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Apenas para finalidades de ensino

5. April 2016

1

DESENVOLVENDOUMA CIÊNCIA MELHOR

AGILENT E VOCÊ

Espectrometria de massas

Princípios básicos –

Teoria


5. April 2016

2

Este conjunto de slides foi criado pela Agilent apenas

para finalidades de estudo.

Caso deseje usar as imagens, esboços ou desenhos

para qualquer outra finalidade, primeiro entre em contato

com a Agilent.

A Agilent Technologies tem um

compromisso com a comunidade

educacional e está disposta

a conceder acesso ao material

de propriedade da empresa.

5. April 2016


3

Introdução

Espectrometria de massas (MS) é uma técnica química analítica que

ajuda a identificar a quantidade e o tipo de substâncias químicas presentes

em uma amostra ao medir a razão massa/carga e a abundância de íons

de fase gasosa.

Um espectro de massa é um gráfico do sinal do íon em função da razão

massa/carga. A partir dos espectros, a massa do íon molecular e dos

fragmentos são usados para determinar a composição elementar ou a

assinatura isotópica de um composto. Estas informações são usadas para

elucidar as estruturas químicas de moléculas, como pesticidas ou peptídeos.

A espectrometria de massas funciona ionizando compostos químicos

para gerar moléculas ou fragmentos de moléculas carregadas e medir

suas razões massa/carga.

Fonte: Wikipedia

5. April 2016


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IntroduçãoTecnologia vencedora do Prêmio Nobel

John Fenn e Koichi Tanaka receberam o Prêmio Nobel de Química em 2002

pelo desenvolvimento de duas tecnologias de ionização suave:

• Tecnologia eletrospray, Dr. Fenn

• Dessorção por laser suave, Dr. Tanaka

Concert Hall, Estocolmo, Suécia, dezembro de 2002 Dr. Fenn recebendo o Prêmio Nobel do Rei da Suécia

5. April 2016


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Índice (ToC)

Introdução

• Considerações básicas

• Massas em espectrometria de massas

• Etapas fundamentais

Como funciona

• Ionização

• Impacto de elétron

• Ionização química

• Considerações sobre amostra (LC-MS)

• Eletrospray

• Ionização química à pressão atmosférica

• Fotoionização à pressão atmosférica

• Ionização multimodo

• MALDI

• ICP

Como funciona

• Analisador de massa

• Quadrupolo simples

• Triplo quadrupolo

• Ion Trap

• Tempo de voo

Resultados

• Espectro de massas

• Quad. simples vs. TOF

• Íons de cargas múltiplas e deconvolução

Informações adicionais

• Webpage da Agilent para o Meio Acadêmico

• Publicações

5. April 2016


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IntroduçãoConsiderações básicas

Os elementos podem ser identificados

exclusivamente pela massa. A espectrometria

de massas é um método analítico para

medir o peso molecular ou atômico.

ToC

Fonte: Tabela periódica, pôster SI-0186

Compostos, com elementos diferentes,

podem ser diferenciados por suas massas:

Glicose C6H12O6

MW: 180.1559 g/mol

Penicilina C16H18N2O4S

MW: 334.39 g/mol

http://www.chem.agilent.com/Library/posters/Public/Agilent_Periodic_Table_Poster_SI-0186.pdf

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IntroduçãoMassas em espectrometria de massas

A média de massa de uma molécula é obtida pela soma das médias de massas

atômicas dos elementos.

Média de massa da água (H2O): 1.00794 + 1.00794 + 15.9994 = 18.01528 Da

A massa monoisotópica é a soma das massas dos átomos em uma molécula no

estado fundamental, usando a massa exata do isótopo de ocorrência natural mais

abundante de cada elemento. A massa monoisotópica geralmente é expressa em

unidades de massa atômica.

A massa exata (mais adequadamente, a massa exata medida) é estabelecida

experimentalmente e permite que a composição elementar seja determinada. Para

moléculas com massa abaixo de 200 uma (unidades de massa atômica),

a precisão de 5 ppm geralmente é suficiente para determinar de forma exclusiva

a composição elementar.

