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UNIVERSIDADE DO OESTE PAULISTA MESTRADO EM CIÊNCIAS

PROJETO DE PESQUISA

Citocinas inflamatórias no soro materno e lavado vaginal em gestações de

Alto Risco e relação com resultados obstétricos

LUCIANA VASCONCELOS DE JESUS SOUZA

Orientador: Profa. Dra. Jossimara Polettini

Universidade do Oeste Paulista, UNOESTE

Co-orientador: Profa. Dra. Glilciane Morceli


Pesquisadores colaboradores:

Dr. Fernando Augusto Barreiros


Denise Vasconcelos de Jesus Ferrari


Discentes:

Leticia Aguiar de Campos


Presidente Prudente – SP 2017

UNIVERSIDADE DO OESTE PAULISTA MESTRADO EM CIÊNCIAS

Citocinas inflamatórias no soro materno e lavado vaginal em gestações de

Alto Risco e relação com resultados obstétricos

LUCIANA VASCONCELOS DE JESUS SOUZA

Pesquisador responsável: Profa. Dra. Jossimara Polettini

Pesquisadores colaboradores:

Profa. Dra. Glilciane Morceli

Dr. Fernando Augusto Barreiros

Denise Vasconcelos de Jesus Ferrari

Leticia Aguiar de Campos

Projeto de Pesquisa apresentado ao Comitê Assessor de Pesquisa Institucional da Universidade do Oeste Paulista – Unoeste.

Presidente Prudente – SP

2017

SUMÁRIO

1_Resumo __________________________________________________ 01

2_Introdução e Justificativa____________________________________ 02

3_Objetivos_________________________________________________ 05

4_Casuística e métodos_______________________________________ 06

5_Referências_______________________________________________ 10

6_Anexos __________________________________________________ 13

Citocinas inflamatórias e resultados obstétricos em gestações de Alto Risco 1

1. RESUMO

Introdução: As gestações de alto risco são aquelas nas quais condições maternas

prévias e adquiridas na gestação podem aumentar os riscos de adversidades gestacionais

com consequentes morbidades maternas e perinatais, e os principais fatores associados são

os antecedentes obstétricos como aborto, restrição de crescimento fetal, diabetes,

eclâmpsia/eclâmpsia e prematuridade. Além disso, infecções do trato genital Inferior podem

gerar mediadores inflamatórios que contribuem para o desencadeamento das adversidades

gestacionais, no entanto, ainda não existem marcadores específicos para prevenir as

intercorrências gestacionais decorrentes. Objetivos: O objetivo do presente estudo será

caracterizar gestações de alto risco em relação a gestações sem intercorrências quanto aos

aspectos sociodemográficos e obstétricos e relacionar o desfecho gestacional com a

presença de mediadores inflamatórios no soro materno e lavado vaginal e infecção vaginal.

Material e métodos: Trata-se de um estudo prospectivo transversal, no qual serão incluídas

gestantes atendidas no Ambulatório de Alto Risco do Hospital Regional (HR) de Presidente

Prudente no período de agosto de 2017 a julho de 2018. Gestantes que não apresentem

fatores associados ao Alto Risco, atendidas em Estratégias de Saúda da Família de

Presidente Prudente, serão incluídas como grupo controle, pareadas à idade gestacional de

cada amostra de Alto Risco. Os dados pessoais, comportamentais, de antecedentes

obstétricos, familiares e da gestação atual serão coletados no momento da consulta

obstétrica, seguindo protocolo estabelecido para o presente estudo. Os dados referentes aos

desfechos gestacionais serão coletados pela análise dos prontuários médicos. Coleta de

sangue periférico materno, conteúdo e lavado vaginal serão coletados no momento da

primeira consulta obstétrica. O sangue coletado será imediatamente centrifugado e o soro

isolado, assim como o lavado vaginal serão acondicionados a -80ºC até o momento das

dosagens de citocinas inflamatórias, interleucina (IL)-1β, IL-6, IL-8 e fator de necrose tumoral

(TNF)-α, pela técnica de ELISA. As amostras de conteúdo vaginal serão utilizadas para

confecção de lâminas que serão coradas pela técnica de Gram e analisadas pelo exame

microscópico para identificação do padrão de microbiota vaginal. Todas as gestantes serão

informadas quanto à finalidade da pesquisa e assinarão o termo de consentimento livre e

esclarecido. Os dados demográficos e obstétricos, bem como o perfil dos mediadores

inflamatórios e a presença de infecção vaginal serão relacionados ao desfecho gestacional

observado. A análise estatística será realizada de acordo com os pressupostos determinados

pelos resultados e o nível de significância adotado será de 5%.

