MEIOS DE CULTURA

Como preparar

• Meios comerciais devem ser hidratados

• Primeiramente devem ser pesados

• Tansferir para um frasco

• Hidratar em pequena quantidade e misturar

• Depois deve-se acrescentar o restante da água

• Levar o meio para fundir aquecer

• Distribuir o meio antes de autoclavar - os tubos não precisam estar esterilizados previamente

• Esterelizar em autoclave por 15 minutos e à temperatura de 121ºC

• Distribuir o meio após a autoclavação - tubos, frascos, placas, pipetas e vidrarias estéreis

• Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-abertas - tampas fechadas não permitem a entrada do vapor

Classificação dos meios

• Meios para transporte e conservação• Meios para cultivo e isolamento• Meios comerciais para provas de identificação

Transporte e conservação

• Cary Blair

• Salina Tamponada

• Meio Stuart

• Agar nutriente

Cary Blair

• Microrganismos intestinais patogênicos e outros coliformes fecais sobrevivem bem neste meio.

• ƒA carência de uma fonte de nitrogênio impede consideravelmente a multiplicação dos microrganismos e a composição nutritiva garante a sobrevivência deles.

• Utilizado para transporte de material fecal e consequente conservação dos microrganismos.

Salina Tamponada

• Meio líquido tamponado que mantém a bactéria viável.

• Usado como meio de transporte de amostras biológicas.

• Contém NaCl, fosfato dipotássico anidro, Glicerina bidestilada e água destilada.

Meio Stuart

• A carência de uma fonte de nitrogênio impede consideravelmente a multiplicação de microrganismos e a composição nutritiva garante a sobrevivência deles.

• Usado para transporte de diversos materiais e consequente conservação dos microrganismos.

• ƒConservação de microorganismos patogênicos como: Haemophilus spp., Pneumococcus, Salmonella spp., Shigella spp. entre outros.

Agar Nutriente

• É um meio relativamente simples, de fácil preparação e barato, muito usado nos procedimentos do laboratório de Microbiologia.

• Usos: • ƒAnálise de água, alimentos e leite• Meio para cultivo preliminar das amostras submetidas a

exames bacteriológicos• Isolamento de organismos para culturas puras. • Observar esporulação de espécies de bacilos Gram

positivos. • O uso mais frequente - conservação de culturas em

temperatura ambiente, para os laboratórios que não dispõem de crioconservação (freezer à - 70ºC).

Cultivo e Isolamento

• Ágar TSA• Ágar Chocolate• Ágar MacConkey• Ágar Sangue• Ágar CLED• Ágar Salmonella-Shigella • Ágar Manitol (MSA)• Ágar EMB• Ágar Mycosel• Ágar Sabouraud• Ágar Verde Brilhante (BGA)• Caldo Tioglicolato com indicador• Caldo Tioglicolato sem indicador

• Caldo BHI • Caldo Selenito• Caldo Tetrationato• Löwenstein Jensen• Meio bifásico: Löwenstein e

Middlebrook,

Tryptic Soy Agar (TSA)

• Caldo Triptona de Soja com 0,1% Agar

• Também chamado de CASO Agar (Casein-peptone soymeal-peptone agar)

• É recomendado para o cultivo de bactérias não fastidiosas – uso geral.

Pseudomonas aeruginosa

Staphylococcus aureus

Escherichia coli

Caldo BHI• Brain Heart Infusion – meio enriquecido

• É um meio derivado de nutrientes de cérebro e coração, peptona e dextrose.

• Fornece fontes de nitrogênio, carbono, enxofre e vitaminas.

• Meio para cultivo de estreptococcos, pneumococos, meningococos, enterobactérias, não fermentadores, leveduras e fungos.

• Pode ser utilizado na preparação do inóculo para teste de susceptibilidade aos antimicrobianos

• Realização de teste de coagulase em tubo

• Teste de crescimento bacteriano a 42 e 44°C

• Teste de motilidade em lâmina.

Agar Sangue

• Meio enriquecido e diferencial

• Compra-se a base comercial, depois de autoclavada e resfriada, adiciona-se sangue.

• A conservação dos eritrócitos íntegros favorecem a formação de halos de hemólise nítidos.

• Diferenciação de Streptococcus spp. e Staphylococcus spp.

Bacillus cereus

-hemolítico

Estreptococcus -hemolítico

Enterococcus faecalis

Não hemolítico ()

Agar Chocolate

• Meio de cultura enriquecido 

• À base do meio, é adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as hemácias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes.

• Utilizado no cultivo de organismos fastidiosos (Ex.: Neisseria, Haemophilus)

• Alguns organismos que não crescem em meios comuns são capazes de crescer neste meio

Neisseria gonorrhoeae

Staphylococcus aureus

Escherichia coli

Agar Thayer-Martin

• Thayer-Martin Chocolate é um meio rico seletivo

• É superior a outros meios de cultivo destinados para o isolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis

• Contém em sua fórmula antibióticos que inibem o crescimento de Neisserias saprófitas e outras bactérias, evitando contaminações.

Neisseria gonorrhoeae

Agar Salmonella-Shigella (SS)

• Seletivo e diferencial

• Possui componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio) que inibem microrganismos Gram positivos.

