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Microscopia ConfocalGesiane Ferreira7 de Farmcia Estgio em UroanliseFUPAC- Ipatinga 2011

Microscopia Confocaly Desenvolvida

por Marvin Minsky, em 1955.y Aumenta o contraste da

imagem e constroi imagens 3D.http://www.google.com.br/imgres?imgurl=http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/2/28/Marvin_Minsky_at_OLPCb.jpg&imgrefurl =http://en.wikipedia.org/wiki/File:Marvin_Minsky_at_OLPCb.jpg&usg=__xYrYtNjR2LmCCFpd1vbHEsPxWdg=&h=1025&w=1024&sz=238& hl=ptBR&start=1&sig2=5A2bF1DhhK97hVz1Lh5CaA&zoom=1&tbnid=OmaR2enBydCKrM:&tbnh=150&tbnw=150&ei=5z3qTdHGHcna0QGS0aHFA Q&prev=/search%3Fq%3DMarvin%2BMinsky%26hl%3DptBR%26sa%3DX%26biw%3D1212%26bih%3D739%26tbs%3Disz:l%26tbm%3Disch%26prmd%3Divnsbo&itbs=1

Microscopia Confocaly Utiliza recursos de microscopia ptica aliadas

princpios de mecnica quntica, fsico-qumica e computao para a aquisio e processamento de imagens.y Tornou possvel

olhar bem de perto variados tipos de clulas vivas e medir fenmenos biolgicos em tempo e espao reais. biologia, biofsica, bioqumica, biologia celular, microbiologia, fisiologia, farmacologia e outras.

y Ampliou-se os estudos em reas diferentes da

Constituio do Microscpio Confocal1) Laser : fonte de luz projetada na amostra 2) Scanner : digitalizador por unidade 3) Z control: permite a focar e adquirir imagem nos eixos X e Z 4) Fotomultiplicadores: detectam os fotes emitidos pela amostra 5) Pinhole 6) Via de Fluorescncia: definida pela combinao dos espelhos principal e secundrio e filtros de emisso 7) Objetivas: formao ptica da imagem, determina as propriedades de qualidade da imagem e as resolues nos eixos X, Y e Z

Como funciona...O M.C. de fluorescncia por varredura laser utiliza a fluorescncia para a aquisio das imagens. A fluorescncia: o corpo absorver luz e aps um curto intervalo de tempo reemite essa luz.

Usa-se compostos qumicos chamados fluorforos. Uma fonte de laser promove a excitao.

Como funciona...A obteno de imagens sucessivas de diferentes planos da mesma amostra possibilita construir imagens 3D e imagens em movimento. O inconveniente desta tcnica a degradao dos fluorforos Que leva utilizao do confocal para o estudo de fenmenos mais rpidos.

Distribuio espacial das vesculas sinpticas (azul) Ilhota-1 (vermelho) Neurofilamentos (roxo)Confocal laser scanning microscopy winner

http://www.fmhs.auckland.ac.nz/sms/biru/_images/2007_confocal_winner.jpg

Clulas ciliadas da cclea

http://scienceblogs.com/retrospectacle/2007/11/confocal_image_of_cochlea_wins.php

Olho da Drosophila sp.

http://www.leica-microsystems.com/news-media/image-galleries/confocal/

Micitos cardacos de rato.

http://www.leica-microsystems.com/news-media/image-galleries/confocal/

Espirogira (alga verde)

http://www.leica-microsystems.com/news-media/image-galleries/confocal/

Preparao de Amostras BiolgicasPodem ser organismos vivos, culturas celulares, amostras fixadas, cortes histolgicos de rotina. Deve ser submersa em fixador com ligeira agitao Os tecidos osmoticamente ativos podem apresentar algumas alteraes morfolgicas. O tempo de observao deve ser limitado, porque os radicais livres produzidos durante o tempo de excitao dos fluorocromos danificam as clulas e tecidos no fixados. Devem ser protegidas da luz, analisadas rapidamente e armazenadas no frio.

RiscosTendo em conta os reagentes utilizados, consideram-se mltiplos riscos, tais como: y Inflamveis y Nocivos y Irritantes y Txicos y Cancergenos

VANTAGENS Imagens multidimensionais Seccionamento ptico Melhor contraste Melhor resoluo

DESVANTAGENSCusto elevado Nmero limitado de ondas de excitao Carter nocivo da radiao laser de alta intensidade

Observao de material Carter nocivo dos vivo sem destruio reagentes Observao em tempo real

ConclusoO microscpio uma ferramenta extremamente importante em laboratrio. O Confocal especialmente til por permitir a visualizao de estruturas de interesse com alta resoluo, graas utilizao do laser para a excitao dos fluorforos Lembrando que o preparo adequado da amostra aumenta a eficincia dos recursos a qualidade da imagem final.

RefernciasMicroscopia confocal. Http://pt.wikipedia.org/wiki/Microscopia_confocal METZ, Hugo Leonardo. Microscpico Confocal. Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Fsica GlebWataghin.