Palavras-chave: Gestação, complicações gestacionais, morbidade materna


2. INTRODUÇÃO

A duração da gestação considerada normal em humanos compreende o período

médio de 37 a 40 semanas de gestação (a partir da data da última menstruação), quando

acredita-se que o feto esteja em pleno desenvolvimento fisiológico, incluindo a maturação dos

órgãos e tecidos, e caracteriza a gestação a termo. A sinalização clássica desse momento

envolve os sistemas endócrino e imune maternos, além de mudanças na cavidade

intrauterina diretamente relacionadas com o crescimento e desenvolvimento fetal 1–3. Apesar

dos avanços nas pesquisas nessa área, a fisiopatologia da gestação não está completamente

elucidada 4,5 e muitas intercorrências são observadas principalmente em decorrência do

desbalanço dos sistemas citados.

As gestações de Alto Risco são definidas como “aquelas nas quais a vida ou a saúde

da mãe e/ou do feto e/ou do recém-nascido tem maiores chances de serem atingidas que as

da média da população considerada” 6. Tais condições clínicas diferem do fenômeno

fisiológico, que ocorre sem complicações na maioria dos casos 3, uma vez que podem levar

a agravos como desvio quanto ao crescimento uterino, alteração do volume de líquido

amniótico, desenvolvimento de diabetes gestacional, índice ponderal inadequado,

hemorragias da gestação, insuficiência istmo-cervical, trabalho de parto prematuro, gravidez

prolongada, amniorrexe prematura, pré-eclâmpsia e eclâmpsia, além de óbito fetal 6.

Tais contextos aumentam o risco de morbidade e mortalidade neonatal, bem como o

aumento do tempo de hospitalização neonatal em unidade de terapia intensiva 7.

Epidemiologicamente, as gestações de alto risco são associadas a condições

sociodemográficas desfavoráveis, baixa escolaridade, exposição e consumo de agentes

tóxicos e teratogênicos, hábitos tabagista, etilismo, e também com idade materna menor que

15 e maior que 35 anos 8. Ainda, antecedentes obstétricos como aborto, cirurgia uterina,

esterilidade, infertilidade, restrição de crescimento fetal, pré-eclâmpsia/eclâmpsia,

prematuridade e síndromes hemorrágicas aumentam os riscos de complicações na gestação

atual 9.


Além de gestações múltiplas e de gestações com alteração no volume do líquido

amniótico, o Diabetes Mellitus Gestacional (DMG) ou DM prévio à gestação (DM1 e DM2) são

complicações frequentes, com importantes repercussões materno-fetais a curto e longo

prazo, incluindo o aumento do número de cesáreas, maior número de episódios de

hipoglicemia neonatal e maior ocorrência de macrossomia, além de síndrome do desconforto

respiratório e/ou prematuridade, aumentado o risco de morte perinatal 10,11.

As doenças hipertensivas representam aproximadamente 30% das gestações de alto

risco 12, sendo a pré-eclâmpsia o tipo mais comum, que afeta cerca de 2 a 8% das mulheres

grávidas 13. Pré-eclâmpsia (PE) é definida como início de hipertensão e proteinúria após 20

semanas de gestação em uma mulher previamente normotensa 13. Entre os fatores de risco

associados estão idade materna avançada 14, gestação múltipla, nuliparidade e obesidade 13.

Um fator importante a ser considerado é que existe um risco de cerca de 30% da mulher ter

recorrência em gestações subsequentes 9 ou ainda aumentar o risco da mulher desenvolver

doença cardio vascular futuramente 15. Adicionalmente, ressaltam-se as consequências para

o neonato, como óbito neonatal que acomete 3 vezes mais as gestações com complicações

e consideradas de alto risco em comparação às gestações normais 16. O tempo de

permanência em UTI neonatal relaciona-se positivamente com a ocorrência de rotura

prematura de membranas ou pré-eclampsia 7.

Adicionalmente às condições expostas, o trabalho de parto pré-termo (TPP) é

considerado um dos principais problemas da Clínica Obstétrica, acompanhado ou não de

rotura prematura de membranas corioamnióticas pré-termo (RPM-PT) – rompimento da

“bolsa das águas” antes do início do trabalho de parto. Em todo mundo, a incidência de TPP

é cerca de 10% das gestações 17, e acomete cerca de 40% das gestantes de alto-risco 12. A

RPM-PT é o antecedente direto de TPP em cerca de 40% a 50% de todas as gestações pré-

termo, e ocorre mesmo na ausência de fatores de risco conhecidos 18,19.

Já está bem consolidado na literatura que uma cascata inflamatória seja a chave

principal do mecanismo de parto através da indução de contratilidade uterina 20,21. Dessa

forma, o desbalanço do sistema imune é relatado na maioria das condições clínicas que


constituem as gestações de alto risco. Nesse contexto, um processo infeccioso pode induzir

a produção de mediadores inflamatórios, como por exemplo as citocinas 20,22. Trabalhos da

literatura relatam diferentes taxas de cultura positiva no líquido amniótico, variando de 10 a

40% dos casos de TPP 23–25. Tais infecções geralmente são subclínicas ou podem ser

causadas por micro-organismos de difícil cultivo 26, o os micro-organismos encontrados são

similares aos da região vaginal, sendo, portanto, a infecção ascendente a principal via de

infecção/inflamação da cavidade amniótica 27,28.

