UNIVERSIDADE ABERTA DO BRASIL UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARAIBA - UFPB VIRTUAL

LICENCIATURA EM CINCIAS BIOLGICAS A DISTNCIA

DISCIPLINA BIOQUMICA ESTRUTURAL

Ministrante: Prof. Dr. Carlos Alberto de Almeida Gadelha

Mediador: Tutor Daniel Lima de Farias

PLANO DE AULA PRTICA

Importante: As aulas prticas sero ministradas integralmente ou parcialmente, de acordo com o tempo disponvel para sua execuo.

Objetivos gerais da prtica:

1. Apresentao do material e manuseio dos instrumentos do Laboratrio; 2. Familiarizao com os conceitos de pH e capacidade tamponante; 3. Medir o pH de algumas solues de nosso cotidiano; 4. Constatar o efeito tamponante e sua importncia biolgica; 5. Detectar o polissacardeo amido em diferentes amostras; 6. Constatar a hidrlise do amido pela enzima amilase salivar; 7. Determinar a quantidade de vitamina C em diferentes tipos de alimentos.

Parte I O Laboratrio Didtico: Materiais e Cuidados.

Procedimento geral:

Antes de efetuar os experimentos, necessrio conhecer o material e os equipamentos existentes no laboratrio. Seguido de procedimentos prticos para que se possa saber manusear (pipetar, filtrar, pesar, etc.) os instrumentos existentes no laboratrio, assim como, saber manusear com inflamveis, cidos e bases fortes.

Parte II pH e Capacidade Tamponante.

Procedimento geral:

Antes de efetuar as medies de pH com o potencimetro, necessrio calibr-lo usando solues tampo padres, seguindo o procedimento descrito no manual do aparelho. Aps isso ter sido feito, mergulhe o eletrodo de forma que o poro em sua lateral fique sempre encoberto pelo lquido que se deseja medir o pH.

- Prtica de medio do pH de diferentes amostras.

1 Reagentes: Soluo de diferentes substncias (refrigerante de cola, vinagre, gua sanitria, etc). 2 Material: - Bqueres de 100ml; - Potencimetro. 3 Procedimentos: Mergulhar o eltrodo do potencimetro nas solues onde sero determinados os pHs e anotar os valores obtidos.

- Prtica de capacidade tamponante.

1 Reagentes: - gua pura ou destilada; - Soluo Tampo TRIS 0,1M pH 7,4 (pKa = 8,3); - Soluo de cido clordrico (HCl) 0,1M; - Soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 0,1M. 2 Material: - 4 Bqueres de 100ml; - Potencimetro. 3 Procedimentos: Em dois bqueres adicionar 50ml de gua pura ou destilada e nos outros dois, adicionar 50ml de soluo tampo TRIS 0,1M pH 7,4. Mergulhar o eltrodo do potencimetro nas solues contidas nos 4 bqueres e anotar os valores de pH obtidos. Em seguida adicionar a um bquer de gua pura e a um bquer de soluo tampo TRIS 0,1M pH 7,4, um mililitro de soluo de cido clordrico 0,1M. Repetir o procedimento adicionando um mililitro de soluo de hidrxido de sdio 0,1M aos outros bqueres. Mergulhar novamente o eltrodo do potencimetro nas solues contidas nos 4 bqueres e anotar os valores de pH e comparar os resultados obtidos.

Parte III Carboidratos.

- Prtica de Deteco do Amido em Diferentes Amostras.

1 Objetivo: - Identificar a presena do amido em diferentes amostras de alimentos.

2 Materiais: Frasco conta-gotas; Tintura de iodo comercial; Frascos de vidro transparente pequenos ou tubos de ensaio ou copos descartveis de caf; Pedaos, fatias ou pequenas pores de alimentos contendo amido (po, maizena, goma de mandioca, batata inglesa, inhame, macaxeira, etc). 3 Procedimento: Colocar pedaos, fatias ou pequenas pores de diferentes alimentos contendo iodo em frascos de vidro transparente pequeno ou tubos de ensaio ou copos descartveis de caf e gotejar a soluo de tintura de iodo. O aparecimento de colorao azulada revela presena do carboidrato amido na amostra.

Parte IV Enzimas.

- Ao da Enzima Amilase Salivar (Ptialina) sobre o Amido.