Fonte: WikipediaToC

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8

IntroduçãoEtapas fundamentaisProcedimento de MS característico:

• A amostra (sólida, líquida, gasosa) é ionizada

• As moléculas da amostra podem quebrar em

fragmentos carregados durante a ionização

• Os íons são separados de acordo com

a razão massa/carga (m/z)

• Os íons são detectados por um mecanismo

capaz de detectar partículas carregadas

(ex: multiplicador de elétrons)

• Os resultados são exibidos como espectros

da abundância relativa como uma função

de razão massa/carga

• A identificação é feita ao correlacionar

massas conhecidas com as massas

identificadas ou por meio de um padrão

de fragmentação característico

ToC

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9

Como funcionaIonização

Antes de ser analisada por espectrometria de massas a amostra deve ser ionizada

na fonte de íons.

Introdução de amostra gasosa:

• Ionização de elétrons (EI)

• Ionização química (CI)

Introdução de amostra líquida:

• Ionização eletrospray (ESI)

• Ionização química à pressão atmosférica (APCI)

• Fotoionização à pressão atmosférica (APPI)

• Ionização multimodo (MMI)

• Ionização/dessorção a laser assistida por matriz (MALDI)

• Plasma induzido acoplado (ICP)

ToC

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10

Como funcionaIonização

A polaridade dos analitos determina a fonte de ionização.

Pes

o m

ole

cula

r

Polaridade do analito

100.000

não polar muito polar10

APCI

ESI

APPI

GCMS

ESI Ionização eletrospray

APPI Fotoionização à

pressão atmosférica

APCI Ionização química

à pressão atmosférica

GC/MS Cromatografia gasosa/

Espectrometria de massas

ToC

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Como funcionaIonização – Impacto de elétrons (EI)

O Impacto de elétrons (EI) é bem conhecido e é o método de ionização mais comum

na Cromatografia Gasosa (GC).

As moléculas existentes no cromatógrafo gasoso são bombardeadas por um feixe

de elétrons (70 eV) que remove um elétron da molécula, resultando em um íon carregado.

CH3OH + 1 elétron CH3OH+ + 2e-

O EI geralmente produz íons e fragmentos de íons moleculares carregados (partes menores

das moléculas originais) que são usados para elucidar a estrutura.

CH3OH+ CH2OH+ + H ou CH3OH+ CH3+ + OH

Um elétron ou fotomultiplicador detecta os íons separados.

O espectro de massa gerado representa a intensidade do sinal em uma determinada razãomassa/carga.

Íon molecular

Íon fragmento

ToC

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Como funcionaIonização – Impacto de elétrons (EI)

A interface de GC/MS opera em altas temperaturas.

Interface EI para GC/MS. Fonte: Manual de operação do GC/MS Agilent 7000 Series triplo quadrupolo (p 46)ToC

http://www.chem.agilent.com/Library/usermanuals/Public/7000OperatingManual-en.pdf

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Como funcionaIonização – Ionização química (CI)

O EI é um processo de transferência de energia direta com energia cinética do elétron depositada

diretamente em uma molécula de analito.

A CI é um processo indireto envolvendo um agente químico intermediário. Isso é realmente

verdadeiro na ionização química positiva (PCI). Na PCI, a fonte de íons é preenchida com

um gás reagente ionizado para criar íons que reajam com o analito.

Gases reagentes usados com mais frequência: metano, iso-butano e amônia.

O gás reagente aplicado determina o comportamento de ionização e fragmentação do analito.

As principais reações do metano são:

CH4 + e- CH4+, CH3

+, CH2+ O gás reagente é ionizado pelos elétrons que entram na fonte de ionização.

