Prat 5 inibidores
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UFMS/CCBS - Departamento de Morfofisiologia AULA PRÁTICA Enzima Invertase/ e ação de inibidores Profª Drª Fabiana Fonseca Zanoelo Fundamentação Teórica As reações químicas conduzidas pelos organismos vivos são, na sua grande maioria, catalisadas enzimaticamente, tornando a velocidade das mesmas compatíveis com as exigências metabólicas. As si m a le vedur a (Sacchar omyces cerevi siae) , por int ermédi o da "inver tas e" hid rol isa a sacarose result and o numa mi stura equi mole cul ar de gl ic ose e fr utose, açúca re s es ses que sã o abs orvidos pel a cél ula. A membrana pla smá ti ca é impermeáve l à sacarose, e a levedura acaba excretando a invertase (sendo, pois, uma exoenzima) para a hidrólise ocorrer fora da célula de levedura. Ensaio enzimático Em 14 tubos de ensaio (para a primeira reação e 14 para a segunda), enumerados de 0 a 5 (2x), pipetar os volumes (em mL) das soluções conforme indica o quadro que se segue: SEM INIBIDOR TUBO (N O ) SACAROSE 30mM (mL) ÁGUA INVERTASE DILUÍDA (mL) 0 0,0 2,0 0,5 1 0,4 1,6 0,5 2 0,8 1,2 0,5 3 1,2 0,8 0,5 4 1,6 0,4 0,5 5 2,0 0,0 0,5 COM INIBIDOR TUBO (N O ) SACAROSE 30mM (mL) ÁGUA (mL) INIBIDOR (mL) INVERTASE DILUÍDA (mL) 0 0,0 2,0 0,05 0,5 1 0,4 1,6 0,05 0,5 2 0,8 1,2 0,05 0,5 3 1,2 0,8 0,05 0,5 4 1,6 0,4 0,05 0,5 5 2,0 0,0 0,05 0,5 • Incubar todos os tubos a 37 o C, por 15 minutos. • Retirar 0,2mL e adicionar no tubo com 0,2mL de DNS. • Ferver por 5 minutos. • Adicionar 2mL de água destilada. • Agitar e fazer leitura em 540 nm. Sacarose Invertase Glicose Frutose
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5/11/2018 Prat 5 inibidores - slidepdf.com
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UFMS/CCBS - Departamento de MorfofisiologiaAULA PRÁTICA
Enzima Invertase/ e ação de inibidoresProfª Drª Fabiana Fonseca Zanoelo
Fundamentação TeóricaAs reações químicas conduzidas pelos organismos vivos são, na sua grande maioria, catalisadas
enzimaticamente, tornando a velocidade das mesmas compatíveis com as exigências metabólicas.
Assim a levedura (Saccharomyces cerevisiae), por intermédio da "invertase" hidrolisa a
sacarose resultando numa mistura equimolecular de glicose e frutose, açúcares esses que sãoabsorvidos pela célula. A membrana plasmática é impermeável à sacarose, e a levedura acaba
excretando a invertase (sendo, pois, uma exoenzima) para a hidrólise ocorrer fora da célula de levedura.
Ensaio enzimáticoEm 14 tubos de ensaio (para a primeira reação e 14 para a segunda), enumerados de 0 a 5 (2x), pipetar os
volumes (em mL) das soluções conforme indica o quadro que se segue:
SEM INIBIDOR TUBO
(NO)SACAROSE30mM (mL)
ÁGUA INVERTASEDILUÍDA (mL)
0 0,0 2,0 0,51 0,4 1,6 0,5
2 0,8 1,2 0,53 1,2 0,8 0,54 1,6 0,4 0,55 2,0 0,0 0,5
COM INIBIDOR TUBO
(NO)SACAROSE30mM (mL)
ÁGUA(mL)
INIBIDOR (mL)
INVERTASEDILUÍDA (mL)
0 0,0 2,0 0,05 0,51 0,4 1,6 0,05 0,52 0,8 1,2 0,05 0,5
3 1,2 0,8 0,05 0,54 1,6 0,4 0,05 0,55 2,0 0,0 0,05 0,5
• Incubar todos os tubos a 37oC, por 15 minutos.
• Retirar 0,2mL e adicionar no tubo com 0,2mL de DNS.
• Ferver por 5 minutos.
• Adicionar 2mL de água destilada.
• Agitar e fazer leitura em 540 nm.
Sacarose
Invertase
Glicose Frutose
5/11/2018 Prat 5 inibidores - slidepdf.com
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