1 Objetivo: - Observar a hidrlise do carboidrato amido por ao cataltica da enzima amilase salivar. 2 Materiais: Frascos de vidro transparente pequenos ou tubos de ensaio ou copos descartveis de caf; Pipeta Pasteur ou conta-gotas; Tintura de iodo comercial; gua filtrada ou soro fisiolgico (cloreto de sdio 0,9%); Amido; Saliva colhido de aluno voluntrio (evitar pessoas que se alimentaram recentemente!). 3 Procedimento: Prepare trs tubos de ensaio (frascos de vidro ou copos descartveis de caf) contendo soluo de amido como substrato (dissolva aproximadamente 0,5 g de maizena em 100ml de gua) em seguida, adicione a cada um dos trs tubos (conforme apresentado na Tabela 1) 0,5ml da enzima (soluo de saliva diluda em gua na proporo 1:10), misture e incube o frasco na mo fechada durante 15 a 20 minutos com suaves agitaes casuais. Tabela 1: Substrato e respectivos reagentes a serem adicionados em cada experimento. Experimento Substrato Enzima (reagente) 1 2 ml de Soluo de Amido 0,5 ml de gua (Branco) 2 2 ml Soluo de Amido 0,5 ml de Soluo de Amilase Salivar (1:10) 3 2 ml Soluo de Amido 0,5 ml de Soluo de Amilase Salivar (1:10) Fervida Decorrido o tempo de incubao, adicionar uma ou duas gotas de tintura de iodo comercial e agitar. Observar e comparar os resultados. Parte V - Vitaminas.

- Determinao de Vitamina C em Alimentos. 1 Objetivo: O enfoque agora determinar a quantidade de vitamina C em diferentes tipos de alimentos atravs do teste do complexo iodo-amido. 2 Materiais: - 1 comprimido efervescente de 1g de Vitamina C; - tintura de iodo a 2% (comercial); - sucos de frutavariados; - 5 seringas descartveis; - 1 fonte de calor (aquecedor, lamparina); - 6 copos de vidro (ou vidros de gelia); - 1 conta-gotas; - 1 garrafa de refrigerante de 1L; - 1recipiente de vidro de 500ml (meio litro).

3 Procedimentos: A) Prepare a mistura de amido com gua do seguinte modo: aquea 200ml (mais ou menos um copo) de gua num recipiente com capacidade para meio litro. Aquea at uns 50C (mergulhando o dedo at que fique difcil deixar dentro da gua). Em seguida, adicione 1 colher de ch de amido de milho (pode ser farinha de trigo) na gua aquecida. Agite bastante at que adquira a temperatura ambiente. B) Prepare uma soluo de vitamina C. Em uma garrafa de refrigerante de 1L adicione mais ou menos meio litro de gua filtrada. A seguir adicione um comprimido de vitamina C. Agite e complete com gua at dar um litro. C) Numere 6 copos de vidro e coloque em cada um deles 20mL da mistura de (amido +gua). D) No copo 2 adicione 5mL da soluo de vitamina C. E) Nos copos 3, 4, 5 e 6 adicione 5 ml de cada suco disponvel. F) A seguir, pingue, gota a gota, a soluo de iodo no copo 1, agitando at que aparea a colorao azul. Anote o nmero de gotas. (geralmente 1 suficiente). G) Repita o procedimento nos outros copos e anote os resultados.

ANEXOS:

Montagem de um experimento de titulao

Curva de titulao do cido actico

Como funciona o tampo cido actico/acetato ?

Transformaes estruturais da molcula do aminocido glicina ao longo de sua titulao.

Experimento Vitamina C :

Como j estudamos anteriormente, se misturarmos iodo em uma mistura de (amido + gua) obteremos a cor azul intensa, pois o iodo forma um complexo com o amido.

Os qumicos testaram e descobriram que, ao misturarmos vitamina C com o complexo iodo-amido, d-se uma transformao qumica. O iodo sofre uma transformao e forma o iodeto que transparente.

Ento, quanto mais vitamina C um alimento tiver, mais rapidamente a cor azul vai desaparecendo. Ao mesmo tempo, se quisermos voltar a ter a cor azul teremos que colocar mais iodo na soluo.

Experimento Vitamina C :