• O meio possui lactose, que permite diferenciar bactérias lactose positivas e negativas

– Lactose positivas- produzem ácido que na presença do indicador vermelho - formação de colônias de cor rosa

– Lactose negativas- formam colônias transparentes.

• ƒPermite a detecção de H2S - formação de colônias de cor negra no centro.

Agar MacConkey

• Seletivo e diferencial

• O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos.

• ƒ A concentração de sais de bile é relativamente baixa, por isso não é tão seletivo para Gram negativos como, por exemplo, o ágar SS.

• Usado para isolar bacilos Gram negativos (enterobactérias e não fermentadores) e verificar a fermentação ou não da lactose.

Pseudomonas aeruginosa

Escherichia coli Salmonella sp.

Meio Hektoen

• É um meio seletivo e diferencial 

• Utilizado para detectar a fermentação de lactose e produção de H2S

• Possui a capacidade de inibir o crescimento de bactérias não-entéricas 

• Fermentados de lactose - amarelo ou salmão• Não fermentadores - sem cor• Produção de H2S - precipitado preto

Escherichia coli

Salmonella enteridis

Agar Sal Manitol

• Meio seletivo e diferencial

• Utilizado para selecionar Staphylococci, que crescem em altas concentrações de sal

• Diferencia Staphylococcus aureus de outros Staphylococci 

• Após o crescimento, Staphylococcus aureus é amarelo (fermenta o manitol), outros Staphylococci são brancos

Staphylococcus epidermidis

Staphylococcus aureus Escherichia coli

Agar CLED

• Cystine Lactose Eletrolyte Deficient – Seletivo e diferencial

• A deficiência de eletrólitos inibe o véu de cepas de Proteus.

• Usado para isolamento e quantificação de microrganismos presentes em amostras urina.

• Eficiente para isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras.

• Colônias lactose positivas: cor amarela/ negativas: cor �azul.

Staphylococcus aureus

Proteus mirabilis Escherichia coli

Agar verde brilhante (BGA)

• É um meio altamente seletivo, usado para o isolamento  de outras salmonelas que não a S. Typhi, existentes nas fezes e em outros materiais.

• A presença de extrato de levedura e duas peptonas fornecem os  nutrientes

• A lactose e a sacarose, juntamente com o vermelho de fenol, fornecem um sistema  de diferenciação de fermentadores da lactose e/ou sacarose (ex: E. Coli).

• Salmonelas não produzem ácido a partir destes açúcares.

• O verde brilhante é o  agente seletivo que inibe a flora de acompanhamento. 

Escherichia coli

Salmonella sp.

Agar Eosina Azul de Metileno

• Agar EMB é um meio para diferenciação ligeiramente seletivo

• Utilizado para o isolamento e diferenciação de bacilos entéricos gram-negativos (Enterobacteriaceae e outros bastonetes gram-negativos).

• Corantes Eosina Y e azul-de-metileno inibem as bactérias gram-positivas num determinado grau - diferenciar os fermentadores

• Coliformes produzem colónias pretas-azuladas

• Salmonella e Shigella são incolores ou têm uma cor âmbar transparente, não fermentam lactose

• Escherichia coli poderão apresentar um reflexo verde metalizado característico, devido à rápida fermentação da lactose

Escherichia coli

Klebsiella pneumoniae

Salmonella enteridis

Meio Löwenstein Jensen

• A base do meio é constituída por ovos integrais, o que permite amplo crescimento das micobactérias

• O crescimento é satisfatório para o teste de niacina (que é positivo para Mycobacterium tuberculosis)

• Utilizado para isolamento primário das micobactérias

• Crescimento bom a excelente (colônias amarelas) - Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium

• Incubação por 60 dias

Mycobacterium tuberculosis

Agar Mycosel

• A Cicloheximida, um dos componentes do meio, serve para selecionar dermatófitos.

• O cloranfenicol inibe o crescimento de bactérias e alguns fungos filamentosos.

• Usado para isolamento de fungos patogênicos, principalmente dermatófitos, a partir de material de investigação contaminado.

• Crescimento bom a excelente: Trichophyton verrucosum, Candida albicans

• Crescimento inibido: Aspergillus niger , Candida tropicalis, Penicillium spp.

Candida albicans

Agar Sabouraud

• Meio com nutrientes que favorece o crescimento de diversos fungos leveduriformes e filamentosos.

• Cultivo e crescimento de espécies de Candidas e fungos filamentosos, particularmente associados a infecções superficiais.

• Caracterização macroscópica do fungo filamentoso (colônia gigante).

Candida albicans

Sporothrix schenckii

Microsporum canis

Meios para identificação

• Ágar TSI• CaldoTSB • Meio SIM• Ágar Citrato Simmons• Ágar Fenilalanina• Ágar base uréia• Caldo Triptona• Caldo Nitrato• Caldo Malonato • Ágar Bílis-Esculina• Ágar Sangue• Caldo base de Moeller

• Ágar Dnase • Ágar Esculina• CTA – Cystine Tryticase Agar• Meio base para oxidação e

fermentação - OF• Base de nitrogênio para

leveduras

Veremos os meios para identificação na nossa próxima aula!