CH4 + CH4+ CH5

+, CH3

CH2+ + CH4 C2H4

+ + H2

CH2+ + CH4 C2H3

+ + H2+H

CH3+ + CH4 C2H5

+ + H2

C2H3+ + CH4 C3H5

+ + H2

ToC Consulte as observações para obter mais detalhes

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Como funcionaIonização – Considerações sobre a amostra (LC/MS)

ESI

Volatilidade não exigida

Técnica preferencial para analitos termicamente instáveis

Íons formadosem solução

Pode formar íons de cargas múltiplas

APCI

Um pouco de volatilidade necessária

O analito deve ser termicamente estável

Íons formados na fase gasosa

Forma somente íons carregados isoladamente

APPI

Um pouco de volatilidade necessária

O analito deve ser termicamente estável

Íons formados na fase gasosa

Forma somente íons carregados isoladamente

Muitos compostos serão bem ionizados usando as três fontes. APCI/APPI

podem ionizar moléculas que sejam muito não polares para ionizar no ESI.ToC

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Como funcionaIonização – Considerações sobre a amostra (LC/MS)

ESI

Íons em solução ex: catecolamina, conjugados de sulfato, aminas quaternárias

Compostos que contêm heteroátomos ex: carbamatos, benzodiazepinas

Compostos que multiplicam a carga na solução ex: proteínas, peptídeos, oligonucleotídeos

APCI

Compostos de MW e polaridade intermediárias ex: PAHs, PCBs, ácidos graxos, ftalatos, álcoois


Compostos que são muito não polares para resposta de ESI

APPI

Compostos de MW e polaridade intermediárias ex: PAHs, PCBs, ácidos graxos, ftalatos, álcoois


Compostos que são muito não polares para resposta de ESI

ToC

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Como funcionaIonização – Eletrospray (ESI)

A ionização eletrospray (ESI) é uma técnica de

ionização suave.

O eluente de LC é pulverizado (nebulizado) em uma

câmara de nebulização a pressão atmosférica na

presença de um campo eletrostático e um gás de

secagem aquecido. O campo eletrostático ocorre

entre o nebulizador, que está no chão neste design

e o capilar, que está em alta tensão.

Moléculas adequadas:

• Pequenas moléculas (glicose) e biomoléculas

grandes (proteínas, oligonucleotídeos)

A carga múltipla é o fenômeno do ESI que permite

a análise de grandes moléculas (-> Deconvolução)

Fonte de íons eletrospray

Fonte: Guias de conceito de LC/MS (p 22)ToC

http://www.chem.agilent.com/Library/usermanuals/Public/G1960-90083_6100_Concepts.pdf

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17

Como funcionaIonização – Processo de ESI

De gotículas carregadas a íons de analito

O nebulizador produz um tamanho de gotícula uniforme.

As gotículas carregadas são atraídas em direção ao

capilar dielétrico. O fluxo de nitrogênio aquecido ao

redor do capilar diminui as gotículas. Esse processo

é chamado de dessolvatação.

As gotículas continuam diminuindo de tamanho

até que as forças eletrostáticas repulsivas (Lei de

Coulomb) excedam as forças de coesão da gotícula,

fazendo com que explodam.

Este processo se repete até que os íons do analito são

finalmente dessorvidos na fase gasosa, determinados

pelos campos elétricos fortes na superfície das

microgotículas. Este processo é chamado de

evaporação de íons.

ToC

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18

Como funcionaIonização – Ionização química à pressão atmosférica (APCI)

A APCI é um processo de ionização química

de fase gasosa. Portanto, o analito deve estar

na fase gasosa para a ionização.

O eluente de LC passa por uma agulha

de nebulização, que cria uma névoa fina.

As gotículas são completamente vaporizadas

em um tubo de cerâmica aquecido (~ 400 a 500°C).


• Moléculas ˂ 1.500 u

• Menos compostos polares e não polares

(geralmente analisados por cromatografia

de fase normal)

Fonte de ionização química à pressão atmosférica



5. April 2016


19

Como funcionaIonização – Processo de APCI

Isto demonstra os processos de evaporação

e ionização de APCI.

Observe que o analito não é ionizado até

depois da evaporação e após o gás reagente

ser ionizado.

O gás reagente então transfere uma carga

para o analito.

Geralmente, a APCI gera apenas íons

carregados unicamente, no entanto, é possível

obter íons carregados duplamente onde

os locais da carga são mantidos distantes

(geralmente por uma região hidrofóbica).

Consulte as observações para obter mais detalhesToC

5. April 2016


20

Como funcionaIonização – Fotoionização à pressão atmosférica (APPI)

Com a técnica de APPI, o eluente de LC passa por

uma agulha de nebulização para criar uma névoa fina.

As gotículas são completamente vaporizadas em um

tubo de cerâmica aquecido.

