CETIS 62

PRACTICA No.6

IDENTIFICACION DE PROTEINAS

LILIANA MARGARITA ALMANZA LOPEZ

6° E LABORATORIO CLINICO

OBJETIVO: Realizar experimentos para identificar las proteínas, como la configuración y la identificación por el reactivo BIURET.

MARCO TEORICO:

Las proteínas  son biomoleculas formadas por cadenas lineales de aminoácidos.

Por sus propiedades físico-químicas, las proteínas se pueden clasificar en proteínas simples (holoproteidos), formadas solo por aminoácidos o sus derivados; proteínas conjugadas (heteroproteidos), formadas por aminoácidos acompañados de sustancias diversas, y proteínas derivadas, sustancias formadas por desnaturalización y desdoblamiento de las anteriores. Las proteínas son necesarias para la vida, sobre todo por su función plástica (constituyen el 80 % del protoplasma deshidratado de toda célula), pero también por sus funciones biorreguladoras (forman parte de las enzimas) y de defensa (los anticuerpos son proteínas).

Las proteínas desempeñan un papel fundamental para la vida y son las biomoléculas más versátiles y diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo y realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan:

Contráctil (actina y miosina)

Enzimática  (Ej.: sacarasa y pepsina)

Estructural. Esta es la función más importante de una proteína (Ej.: colágeno)

Homeostática: colaboran en el mantenimiento del pH (ya que actúan como un tampón químico)

Inmunológica (anticuerpos)

Producción de costras (Ej.: fibrina)

Protectora o defensiva (Ej.: trombina y fibrinógeno)

Transducción de señales (Ej.: rodopsina).

Las proteínas están formadas por aminoácidos. Las proteínas de todos los seres vivos están determinadas mayoritariamente por su genética (con excepción de algunospéptidos antimicrobianos de síntesis no ribosomal), es decir, la información genética determina en gran medida qué proteínas tiene una célula, un tejido y un organismo.

Las proteínas se sintetizan dependiendo de cómo se encuentren regulados los genes que las codifican. Por lo tanto, son susceptibles a señales o factores externos. El conjunto de las proteínas expresadas en una circunstancia determinada es denominado proteoma.

REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)

MATERIAL

1 gradilla pescado, espinaca, levadura,

Tubos de ensaye Albúmina, grenetina y caseína

REACTIVOS

NaOH al 10%Sulfato cúprico al 1% en gotero

proteína Gota a la que se coloreoEspinaca No tomo colorAlbumina 3Levadura 5Caseína 5Pescado 2grenetina 7

Observaciones: algunas proteínas no son de fácil dilución como las espinacas y el pescado que se tienen que diluir de 25-1

PROCEDIMIENTO1. En cada tubo de ensaye colocar 2ml de solución de proteína (diluida al 1%).2. Añadir a cada tubo 2ml de NaOH al 10% y agitar.3. Agregar gota a gota solución de sulfato cúprico al 1% hasta la aparición de

un color rosa o violeta (máximo 10 gotas). 4. Reportar a que gota aparece el color.

REACCION XANTOPROTEICA

MATERIAL REACTIVOS

Tubos de ensaye proteínas Gradilla NaOH concentrado (gotero)Baño maría HNO3 concentrado

PROCEDIMIENTO1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína.2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado.3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a él

vire de color. Observar y reportar resultados.

proteína Gotaspescado 7grenetina 10levadura 10albumina 8espinaca No cambia de colorCaseína de la leche 9

COAGULACION POR CALOR

MATERIAL REACTIVOS

16 Tubos de ensaye Acido acético al 1%Gradilla Acetona Baño maría Éter

Tetracloruro de carbono Butanol

Proteínas NaOH concentrado con

gotero

PROCEDIMIENTO1. Calentar a hervir 5ml de solución de proteína 2. Añadir 2 gotas de acido acético al 1% 3. Colocar en 4 tubos, la solución repartida por igual y agregar de la siguiente

manera: Tubo1= 1ml acetona Tubo2= 1ml de éter

Tubo3= 1ml de butanolTubo4= 1ml tolueno

4. Agitar fuertemente para tratar de disolver el coagulo. Reportar en tabla.5. Los tubos que no disolvieron el coagulo, agregar 3 gotas de NaOH

concentrado, y agitar.6. Observar y anotar diferencias.

resultados acetona éter butanol ToluenoAlbumina insoluble insoluble insoluble insolubleEspinaca soluble soluble insoluble insolubleGrenetina soluble soluble insoluble insolubleCaseína soluble soluble soluble insolublePescado soluble soluble soluble insolubleLevadura soluble soluble soluble insoluble

OBTENCION DE CASEINA DE LA LECHE

MATERIAL REACTIVOS2 vasos de precipitados de 250ml leche entera1 probeta de 100ml HCl 0.2N 1 embudo acetona 2 papel filtro éter

PROCEDIMIENTO1. Colocar 100ml de leche en un vaso de precipitado 2. Agregar 100ml de agua destilada3. Con una pipeta añadir HCl 0.2N hasta obtener un pH de 4.84. Dejar reposar hasta que el sedimento precipite.5. Suspender el precipitado en 100ml de agua destilada y dejar reposar.6. Repetir este lavado 4 veces.7. Filtrar el precipitado final en un embudo Buchner, colectando en el papel la

proteína.8. Suspender la caseína en 25ml de agua destilada, agitar para homogeneizar

y filtrar. Repetir 4 veces.9. Después del último lavado, suspender la proteína en 5ml de éter y 5ml de

acetona, y filtrar.

10.Colocar el polvo obtenido en un desecador con cloruro de calcio y pesar el polvo 24 horas después.

CUESTIONARIO

1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de las PROTEINAS?En la solidificación o separación de sustancias con proteínas

2. ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?Los ácidos son lo que tienen mayor poder de desnaturalizar sustancias y lo hacen en un tiempo corto

3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?Haciendo pruebas como la de biuret que nos ayuda a determinar concentraciones proteicas

4. Que coloración da la reacción del Biuret?Morado violentado

5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?Sí, porque al desnaturalizarse una proteína, esta cambia su estructura pero no se rompen los enlaces que la conforman lo que hace esta prueba es romper los enlaces peptídicos para comprobar la presencia de proteínas

6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué?No, porque se necesita tener una cadena de aminoácidos con almenas un enlace peptídico para que la prueba de positiva. La Glicina no está unida con otro aminoácido por lo tanto la dará negativa

7. Explica la reacción Xantoproteíca.Es un método que se puede utilizar para determinar la cantidad de proteína soluble en una solución, empleando ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali vira a un color amarillo oscuro

CONCLUSIONES:

Las proteínas son materiales polímeros que se encuentran en las células vivientes. Sirven como materiales estructurales en el cuerpo y son fundamentales para muchos procesos vitales. Las proteínas son polímeros de aminoácidos y se producen en las células del cuerpo. Las proteínas de otros animales y de algunas plantas son un alimento importante, ya que proporcionan los aminoácidos que son esenciales para el cuerpo en la producción de las proteínas necesarias