Sabe-se hoje que o perfil de mediadores imunes, especialmente as citocinas,

apresenta-se de uma forma balanceada ao longo da gestação normal 29, sendo que no

primeiro trimestre gestacional ocorre predomínio de resposta imune de perfil Th1, importante

para permitir o correto reparo do endométrio, que sofre danos consequentes da implantação

do feto, quanto para remoção de debris celulares. O TNF-α, a IL- 1β e a IL-6 são algumas

das citocinas fundamentais no início da gestação, atuando no fenômeno de implantação do

blastocisto e, de maneira adversa, nas perdas de primeiro trimestre 2,30. Com a evolução da

gestação, elevadas concentrações de TNF-α foram relacionadas ao desenvolvimento de pré-

eclâmpsia e diabetes mellitus gestacional e, a redução de IL-10, ao parto pré-termo 31,32. Já

o segundo trimestre é caracterizado pela resposta imune de perfil Th2 2,33, com aumento de

citocinas com atividade anti-inflamatória, importantes para a manutenção da gestação. No

terceiro trimestre e no momento do parto, o predomínio volta a ser de perfil Th1, tanto

sistemicamente, quanto no tecido placentário e no líquido amniótico 30,34, o que foi observado

também por Bowen et al. 35 e Erez et al.21 ao descreverem níveis crescentes de mediadores

inflamatórios secretados pelos tecidos gestacionais. Assim, os mediadores inflamatórios são

considerados importantes indicadores das adversidades gestacionais, embora em revisões

sistemáticas recentes foi demonstrado que ainda não existe um único marcador ou uma

combinação dos mesmos para predizer tais complicações 36,37.

Dessa forma, a ativação do sistema imune inato torna-se de particular interesse no

contexto gestacional 38. A regulação desse sistema ainda não está bem estabelecida, e sua


principal consequência está relacionada com a influência que a resposta proinflamatória

exerce no desencadeamento das adversidades gestacionais descritas anteriormente.

JUSTIFICATIVA

Apesar dos fatores de risco associados ao desencadeamento de uma gestação de

alto risco, ainda não existem marcadores específicos para prevenir as intercorrências

gestacionais decorrentes. O papel da infecção uterina e resposta inflamatória tem sido

estudado no contexto gestacional para se estabelecer parâmetros preditivos, porém, uma das

dificuldades em estabelecer tais parâmetros decorre da escassez de dados que caracterizem

tais populações vulneráveis. Dessa forma, é plenamente justificável a proposta de

caracterização dos dados sociodemográficos e obstétricos de gestações de alto risco em

comparação a gestações sem fatores de risco associados e com evolução sem

intercorrências, o que poderá contribuir para o entendimento da fisiopatologia das

complicações gestacionais.

Decisões clínicas implicam equilibrar os potenciais benefícios do prolongamento da

gravidez em situações adversas, em relação ao risco de infecção intrauterina. Testes de

diagnóstico no soro materno de valor preditivo através da amniocentese seria ideal, porém

este é um procedimento invasivo. Portanto, o entendimento da fisiopatologia envolvendo

marcadores obtidos de forma não invasiva, como soro e lavado vaginal, é uma busca intensa

na comunidade científica.

3. OBJETIVOS

3.1. Objetivo geral

O objetivo do presente estudo comparar gestações de alto risco em relação a

gestações com evolução sem intercorrências quanto aos aspectos sociodemográficos e

obstétricos e relacionar o desfecho gestacional com a presença de infecção vaginal e

mediadores inflamatórios no soro e lavado vaginal.


3.2. Objetivos específicos

Identificar os subgrupos de gestantes de acordo com os desfechos que caracterizam

a gestação de alto risco (desvio quanto ao crescimento uterino, número de fetos e

volume de líquido amniotico, diabetes gestacional, ganho ponderal inadequado,

hemorragias da gestação, insuficiência istmo-cervical, trabalho de parto prematuro

e gravidez prolongada, amniorrexe prematura, pré-eclâmpsia e eclâmpsia,

aloimunização e óbito fetal);

Comparar os dados sociodemográficos e antecedentes obstétricos com o desfecho

da gestação atual nos grupos de alto risco comparados às gestações sem

intercorrências;

Relacionar os níveis sanguíneos e vaginais dos mediadores inflamatórios em cada

subgrupo de gestantes de alto risco em comparação às gestações sem

intercorrências;

4. CASUÍSTICA E MÉTODOS

4.1. Sujeitos, desenho e local do estudo

Estudo de corte prospectivo e transversal, no qual serão incluídas gestantes atendidas

no Ambulatório de Alto Risco do Hospital Regional (HR) de Presidente Prudente, referência

para gestações de Alto Risco. O tamanho amostral será constituído por gestantes atendidas

no período de agosto de 2017 a julho de 2018. Esta coleta está vinculada ao projeto docente

CAPI Protocolo: 2869, que visa a caracterização das gestações de Alto Risco no referido

Serviço. Para os objetivos do presente projeto, serão incluídas como grupo controle gestantes

que não apresentem fatores associados ao Alto Risco, atendidas em Estratégias de Saúda

da Família de Presidente Prudente e Álvares Machado, pareadas à idade gestacional de cada

amostra de Alto Rico.