A mistura de gás/vapor passa por uma luz ultravioleta

de uma lâmpada de criptônio para ionizar as moléculas

da amostra. Os íons da amostra são introduzidos

no capilar.

A APPI é aplicável a muitos compostos semelhantes

que são geralmente analisados pela APCI. Foi

comprovado que a APPI é principalmente vantajosa

para analisar compostos não polares aromáticos.

Fonte de fotoionização à pressão atmosférica



5. April 2016


21

Como funcionaIonização – Processo de APPI

Isto demonstra os processos de evaporação

e ionização de fotoionização.

A APPI e a APCI são semelhantes, com a APPI

substituindo uma lâmpada para a agulha corona para

ionização. A APPI geralmente usa um outro solvente

ou modificador de fase móvel, chamado de "agente

dopante" (D), para auxiliar o processo de ionização.

APPI direta:

APPI dopante:

SHMSHM

eMhM

DMMD

DHMMD

eDhD

Consulte as observações para obter mais detalhesToC

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Como funcionaIonização – Ionização multimodo (MMI)

A fonte multimodo é uma fonte de íons

que pode operar em três modos diferentes:

• APCI

• ESI

• APCI/ESI simultâneo

Incorpora duas zonas otimizadas separadas

eletricamente – uma para ESI e uma para APCI.

Durante a APCI/ESI simultânea, os íons de ambos

os modos de ionização entram no capilar e são

analisados simultaneamente pelo espectrômetro

de massas.

A MMI é útil para analisar desconhecidos

ou sempre que a amostra tiver uma mistura de

compostos em que alguns respondem pelo ESI

e outros pela APCI.

Fonte multimodo



5. April 2016


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Como funcionaIonização – Ionização/dessorção a laser assistida por matriz (MALDI)

A ionização/dessorção a laser assistida por matriz (MALDI) é uma técnica de ionização suave.

A amostra é misturada com uma matriz em uma placa de metal.

Um laser pulsado irradia a amostra, desencadeando a ablação e a dessorção.

As moléculas do analito são ionizadas na coluna de fumaça quente dos gases ablacionados.

Os íons são acelerados no espectrômetro de massas.


• Biomoléculas (DNA, proteínas, açúcares)

• Grandes moléculas orgânicas (polímeros)

ToC

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24

Como funcionaIonização – Plasma induzido acoplado (ICP)

Um instrumento de plasma induzido acoplado

(ICP) usa uma fonte de plasma na qual a energia

é fornecida por correntes elétricas que são

produzidas pela indução eletromagnética, ou seja,

por campos magnéticos de tempo variável.

O plasma é tão energético que

reduz as moléculas a elementos ionizados.

Há tipos distintos de geometrias de ICP

disponíveis que podem ser

acopladas a tecnologias diferentes:

• ICP-AES Espectroscopia de emissão atômica

• ICP-OES Espectroscopia de emissão óptica

• ICP-MS Espectrometria de massas

• ICP-RIE Gravura de íon reativo

Fonte: Wikipedia

O diagrama esquemático mostra as inter-relações dos

vários componentes em um sistema de ICP-MS hifenado

Fonte: Manual de aplicação de ICP-MS hifenado

ToC

http://www.chem.agilent.com/Library/applications/5990-9473EN_icpmsSpeciationHB_lr.pdf

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25

Como funcionaAnalisador de massa

Após a ionização e o transporte de íons, os analitos entram no analisador de massa.

O espectrômetro de massas mede os sinais de íon resultantes em um espectro de

massas, que pode fornecer informações importantes sobre o peso

molecular, estrutura, identidade e quantidade de um composto.

Há diversos tipos de analisadores de massas:

• Quadrupolo simples (SQ)

• Triplo quadrupolo (QQQ)

• Tempo de voo (TOF)

• Ion Trap (IT)

ToC

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26

Como funcionaAnalisador de massa – Quadrupolo simples (SQ)

Íons carregados gerados na fonte de

íons entram no analisador de massa.

