Métodos em Fitopatologia

Esterilização

Esterilização: processo que visa eliminar todos osmicroorganismos presentes em um material / meio de cultura;

Assepsia: Conjunto de processos (técnicas) utilizados para impedira entrada de microrganismos em local que não os contenha

Descarte e lavagem

Placas contendo meio cultura:

Descarte de meios com patógeno comum (lixo);

Descarte de meios com patógeno exótico (autocIavagem / lixo);

Lavagem de placas com água e detergente;

Enxaguar muito bem e secar ao ar;

Embalar 3 a 3 em papel;

Esterilizar em estufa;

Armazenar em local livre de poeira.

Descarte e lavagem

Vidraria:

Provetas/Beckers:lavar / enxaguar / secar / esterilizar / cobertura alumínio

Vidros c/ tampas rosca:lavar / enxaguar / secar / esterilizartampar frouxamente para esterilização (autoclave)

Pipetas:imersão em solução desinfetante (água, detergente, hipoclorito sódio)

enxaguar / secar / embalar / esterilizar

ESTERILIZAÇÃO

Calor úmido

- Autoclavagem: meios de cultura a 121ºC durante 20 minutos

- Temperaturas de autoclavagem :

- vapor + 0,5 atm = 111ºC

- vapor + 1,0 atm = 121ºC

- vapor + 1,5 atm = 128ºC

- vapor + 2,0 atm = 135ºC

- Tindalização : vapor sem pressão, esterilização fracionada (15'/três dias)

- Autoclavagem : Esterilização do solo para fins experimentais (campo)

Autoclavagem = calor + pressão

Resistência coberta por água e suporte da cesta

Cesta interna da autoclaveAutoclave

Válvula de exaustão e manômetro (bolsa de ar)

Calor úmidoMecanismo de ação: coagulação de proteínas

Alta eficiência: alta capacidade de penetração

Modelos de autoclavesEsterilização pelo calor úmido

ESTERILIZAÇÃOCalor seco: Mecanismo de ação: oxidação constituintes químicos da célulaEficiência: baixa capacidade de penetração

- Estufas ou fornos: vidraria envolta em jornal (placas e pipetas),Temperatura de 180ºC por 2 horas

- Bico de Bunsen e lamparinas: instrumentos metálicos do tipo pinças,agulhas, alças, tesouras, escalpelos.. imersão em álcool e queima na chama. queima direta na chama até atingir o rubro. flambagem de tubos de ensaio e de placas antes e após a repicagem.

DESINFESTANTES:

- Álcool (70-96%) : para desinfestação de superfícies: mesas, balcões,câmaras de assépticas e material vegetal para isolamento depatógenos. Ação: desnaturação lipídios e proteínas.

- Hipoclorito de sódio (1-2%): 3 partes de água: 1 parte de hipoclorito5%: desinfestação de material vegetal para isolamento de patógenos,lavagem de ferramentas como canivetes de enxertia e tesouras depoda. Ação: Oxidação componentes celulares.

- Amônia quaternária : eficiente e não corrosiva, princípio ativo: cloreto deamônio. Concentração do produto comercial: 50% do princípio ativo.Usar solução 0,1%. Aplicar em superfície limpa e aguardar 3-10 min. Sehouver uso imediato enxaguar a superfície. Indicado p/ imersão oupulverização. Ação: inativação enzimática, desnaturação protéica edestruição das membranas celulares.

ESTERILIZAÇÃO

Filtração:

- Membranas filtrantes (Filtros Millipore - 0.20 ou 0.45 micrômetros)

- Usadas em conjunto de kitasato ou em seringas.

- Filtros de algodão hidrofóbico / lã de vidrousados em câmaras assépticas.

ESTERILIZAÇÃO Gás:

- Óxido de etileno. puro é inflamável, porém com CO2 como veículo se torna seguro. usado geralmente na forma de gás. promove esterilização de placas de vidro ou de poliestireno. câmara (saco plástico especial ou tambores) é usada para expor os

materiais à ação do gás. ação: desnaturação de proteínas e ácidos nucléicos

ESTERILIZAÇÃO

Radiação

Radiação ultravioleta : utilizada para criação e manutenção de ambienteasséptico. Esterilização do interior de câmaras assépticas

Tempo de 5-10 minutos, podendo a câmara ser usada imediatamente.

Radiação UV é fornecida por lâmpada que emite comprimentos de onda na faixa ~260nm

- Radiação baixa penetração (baixa energia)

- Mecanismo ação: danos ao DNA

Câmara Asséptica ou de Fluxo Laminar

Câmara Asséptica ou Fluxo Laminar

O COLETOR SOLAR

- Caixa de madeira, medindo 1,0 m X 1,5 m

- Contém seis tubos metálicos de 15 cm diâmetro

- Material: ferro, chapa galvanizada, alumínio, cobre , outro

- Caixa coberta por filme plástico transparente p/ permitir entrada raios solares

-Tubos são preenchidos com substrato por cima e retirado por baixo

-Volume solo desinfestado por tratamento: 120 litros/caixa

- Tempo do tratamento: 1-2 dias

Fonte: Ghini, R. – EMBRAPA - Jaguariuna

Fonte: Ghini, R. – EMBRAPA -Jaguariuna

Esterilização química por brometo de metila

Tratamento térmico por solarização