As considerações éticas serão baseadas no uso do material biológico para fins

científicos, com sigilo da identidade da gestante, livre de coação ou conflito de interesses da


instituição ou de pessoas envolvidas no projeto. As coletas respeitarão os protocolos técnicos

do hospital e dos serviços envolvidos. As gestantes serão previamente informadas e o

material somente será coletado ou utilizado sob expresso consentimento em formulário

específico (Termo de Consentimento Livre e Esclarecido – TCLE, Anexo 1), conforme

resolução 466/12 do Conselho Nacional de ética em Pesquisa (CONEP).

Serão incluídas gestações caracterizadas como alto risco: desvio quanto ao

crescimento uterino, número de fetos e volume de líquido amniotico, diabetes gestacional,

ganho ponderal inadequado, hemorragias da gestação, insuficiência istmo-cervical, trabalho

de parto prematuro e gravidez prolongada, amniorrexe prematura, pré-eclâmpsia e

eclâmpsia, aloimunização e óbito fetal.

Os critérios de inclusão no estudo são: primeira consulta da gestante no referido

ambulatório em qualquer idade gestacional, a qual será avaliada pela data da última

menstruação e/ou o exame ultrassonográfico precoce (até 20 semanas); assinatura do Termo

de Consentimento Livre e Esclarecido. Serão excluídas do estudo pacientes que

apresentarem gemelaridade, malformação ou óbito fetais ao longo da gestação, gestantes

acometidas por doenças ou infecções sistêmicas como lúpus eritematoso sistêmico, ou

soropositividade para hepatite, HIV ou sífilis ou que façam uso de drogas. Como a coleta será

realizada no momento da primeira consulta obstétrica no referido Serviço, os dados das

pacientes e as referidas amostras serão descartados no caso de diagnóstico de um ou mais

critérios de exclusão em qualquer momento da gestação e/ou em caso de ocorrência de um

ou mais critérios de descontinuidade: abandono do pré-natal no Serviço durante o período do

estudo, perda de dados relativos ao parto.

4.2. Variáveis de estudo

As variáveis de estudo e os desfechos gestacionais serão coletados no momento da

consulta obstétrica e a partir do levantamento de dados descritos nos prontuários médicos,

respectivamente. Os dados pessoais, comportamentais, de antecedentes obstétricos,


familiares e da gestação atual de interesse serão coletados seguindo protocolo estabelecido

para o presente estudo (Anexo 2).

4.3. Coleta de sangue materno e lavado vaginal

Amostras de sangue materno serão coletadas no momento da inclusão do estudo.

Para isto serão seguidas as orientações protocolares das boas práticas clínicas na gestação,

portanto a quantidade máxima de sangue colhido será de 10mL. O sangue coletado será

transportado ao laboratório de Bioquímica da Unoeste e centrifugado por 15 minutos a 160g.

O soro será separado e armazenado a –80oC para posterior dosagens dos mediadores de

interesse.

Durante a consulta obstétrica, as gestantes incluídas no estudo serão convidadas a

realizar um exame especular não invasivo, empregando-se o espéculo bi-valvo de Collins

esterilizado e isento de qualquer lubrificante apenas para afastamento das paredes vaginais.

O pH vaginal será aferido utilizando-se fitas comerciais que serão colocadas em contato com

a parede vaginal e comparadas ao padrão oferecido pelo fabricante. Serão realizados lavados

vaginais com 3mL de solução salina estéril para posterior determinação dos mediadores

inflamatórios. Essas amostras serão armazenadas a –80oC até o momento do

processamento.

4.4. Quantificação das citocinas inflamatórias

A determinação das citocinas inflamatórias interleucina (IL)-1β, IL-6, IL-8 e fator de

necrose tumoral (TNF)-α no soro e lavado vaginal será realizada por ensaio imunoenzimático

(ELISA), no Laboratório de Imunopatologia da Relação Materno-Fetal, da Faculdade de

Medicina de Botucatu, UNESP. Inicialmente, placas de poliestireno com 96 orifícios e fundo

plano de alta afinidade (MaxSorp, Nunc, Life Tech. Inc. Maryland, USA) serão separadamente

sensibilizadas por 18 horas a 4º C, em câmara úmida, com anticorpo de captura: IL-1β, IL-6,

IL-8 e TNF-α, R&D Systems, DuoSet, (Minneapolis, MN) diluído em tampão PBS, pH 7,2.