O analisador de massa quadrupolo faz

uma varredura sequencial, de modo que

apenas uma única m/z de íon possa

passar de uma vez. Todos os outros

íons são perdidos.

m/z - razão massa/carga:

Massa de um íon (Daltons ou u.m.a.)

dividida pelo número de cargas no íon

Informações recebidas: Apenas MS

Modelo conceitual – Quadrupolo simples

ToC

Modelo conceitual – Quadrupolo simples

5. April 2016


27

Monitoramento de íon simples (SIM) Modo de varredura

Como funcionaAnalisador de massa – Quadrupolo simples (SQ)

Um íon alvo com m/z específica é monitorado.

O SIM em um quadrupolo simples permite

a melhor sensibilidade para quantificação,

no entanto não oferece especificidade.

O analisador de massa está configurado para

permitir que apenas íons de

m/z única passem

para o detector

No modo de MS de varredura, o analisador de

massa quadrupolo faz a varredura sequencial,

permitindo que apenas 1 m/z de cada vez

passe para o detector.

ToC

5. April 2016


28

Como funcionaAnalisador de massa – Triplo quadrupolo (QQQ)

Íons carregados gerados na fonte de íonsentram no analisador de massa.

O analisador consiste em três quadrupolos(Q1-Q3) e diversos modos de operaçãoresultam em diferentes informações.

A seguir é apresentada uma configuraçãosimples:

• Q1: usado como um filtro para m/z específica

(íon precursor)

• Q2: usado como cela de colisão para

fragmentar o íon precursor e gerar íons

de produto

• Q3: configurado para m/z específica

(SRM ou MRM)

ou modo de varredura (varredura de íon

de produto)

Informações recebidas: MS e MS/MS

Modelo conceitual – Triplo quadrupolo

O esquema exibe o modo de SRM

ToC

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29

Monitoramento de reações múltiplas (MRM) Modo de MS/MS de varredura completa

Como funcionaAnalisador de massa – Triplo quadrupolo (QQQ)

Íons precursores com m/z única passam pela cela

de colisão. Íons fragmento são gerados por

colisão com moléculas de argônio. O Q3 está

configurado para m/z única de íon fragmento

específico. Este método é muito sensível e usado

para quantificação.

A diferença do modo de varredura completa em

relação ao SRM/MRM na função de varredura.

O Q3 faz a varredura sequencial, permitindo que

apenas 1 m/z de cada vez passe para o detector.

Um espectro de íon de produto é gerado. Este

modo de operação é menos sensível em relação ao

SRM/MRM.

Cela de colisão com

gás argônio.

ToC

5. April 2016


30

Como funcionaAnalisador de massa – Ion trap (IT)

Íons carregados gerados na fonte de íons

entram no analisador de massa. Todos os íons

da polaridade selecionada na faixa de massa

podem ser armazenados ao mesmo tempo

no trap. Os íons podem ser manipulados

no analisador de massa ion trap – realizando

diversos estágios de isolamento e

fragmentação – até o momento da detecção.

Em vez de quatro hastes paralelas, o ion trap

consiste em um eletrodo de anel circular mais

dois end caps que formam um "trap".

Informações recebidas: MS e MS/MS

Modelo conceitual – Ion trap

ToC

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31

Etapa 1: Isolamento do íon precursor Etapa 2: Fragmentação do íon precursor

Como funcionaAnalisador de massa – Ion trap (IT)

Assim que a injeção e o acúmulo de íons forem

concluídos, a porta de íons se fecha e os íons

não são mais injetados no analisador de massa.

Formas de onda são aplicadas para expelir

massas acima e abaixo do íon precursor.

A ressonância de excitação do íon precursor

causa a dissociação induzida por colisão (CID)

e íons de produto são gerados. Os íons de

produto de varredura completa são expelidos

para o detector (b).

a

ToC

a

b

5. April 2016


32

Como funcionaAnalisador de massa – Tempo de voo (TOF)

Íons carregados gerados na fonte de íons

entram no analisador de massa.

Componentes do analisador:

• Filtro de massa (Q1), opcional

• Tubo de voo

• Cela de colisão (Q-TOF)

Depois de passar o quadrupolo ou a cela de

colisão os íons chegam no pulsador de íons.

Um pulso de alta tensão é aplicado e acelera

os íons no tubo de voo. Um espelho de íons

no fim do tubo reflete os íons e os envia para

o detector, que registra o momento de chegada.

