist, Pays-Bas), optimisé et validé en collaboration avec l’Université d’Auvergne est un système multi-compartimenté (estomac, duodénum, jéjunum et iléon) piloté et contrôlé en continu par ordinateur. Il est capable de reproduire dans des conditions les plus physiologiques possibles (temps, conditions de pH appropriées,…), les mouvements péristaltiques, les sécrétions d’enzymes digestives, le transit intestinal et l’absorption des produits de digestion.

> L’utilisation du système digestif artificiel TIM permet de déterminer les souches ou associations de souches capables de survivre au cours du transit intestinal et d’atteindre le côlon sous forme viable.

Schéma 1 : Description du système digestif artificiel TIM (TNO Intestinal Model)

Les critères d’expertise dans la sélection des probiotiques

Document destiné uniquement aux professionnels de la santé. Distribution interdite.

YPLAQEXPROBIO.indd 7 15/04/2016 12:13

> La capacité d’adhésion aux cellules épithéliales intestinales est un critère important dans la sélection des souches probiotiques. L’adhésion augmente le temps de présence des souches probiotiques dans l’intestin favorisant ainsi l’interaction avec les bactéries du microbiote et le système immunitaire intestinal de l’hôte.

3- Capacité d’adhésion des probiotiques à la muqueuse intestinale

4- Études sur les propriétés et l’efficacité de souches probiotiques

Résultats : Ces 4 souches probiotiques sont capables d’adhérer aux cellules épithéliales intestinales.

Graphique 3 : Exemple de résultats de l’étude d’adhésion à la paroi intestinale

Adhésion de différentes souches probiotiques

% d

’adh

ésio

n re

lativ

e

Témoin

positif B.lo

ngum

LA104

Lb. helv

eticus

LA102 L.

lactis

LA103

S. therm

ophilus

LA104

8

Les critères d’expertise dans la sélection des probiotiques

In vitro(cellule)

In vivo(chez l’animal)

Clinique(chez l’homme)

Document destiné uniquement aux professionnels de la santé. Distribution interdite.

YPLAQEXPROBIO.indd 8 15/04/2016 12:13

1> Capacité d’inhibition de la croissance et l’adhésion des pathogènes :

a) Inhibition de la croissance de Salmonella typhimurium et Escherichia coli par les souches Lactobacillus acidophilus LA 201, Lactobacillus casei LA205, Lactobacillus plantarum LA 301 :

b) Inhibition de la croissance de Candida albicans par la souche Lactobacillus helveticus LA 401 candisis :

c) Inhibition de l’adhésion de Candida albicans aux cellules épithéliales intestinales en présence de la souche Lactobacillus helveticus LA 401 candisis :

Résultats : Ces 3 souches probiotiques sont capables de réduire d’environ 80%, 2 des bactéries responsables de la diarrhée du voyageur.

Résultats : La souche probiotique Lactobacillus helveticus LA 401 candisis limite la croissance de Candida albicans d’un facteur 10.

Résultats : La souche probiotique Lactobacillus helveticus LA 401 candisis inhibe de façon significative l’adhésion de Candida albicans.

Adhésion de différentes souches probiotiques

Graphique 4 : Etude d’inhibition sur 2 pathogènes fréquemment impliqués dans la diarrhée du voyageur : Salmonella typhimurium et Escherichia coli

Graphique 5 : Etude d’inhibition de la croissance de Candida albicans

Graphique 6 : Étude d’inhibition de l’adhésion de Candida albicans (radiomarqué à l’adénine tritiée) à la surface des cellules intestinales Caco-2, par mesure de la radioactivité du tapis cellulaire (après lavage).

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90

100

Contrôle (sans souche probiotique) Lactobacillus acidophilus LA201 Lactobacillus casei LA205 Lactobacillus plantarum LA301 % d

e co

ntam

inat

ion

par l

es b

acté

ries

path

ogèn

es

S. typhimurium CIP6062T

E. coli O157:H7

9

Les critères d’expertise dans la sélection des probiotiquesÉtudes in vitro

Inhibition de la croissance de C. albicans par la souche Lactobacillus helveticus LA401 candisis

Durée (heure)

Viab

ilité

s de

C. a

lbica

ns (U

FC/m

l)

Document destiné uniquement aux professionnels de la santé. Distribution interdite.

YPLAQEXPROBIO.indd 9 15/04/2016 12:13

b) Capacité des souches à stimuler la production de cytokines de type Treg (IL-10)

2> Propriétés immunomodulatrices des souches probiotiques :

a) Capacité des souches à stimuler la production de cytokines de type Th1 (IL-12 et IFN-g) :

d) Inhibition de la croissance du pathogène Helicobacter pylori par les souches Lactobacillus plantarum LA301 et Lactobacillus salivarius LA 302 :

Résultats : Les 4 souches probiotiques sont capables de stimuler la production de cytokines de type Th1 (IL-12 et IFN-g)

Résultats : Les souches probiotiques Lactobacillus plantarum LA 301 et Lactobacillus salivarius LA 302 limitent la croissance de la bactérie pathogène Helicobacter pylori.