Após incubação, serão realizadas três lavagens da placa com solução de PBS pH 7,2


contendo Tween 20 a 0,05% (PBS-T). Esse procedimento será repetido em todas as etapas

de lavagem até a fase anterior à adição do substrato. O bloqueio dos sítios livres da placa

será realizado com solução de PBS-T contendo leite desnatado (Molico Nestlé®) na

concentração de 5% (PBST-M) durante três horas à temperatura ambiente. Após a lavagem

da placa, serão adicionados na primeira coluna 50μL das referidas citocinas recombinantes,

em concentrações indicadas pelo fabricante para obtenção da curva padrão. Nos demais

orifícios serão distribuídos 50μL de soro ou lavado vaginal com posterior incubação por quatro

horas à temperatura ambiente. Após esse período e lavagem, serão adicionados 50μL de

anticorpo de detecção para cada uma das citocinas e as placas serão mantidas por três horas

à temperatura ambiente. Em seguida à lavagem, serão adicionados 50μL de estreptoavidina

na diluição 1:200 em cada orifício da placa e a reação incubada por 30 minutos à temperatura

ambiente. Após o procedimento de lavagem, serão adicionados 50μL do substrato constituído

de 12,5mL de tampão citrato-fosfato 0,1M, pH 5,0, 10mg de ortofenilenodiamina (Sigma,

Chemical Co, USA) e a reação incubada por 30 minutos à temperatura ambiente em câmara

escura. A reação será interrompida por adição de 25μL de solução de ácido sulfúrico 2N e as

densidades ópticas avaliadas em leitor automático de ELISA (Epoch-BioTek), em

comprimento de onda de 492 nm. As concentrações das citocinas séricas e no lavado vaginal

serão calculadas sobre a curva padrão, obtida com diferentes concentrações das citocinas

recombinantes humanas de interesse.

4.5. Análise estatística

Os dados serão armazenados em planilhas do software Excel 2010, conferidos e

avaliados em relação à consistência e, posteriormente, submetidos à análise estatística de

acordo com os pressupostos determinados pelos resultados. A relação entre as variáveis

analisadas entre as gestantes de Alto Risco será realizada por meio do teste do qui-quadrado

ou exato de Fisher. Para todos os testes, o nível de significância estatística será de 5% (p <

0,05).


5. REFERÊNCIAS

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36. Menon R, Torloni MR, Voltolini C, Torricelli M, Merialdi M, Betrán AP, Widmer M, Allen T, Davydova I, Khodjaeva Z, Thorsen P, Kacerovsky M, Tambor V, Massinen T, Nace J, Arora C, Betran a. P, Widmer M, Allen T, Davydova I, Khodjaeva Z, Thorsen P, Kacerovsky M, Tambor V, Massinen T, Nace J, Arora C. Biomarkers of spontaneous preterm birth: an overview of the literature in the last four decades. Reproductive Sciences. 2011;18(11):1046–70.

37. Kacerovsky M, Lenco J, Musilova I, Tambor V, Lamont R, Torloni MR, Menon R. Proteomic biomarkers for spontaneous preterm birth: a systematic review of the literature. Reproductive Sciences. 2014;21(3):283–95.

38. Masi S, Salpea KD, Li K, Parkar M, Nibali L, Donos N, Patel K, Taddei S, Deanfield JE, D’Aiuto F, Humphries SE. Oxidative stress, chronic inflammation, and telomere length in patients with periodontitis. Free Radical Biology & Medicine. 2011;50(6):730–5.

13

ANEXOS

TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Título da Pesquisa: “Citocinas inflamatórias no soro materno e lavado vaginal em gestações de Alto Risco e relação com resultados obstétricos”

Nome do (a) Pesquisador (a): Luciana Vasconcelos de Jesus Souza, Glilciane Morceli, Leticia Aguiar de Campos.

Nome do (a) Orientador (a): Jossimara Polettini

1. Natureza da pesquisa: a sra está sendo convidada a participar desta pesquisa que tem como finalidade relacionar os fatores

sociodemográficos e o resultado da gestação com a presença de infecção vaginal e concentração de moléculas do sistema imune (de defesa)

no sangue e lavado vaginal.

2. Participantes da pesquisa: o tamanho amostral será constituído de, no mínimo, 120 gestantes, assim distribuídas: 60 no grupo estudo:

Gestantes de Alto Risco; e 60 no grupo controle (gestações sem intercorrências), período agosto 2017 a julho de 2018.

3. Envolvimento na pesquisa: Ao participar deste estudo a sra permitirá que um dos pesquisadores participantes aplique um questionário de

coleta de dados pessoais, sociodemográficos, comportamentais, de dados de gestações anteriores, familiares e da gestação atual. Além disso,

a sra concorda em realizar coleta de 10mL de sangue periférico, que representa um volume mínimo que não interfere no seu acompanhamento

nesse Serviço e/ou apresenta riscos para sua gestação. Para as coletas de sangue, a sra sentirá apenas a picada da agulha na veia e o

desconforto é mínimo. E também a sra concorda em realizar um exame vaginal não invasivo, que utiliza o “bico de pato” (espéculo),

esterilizado (limpo) e sem qualquer lubrificante para afastamento das paredes vaginais. Nesse momento, será medido o pH vaginal utilizando-

se fitas comerciais que serão colocadas em contato com a parede da vagina e coletado conteúdo passando-se um “cotonete grande” na parede

vaginal. Será colocado soro fisiológico para lavagem interna da vagina. A sra também concorda que as pesquisadoras informaram que esse

procedimento vaginal não causa dor ou prejuízo para a gestação. A sra tem liberdade de se recusar a participar e ainda se recusar a continuar

participando em qualquer fase da pesquisa, sem qualquer prejuízo para a sra quanto ao seu atendimento nesse ambulatório. Sempre que

quiser poderá pedir mais informações sobre a pesquisa através do telefone dos pesquisadores do projeto e, se necessário através do telefone

do Comitê de Ética em Pesquisa, que é o órgão que avalia se não há problemas na realização de uma pesquisa com seres humanos.