Informações recebidas:

TOF: Apenas MS

Q-TOF: MS e MS/MS

Esquema do espectrômetro de massas de tempo de voo

Fonte: Espectrometria de massa de TOF

O gráfico mostra um Q-TOF

ToC

http://www.chem.agilent.com/Library/technicaloverviews/Public/5990-9207EN.pdf

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33


O tempo de voo (t) para cada massa é único e é determinado pela energia (E) à qual

um íon é acelerado, a distância (d) que deve ser percorrida e a m/z.

A equação diz que para uma determinada energia cinética, E, massas menores terão

velocidades maiores do que massas maiores. Íons com massas menores chegam

antes ao detector.

A velocidade é determinada (e consequentemente a massa) ao medir o tempo que

um íon demora para atingir o detector.

Cela de colisão com

gás argônio.

b

22/1 mvE a qual é resolvida para m parece:

2/2 vEm a qual é resolvida para v parece:

)/2( mEv equação 1

ToC

5. April 2016


34


A segunda equação é a velocidade (v) conhecida igual a distância (d)

dividida pelo tempo (t):

A combinação das equações 1 e 2 produz:

Para uma determinada energia (E) e distância, a massa é proporcional ao quadrado

do tempo de voo do íon. E e d são mantidas constantes e resumidas na variável A

que gera uma equação simplificada:

Para ser bem preciso, um atraso de tempo para aplicar a alta tensão também

deve ser considerado:

Isso resulta na equação final:

tdv /

22)/2( tdEm

2tAm

0ttt m

2

0)( ttAm m

ToC

5. April 2016


35

ResultadosExemplo 1

Espectro de massas de

sulfametazina analisado

com um analisador de massa

de quadrupolo simples

Fórmula molecular: C12H14N4O2S

[M+H]+: 279,33

Espectro de massas de sulfametazina.

Fonte: G1960-90083 (p. 17)

ToC

279,1

280,0

281,0

301,0

http://www.chemspider.com/Chemical-Structure.5136.html?rid=ce620523-5958-41b0-96b5-0221f70acdde


5. April 2016


36

ResultadosExemplo 2

Espectro de massas

de cocaetileno com um

analisador de massa Q-TOF

Fórmula molecular: C18H23NO4

[M+H]+: 318,387

Espectro de massas de cocaetileno.

Fonte: Uma comparação de diversas técnicas

de LC/MS para uso em toxicologia (Fig. 36)

ToC

http://www.chemspider.com/Chemical-Structure.559082.html

http://www.chem.agilent.com/Library/applications/5990-3450EN.pdf

5. April 2016


37

ResultadosQuad simples vs. TOF de alta resolução

A análise com um quadrupolo simples (triplo)

oferece informações de massa nominal (baixo

poder de resolução); instrumentos de tempo de

voo podem oferecer informações de massa exata

(alto poder de resolução).

A calibração contínua de um sistema TOF é

necessária para a análise de tempo de voo para

garantir a melhor exatidão de massa possível.

As medições geralmente desviam apenas algumas

partes por milhão (ppm).

Com resolução de massa e exatidão de massa

suficientes, um espectrômetro de massas TOF pode

confirmar positivamente a composição elementar.

Poder de resolução de um quadrupolo simples (a) em relação ao

Tempo de voo (b) Fonte: 5989-2549EN (material em inglês) (p. 14)

ToC

Ab

un

dâ

nc

iaA

bu

nd

ân

cia

Poder de resolução baixo

Massa alvo

Interferência

Massa alvo

Interferência

Poder de resolução alvo

Massa


5. April 2016


38

ResultadosQuad simples vs. TOF

Espectro de massas de quadrupolo

simples típico

Espectro de massas de sulfaclorpiridazina com aduto e íons

fragmento. Fonte: 5989-2549EN (material em inglês) (p. 25)

Espectro de massas de TOF típico

Espectro de massas de sulfametazina.

