Ministério da Educação

Secretaria de Educação Profissional e Tecnológica

Instituto Federal de Educação Ciência e Tecnologia Goiano

Curso de Agronomia

Disciplina de Fitopatologia I

Parasitismo de estágio secundário juvenil de

Heterodera glycines e quatro estágios larvais de

Caenorhabditis elegans por Hirsutella spp

Apresentação de Sérgio Alves Barbosa Neto

JINGZU, S; HONGYAN, X; JUNZHI, Q; XINGZHONG, L; MEICHUN, X. Parasitism of secondary-stage juvenile

of Heterodera glycines and four larva stages of Caenorhabditis elegans by Hirsutella spp. Institute of Microbiology (IM),

Chinese Academy of Sciences (CAS), No. 3, 1st Beichen West Road, Chaoyang District, Beijing100101, China. Fax: +86 10

64807505.1

2

Introdução Nematóide de Cisto;

Hirsutella spp;

Caenorhabditis elegans.

Objetivos

Materiais e Métodos

Resultados

Discussão

Conclusão

3

Nematóide de Cisto

Praga destrutiva;

Ciclo de vida;

Fase Juvenil.

4

Caenorhabditis elegans

Nemátodo bacterivorous, C. elegans;

Quatro fases larvais.

5

Hirsutella spp.

Parasita;

Três espécies de Hirsutella foram relatadas para infectarnematoides, entre elas: Hirsutella rhossiliensis, Hirsutellaminnesotensis, Hirsutella vermicola;

Hirsutella minnesotensis e H. rhossiliensis podem parasitar todos osnematóides tróficos, incluindo as bactérias de alimentação denematóides Caenorhabditis elegans;

H. vermicola teve um tipo de parasitismo fraco em seis espécies denematóides ensaiadas (H. glycines, H. avenae, Meloidogyne hapla,Bursaphelenchus xylophilus, Heteror-bacteriophora habditis,e Steinernema carpocapsae);

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Hirsutella spp. Em Estufa têm demonstrado que o H. rhossiliensis

e H. minnesotensis são agentes potenciais importantes de controle

biológico de plantas, e nematóides parasitas.

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Objetivo

Os objetivos deste estudo foram avaliar vinte isolados de

Hirsutella spp. para parasitismo de C. elegans L1-L4 e SCN e

J2 e determinar se existem diferenças no parasitismo de C.

elegans em estágios que se referem ao tamanho do corpo e

mobilidade.

Os resultados indicará se C. elegans pode substituir SCN

como um modelo sistema para estudar o parasitismo de

nematóides por Hirsutella spp.

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Materiais e Métodos

Fungo:

Vinte isolados de quatro espécies Hirsutella foram testadas:

9

Fungo:

H. Rhossiliensis, H.minnesotensis, Hirsutella thompsonii e H. vermicola;

H. thompsonii ;

Todos os fungos foram mantidos em PDA em clima de 4 ° C e foram transferidas para placas de PDA para produção de conídios. Depois de duas semanas a 25 ° C, as colónias foram lavadas com uma solução de Tween 20 esterilizada a 0,1%. O número de conídios na suspensão foi determinada com um hemacitómetro.

10

Preparação de SCN(Soybean Cyst Nematode):

Nematóide de cisto da soja raça 4, original de um campo de

soja no o subúrbio de Pequim, foi mantida em variedade de

soja Zhonghuang em uma estufa. Cistos recém-formados

foram extraídos a partir do solo por flutuação em sacarose e

centrifugação.

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Preparação de C. elegans:

Utilizado fases larvais mistas de C. elegans , que foram

mantidas a 24 ° C em placas de agar contendo nematóide em

meio de crescimento;

Os nematóides recolhidos foram lavados com água

esterilizada e foram utilizados imediatamente.

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Ensaio Parasitismo:

l ml de volume de cada suspensão de conídios e foi espalhada

sobre o superfície de cada poço de uma placa de cultura de

tecidos de 12 poços; cada um dos poços haviam sido

previamente cheia com 1 ml de agar de farinha de milho;

Depois foram adicionadas as suspensões, as placas foram

descoberto por 30 min em uma capela de fluxo iluminado

para permitir que a água evapore;

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A análise estatística:

Os efeitos de espécies e estágios de nematóides, espécies de

fungos e isolados na porcentagem de nematóides parasitados

foram determinada por uma análise de variância (ANOVA).

A relação existente entre o percentual de SCN J2 parasitados

por H. rhossiliensis e H. minnesotensis e a percentagem de

diferentes fases de larva de C. elegans parasitados por estes

fungos foi avaliada por cálculo do Coeficientes de Pearson e

Spearman.

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Resultados e Discussões

Parasitismo de nematóides:

No ensaio de placa de cultura de tecido, os parasitismos diferiramsignificativamente entre as espécies fúngicas e entre SCN J2 e C.elegans;

H. thompsonii;

H. vermicola;

H. minnesotensis e H. rhossiliensis.

15

16

17

Correlação entre o parasitismo de SCN J2 e C. elegans

L1-L4:

O parasitismo por H. Minnesotensis e H. Rhossiliensis foi

correlacionada entre SCN J2 e C. Elegans L1 e L2, mas não entre

SCN J2 e C. Elegans L3 e L4. Sem correlações foram

significativas.

C. elegans aumentou com a fase larval. As áreas de superfície foi

semelhante para SCN e J2 L3 de C. elegans. SCN J2 eram,

obviamente, menos móveis do que L2-L4 de C. elegans.

18

O presente estudo documenta que parasitismo de nematóides

por H. rhossiliensis e H. minnesotensis diferiu entre fungos isolados

e entre as espécies de nemátoides;

H. minnesotensis e H. rhossiliensis parasitam um maior percentual

de SCN J2 do que a fase larval de C. elegans ;

H. vermicola ;

H. thompsonii .

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H. minnesotensis e H. rhossiliensis também produzem conídios

adesivas que iniciam a infecção de nemátodos. No estudo

atual, H. Minnesotensis e H. rhossiliensis parasitam mais larvas

jovens (L1 e L2) do que de idade juvenis (L3) de C. elegans;

O efeito da larva em estágio de parasitismo de C. elegans por

fungos pode ser afetada por outras características, incluindo

tamanho e motilidade;

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Conclusões

O sistema de pesquisa foi estabelecido usando C. elegans L1

como um alternativa do SCN J2 para estudar o parasitismo

de nematóides por H. rhossiliensis e H. minnesotensis. Este

sistema modelo serviu para estudar a interação entre fungos e

nematóides que fornece simples, conveniente manipulação e

abordagem rápida para infecções fúngicas do mecanismo,

patogênese e interagindo contra nematóides.

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