Graphique 8 : Augmentation de la production d’IL-12 et d’IFN-g en présence de 4 souches probiotiques (Bifidobacterium longum LA 101, Lactobacillus helveticus LA 102, Lactococcus lactis LA 103, Streptococcus thermophilus LA 104) à partir de cellules mononucléées sanguines issues de donneurs sains.

Graphique 7 : Etude d’inhibition de la croissance d’Helicobacter pylori en présence des souches probiotiques (Lactobacillus plantarum LA 301 et Lactobacillus salivarius LA 302).

10

Les critères d’expertise dans la sélection des probiotiques

Résultats : Les souches probiotiques Lactobacillus salivarius LA 302 et Bifidobacterium lactis LA 304 sont capables de stimuler la production de la cytokine anti-inflammatoire IL-10.

Graphique 9 : Augmentation de la production d’IL-10 à partir de cellules mononuclées sanguines issues de donneurs sains, après 24h d’incubation avec les souches probiotiques.

Lactobacillus salivarius LA 302

Lactobacillus salivarius LA 302

Lactobacillus plantarum LA301

Lactobacillus plantarum LA301

0

Témoin

IFN-g (pg / ml)

LA103

LA104

LA101

LA102

20 000 40 000 60 000 80 000 100 000 120 000 140 000

0

Témoin

IL-12 (pg / ml)

LA103

LA104

LA101

LA102

100 200 300 400 500 600 700 800 900

Document destiné uniquement aux professionnels de la santé. Distribution interdite.

YPLAQEXPROBIO.indd 10 15/04/2016 12:13

11

Les critères d’expertise dans la sélection des probiotiquesÉtudes in vivo

2> Prévention de la colite inflammatoire :

JOURS141312111098765432100

100

200

300

400

500

C. alb

icans

UFC

/ 10

µg de

selle

s

C. albicans + 1,5 % DSS

C. albicans + 1,5 % DSS+ LA 401 pendant 7 jours

C. albicans + 1,5 % DSS+ LA 401 pendant 14 jours

Modèle d’infection intestinale à C. albicans (INSERM U799, Lille)

Témoin positifTraité à 7 joursTraité à 14 jours

Résultats : La complémentation par la souche probiotique Lactobacillus helveticus LA 401 candisis (109 UFC/jour) permet de réduire significativement la colonisation intestinale par Candida albicans.

Résultats : L’administration préventive du mélange de 4 souches probiotiques sélectionnées permet une diminution significative des scores macroscopiques et histologiques de 54% et 58% et confère une protection vis-à-vis de la colite inflammatoire.

Graphique 10 : Efficacité d’une souche probiotique sur une infection intestinale à C. albicans (modèle de colite in vivo).

Graphique 11 : Administration préventive pendant 5 jours d’un mélange de 4 souches probiotiques(a) contre placebo dans un modèle in vivo de colite induite au TNBS.

Mélange probiotique(a)

Placebo

5

4

3

2

1

0

SCORE DE WALLACE

( p = 0,01)

*

Mélange probiotique(a)

Placebo

5

4

3

2

1

0

SCORE D’AMEHO

(p = 0,001)

**

Modèle de colite au TNBS (Institut Pasteur de Lille)

(a) Bifidobacterium lactis LA303Lactobacillus acidophilus LA201

Lactobacillus plantarum LA301Lactobacillus salivarius LA302

Résultats publiés dans Clinical Nutrition

Résultats : L’administration orale de la souche Lactobacillus acidophilus LA 201 pendant 15 jours permet de diminuer de 20% le seuil de douleur au niveau du côlon. Le bénéfice observé est équivalent à celui de la morphine, administrée par voie sous-cutanée à la dose de 1 mg/kg.

Graphique 12 : Efficacité in vivo sur la douleur intestinale (modèle de sensibilité viscérale).* p < 0,05 ; ** p < 0,01

0

10

20

30

40

50

60

70

Contr

ôle

LA20

1

Seui

l de

doul

eur (

mm

Hg)

0

10

20

30

40

50

60

70

0 0,03 0,1 0,3 1 3

Seui

l de

doul

eur (

mm

Hg)

Morphine (sous-cutanée, mg/kg)

P < 0,01

* **

**

3> Prévention de la sensibilité viscérale a) Administration préventive de la souche Lactobacillus acidophilus LA 201

1> Réduction de la colonisation intestinale par Candida albicans :

Document destiné uniquement aux professionnels de la santé. Distribution interdite.

YPLAQEXPROBIO.indd 11 15/04/2016 12:13

b) Administration orale d’un mélange de 5 souches probiotiques dans un modèle in vivo de colite inflammatoire

Résultats : L’administration préventive de ce mélange de 5 souches probiotiques(b) permet de diminuer la perméabilité intestinale en conditions inflammatoires.