Fonte: G1960-90083 (p. 17)

ToC

279,1

280,0

281,0 301,0

156,0116

,0242

,0027

,0000

,0207

Contagens máx. 48e4

+TOF MS: Experimento 2, 0,932 para 1,007 min de sulfa 284 a.wiff Agilent



5. April 2016


39

ResultadosÍons de cargas múltiplas e deconvolução

Dependendo da molécula analisada e da técnica de ionização, íons de cargas múltiplas podem

ser gerados.

Pequenas moléculas e APCI oferecem moléculas carregadas uma única vez:

A m/z medida corresponde ao peso molecular após a subtração (íon positivo) ou adição

(íon negativo) do transportador de carga.

Para moléculas grandes (peptídeos, proteínas) ionizadas com ESI, mais de um possível local

de carga (para protonação ou desprotonação) está disponível e pode resultar em íons de

cargas múltiplas:

Isso torna moléculas grandes, como anticorpos, (> 1 Mio Da) acessíveis para a

espectrometria de massas, visto que os íons medidos passam a ter um intervalo de m/z

mais facilmente medido.

Um algoritmo matemático é necessário para determinar o peso molecular real da m/z medida.

Esse processo é conhecido como deconvolução.

ToC

5. April 2016


40

ResultadosÍons de cargas múltiplas e deconvolução – Exemplo

Espectro de massas de sintetase de glutamina expressa.

Fonte: LC/TOF-MS de massa exata para confirmação de peso molecular de proteínas intactas (Fig 1, p 4)

Espectro de massas deconvoluído de sintetase

de glutamina expressa.

Massa esperada de sintetase de glutamina não modificada:

51.772,7 u

ToC

Abu

ndân

cia

Razão massa/carga (m/z)

Abu

ndân

cia

Razão massa/carga (m/z)A

bund

ânci

a

922,01

977,87

996,67

1016,17

1102,58

1126,52

1117,6

1205,06

1057,61

1233,73

1263,80

1295,38

1328,53

1363,47

1400,31

1439,18

1480,25

1177,68

Massa (u)

51772,87


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Abreviações

Abreviação Definição

APCI Ionização química à pressão atmosférica

APPI Fotoionização à pressão atmosférica

CI Ionização química

D Dopante (APPI)

Da Dalton

EI Impacto de elétron

ESI Ionização eletrospray

GC Cromatografia gasosa

GC/MSEspectrometria de massas por cromatografia

gasosa

ICP Plasma induzido acoplado

IT Ion Trap

LC/MSEspectrometria de massas por cromatografia

líquida

Abreviação Definição

M Íon molecular

MALDIIonização por dessorção de laser assistida

pela matriz

MMI Ionização multimodo

MS Espectrometria de massas

m/z Razão massa/carga

QQQ Triplo quadrupolo

SIM Monitoramento de íon simples

SH Moléculas de solvente

SQ Quadrupolo simples

MRM Monitoramento de reações múltiplas

SRM Monitoramento de reação selecionada

(Q) - TOF Tempo de voo

ToC

5. April 2016


42

Informações adicionaisPara obter mais informações sobre os produtos Agilent, acesse www.agilent.com ou

www.agilent.com/chem/academia

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Publicação Título No. da pub.

Manual Manual de operação do GC/MS Agilent 7000 Series triplo quadrupolo G7000-90044

Guia Sistema LC/MS quadrupolo Agilent 6100 Series – Guia de conceitos G1960-90083

Compêndiode aplicação

Soluções de tempo de voo no desenvolvimento farmacêutico – o potencial da massa exata

5989-2549EN (material em inglês)

Descrição técnica Tempo de voo Espectrometria de massasG5990-9207EN (material em inglês)

AplicaçãoLC/TOF-MS de massa exata para confirmação de peso molecular de proteínas intactas

5989-7406EN (material em inglês)

Aplicação Uma comparação de diversas técnicas de LC/MS para uso em toxicologia5990-3450EN (material em inglês)

Vídeos www.agilent.com/chem/teachingresources

Imagens www.agilent.com/chem/teachingresources

ToC

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http://www.chem.agilent.com/Library/usermanuals/Public/7000OperatingManual-en.pdf



http://www.chem.agilent.com/Library/technicaloverviews/Public/5990-9207EN.pdf



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April 5, 2016

43

OBRIGADO

Número da publicação: 5991-5857PTBR

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