4. Sobre as entrevistas: Será realizada através de questionário.

5. Riscos e desconforto: a participação nesta pesquisa não desrespeita as normas legais e éticas, e a sra está informada quanto aos possíveis

desconfortos da coleta de sangue (picada da agulha e possível mancha roxa no local da picada) e pequeno desconforto durante o exame


vaginal. Os procedimentos adotados nesta pesquisa obedecem aos Critérios da Ética em Pesquisa com Seres Humanos conforme Resolução

no. 466/12 do Conselho Nacional de Saúde. Nenhum dos procedimentos usados oferece riscos à sua dignidade e/ou à sua gestação.

6. Confidencialidade: todas as informações coletadas neste estudo são estritamente confidenciais. Somente o (a) pesquisador (a) e seu

(sua) orientador (a) (e/ou equipe de pesquisa) terão conhecimento de sua identidade e nos comprometemos a mantê-la em sigilo ao publicar

os resultados dessa pesquisa.

7. Benefícios: ao participar desta pesquisa a sra não terá nenhum benefício direto. Entretanto, esperamos que este estudo traga informações

importantes sobre as características gestacionais de gestações de alto risco, de forma que o conhecimento que será construído a partir desta

pesquisa possa contribuir para o entendimento dessas gestações, bem como para desenvolvimento de novas técnicas de diagnóstico. O

pesquisador se compromete a divulgar os resultados obtidos, respeitando-se o sigilo das informações coletadas, conforme previsto no item

anterior.

8. Pagamento: a sra não terá nenhum tipo de despesa para participar desta pesquisa, bem como nada será pago por sua participação.

Após estes esclarecimentos, solicitamos o seu consentimento de forma livre para participar desta pesquisa. Portanto preencha, por favor,

os itens que se seguem: Confiro que recebi uma cópia deste termo de consentimento, e autorizo a execução do trabalho de pesquisa e a divulgação

dos dados obtidos neste estudo.

Obs: Não assine esse termo se ainda tiver dúvida a respeito.

Tendo em vista os itens acima apresentados, eu,

_____________________________________________________, de forma livre e esclarecida, manifesto meu consentimento em participar

da pesquisa.

______________________________

Assinatura do Participante da Pesquisa

__________________________________

Assinatura do Pesquisador

___________________________________

Assinatura do Orientador


Pesquisador: Luciana Vasconcelos de Jesus Souza (18)981354217, Glilciane Morceli (14)991129252, Leticia Aguiar de Campos.

Orientador: Jossimara Polettini (18)998027402

Coordenadora do Comitê de Ética em Pesquisa (CEP): Profa. Dra. Gisele Alborghetti Nai

Vice-Coordenadora do CEP: Profa. Dra. Rosa Maria Barilli Nogueira.

Telefone do Comitê: (18) 3229-2077 - E-mail: [email protected]

FLUXOGRAMA PARA PESQUISAS ENVOLVENDO SERES HUMANOS (JAN/99)

CEP Aprovação

GRUPO

I

Código - Áreas Temáticas Especiais

GRUPO II

Código - Área Temática Especial

GRUPO III

Todos os outros que não se enquadrem em áreas temáticas especiais

I . 1. Genética Humana

I . 2. Reprodução Humana

I.. 4. Novos Equip, insumos e dispositivos(*)

I. 5. Novos procedimentos I. 6. Populações Indígenas

I. 7. Biossegurança I. 8. Pesquisas com cooperação estrangeira

I. 9. A critério do CEP

II. 3. Novos Fármacos, Vacinas e

Testes Diagnósticos (*)

Enviar:

- Protocolo completo - Folha de Rosto

- Parecer Consubstanciado

Enviar:

- Folha de Rosto

- Parecer Consubstanciado

(para

acompanhamento)

Enviar:

Relatório Trimestral com Folhas de Rosto

(para apreciação)

(para banco de dados)

mailto:[email protected]


C O N E P

CÓDIGO – ÁREAS DO CONHECIMENTO ( Folha de Rosto Campos 2 e 3 )

1- CIÊNCIAS EXATAS E DA TERRA

1.01 – MATEMÁTICA 1.02 – PROBABILIDADE E ESTATÍSTICA

1.03 - CIÊNCIA DA COMPUTAÇÃO

1.04 - ASTRONOMIA 1.05 - FÍSICA

1.06 - QUÍMICA

1.07 - GEOCIÊNCIAS 1.08 - OCEANOGRAFIA

2 - CIÊNCIAS BIOLÓGICAS (*)