Graphique 14 : Perméabilité paracellulaire intestinale totale au 51Cr-EDTA en conditions inflammatoires induites par un stress chronique d’évitement passif à l’eau (WAS = Water Avoidance Stress) in vivo, après administration préventive d’un mélange de 5 souches probiotiques(b) contre placebo.

12

Les critères d’expertise dans la sélection des probiotiques

Résultats : L’administration préventive de ce mélange de 5 souches probiotiques(b) permet de prévenir l’hypersensibilité viscérale en conditions inflammatoires.

Graphique 13 : Intensité des crampes abdominales in vivo en conditions inflammatoires induites par la perfusion de surnageants fécaux de patients avec SII-D, après administration préventive d’un mélange de 5 souches probiotiques(b) contre placebo.

5> Restauration de l’intégrité de la muqueuse intestinale

Résultats : L’administration préventive de ce mélange de 5 souches probiotiques(b) augmente en conditions inflammatoires l’expression des protéines des jonctions serrées qui scellent les cellules épithéliales entre elles.

Graphique 15 : Expression des protéines de jonctions serrées au niveau du côlon en conditions inflammatoires induites par un stress chronique d’évitement passif à l’eau (WAS = Water Avoidance Stress) in vivo, après administration préventive d’un mélange de 5 souches probiotiques(b) contre placebo.

4> Diminution de la perméabilité intestinale

(b) Bifidobacterium lactis LA 303, Lactobacillus acidophilus LA 201, Lactobacillus plantarum LA 301, Lactobacillus salivarius LA 302, Bifidobacterium lactis LA 304

Document destiné uniquement aux professionnels de la santé. Distribution interdite.

YPLAQEXPROBIO.indd 12 15/04/2016 12:13

13

Les critères d’expertise dans la sélection des probiotiques

1> Dans le syndrome de l’intestin irritableEfficacité clinique d’un mélange de 4 souches probiotiques sélectionnées (Bifidobacterium longum LA 101, Lactobacillus helveticus LA 102, Lactococcus lactis LA 103, Streptococcus thermophilus LA 104) réalisée en double aveugle contre placebo chez 100 patients présentant un syndrôme de l’intestin irritable selon les critères de Rome.

Études cliniques

> Syndrome de l’intestin Irritable (SII) selon les critères de Rome :

Douleur ou inconfort abdominal récurrent présent au moins 3 jours par mois au cours des 3 derniers mois. Cette douleur doit correspondre à au moins 2 des 3 critères suivants :6 être soulagée au moment de la défécation6 être associée à une modification de la fréquence des selles6 être associée à une modification de la consistance des selles

a) Amélioration de la constipation chez les sujets à prédominance constipée (SII-C)

b) Diminution de la douleur abdominale

Résultats : L’administration orale de ce mélange de 4 souches probiotiques sélectionnées améliore dès la 1ère semaine de complémentation le transit intestinal des sujets à prédominance constipée (SII-C).

Résultats : La consommation de ce mélange de 4 souches probiotiques(c) pendant 4 semaines permet de réduire de 42% l’intensité des douleurs abdominales.

Graphique 16 : Nombre de selles quotidien après consommation quotidienne pendant 4 semaines d’un mélange de 4 souches probiotiques(c) contre placebo.*p=0,043; ** p=0,029; ***p=0,049

Graphique 17 : Intensité des douleurs abdominales mesurée sur une échelle visuelle de 0 à 10 chez les sujets présentant un syndrome de l’intestin irritable après la consommation quotidienne pendant 4 semaines d’un mélange de 4 souches probiotiques(c) contre placebo.*p=0,048

S00.4

0.6

0.8

1.2

1.4

1.6

1.8

1

S1 S2 S3 S4Semaines

Régulation du transit chez les sujets à prédominance constipée

Nom

bre

de s

elle

s qu

otid

ien

Placebo

******

Mélange probiotiques(c)

Publiée dans « Gastroentérologie Clinique et Biologique » en Mars 2008, l’étude clinique démontre pour la 1re fois en France l’efficacité d’un probiotique dans le syndrome de l’intestin irritable (SII). Référence bibliographique : « A double blind randomized controlled trial of a probiotic combination in 100 patients with irritable bowel syndrome », Gastroentérologie Clinique et Biologique, Mars 2008, Vol. 32, 147-152. S. Drouault-Holowacz, S. Bieuvelet, A. Burckel, M. Cazaubien, X. Dray, P. Marteau

(c) Bifidobacterium longum LA 101, Lactobacillus helveticus LA 102, Lactococcus lactis LA 103, Streptococcus thermophilus LA 104

Document destiné uniquement aux professionnels de la santé. Distribution interdite.

YPLAQEXPROBIO.indd 13 15/04/2016 12:13