2.01 - BIOLOGIA GERAL 2.02 - GENÉTICA

2.03 - BOTANICA

2.04 - ZOOLOGIA 2.05 - ECOLOGIA

2.06 - MORFOLOGIA

2.07 - FISIOLOGIA 2.08 - BIOQUÍMICA

2.09 - BIOFÍSICA

2.10 - FARMACOLOGIA 2.11 - IMUNOLOGIA

2.12 - MICROBIOLOGIA

2.13 - PARASITOLOGIA 2.14 - TOXICOLOGIA

3 - ENGENHARIAS

3.01 - ENGENHARIA CIVIL 3.02 - ENGENHARIA DE MINAS

3.03 - ENGENHARIA DE MATERIAIS E

METALÚRGICA 3.04 - ENGENHARIA ELÉTRICA

3.05 - ENGENHARIA MECÂNICA

3.06 - ENGENHARIA QUÍMICA 3.07 - ENGENHARIA SANITÁRIA

3.08 - ENGENHARIA DE PRODUÇÃO

3.09 - ENGENHARIA NUCLEAR 3.10 - ENGENHARIA DE TRANSPORTES

3.11 - ENGENHARIA NAVAL E OCEÂNICA

3.12 - ENGENHARIA AEROESPACIAL

4 - CIÊNCIAS DA SAÚDE (*) 4.01 – MEDICINA

4.02 – ODONTOLOGIA

4.03 – FARMÁCIA

4.04 – ENFERMAGEM

4.05 – NUTRIÇÃO

4.06 - SAÚDE COLETIVA 4.07 – FONOAUDIOLOGIA

4.08 – FISIOTERAPIA E TERAPIA

OCUPACIONAL 4.09 – EDUCAÇÃO FÍSICA

5 - CIÊNCIAS AGRÁRIAS 5.01 - AGRONOMIA

5.02 - RECURSOS FLORESTAIS E

ENGENHARIA FLORESTAL

5.03 - ENGENHARIA AGRÍCOLA

5.04 - ZOOTECNIA

5.05 - MEDICINA VETERINÁRIA 5.06 - RECURSOS PESQUEIROS E

ENGENHARIA DE PESCA

5.07 - CIÊNCIA E TECNOLOGIA DE ALIMENTOS

6 - CIÊNCIAS SOCIAIS APLICADAS 6.01 - DIREITO

6.02 - ADMINISTRAÇÃO

6.03 - ECONOMIA

6.04 - ARQUITETURA E URBANISMO

6.05 - PLANEJAMENTO URBANO E

REGIONAL 6.06 - DEMOGRAFIA

6.07 - CIÊNCIA DA INFORMAÇÃO

6.08 - MUSEOLOGIA 6.09 - COMUNICAÇÃO

6.10 - SERVIÇO SOCIAL

6.11 - ECONOMIA DOMÉSTICA 6.12 - DESENHO IDUSTRIAL

6.13 - TURISMO

7 - CIÊNCIAS HUMANAS 7.01 – FILOSOFIA

7.02 – SOCIOLOGIA 7.03 – ANTROPOLOGIA

7.04 – ARQUEOLOGIA

7.05 – HISTÓRIA 7.06 – GEOGRAFIA

7.07 – PSICOLOGIA

7.08 – EDUCAÇÃO 7.09 - CIÊNCIA POLÍTICA

8 - LINGÜÍSTICA, LETRAS E ARTES 8.01 - LINGÜÍSTICA

8.02 - LETRAS 8.03 - ARTES

(*) NÍVEL : ( Folha de Rosto Campo 4 )

(P) Prevenção (D) Diagnóstico

(T) Terapêutico

(E) Epidemiológico (N) Não se aplica


7.10 – TEOLOGIA

(*) OBS: - As pesquisas das áreas temáticas 3 e 4 ( novos fárrmacos e novos equipamentos ) que dependem de licença de importação da ANVS/MS, devem obedecer ao seguinte fluxo- Os projetos da área 3 que se enquadrarem simultaneamente em outras áreas que dependam da aprovação da CONEP, e os da área 4 devem ser enviados à CONEP, e esta os enviará à ANVS/MS com seu parecer.

- Os projetos exclusivos da área 3 aprovados no CEP ( Res. CNS 251/97 – item V.2 ) deverão ser enviados à ANVS pelo patrocinador ou pesquisador.


Anexo 2.

Questionário – Protocolo de atendimento

Projeto: “Resultados obstétricos e marcadores inflamatórios e oxidativos de gestantes atendidas em Ambulatório de Alto Risco do

interior do Estado de São Paulo”

Responsável: Profa. Dra. Jossimara Polettini

DADOS DA PACIENTE

Nome:…………………………………………………………Paciente no …………………

Data:……/……/…… Registro HR................

Data de nascimento:……/……/……

RG:..................................... Qual o seu endereço (rua, nº , cidade, CEP): _______________________________________________________________

Telefone para contato ________________________________

Qual é sua nacionalidade?_________________________________

Cor: Branca ( ) Parda ( ) Negra ( ) Amarela ( ) Estado civil

( 1 ) casada ( 2 ) divorciada ( 3 ) solteira

( 4 ) amasiada ( 5 ) viúva

Escolaridade: Escolaridade (anos de aprovação escolar) ..........

Exerce atividade remunerada ( ) Sim ( ) Não

Profissão:…………………… Há exigência de esforço físico? Sim ( ) Não ( )


HÁBITOS

Hábito de fumar: Fuma ( ) No de cigarros/dia…………………...

Nunca fumou ( ) Parou de fumar ( ) há quanto tempo?.............

Por quanto tempo fumou?....................................

Tipo: ( ) cachimbo ( ) charuto ( ) palha ( ) papel com filtro ( ) outros

Convive com fumante? Sim ( ) Não ( )

Local: ( ) casa ( ) trabalho ( ) outros

No. de pessoas?...................... Quantas horas/dias?..............................................

Consume bebida alcoólica? Sim ( ) Não ( )

Até 7 doses/sem. ( ) Mais de 7 doses/sem ( )

Usa drogas? Sim ( ) Não ( )

Tipo: ( ) maconha ( ) cocaína ( ) craque ( ) outros

Vias de administração: ( ) inalatória ( ) endovenosa ( ) outras

Durante quanto tempo?..............................................................

Já usou? Sim ( ) Não ( ) Quanto tempo?....................................

Parou há quanto tempo?.....................................................

Contato com substâncias tóxicas? Sim ( ) Não ( )

Quais?.......................................................................................

Por quanto tempo (meses)?..............................................................................

Período sem contato com a (s) substância (s) (meses):...................................................

Possui algum tipo de doença? Sim ( ) Não ( ) Qual(is)?


Diabetes mellitus ( )

Já teve infarto? Sim ( ) Não ( ) Há quanto tempo?……………..

É hipertensa? Sim ( ) Não ( )

É obeso? Sim ( ) Não ( )

Peso (Kg)………… Altura (cm)………….. IMC:………………….

Toma medicamento? Sim ( ) Não ( )

Qual(is)? Em que dosagem?………………………………………………………….. ..………………………………..…………………………………………….……………

Pratica exercício físico? Sim ( ) Não ( ) Com que freqüência?………… Frequência de relações sexuais (no relações/semana).................

No parceiros sexuais (no ultimo ano): ( ) 1 ( ) 2 ( ) > 2

Faz uso de ducha vaginal ( ) Sim ( ) Não

Faz uso de sabonete intimo ( ) Sim ( ) Não

Antecedentes ginecológicos

História de VB: ( ) Sim ( ) Não História de DST: ( ) Sim ( ) Não Qual(is)?.............................

Uso de métodos contraceptivos (4 meses anteriores): ( ) Sim ( ) Não Tipo....................................

HISTÓRICO FAMILIAR

Possui algum parente com:

Diabetes Mellitus ( ) Obesidade ( ) Hipertensão ( )

Doença cardiovascular ( ) Hipercolesterolemia ( ) ( ) outros

Quem?……………………………………………

Não tem ( ) Não sabe ( )


HISTÓRIA GESTACIONAL G:....................P:.........................A:..............................C:...............................

DUM:...................................................

Pré-natal: Sim ( ) Não ( ) No. de consultas?.................................

Intercorrências durante a gravidez: (..)náuseas ( )vômitos ( ) dor abdominal

( )dor para urinar ( )corrimentos ( ) sangramento ( )outros

Doenças durante a gestação: Sim ( ) Não ( ) Tipo?...............................................

Tratamento: Sim ( ) Não ( ) Qual?........................................................................

Fatores de risco para HIV? Sim ( ) Não ( )

AVALIAÇÕES

Inicial Final

Peso (kg)

Pressão Arterial (mmHg)

DADOS DO PARTO E RECÉM-NASCIDO (RN)

Tipo de parto: ( ) normal ( ) cesária ( ) fórceps ( ) outros

Sinais de sofrimento fetal? Sim ( ) Não ( )

Qual?.................................................................................................................................

Mecônio: Sim ( ) Não ( )


Tipo: ( )fluido ( ) moderado ( ) espesso

Apgar: 1’ ................................5’.....................................10’........................................

New Ballard (NB):............................Sexo:.....Peso:.......................Estatura:............

PC:............................PT:................................PA:.........................................

Classificação do RN: ( ) PIG ( ) AIG ( ) GIG

Necessidade de reanimação: ( ) máscara ( )ventilação sob pressão ( ) intubação

( ) drogas Quais drogas?..................................................................................

Óbito RN: Sim ( ) Não ( )

Vasos do cordão: ( ) 2 artérias e 1 veia ( ) 1 artéria e 1 veia ( ) outros

Anomalias ou malformações: Sim ( ) Não ( ) Quais?............................................................................................................

Tipo de placenta: ( ) normal ( ) calcificada ( ) outra

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